酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg
乙肝两对半检测采用时间分辨法与酶联免疫法的效果对比
乙肝两对半检测采用时间分辨法与酶联免疫法的效果对比摘要：目的：对比分析时间分辨法与酶联免疫法的乙肝病毒血清学检验效果。
方法：利用随机抽样的方法，选取我院2014年6月至2016年6月期间收治的乙肝患者60例当作研究对象，对患者的临床资料进行回顾性分析。
分别采用时间分辨法与酶联免疫法对乙肝病毒血清学标志物进行检测，并评价不同方法对乙肝病毒的检测效果。
结果：时间分辨法的诊断符合率为98.33%，酶联免疫法的诊断符合率为78.33%，时间分辨法的诊断符合率明显高于酶联免疫法，差异有统计学意义（P＜0.05）。
结论：相比较于酶联免疫法，时间分辨法对乙肝病毒血清学标志物的检验效果更加准确，值得临床推广应用。
关键词：乙肝病毒；血清学检验；时间分辨法；酶联免疫法；效果对比乙肝是临床上较为常见的一种疾病，据相关调查统计显示，我国乙型肝炎患者已经增长到了3×107例，而乙肝病毒携带者已经增长到1×108例，从这一方面来看，乙肝仍严重威胁着我国人民的身心健康与生命安全[1]。
临床上，较为常用的乙肝病毒血清学检验方法主要有化学发光法、时间分辨法与酶联免疫法，不同的检测方法均有各自的适用范围与优缺点[2]。
本研究通过回顾性分析60例乙肝患者的临床资料，旨在对比分析时间分辨法与酶联免疫法的乙肝病毒血清学检验效果。
1.资料与方法1.1一般资料利用随机抽样的方法，选取我院2014年6月至2016年6月期间收治的乙肝患者60例当作研究对象，对患者的临床资料进行回顾性分析。
其中男性患者34例，女性患者26例；年龄在20岁至48岁之间，平均为（35.95±11.36）岁；体质量47~73千克，平均（63.32±5.62）千克。
本组60例患者在入选后，采取5毫升空腹静脉血，使用血清分离机分离血清之后，置于低温箱内冷藏、备检。
1.2仪器与试剂：①伯乐洗板机1575；②美国伯乐iMark 型酶标仪；③AD-1235时间分辨荧光分析仪（上海新波生物技术有限公司）；④时间分辨仪所使用的试剂主要是上海新波生物技术有限公司所生产的乙肝核心抗体、乙肝表面抗体、乙肝e抗体、乙肝表面抗原、乙肝e抗原的检测试剂盒，酶联免疫法使用丽珠生物工程股份有限公司所生产的试剂盒[3]。
时间分辨荧光免疫分析法与酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒表面
时间分瓣荧 光免 峻分新
与酶 联免唼吸附试验检测 乙型肝 炎瞒毒表面抗休的 比较
唐 玲 ］ｉ ［ ｌ ｌ 德阳 ６ １ ８ ０ ０ ０） （ 四川德 阳 市第 二人 民 医院检 验科
【 摘 要 】 探讨时间分辨荧光免疫分析（ Ｔ ＲＦ Ｉ Ａ ） 与酶联免疫吸附试验 （ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 在乙型肝炎病毒表面抗体（ Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｂ） 的检
本 文 分 别运 用 Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ法 和 传 统 的 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ一 步 法 同时 对 ９ ２ 份血清标本进行检 测，探讨 Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ法定量检测 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｂ的优 点 及 临床 价 值 。 １ 资 料 与 方 法 １ ． １标 本 来源 医 院 门诊 、住 院病 人 以及 体 检 人 员 检测 乙肝标志物 的血液标 本。 标本均 为空腹采取静 脉血， 无溶血、 黄疸等 ；３ ５ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ离心 ３ ｍ ｉ ｎ分离血清 。 １ ． ２标本 分组 收集常规 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ定性检测 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｂ ｓ ／ ｃ ｏ 值＞ ０ ． ６的样 本，按 ｓ ／ ｃ ｏ值 分为 ５组：Ｓ ／ ｃ ｏ值 ｏ ． ６ ～１ ． ｏ（ 第 １组 ） １ ６例 ， ｓ ／ ｃ ｏ值 １ ． １ ～６ ． ０ （ 第 ２组 ） ２ ０ 例， ｓ ／ ｃ ｏ值 ６ ． １ ～ １ ３ ． ０（ 第 ３组 ）２ ０例 ，Ｓ ／ Ｃ Ｏ值 １ ３ ． １ ～２ ０ ． ｏ（ 第 ４组 ）２ ０例 ， ｓ ／ ｃ ０值 ＞ ２ ０ ． ０（ 第 ５ 组 ）１ ６例 。 １ ． ３ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ一步法 双抗原 夹心法 。 ｉ ． ４ Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ法 Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ法用镧系金属离 子 （ 铕 Ｅ ｕ ）作为 示踪物标记 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ ，采 用双抗原夹心法 ：用 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ包被 反应 板， 加入样本后 ， 样本中的 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｂ与 包 被 板 上 的 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ结 合 ， 再 加 入铕 标 记 的 Ｈ Ｂ ｓ Ａ ｇ后 ，形 成 双 抗 原 夹 心 的 复 合 物 。加 入 增 强剂使 Ｅ ｕ离子从反应复合物 中解离下来 ，成 为游 离的 Ｅ ｕ
时间分辨荧光免疫法与酶联免疫法检测乙型肝炎病毒的对比分析
时间分辨荧光免疫法与酶联免疫法检测乙型肝炎病毒的对比分析时间分辨荧光免疫（简称TRF）分析法是用三价稀土离子作为示物，标记蛋白质，多肽，激素，抗体，核酸探针或生物活性细胞，待反应体系发生后，用时间分辨光分析仪测定最后产物中的荧光强度，以此来判断反应体系中被测物质的浓度，笔者结合患者血清学指标乙肝五项（聚合酸链反应）性，初步探讨TRF在检测乙型肝炎病毒中的临床价值，报道如下：1 实验资料1.1 材料和仪器 200份血清均为ELISA法确诊为HBV感染者，同时抽样检测乙肝五项定量（TRF）。
乙肝五项（ELISA）试剂由万泰生物药业股份公司提供。
TRF试剂由上海新波生物技术有限公司提供，时间分辨荧光分析仪也是上海新波生物技术有限公司提供。
1.2 原理和方法1.2.1 技术原理：TRF采用了双抗体夹心时间分辨免疫荧光分析法，其中抗原与已包被的抗体结合成抗体抗原复合物，洗涤后再加入銪标记抗体与已结合的抗原联接成抗一抗体—抗原—抗—抗体—Eu复合物。
增强液将标记在抗体上的Eu3+离子解离到溶液中，在溶液中Eu3+离子和增强液形成了高荧光强度的螯合物。
荧光强度和样品中的抗原浓度成正比。
1.2.2 实验方法严格按说明书操作，将试剂盒放置室温平衡，配备洗涤液，使用前一小时内按1：50倍稀配备銪标记物，吸取100ml样本及对照，按顺序加入微孔反应小孔中并加贴封片，放37度恒温1小时，用洗板机洗涤4次拍干，再每孔入100ml已稀释的销标记物、加封条，放37度1小时，第2次孵育结束后，洗板机洗涤6次，拍干，每孔加入增强液100ml，然后在室温下用振荡仪振荡5分钟，上分析仪检测。
2 结果乙肝五项定量参考范围，HBSAG：0-0.5hg/ml，HBsAb：0-10mIU/ml，HBeAg：0-0.5PEIU/ml，HBeAb： 0-0.2PEIU/ml ，HBCAb：0-0.9PEIU/ml。
表1 200例标本乙肝五项定量与酶联免疫测试HBV含量关系3 讨论TRF采用于双抗体夹心时间分辨荧光分析法，其灵敏度高达0.01Fg/ml，可准确定量出0-1010个拷贝的病原体，可清楚的反映出HBV的感染和复制情况，该技术在一整套时间分辨荧光免疫分析仪中进行，整个过程可在2个半小时完成，设备自动化程度高，操作简单，而且保证了检测的准确性和特异性，HBSAg的检测可协助乙肝的早期诊断，在乙肝病人中HBSAg检出率在70%以上，可协助乙肝的鉴别诊断，阳性者可能为急性、慢性患者，乙肝潜伏期或无症状携带者，有助于乙肝的预后估计，定量检测血清中HBSAg，对乙肝病人动态疗效观察，消毒药物考核很有价值。
时间分辨荧光免疫法与酶联免疫吸附法检测乙型肝炎病毒感染血清学
Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ Ｏ ． ２ Ｏ １ ５ ． ０ ７ ． ０ ５ ７ 文 献标 识 码 ： Ｂ 文 章编 号 ： １ ６ ７ ３ — ４ １ ３ ０ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ７ — ０ ９ ９ ４ — ０ ２
析法 （ ｔ ｉ ｍｅ ｒ ｅ ｓ ｏ ｌ ｖ ｅ ｄ ｆ ｌ ｕ ｏ ｒ ｏ ｉ ｓ ｎ ｍｕ ｎ ｏ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ， Ｔ Ｒ Ｆ Ｉ Ａ） 、 微 粒 子 酶 免 疫测定法 （ ｍｉ ｃ ｒ ｏ ｐ ａ ｒ ｔ ｉ ｃ ｌ ｅ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍｅ ｉ ｍｍｕ ｎ ｏ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ， ＭＥ Ｉ ） 和 酶 联 免 疫吸附测 定 法 （ ｅ ｎ ｚ ｙ ｍ ｅ — ｌ ｉ ｎ ｋ ｅ ｄ ｉ Ｉ ｍｕ ｎ ｏ ｓ ｏ ｒ ｂ ｅ ｎ ｔ ａ ｓ ｓ ａ ｙ ， Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ）
乙型 肝 炎 病 毒 简 称 乙肝 病 毒 ， 也 称 丹 氏颗 粒 ， 属 嗜肝 ＤＮＡ 病毒科 （ ｈ ｅ ｐ ａ ｄ ｎ ａ ｖ ｉ ｖ ｉ ｄ ａ ｅ ） ， 是 引起 各 类 急 慢 性 肝 炎 的 致 病 因 素 。 据 不 完 全 资料 统 计 ， 我 国 乙 肝 病 毒 的感 染 率 超 过 ５ ｏ ， 乙 肝 病 毒携带者近 １ 亿人 ， 乙 肝 患 者也 有 近 ３ ０ ０ ０万 。如 何 选 择 一 种 操作简单 、 经济适用 、 便 于 推 广 而 敏 感 度 又 相 对 较 高 的 乙肝 病 毒检 测法 ， 对 如 此 大 的 人 群 进 行 乙 肝 病 毒 筛查 一 直 是 临 床研 究 的热 点 。 目前 常用 的 乙 肝 病 毒 检 测 法 主 要 有 时 间 分 辨 荧 光 分
酶联免疫吸附法和时间分辨荧光免疫法在检测乙型病毒性肝炎中的效果比较
酶联免疫吸附法和时间分辨荧光免疫法在检测乙型病毒性肝炎中的效果比较吴阿阳;陈忠进【摘要】目的分析比较ELISA法和TRFIA法在检测乙型肝炎患者血清学标志物的灵敏性.方法以2011年5月至2012年1月期间来我院就诊的74例乙肝患者为研究对象.分别采用两种检测方法对患者血清学标志物进行检测,并对检出结果进行统计分析.结果 TRFIA法对乙肝患者血清标志物检测的阳性率明显高于ELISA法(P ＜0.05).结论与ELISA相比,TRFIA法对乙肝血清学标志物的检测更为灵敏,临床上值得推广.【期刊名称】《中国现代药物应用》【年(卷),期】2012(006)013【总页数】2页(P34-35)【关键词】时间分辨荧光免疫法;酶联免疫吸附法;乙型肝炎;血清学标志物【作者】吴阿阳;陈忠进【作者单位】363000,福建省医科大学附属漳州市医院检验科;福建省云霄县医院【正文语种】中文乙型病毒性肝炎(简称乙肝)是危害人类健康的最严重的病毒性肝炎之一。
有资料显示，我国有10%以上的人为乙肝病毒携带者［1］。
乙肝血清学标志物是检验机体是否感染过或正在感染乙肝病毒的有效证据之一，也是对乙肝患者病程的分析和判断的重要依据。
可见，乙肝血清学标志物的检测在临床诊断和治疗中起着非常重要的作用。
酶联免疫吸附法(ELISA)是临床上检验科常用的一种检测乙肝血清学标志物的方法。
近年来，随着免疫学技术的不断发展，时间分辨荧光免疫法(TRFIA)逐渐成为一种新的检测乙肝血清学标志物的方法为广大临床医师所接受。
本研究采用两种不同的方法对我院2011年5月至2012年1月期间的74例乙肝患者进行检测，旨在探讨两种检测方法的优劣性，以期为临床检测提供参考依据。
1 资料与方法1.1 一般资料以2011年5月至2012年1月期间来我院就诊的74例乙肝患者为研究对象。
年龄17～51岁，平均年龄39.4岁，其中男49例，女25例。
清晨空腹抽取患者静脉血3 ml，分离血清后分装，一部分立即检测，另一部分保存于-80℃冰箱备用。
酶联免疫法和发光免疫法测定乙肝病毒标志物比较
酶联免疫法和发光免疫法测定乙肝病毒标志物比较目的比较发光免疫、酶联免疫这两种免疫学方法检测乙肝病毒标志物的特点和各自的应用价值。
方法用这两种不同的免疫学方法分别对182例乙肝患者的血清标本进行检测,然后计算结果、分析结果。
结果两种方法对乙肝病毒标志物前四项(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb)均敏感,灵敏度达到ng/mL,结果的相互符合率也达到96%以上。
而对HbcAb而言,结果的相互符合率仅为89%,因为发光免疫法检测HbcAb时未稀释标本,所以发光免疫法的灵敏度要高于酶免法。
结论两种实验方法各有特点,操作时应根据实验的实际情况来选择。
标签：酶联免疫法; 发光免疫法; 乙肝病毒标志物现在实验室免疫学分析用的最广的方法是酶联免疫法和发光免疫法。
这两种方法哪种的灵敏度高、它们又有什么样的不足之处,现就这两种方法对乙肝病毒表面标志物的检测作比较,结论如下。
1 材料与方法1.1 材料收集182例临床确诊乙肝的病人静脉血样离心,分离出的血清用未加抗凝剂的密闭试管中保存,放置于-20℃环境中备用。
酶免法表面抗原质控品由北京市临检中心提供,浓度为2ng/mL。
1.2 试剂和仪器酶联免疫法试剂采用上海科华生物工程有限公司生产的乙肝两对半诊断试剂盒(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb);试剂为同批号试剂,批号:20081106,校期:20091105。
仪器有洗板机(BIORAD MODEL 1575),酶标比色仪(Rayto RT-6000)。
化学发光法采用北京源德生物医学工程公司JETLIA-962化学发光免疫测定系统及配套使用的专用试剂盒,试剂批号:200902012290318A,校期:20090917。
1.3 方法酶联免疫法的操作严格按照使用说明书进行,以表面抗原定值血清作为质控,设空白一空,阴阳对照各两孔。
主要步骤是加样,加酶,孵育,洗板,加显色剂,显色,比色。
其中核心抗体检测时用生理盐水作1∶30稀释。
检测hbsag的常用方法是
检测hbsag的常用方法是检测乙型肝炎表面抗原（HBsAg）的常用方法包括免疫荧光法、酶免疫法、免疫层析法和聚合酶链反应法。
免疫荧光法是一种常用、成熟的HBsAg检测方法。
其原理是，在荧光显微镜下观察标本中HBsAg与特异性抗原结合形成荧光复合物。
这种方法具有高灵敏度和高特异性，能迅速准确地检测HBsAg的存在，并可实现对阳性样本的图像记录。
酶免疫法（ELISA）是一种常用的定性和定量检测HBsAg的方法。
它利用特异性抗原与酶标记的抗体结合，形成抗原-抗体复合物。
酶作为信号放大因子，可通过底物的酶促反应，产生可见的色素变化。
通过测定底物的酶促反应产物的光密度或荧光值，可以判断样本中HBsAg的浓度。
酶免疫法具有敏感度高、准确性高、简单易行、操作快捷等优点，广泛应用于临床乙肝病毒感染的筛查和诊断。
免疫层析法是一种快速检测HBsAg的方法。
该方法通过溶液或尿液样本在试纸或膜片上向上渗透，与标记在试纸上的抗HBsAg抗体结合形成复合物。
复合物会在试纸上显示出一条颜色变化的线条。
这种方法操作简单，无需仪器，快速方便，适用于乙肝病毒感染的后勤补给和现场筛查。
聚合酶链反应法（PCR）是一种利用酶的芯片技术快速、高效地检测HBsAg的方法。
PCR技术通过特异性引物选择性地扩增HBV核酸，再利用荧光染料或融合探针进行定性或定量分析。
PCR方法具有极高的灵敏度和特异性，能够在病毒感染初期或重度感染时快速准确地检测出HBsAg，对于乙肝感染的早期诊断和监测具有重要意义。
综上所述，免疫荧光法、酶免疫法、免疫层析法和聚合酶链反应法是常用的HBsAg检测方法。
不同的方法有各自的优缺点，临床医生可根据具体情况选择合适的检测方法，以确保乙肝病毒感染的早期发现和准确诊断。
化学发光免疫测定、酶联免疫、时间分辨免疫荧光三种方法检测乙肝
时间分辨免疫荧光与化学发光法、酶联免疫法测定乙肝标志物的比较摘要目的: 比较化学发光免疫测定（CL）、酶联免疫（EIA）与时间分辨免疫荧光（TRFIA）三种方法检测乙肝病毒免疫标志物的优缺点。
方法: 用上述三种方法的检测试剂及仪器对189例临床血清标本分别进行检测，然后进行结果分析。
结果: 三者对乙肝表面抗原的检测灵敏度均达到了0.1ng/ml。
对HBcAb的测定，以CL的灵敏度最高，ELISA最低。
对表面抗体、E抗原及E抗体的检测，相互符合率均在95%以上，但对核心抗体的检测符合率，TRFIA与CL为83.23%，TRFIA与EIA为85.19%。
结论: 三种方法的检测性能相差不大，但操作性各有特点，应按各实验室具体情况加以选择。
关键词：化学发光法，酶联免疫试验，时间分辨荧光免疫测定本文作者:肖征周薇薇白立彦赵莉萍parison of chemiluminescence, ELISA and time-resolved fluoroimmunoassay in detecting Hepatitis B markers肖征，副主任医师，副教授周薇薇，主管技师白立彦，主管技师赵莉萍，主管技师解放军总医院微生物科，100853Zheng Xiao, Weiwei Zhou, Liyan Bai, Liping ZhaoGeneral Hospital of PLA, Beijing, 100853 PRCAbstractSubject:To pare three deferent assays to see their abilities in detecting hepatitis B markers.Methods：By using Chemiluminescence (CL), ELISA and Time-resolved fluoroimmunoassay (TRFIA), 189 serum samples were tested for hepatitis B markers, then the results were analyzed.Results:The three assays all can detect as low as 0.1ng/ml of HBsAg. But in HBcAb, The CL showed the highest sensitivity, ELISA showed the lowest sensitivity. The coincidences of the three methods in detecting HBsAb, HBeAg, and HBeAb are normally above 95%, but for HBcAb, the coincidence was 83.23% between TRIF and CL, and 85.19% between TRIFA and EIA.Conclusion:There were not much difference among these three methods regarding their abilities in detecting hepatitis B markers, but the maneuver flexibilities of each method differed a lot. One should consider his own lab's situation before making choice.Key words:chemiluminescence, ELISA, time-resolved fluoroimmunoassay自二十世纪七十年代以来，许多高灵敏度的测定方法应用于临床免疫学检测。
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酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg陈桂花1a，谭玉华2，罗颖照1b（1.广州经济技术开发区红十字会医院，a检验科,b体检中心，广东广州 510530 ；2.广州市丰华生物工程有限公司，广东广州 510730）摘要：目的比较2种方法4种试剂乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）的检测性能，并探讨HBsAg阳性HBV血清标志物（HBV M）模式组间及其与HBsAg阴性模式组间的HBsAg 浓度差异。
方法酶联免疫法（ELISA）对1205例标本HBV M进行定性检测。
其中定性检测的153例标本再用3个厂家的时间分辨荧光免疫法（TrFIA）定量测试试剂进行HBsAg比对检测，其余经定性检测的1052例标本均再用TrFIA定量测试试剂进行HBsAg定量检测，对HBsAg结果进行统计分析。
结果 2种方法4种试剂间HBsAg阳性检出率差异均无统计学(P>0.05)，3个厂家的TrFIA法试剂HBsAg定量检测结果相关性良好，r>0.95。
TrFIA法能对0.2ng/ml—1.0ng/ml的低浓度HBsAg标本进行有效检测。
研究发现TrFIA法定量检测未经稀释的HBV感染者血标本HBsAg浓度在0.2ng/ml—650ng/ml间。
“HBsAg、e抗原（HBeAg）、核心抗体（抗-HBc）”阳性模式组HBsAg浓度与“HBsAg、抗-HBc”阳性、“HBsAg、e抗体（抗-HBe）、抗-HBc”阳性、“HBsAg”单阳性模式组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg、抗-HBc”阳性模式组和“HBsAg、抗-HBe、抗-HBc”阳性模式组间HBsAg浓度差异无统计学意义(P>0.05)，“HBsAg、抗-HBc”阳性模式组、“HBsAg、抗-HBe、抗-HBc”阳性模式组HBsAg 浓度与“HBsAg”单阳性模式组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg”单阳性模式组和“HBsAg阴性模式”组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg阳性模式”组HBsAg浓度与“HBsAg阴性模式”组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05）。
结论 HBsAg 出现的早晚和它被清除的早晚与感染剂量、感染方式以及病情轻重有关。
HBeAg或抗-HBe 的出现与HBsAg的浓度呈一定的关系，HBsAg浓度与病毒的复制存在一定的关系。
ELISA法HBV M定性检测结合TrFIA法HBsAg定量检测对HBV感染诊断和防治具有重要意义。
关键词：酶联免疫法；时间分辨荧光免疫法；乙型肝炎病毒，表面抗原HBsAg是HBV感染后血清中首先出现的标志物HBV M，可作为乙肝的早期诊断和普查项目。
HBsAg的检测受到许多研究者的关注[1-6]，随着标记免疫方法学的飞跃发展，HBsAg检测的灵敏度有了进一步提高，并且定量结果取代了定性报告，为临床诊断提供了更多的信息。
作者采用了1个厂家的ELISA法定性诊断试剂与3个厂家的TrFIA定量测试试剂对HBsAg 进行了比对检测，结果与分析如下。
一材料与方法1. 标本标本采自广州市经济技术开发区红十字会医院门诊病人、住院病人和体检人员标本1205例，及时分离血清，-20℃保存备用。
2. 仪器与试剂 ST-360 型酶标仪（上海科华公司），酶联免疫法乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（国药准字S1*******，上海荣盛公司）；Victor2-D1420时间分辨荧光免疫仪（美国PE公司）；时间分辨荧光免疫法乙型肝炎病毒表面抗原定量测试试剂盒[国药准字S2*******，广州丰华公司；国药准字S2*******，苏州新波公司；国食药监械（准）字2007第3401095号，中山大学达安公司]；DEM-Ⅲ型自动酶标洗板机和FWZ-Ⅱ型恒温微量振荡仪（广州丰华公司）。
3. 方法 ELISA法与TrFIA法均严格按试剂盒和仪器说明书操作。
ELISA法对以上1205例标本进行定性检测，按说明书结果判断方法判读阴阳性，对弱阳性的HBV M、“HBsAg、抗-HBs”或“e抗原、e抗体”双阳模式的HBVM均须2孔复查，仍为阳性者判为阳性。
其中定性检测作者简介：陈桂花，女，1974年9月生，本科，检验技师，主要从事免疫学检验工作。
的153例标本再用以上3个厂家的TrFIA定量测试试剂进行HBsAg比对检测。
其余经定性检测的1052例标本均再用广州丰华公司TrFIA定量测试试剂进行HBsAg定量检测。
TrFIA法如HBsAg检测结果≥0.5ng/ml时判为阳性，<0.2 ng/ml时判为阴性；如0.2 ng/ml≤HBsAg<0.5ng/ml时均须以上3厂家TrFIA定量测试试剂盒各3孔复检，如有2孔仍为HBsAg ≥0.2 ng/ml时判为该试剂盒检测HBsAg阳性，如有2家TrFIA定量测试试剂盒检测HBsAg ≥0.2 ng/ml时判为该标本HBsAg阳性。
用TrFIA法HBsAg结果结合ELISA法相应标本其它HBVM结果，重新确定HBVM抗原抗体模式。
4. 统计与分析抗原抗体排列顺序：(1) HBsAg；(2)抗-HBs；(3) HBeAg；(4)抗-HBe；(5)抗-HBc。
以阳性项目的序号代表该阳性项，同一患者血清HBVM组合称抗原抗体模式（如“1+3+5”代表“HBsAg，HBeAg，抗-HBc”同时阳性；“1+4+5”代表“HBsAg，抗-HBe，抗-HBc”同时阳性）。
对以上4个厂家试剂检测的153例标本HBsAg结果进行比较分析，计算各试剂间检测HBsAg的粗一致性、约登指数、真阳性符合率、真阴性符合率，并采用配对资料Χ2检验，再对 3个厂家的TrFIA法HBsAg定量检测结果进行回归分析。
对广州丰华公司TrFIA定量试剂检测的1205例标本HBsAg结果，按“1+3+5”、“1+4+5”、“1+5”、“1”等抗原抗体模式和“HBsAg阴性”模式进行统计，计算平均值（X）和标准偏差（SD），对组间HBsAg 浓度差异采用秩和检验。
二结果1. 2种方法4种试剂比对试验 153例标本HBsAg检测结果，3个厂家的TrFIA法试剂与ELISA法试剂HBsAg检测结果比较，3个厂家的TrFIA法试剂间HBsAg检测结果相互比较，2种方法4种试剂间HBsAg阳性检出率差异均无统计学意义(P>0.05)，3个厂家的TrFIA法试剂HBsAg定量检测结果相关性良好，r>0.95，结果详见表1。
表1 2种方法4种试剂检测153例标本HBsAg结果比较试剂配对粗一致性（%）约登指数真阳性率（%）真阴性率（%）χ2检验 (P) 回归方程α=0.05, χ2（0.05)(1)=3.48丰华TrFIA与荣盛ELISA 97.38 0.9478 98.67 96.15 0.25 (＞0.05)新波TrFIA与荣盛ELISA 96.73 0.9354 98.67 94.87 0.80 (＞0.05)达安TrFIA与荣盛ELISA 95.42 0.9113 98.67 92.31 2.28 (＞0.05)新波TrFIA与丰华ELISA 99.35 0.9872 100.0 98.68 0 (＞0.05) Y=0.9665X+4.7739，r=0.9569 达安TrFIA与丰华ELISA 95.42 0.9101 97.40 93.42 0.57 (＞0.05) Y=1.1095X+4.5493，r=0.9686 达安TrFIA与新波ELISA 96.09 0.9226 97.44 94.67 0.17 (＞0.05) Y=1.0850X+5.5247，r=0.9566 2. 抗原抗体模式与HBsAg检测结果 TrFIA法HBsAg检测结果结合ELISA法相应标本其它HBVM结果，从1205例标本中共检测出10种抗原抗体模式，HBsAg阳性的模式共4种，TrFIA 法检测HBsAg阳性480例，其中ELISA法HBsAg弱阳性36例（0.5ng/ml—5.0ng/ml）和阴性20例（0.2ng/ml—1.0ng/ml,分布在“3+5”模式1例，“4+5”18例，“5”模式1例），TrFIA法定量检测未经稀释的HBV感染者血标本HBsAg浓度在0.2ng/ml—650ng/ml间，结果详见表2。
表2 TrFIA法结合ELISA法检测HBV M的抗原抗体模式与模式组的HBsAg浓度HBV M抗原抗体模式组例数（%） HBsAg浓度（ng/ml,X±SD）1+3+5a 157（13.0） 330.2±143.81+5b 12（0.996） 118.1±146.71+4+5c 306（25.4） 129.3±124.81d 5（0.415） 1.5±0.4HBsAg阴性模式e 725（60.2） 0.01±0.05注：组间HBsAg浓度差异采用秩和检验，a与b间差异有统计学意义（N=169，u c=4.89,P<0.05）；a与c间差异有统计学意义（N=463，u c=12.35,P<0.05）；a与d间差异有统计学意义（N=162，u c=3.71,P<0.05）；a 与e间差异有统计学意义（N=882，u c=18.41,P<0.05）；b与c间差异无统计学意义（N=318，u c=0.79,P>0.05）；b与d间差异有统计学意义（n2=5, n1-n2=7,T=27,P<0.05）；b与e间差异有统计学意义（N=737，u c=5.93,P<0.05）；c与d间差异有统计学意义（N=311，u c=3.22,P<0.05）；c与e间差异有统计学意义（N=1031，u c=9.81,P<0.05）；d与e间差异有统计学意义（N=730，u c=3.82,P<0.05）。
三讨论研究中2种方法4种试剂间HBsAg阳性检出率差异均无统计学(P>0.05)，3个厂家的TrFIA法试剂HBsAg定量检测结果相关性良好，r>0.95，但试剂间仍存在一定的“灰区”检测范围，仍存在HBsAg阳性检测不一致现象，提高试剂盒质量进而提高各试剂间的可比性是厂家亟需解决的问题。
HBsAg是HBV的外壳，它出现的早晚和它被清除的早晚与感染剂量、感染方式以及病情轻重有关[7]。
HBeAg或抗-HBe的出现与HBsAg的浓度呈一定的关系[8]。
研究中HBsAg 阳性模式中除“1+5”模式与“1+4+5”模式的HBsAg 浓度差异无统计学意义（P>0.05）外，其它HBsAg 阳性模式间HBsAg浓度差异均有统计学意义（P<0.05），HBsAg 阳性模式与HBsAg 阴性模式间HBsAg浓度差异均有统计学意义（P<0.05）。