葡萄糖氧化酶酶活测定
邻联茴香胺分光光度法测定饲料添加剂中葡萄糖氧化酶活力-文档资料
邻联茴香胺分光光度法测定饲料添加剂中葡萄糖氧化酶活力1 引言葡萄糖氧化酶是一种绿色饲料添加剂，在饲料和畜牧生产中可作为抗氧化剂减缓饲料氧化变质[1]，改善动物肠道微生物平衡[2]，提高饲料利用率[3]，促进动物生长，降低中毒反应更在一定程度上替代抗菌药物和抗球虫病药物，具有广泛的应用前景。
由于葡萄糖氧化酶的高度专一性，基于不同的酶活定义而建立的检测方法主要有电化学法、测压法、凝胶电泳法、滴定法、分光光度法和傅立叶变换红外光谱法等[4]。
电化学法、测压法、凝胶电泳法存在方法操作复杂，要求严格，有很强的仪器依赖性；滴定法存在工作量大、样品需要量大、人工读数导致的测量精度低，尤其在混合型饲料添加剂的检测中不能排除酸性、碱性载体干扰的缺点。
傅立叶变换红外光谱法是较新开发的一种检测方法，优点为检测速度快，试剂用量少。
缺点为仪器要求和模型建立需要前期投入太大，限制了其使用范围。
因此寻找一种简便，快捷，灵敏的高的酶活力检测方法很有意义。
本研究采用邻联茴香胺分光光度法测定葡糖糖酶活力。
反应机理为：葡萄糖氧化酶是一种需氧脱氢酶，能催化氧化葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。
在一定的pH、温度、浓度及反应时间内通过测定产物吸光度在460nm 波长下的变化速率定量计算出酶活力。
基本反应式为：β-D-葡萄糖+H20+O2 δ-D-葡萄糖基-1，5-内酯+H2OH2O2+邻联茴香胺氧化型邻联茴香胺+2H2O1实验部分1.1仪器设备北京瑞利仪器XX公司UV-2600型紫外可见分光光度计；北京中兴伟业仪器XX公司DZKW-2型电热恒温水浴锅；赛多利斯科学仪器XX公司BSA224S型分析天平。
1.2实验试剂和材料标示含量为40GODU/g的葡萄糖氧化酶饲料添加剂；辣根过氧化物酶（上海蓝季生物）；邻联茴香胺（sigma，D9143）；磷酸二氢钠（国药试剂）；磷酸氢二钠（国药试剂）；葡萄糖（国药试剂）。
测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法
测定葡萄糖氧化酶活力的一种简便方法周建芹 , 陈韶华 , 王剑文( 1. 苏州大学医学部药学院 , 江苏苏州215123; 2. 苏州大学医学部实验中心 , 江苏苏州215123 )摘 : 利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖溶液产生的过氧化氢浓度 , 经过标要准曲线转换得到葡萄糖氧化酶的活力。
研究了缓冲液 pH 值、水浴温度、靛蓝胭脂红用量等对葡萄糖氧化酶活力测定的影响。
结果表明 : 利用靛蓝胭脂红褪色分光光度法测定葡萄糖氧化酶活力时 , 缓冲液最佳 pH 值为 4、最佳水浴温度为100 ℃、靛蓝胭脂红最佳用量为 1.3 mL。
此方法的重现性较好 , 反应系统较稳定。
葡萄糖氧化酶在自然界中普遍存在 , 在食品、医药和发酵等工业生产及分析检测中用途广泛 , 是高等院校生物化学、酶学和酶工程等相关实验课程中经常选用的一种重要的模式酶。
在有氧情况下 , 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生葡萄糖酸和过氧化氢 : 葡萄糖 + O2 葡萄糖酸 + H2 O2 。
测定葡萄糖氧化酶活力常用的方法有 2 种。
一种是滴定法 , 即用碱滴定葡萄糖氧化酶催化葡萄糖产生的葡萄糖酸 , 这种方法误差比较大 , 灵敏度比较低 , 尤其是葡萄糖含量比较低时。
另一种是利用葡萄糖氧化酶—辣根过氧化物酶—苯胺衍生物或染料隐性体偶联反应体系测定。
过氧化物酶在有氧存在时 , 催化葡萄糖氧化、生成的过氧化氢分解 , 分解出的氧又将苯胺衍生物或染料隐性体(如邻 - 联二茴香胺 ) 氧化变成红色或棕色物质 , 颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。
这种方法非常灵敏 , 但也存在显色物质不稳定、在 1 m in内有明显褪色、数据重复性不好等不足 , 而且因为要与辣根过氧化物酶联用 , 因此这个方法比较昂贵 , 增加了测定成本。
葡萄糖氧化酶活力测定的困难限制了其在学生实验及课外科研项目中的应用 , 因此寻找一种廉价、简便并且灵敏度高的活力测定方法很有意义。
氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖
葡萄糖氧化酶法测定操作规程1实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。
过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林（4-AAP）和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。
在500nm处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。
GOD葡萄糖+O2→葡萄糖酸+H2O2PODH2O2+4-AAP+酚→红色醌类化合物+H2O2临床意义1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。
2.病理性高血糖（1）糖尿病患者。
（2）内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。
升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。
（3）颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。
（4）脱水引起的高血糖：如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。
3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。
4.病理性低血糖（特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等）。
（1）胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。
（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。
（3）严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。
3实用仪器蓝韵200（L Y-C200）4储存条件及有效期试剂盒应避光密封储存在2--8℃环境中，有效期为12个月。
开封后，上机在2--8℃避光保存其有效期为28天。
5操作步骤5.1、全自动生化分析仪操作步骤：参数设置→试剂装载→校准→质控→样品加载→测定→结果审核→报告。
5.2、校准：采用纯化水或生理盐水和校准品两点校准。
当试剂更换批号、出现质控漂移、仪器做完保养后及重要零件更换时，须重新校准。
5.3、结果计算：全自动生化分析仪会自动给出检测结果。
5.4、质控程序：建立质控体系，选用适当的质控品进行质量控制。
葡萄糖氧化酶检测的金标准
葡萄糖氧化酶检测的金标准引言葡萄糖氧化酶是一种重要的酶，在临床诊断和生物化学研究中具有广泛的应用价值。
本文将详细探讨葡萄糖氧化酶检测的金标准，包括其定义、检测方法、应用领域和意义等方面的内容。
什么是葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶是一种催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸的酶，它是细胞内氧化磷酸化过程中不可缺少的催化剂。
它能将葡萄糖与辅酶NAD+反应，产生葡萄糖酸和还原型辅酶NADH。
葡萄糖氧化酶可以通过可以通过测定还原型辅酶NADH的生成速率来测定葡萄糖的含量。
葡萄糖氧化酶检测的方法葡萄糖氧化酶检测的方法有很多种，常用的方法包括光度法、荧光法和电化学法等。
这些方法基于葡萄糖氧化酶催化反应生成的还原型辅酶NADH的特性，通过测定还原型辅酶NADH的光学或电化学特性来间接测定葡萄糖的含量。
光度法光度法是一种常用的葡萄糖氧化酶检测方法。
它利用葡萄糖氧化酶催化反应生成的还原型辅酶NADH的吸光度变化来测定葡萄糖的含量。
通常使用紫外光谱法或可见光谱法来测定还原型辅酶NADH的吸光度，然后通过与已知浓度的标准葡萄糖溶液比较来计算未知样品中葡萄糖的含量。
荧光法荧光法是另一种常用的葡萄糖氧化酶检测方法。
它利用葡萄糖氧化酶催化反应生成的还原型辅酶NADH的荧光特性来测定葡萄糖的含量。
通过测定还原型辅酶NADH所发射的荧光强度或荧光寿命来计算葡萄糖的含量。
荧光法具有高灵敏度和高选择性的优点，常用于生物医学研究和药物检测等领域。
电化学法电化学法是葡萄糖氧化酶检测的另一种常用方法。
它利用葡萄糖氧化酶催化反应生成的还原型辅酶NADH的电化学特性来测定葡萄糖的含量。
通过将还原型辅酶NADH 在电极上氧化还原的电流变化来计算葡萄糖的含量。
电化学法具有高灵敏度和高选择性的优点，常用于生物传感器和医学诊断等领域。
葡萄糖氧化酶检测的应用领域葡萄糖氧化酶检测在临床诊断和生物化学研究中具有广泛的应用。
它可以用于血糖监测、糖尿病诊断、食品安全检测和生物传感器等领域。
葡萄糖氧化酶质量标准
葡萄糖氧化酶质量标准
葡萄糖氧化酶质量标准是指用于评估葡萄糖氧化酶的纯度、活性和稳定性的一系列参考标准。
以下是一些可能的葡萄糖氧化酶质量标准：
1. 纯度：确定葡萄糖氧化酶中是否存在杂质或其他蛋白质。
可以通过比色法、电泳法或质谱法等技术进行检测。
2. 活性：评估葡萄糖氧化酶在特定条件下的催化能力。
常用的方法是测定其催化单位（1U定义为将1微摩尔葡萄糖氧化为-
D-葡萄糖的酶幅度）。
3. 组合特性：确定葡萄糖氧化酶的催化速度、温度和pH的依
赖关系。
这些特性可以通过实验室条件下的酶反应速率研究来确定。
4. 稳定性：评估葡萄糖氧化酶在储存和使用过程中的稳定性。
可以通过长时间储存酶样品，并定期检测其活性和纯度来评估。
葡萄糖氧化酶的质量标准通常是根据国际或行业标准进行制定和评估的。
如需准确的质量标准信息，建议参考葡萄糖氧化酶的制造商提供的相关文件和技术资料。
d-葡萄糖底物uv分光光度法 酶活测定方法
葡萄糖底物UV分光光度法是一种用于测定酶活的常见方法。
本文将介绍葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及其在生物化学和生物医学研究中的应用。
一、原理1. 葡萄糖酶（也称葡萄糖氧化酶）能够催化葡萄糖与氧气在水溶液中发生氧化反应，生成葡萄糖内酯和过氧化氢。
这个氧化反应是可以通过UV分光光度法测定的。
2. 葡萄糖底物UV分光光度法的原理是通过测定在酶催化下葡萄糖与氧气反应所产生的过氧化氢的浓度变化来间接测定酶的活性。
二、步骤1. 样品处理：将待测样品中的葡萄糖与底物混合，使底物的浓度在一定范围内，以确保底物的过量不会影响酶的活性测定。
2. 加入酶液：将一定量的葡萄糖酶加入混合液中，并在一定温度下孵育一段时间，使酶与底物发生反应。
3. 反应停止：加入一种化学试剂使反应停止，同时转化过氧化氢形成一种有色产物。
4. 测定吸光度：使用紫外-可见分光光度计测定产生的有色产物的吸光度，根据标准曲线计算出反应体系中的过氧化氢的浓度。
5. 计算酶活：根据过氧化氢的浓度变化和所加的酶的蛋白质含量等数据，计算出酶的活性。
三、应用1. 生物化学研究中的应用：葡萄糖底物UV分光光度法广泛应用于酶动力学研究中，可以用来测定各种酶的活性及其对底物的亲和力。
2. 生物医学研究中的应用：在生物医学研究中，葡萄糖底物UV分光光度法可以用来研究酶与疾病的关联性，例如糖尿病患者血清中的葡萄糖酶活性与血糖水平的关系。
结论葡萄糖底物UV分光光度法是一种简单、敏感、精确的酶活测定方法，具有广泛的应用前景和重要的科研意义。
通过对葡萄糖底物UV分光光度法的原理、步骤及应用进行了解和掌握，可以更好地指导实验操作并推动生物化学和生物医学领域的研究进展。
近年来，随着生物技术的不断发展，葡萄糖底物UV分光光度法在生物医学研究中的应用越发广泛。
除了用于酶动力学研究和疾病相关性分析外，葡萄糖底物UV分光光度法还在其他领域展现出了巨大的潜力。
1. 新药研发在新药研发过程中，葡萄糖底物UV分光光度法被用于筛选潜在的药物候选化合物。
葡萄糖氧化酶（GOD）活性检测试剂盒说明书
Beijing Solarbio Science & Technology Co., LtdTel: 400-968-6088葡萄糖氧化酶（GOD）活性检测试剂盒说明书微量法注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0695规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
试剂名称规格保存条件提取液液体110 mL×1瓶2-8℃保存试剂一液体15 mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体3 mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体1 mL×1支-20℃保存溶液的配制：1、工作液的配制：取15 mL试剂一和3 mL试剂二混匀（现配现用）；2、试剂三：融化后可分装-20℃保存。
产品说明：GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生H2O2，是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。
GOD催化葡萄糖产生H2O2，过氧化物酶在有氧存在时催化H2O2分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）（1）组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
（2）细菌、细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎（功率200w，超声3s，间隔10s，重复30次）。
8000g 4℃离心10分钟，取上清，置冰上待测。
葡萄糖(Glu)测定氧化酶法标准操作程序SOP文件
10.3溶血：溶血指数达到850时不会有明显干扰。（血红素浓度约为850mg/dl）
10.4脂血：乳糜指数达到150明显干扰。（甘油三酯浓度约为300mg/dl）
11 临床意义
机体从碳水化合物的代谢中获得血糖。葡萄糖是人体血液中最重要的单糖；餐后血糖浓度大约为5mmol/l。血糖是维持细胞的功能的能量供体。葡萄糖以糖酵解的形式降解。检测葡萄糖的浓度用于对糖代谢紊乱（糖尿病、婴儿性低糖血症、自发性低糖血症以及胰岛细胞癌）的诊断及治疗。GOD－PAP法是建立在1969年出现的Trinder法基础之上的。
ABCD-SOP-04-23
葡萄糖（Glu）测定氧化酶法
版序：ABCD
页码：第2页，Biblioteka 3页5 仪器ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
6 上机操作
见仪器作业指导书，参数设置见附表。
7 参考范围
55-115mg/dl(3.05-5.83mmol/l)
>60岁:80-115mg/dl(4.44-6.38mmol/l)
9 注意事项
9.1 试剂中含迭氮钠，不要吞咽，避免与皮肤及粘膜接触。
9.2血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
9.3换算公式：mg/dL×0.0555 = mmol/L
9.4仅应用于体外诊断。
9.5扔弃废物应符合当地的法规。
10 抗干扰能力：
10.1标准：回收率在90％－110％之间。
血糖降低：生理性血糖过低见于妊娠期、哺乳期、饥饿及长期剧烈体力劳动后。病理性血糖过低常见于过量的胰岛素治疗，胰岛细胞增生或瘤，严重肝病及对抗胰岛素的激素分泌不足。
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葡萄糖氧化酶酶活测定
1 酶活单位与定义
pH6.0、30℃的条件下，每分钟能把 1.0μmol 的β-D-葡萄糖氧化成 D-葡萄糖酸和 H2O2 的酶量为一个单位。
2 测定原理
葡萄糖和氧反应，在葡萄糖氧化酶的作用下，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下，生成水和红色的氧化型邻联茴香胺。
3 试剂和溶液
3.1 磷酸盐缓冲液（pH6.0）
称取 16.61g 磷酸二氢钠（ NaH2PO4·2H2O ）和 35.82g 磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），溶于无 CO2 的水中，稀释到 1000ml。
3.2 邻联茴香胺甲醇缓冲液
1g 邻联茴香胺加在 100ml 甲醇中搅拌溶解备用。
临用时现配，取 0.1ml 加入到上述缓冲液 12ml 中混匀。
3.3 180g/l 葡萄糖水溶液
18g 葡萄糖加适量水溶解，并定容至 100ml。
3.4 0.03%辣根过氧化物酶液
称取辣根过氧化物酶（HRP,美国 Ameresco 公司）10mg，溶于 30ml 蒸馏水。
4 仪器设备
721-分光光度计、恒温水浴、秒表
5 分析步骤
5.1 待测酶样品的处理将待测酶样做适当稀释后进行试验，使得测定△A 值在 0.25～0.4。
5.2 测定
6 结果表示与计算
X=[△ A÷（11.3×t×0.1）] ×n t—测定时间，min
0.1—样品体积，ml
11.3—消光系数
n—稀释倍数
所得结果表示至整数。