离体蛙心灌流实验
内容实验四 离体蛙心灌流
实验器材和药品
【实验对象】 蛙或蟾蜍。 实验对象】 蛙或蟾蜍。 实验器材和药品】 【实验器材和药品】 蛙类手术器械、玻璃蛙心插管、铁支架、蛙心 蛙类手术器械、玻璃蛙心插管、铁支架、 张力换能器、BL-420系统 任氏液、 系统、 夹、张力换能器、BL-420系统、任氏液、无钙任 氏液、 氯化钙溶液、 氯化钙溶液1%氯 氏液、3%氯化钙溶液、0.1%氯化钙溶液 氯化钙溶液 氯化钙溶液 氯 化钾溶液、 去甲肾上腺素溶液、 化钾溶液、l:10000 去甲肾上腺素溶液、l:10000 肾上腺素溶液、 乙酰胆碱溶液、 肾上腺素溶液、l:10000乙酰胆碱溶液、2.5%碳 乙酰胆碱溶液 碳 酸氢钠溶液、3%乳酸溶液、0.0125%毒毛花甙 酸氢钠溶液、 乳酸溶液、 毒毛花甙 乳酸溶液 K。 。
漳州卫生职业学院
基础医学部实验中心
内容:实验四 离体蛙心灌流 内容:
主讲教师：林艺
实验四、 实验四、离体蛙心灌流
目的和原理 实验对象 实验准备 实验器材和药品 实验步骤及观察项目 注意事项 思考与讨论
实验四、 实验四、离体蛙心灌流
目的和原理
正常的蛙心能按静脉窦的节律性自动产生兴奋， 正常的蛙心能按静脉窦的节律性自动产生兴奋， 如将离体的蛙心保存在适宜的环境中，在一定时间内 如将离体的蛙心保存在适宜的环境中， 仍能产生节律性兴奋和收缩活动。 仍能产生节律性兴奋和收缩活动。由于心脏的正常活 动还有赖于内环境因素的相对稳定， 动还有赖于内环境因素的相对稳定，改变灌流液的成 分可引起心脏活动的改变。 分可引起心脏活动的改变。 本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法， 本实验的目的是学习离体蛙心的灌流方法，并观察 某些离子、递质和强心贰对心脏活动的影响。 某些离子、递质和强心贰对心脏活动的影响。
蛙心灌流试验
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.观察心脏的解剖结构
（腹面）
（背面）
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备 1.蛙心插管 1.1 在主A干下穿一线打一 松结；在左主A下再穿一 线结扎。
实验步骤
一、离体蟾蜍心脏标本制备
1.蛙心插管
1.2 在主动脉根部剪一
斜口，将插管插入动脉
圆锥， 在心室收缩时
将插管插入心室，结扎 固定。
实验步骤
二、连接仪器和装置
1.用试管夹将蛙心管固定 在铁支架上 2.把张力换能器固定铁支 架支台上，在心室舒张期 将与换能器相连的蛙心夹 夹在心尖上。
注意事项
1.蛙心插管内液面勿过高或过低，每次换液时，必 须用任氏液冲洗3次。 2.每次加药，心搏曲线出现变化后立即将插管内液 体吸出。 3.随时滴加任氏液于心脏表面使之保持湿润。 4.换能器头端应向下倾斜以免液体进人换能器。 5.各种试剂的滴管不要混淆,以免影响实验结果。
4期自动去极速度↑
自律性↑
心率↑
结果分析与讨论
5. 1:10000 Ach灌流 与心肌M受体结合 K+外流↑, Ca2+内流↓ [Ca2+]i↓ 自律性↓ E-C耦联↓ 心率↓ 最大复极电位↑ 4期K+外流↑
收缩力↓
结果分析与讨论
6. 2.5％NaHCO3 灌流 中和H+，Ca2+与肌钙蛋白结 合，心肌收缩力恢复。
兴奋-收缩耦联↑
收缩力↑
结果分析与讨论
3. 1%KCl灌流：
[K+ ]o↑
AP平台期缩短 Ca2+内流↓ 兴奋-收缩耦联↓ 收缩力↓
结果分析与讨论
4. 1:10000 E灌流 与心肌β1受体结合 cAMP Ca2+内流↑ 肌浆网释放Ca2+↑ 兴奋-收缩耦联↑ 收缩力↑
生理实验斯氏离体蛙心灌流
实验八蛙心灌流一、实验目的1、学习斯氏离体蛙心灌流法2、了解心肌的生理特性。
3、观察、、及肾上腺素（Adr）、乙酰胆碱（ACh）对离体心脏活动的影响。
二、实验原理维持心脏正常收缩的节律和强度，需要有一个适当的理化环境（离子的浓度、比例、溶液的酸碱度、环境温度等），这种环境条件稍有改变，便可影响心脏的正常活动。
心脏的正常节律性活动必须在适宜的理化环境里才能维持，一旦适宜的理化环境被干扰或破坏，心脏活动就会受到影响。
心脏受植物性神经的双重支配，交感神经兴奋时，其未梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导增快，心率加快；而迷走神经兴奋时，其未梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心率减慢。
把离体蟾蜍心脏，即失去了神经支配的蟾蜍心脏保持在适宜的环境中，在一定时间内其仍能产生节律性兴奋和收缩活动。
这是由于蟾蜍的静脉窦能够自动按照一定的节律产生兴奋，并传导到其他心肌细胞，从而引起整个心脏有节律地兴奋和收缩。
离体心脏灌流，是在有控制的条件下研究体液因素以及药物对心肌作用机制的重要实验方法。
两栖类动物心脏无冠状循环，心肌的血液供应直接来自心室腔，故灌流时套管插入心室腔内，但灌流哺乳动物心脏时则须通过冠状血管。
本实验是将蛙心离体后，用人工配制理化特性近似蛙血浆的任氏溶液灌流，在一定时间内，可保持节律性收缩和舒张，如改变任氏液的组成成分或浓度，心脏活动的强度和频率将受到影响。
三、动物与器材实验动物：蟾蜍4只/组。
实验器材：蟾蜍解剖器械、生物/桥式前置、刺激/记录电极、蛙心插管、万向轮、蛙心夹、线、滴管、培养皿、支架、木夹、蛙针。
实验试剂：任氏液（含肝素）、0.65%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1∶5000去甲肾上腺素溶液、1∶10000乙酰胆碱溶液、**品溶液、1％乳酸、2.5％NaHCO3。
四、方法与步骤一）离体蛙心制备用刺蛙针捣毁蛙的脑和脊髓，将蛙仰卧固定于蛙板上。
打开胸腔，剪开心包膜，暴露心脏。
生理学实验报告_蛙心灌流_(2)
蛙类离体心脏灌流一、【目的要求】1、学习离体蛙心灌流法。
2、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh),乳酸对离体心脏活动的影响。
二、【原理】将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。
心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。
外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。
三、【实验仪器】青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。
套管夹、0．65％NaCl、2％CaCl2、1％KCl、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。
四、【方法与步骤】1、斯氏蛙心插管法（1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。
仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。
在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。
再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。
左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。
选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。
当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。
此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。
用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。
生理学实验报告_蛙心灌流_(2)
蛙类离体心脏灌流一、【目的要求】1、学习离体蛙心灌流法。
2、观察Na+,K+,Ca2+及肾上腺素(Adr),乙酰胆碱(ACh),乳酸对离体心脏活动的影响。
二、【原理】将离体蛙心（失去神经支配的蛙心）保持在适宜的环境中，在一定的时间内仍然能够保持节律性收缩，心脏正常的节律性活动需要一个适宜的理化环境，离体心脏也是如此，离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。
心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。
外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。
三、【实验仪器】青蛙、常用手术器械、蛙板(或蜡盘)、蛙心夹、计算机采集系统、张力传感器、支架、双凹夹、双针形露丝刺激电极、滴管、培养皿(或小烧杯)、棉线、任氏液。
套管夹、0．65％NaCl、2％CaCl2、1％KCl、1：10000肾上腺素、1：10000乙酰肌碱、3%乳酸。
四、【方法与步骤】1、斯氏蛙心插管法（1）一只青蛙，双毁髓后背位置于蜡盘中，按前面的方法暴露心脏。
仔细识别心脏周围的大血管(见右图)。
在左主动脉下方穿一线，于动脉圆锥处结扎(动物个体小时，结扎位置可靠上些)。
再从左右两主动脉下方穿一线，并打一活结备用。
左手提起主动脉上的结扎线，右手用眼科剪在结扎线下方、沿向心方向将动脉上壁剪一斜口。
选择大小适宜的蛙心套管，然后将盛有少量(套管内2～3 cm高度)任氏液(内加入一滴肝素溶液)的斯氏蛙心套管，山开口处插入动脉圆锥(见右图)。
当套管尖端到达动脉圆锥基部时，应将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内(于心室收缩时插入，但不可插得过深，以免心室壁堵住套管下口)。
此时可见套管中血液冲人套管，并使液面随心脏搏动而亡下移动，表明操作成功(否则需退回并重新插入)。
用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。
实验四离体蛙心灌流
2、插好离体心脏的套管固定在支架上，用蛙心夹夹 住少许心尖部肌肉(不要夹过多，以免因夹破心室而 漏液)。再将蛙心夹上的系线绕过一个滑枪与张力传 感器相连。注：勿便灌流液滴到传感器上。调节记录 仪上的收缩曲线的幅度适中。 3、实验观察（图11） (1)记录正常心搏曲线。 (2)改用0.65% NaCl溶液灌流，并作好加药标记，观 察心搏变化。待曲线出现明显变化时，立即吸去套管 中的灌流液，同时做好冲洗标记，并用新鲜任氏液清 洗2－3次，待心搏恢复正常，注意：换液时切勿碰套 管，以免影响描记曲线的基线，同时保持灌流液面一 致(以下同)。
(3)向套管内加1－2滴2% CaCl2溶液（较细的套管需 少加）溶液，作好加药记号，观察心搏曲线的频率及 振幅变化。当曲线出现明显变化时，应立即吸去套管 中的灌流液，并做好冲洗标记，迅速用新鲜任氏液清 洗2－3次，待心搏恢复正常。 (4)同法向套管内加入1－2滴1% KCl溶液，记录心搏 曲线的变化。当心搏曲线变化时，同法更换灌流液， 待心搏恢复正常公 (5)同法记录套管中加入1－2滴肾上腺素溶液(1/10000) 后心搏曲线的变化。 (7)同法记录套管中加入1－2滴乙酰胆碱溶液(1/10000) 后心搏曲线的变化。
【注意事项】 1、制备离体心脏标本时，勿伤及静脉窦。 2、蛙心夹应在心室舒张期一次性夹住心尖，避免因夹伤心脏而导致漏液。 3、每一观察项目都应先描记一段正常曲线，然后再加药并记录其效应。 加药时应在心跳曲线上予以标记，以便观察分析。 4、各种滴管应分开，不可混用。 5、在实验过程中，插管内灌流液面高度应保持恒定；仪器的各种参数一 经调好，应不再变动。 6、给药后若效果不明显，可再适量滴加，并密切注意药物剂量添加后的 实验结果。给药量必须适度，加药出现变化后，就应立即更换任氏液， 否则会造成不可挽回的后果，尤其是K＋稍有过量，即可导致难以恢复的 心脏停跳。 7、标本制备好后，若心脏功能状态不好（不搏动），可向插管内滴加 1～2滴2%CaCl2或1：10000肾上腺素，以促进（起动）心脏搏动。在实 验程序安排上也可考虑促进和抑制心脏搏动的药物交换使用。 8、谨防灌流液沿丝线流入张力传感器内而损坏其电子元件。
离体蛙心灌流 2
一、实验目的学习离体蛙心灌流方法，并观察温度、不同离子、神经递质及酸碱度等因素对心脏活动的影像，加深理解内环境相对稳定的生理学意义。
二、实验原理窦房结或静脉窦是心脏节律性活动的正常起搏点，但要维持心脏的正常纪律性活动，还需要一个适宜的理化环境（即相对稳定的内环境）。
因此，利用蟾蜍的离体心脏，用理化特性近似于血浆的任氏液灌流，在一定时间内仍能保持节律性的舒缩活动。
改变灌流液的成分，这种节律性的舒缩活动会随之发生改变，说明内环境理化因素的相对稳定是维持心脏正常节律性活动的必要条件。
三、实验材料蟾蜍，蛙类手术器材，蛙钉，蛙板，双凹夹，试管夹，蛙心插管，蛙心夹，滴管，张力换能器，滑轮，任氏液，40摄氏度任氏液，无钙任氏液，0.65%NaCl,2%CaCl,1%KCl。
四、实验步骤暴露心脏：取蟾蜍一只，用探针刺毁脑和脊髓后，将蟾蜍仰卧固定在蛙板上，用镊子提起胸骨后端腹部的皮肤，剪一小口，然后将剪刀由切口伸入皮下，向左右两侧锁骨外侧方向剪开皮肤，并向头端掀开皮肤。
用镊子提起胸骨后端的腹肌，在腹肌上，剪一小口，将大剪刀伸入胸腔内，剪断胸肋骨和左右锁骨，使创口成一个倒三角形。
用小镊子提起心包膜，用小剪将心包膜剪开，暴露心脏。
插蛙心：插管用连线蛙心夹在心室舒张期夹住心尖约1mm。
将蛙板倒转，使动物头端靠近实验者。
结扎右主动脉，在左主动脉下穿一线以备固定插管用。
用小剪在靠近动脉圆锥处，朝心脏方向将左主动脉斜形剪开一半（注意：既要剪破血管让血流通出，又不把血管剪断）。
取一管尖大小适宜的蛙心插管，注入少量任氏液入管内，左手用小镊子夹住切口上缘轻轻上提，使切口扩大。
右手持蛙心插管插入动脉内，直达动脉圆锥，然后左手放下镊子，轻轻向右提起蛙心夹上的连线，使心室与动脉圆锥成一直线。
在心室收缩时，右手向前并略向左推动蛙心插管，使之进入心室（如进入心室，插管中的液面会随着心室的舒缩而上下移动）。
最后结扎插管并将结扎线固定于插管侧面的小钩上，防止标本滑落。
离体蛙心灌流(精)
离体蛙心灌流实验目的学习离体蛙心灌流的方法；观察钠、钾、钙三种离子对心脏活动的影响。
观察肾上腺素、乙酰胆碱等因素对心脏活动的影响。
实验器材动物：蟾蜍器材：斯氏蛙心套管、套管夹、常用手术器械、任氏液、张力换能器、蛙心夹、0.65%NaCl 溶液、5%NaCl溶液、2%CaCl2溶液、1%KCl溶液、1:5000肾上腺素溶液、1:10000乙酰胆碱溶液、300u/ml肝素溶液实验方法与步骤1、离体蛙心的制备：双毁髓→左主动脉结扎→左右两主动脉下方活结备用→剪口，插管（管内盛任氏液与肝素）→结扎备用线（套管＋左右主动脉）→剪断动脉→结扎并剪断静脉。
2、固定套管并用任氏液换洗血液；进入RM6240系统。
3、观察并记录正常心搏曲线；4、向套管内分别加入以下溶液（0.65%NaCl溶液2d 、5%NaCl溶液2d 、1%KCl溶液1-2d 、2%CaCl2溶液1d 、1:5000肾上腺素溶液1-2d 、1:10000乙酰胆碱溶液1-2d ），观察并记录曲线变化。
实验结果此图为蛙心正常心搏曲线此图为换入0.65% Nacl溶液后蛙心收缩曲线的变化由波形图可知，Nacl可使心肌收缩能力减弱，心率减慢，导致心率曲线幅度减小。
此图为加入5%Nacl溶液后蛙心收缩曲线的变化有波形图可知，向任氏液中加入5%Nacl之后心搏曲线的幅度大大降低。
此图为加入Kcl溶液后蛙心收缩曲线的变化KCl导致心脏肌细胞收缩能力减弱，心率减慢。
此图为加入Cacl2溶液后蛙心收缩曲线的变化可使心肌收缩能力增强，心率加快，导致心率曲线幅度由上图可知，CaCl2增加。
此图为加入肾上腺素后蛙心收缩曲线的变化由波形图可知，肾上腺素可使心肌收缩力增强，心率加快。
此图为加入乙酰胆碱后蛙心收缩曲线的变化由上图可知，乙酰胆碱可使心肌收缩能力减弱，心率减慢，导致心率曲线幅度降低。
实验结果分析离体蛙心仍可具有揭露性收缩，是因为作为蛙心正常起搏点的经脉都（其功能相当于人体心脏的窦房结）能产生自动节律，通过传导系统维持心脏的波动，心脏正常德节律性兴奋和收缩活动必须在适宜的礼花环境才能维持，一旦适宜的环境被干扰或破坏，心脏后东就会受到影响。
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实验五 离体蛙心灌流实验
一 实验目的
1、了解蟾蜍离体心脏的灌流的方法。
2、观察细胞外液钾离子、钙离子浓度变化对心脏活动的影响。
二 实验原理
心脏离体后，如用人工灌流的方法，保持其新陈代谢的顺利进行，则心脏仍
能有节律的自动收缩和舒张，并可维持较长的时间。离体心脏所需的条件应与动
物内环境的理化性质基本相近，因此改变灌流液的理化因素，则可引起心脏活动
的变化。
1、任氏液：正常对照
含有NaCl、CaCl2、KCl、NaH2PO4、 Na2HPO4
和蒸馏水，其电解质、晶体渗透压、pH值与蛙的组织液相近。
2、0.65%NaCl灌流：
3、2%CaCl2灌流
4、 1%KCl灌流
5、
1:10000 E 灌流
6、1:10000 Ach灌流
7、心得安
β1受体阻断剂，抑制肾上腺素与β1受体结合，使E不能发挥作用。
8.、阿托品
M受体阻断剂，抑制Ach减慢心率，加速房室传导，增加心房收缩力。
三 实验器材
微机生物信号处理系统， physiology系统，学校服务器系统，蟾蜍离体蛙
心，任氏液，1%KCl，3%CaCl2，65%NaCl，1/10000 E，心得安+1/10000,1/10000
Ach，阿托品+1/10000 Ach。
四 实验步骤
1、标本制备（观看视频）
2、仪器及标本的连接
3、具体软件操作：
1）离子试剂：任氏液→0.65%NaCl溶液→任氏液清洗→1%KCl溶液→任
氏液清洗→2%CaCl2溶液→任氏液清洗
2）药物试剂：肾上腺素（E）→任氏液清洗→心得安→任氏液清洗→Ach，
任氏液清洗→阿托品→任氏液清洗。
五 实验结果
图1 离体蛙心灌流
表1 离体蛙心灌流数据记录
实验项目
收缩强度 心率
处理前 处理后 处理前 处理后
任氏液 2.45 2.45 34
0.65% NaCl 2.45 1,65 34 34
2% CaCl2 1.27 3.43 34 38
1% KCL 2.43 2.43 35 21
1:10000E 0.9 3.46 33 35
E+心得安 1.13 2.49 33 34
1:10000Ach 1.05 1.11 33 0
Ach+阿托品 1.13 2.46 34 34
六 结果分析
此实验说明心脏具有自律性，兴奋性，传导性，收缩性，离体心脏静脉窦还
能产生兴奋并传导到心房和心室，引起心脏有节律的兴奋和收缩。体内细胞所直
接生存的环境较为稳定，内环境的稳态是细胞、器官维持正常生存和活动的必要
条件，所以改变灌流的溶液，会引起心脏收缩的改变。