大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定
猪大肠杆菌猪沙门氏菌
猪大肠杆菌&猪沙门氏菌猪大肠杆菌：猪大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的肠道传染性疾病，主要侵害仔猪和断奶后的小猪，常引起严重腹泻、脑水肿、生长缓慢和死亡。
由于病原菌的类型不同以及猪的日龄、个体差异、发病率和症状不同该病主要分为三种：即仔猪黄痢、白痢和猪水肿病。
1仔猪黄痢1.1流行病学该病常发生于一周龄以内仔猪，以1-3日龄的仔猪多发。
带菌母猪是主要传染源，由粪便排出病原体，仔猪由于吸乳和到处乱舔，经消化道感染。
该病的发生无季节性，死亡率可达90%以上。
1.2临床症状仔猪出生后12小时内突然有1-2头出现衰弱、昏迷症状，并很快死亡。
接着有的仔猪排黄色稀粪，很快变成水样，具腥臭味。
每小时排粪数次，严重时肛门松弛，排粪失禁，清瘦，脱水，眼球下陷，昏迷死亡。
1.3病理变化皮肤苍白，肠道黏膜充血、出血，以十二指肠显著。
1.4诊断与防治⑴诊断根据发病以3日龄以内初生仔猪为主，排出黄色水样稀便，明显脱水，消瘦，发病率和死亡率都很高，可诊断为该病。
⑵防治①科学免疫：临产前用大肠杆菌疫苗注射母猪，15天、30天各免疫1次。
仔猪出生后及早让其吃上初乳，仔猪可通过吸食母乳获得母源抗体得到保护。
②产房严格消毒，保持干燥、洁净、温暖、通风良好，防止有害气体产生。
③一旦有病猪出现，应立即全窝给予庆大霉素、痢特灵、黄连素、磺胺脒等药物治疗。
2仔猪白痢2.1流行病学常发生于10-30日龄的仔猪，以20日龄以内仔猪多见，日龄越小死亡率越高。
该病的发病与外界环境相关，如气候突变、多雨潮湿、饲料变质或突然变换饲料，以及母乳缺乏或过浓，都可促进该病的发生。
2.2临床症状仔猪排乳白色或灰白色稀粪，呈糨糊状，具腥臭味。
病情加重则表现结膜和皮肤苍白，机体脱水消瘦，最后衰竭而死亡。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案实验原理：1、大肠杆菌的性质：大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：沙门氏杆菌是G-直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
（2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
（3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。
（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
实验原理：1、大肠杆菌的性质:大肠杆菌是G无芽抱直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，口引噪试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S,不能利用xx酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：-沙门氏杆菌是G直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产呵噪，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SQ、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：(1) 取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
(2) 用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
(3) 用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37 C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：(1) 取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37 C恒温培养24小时。
(2) 取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37 C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：(1) 检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
禽源大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定与耐药性检测
李淑 芳 ，曹 慧 ，黄 燕霞 ，陈冬 杰 ，邹海鹏 ，迟 明 飞 ，陈伟垣 ，谢 文斌 （ 广东海洋大学动物 医学系，广东湛江 ５ ２ ４ ０ ８ ８ ）
摘 要 ：为 了解湛江 市禽源致病 菌大肠杆 菌和 沙门氏菌对 禽 肉产品 的污染程 度及其耐 药性 ，采集市售禽 肉中的肝脏样
３ ５ Ｅ． ｃ ｏ ｌ ｉ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ，７ ＥＨＥＣ Ｏ １ ５ ７ ：Ｈ７ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ａ ｎ ｄ ｌ １ Ｓ ａ ｌ ｍｏ ｎ ｅ ｌ ｌ ａ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉ ｆ ｅ ｄ ｂ ｙ ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ ｔ ｅ ｓ ｔ ． Ｔｈ ｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｅ． ｃ ｏ ｌ ｉ ｗａ ｓ ４ ３ ． ２１ ％ ，ｔ ｈｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｅ ＨＥ Ｃ ０ｌ ５ ７： Ｈ７ ｗａ ｓ ８ ． ６ ４ ％ ，ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ Ｓ ａ ｌ ｍｏ ｎ ｅ ｌ ｌ ａ ｗａ ｓ １ ３ ． ５ ８ ％． Ａ ｔ ｏ ａｌ ｔ ｏ ｆ ２ ｌ Ｅ． ｃ ｏ ｌ ｉ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ａ ｎ ｄ ｌ １ Ｓ ａ ｌ ｍｏ ｎ ｅ ｌ ｌ ａ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｉ ｎ
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肠道微生物的分离与鉴定方法
一、有益菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，柔嫩梭菌，丁酸梭菌，芽抱杆菌（枯草、地衣）。
5种有害菌：大肠杆菌，沙门氏菌，产气荚膜梭菌，空肠弯曲杆菌。
4种二、厌氧菌：乳酸杆菌，双歧杆菌，产气荚膜梭菌，丁酸梭菌，柔嫩梭菌。
5种需氧菌：芽抱杆菌。
1种兼性厌氧菌：大肠杆菌，沙门氏菌。
2种注：空肠弯曲杆菌：微需氧菌,在含2.5-5%氧和10%C02的环境中生长最好。
最适温度为37〜42C。
在正常大气或无氧环境中均不能生长。
肠道正常菌群中95%以上为专性厌氧菌，兼性厌氧菌和需氧菌在正常菌群中所占比例较少。
三、一般检测菌株包括厌氧菌中的双歧杆菌、拟杆菌、优杆菌、消化性球菌、乳杆菌及梭菌。
需氧菌中的肠杆菌、肠球菌、葡萄球菌，及酵母菌等。
四、无氧环境的简易操作：1、方法来自文献《健康羊驼粪球中主要正常菌群的分离与初步鉴定》采用干燥器培养空间用焦性没食子酸Wg、10%氢氧化钠溶液100mL,按比例取10%的氢氧化钠液置于干燥器皿底部，然后放置2到3个略高于液面的青霉素小瓶，再按比例称取焦性没食子酸用纸美蓝指示剂一管。
盖上缸盖并用石蜡封闭。
再轻轻摇动干燥器，使焦性没食子酸掉人氢氧化钠液中，反应后，干燥器内无氧，美蓝指示剂由蓝变白。
置于温箱37c培养24 — 48h观察结果。
2、方法来自文献《健康猪肠道菌群的分离培养与耐药性分析》后者先拧紧瓶盖，放入密封性较好的玻璃罐（用凡士林封口），通过蜡烛燃烧法制作简易厌氧装置。
五、CO 2培养箱不可代替无氧培养箱厌氧箱一般是组合气体90%氮气+5%氢气+5%二氧化碳，厌氧箱里面培养的微生物都是厌氧微生物；而二氧化碳培养箱里面是5%二氧化碳+95%空气，里面是有一部分氧气的。
一般的研究认为严格厌氧菌的培养环境中02的浓度必须小于WOOPpm （千分之一），更严格的环境是小于300Ppm （万分之三），本实验室C02培养箱C02浓度范围为280-2000ppm,所以CO2培养箱是不能用来培养严格厌氧菌。
实验五大肠杆菌与沙门氏菌
0.02g 60mL 40mL
• V-P试剂
甲液：α萘酚酒精溶液 （α萘酚5g无水乙醇100mL）
乙液：KOH溶液 （KOH 40g，水100ml）
将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10℃保存。
五、结果观察
1. 大肠杆菌的生长表现
普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落， 直径约2~3mm；
• 在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。
② V-P试验： 某些细菌能发酵
粉
碱
红
+ 二乙酰 色
葡萄糖 丙酮酸 乙酰甲基甲醇 2,3-丁二烯醇
+
化 合
胨中的胍基化合物 物
注意：通常M.R和V-P试验是密切相关： 如果一个微生物M.R是阳性，则V-P是阴性；或者相反。
• M.R试剂
甲基红 95％酒精 蒸馏水
3. 生化管接种培养
① 糖发酵试验：
葡乳麦甘蔗
② H2S试验； ③ 尿素酶试验； ④ 枸橼酸盐利用试验。
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
大肠杆菌
沙门氏菌
大肠杆菌 沙门氏菌 置 37℃培养
4. 吲哚试验
① 接种大肠杆菌或沙门氏菌于5mL邓亨氏蛋白胨水中， 置37℃培养3-5d；
＋(－) ；＋(－)
3. 细菌的染色、镜检
大肠杆菌
沙门氏菌
G－直杆菌，大小0.4-0.7×2-3μm， 无芽胞，两端钝圆，散在或成对。
4. 生化管接种培养
大肠杆菌
沙门氏菌
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕/- － － －
葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿 枸
⊕－ ⊕ ⊕ － ＋ － ＋
雪豹大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的分离及鉴定
雪豹大肠杆菌与沙门氏菌混合感染的分离及鉴定何顺福【期刊名称】《中国畜牧兽医文摘》【年(卷),期】2016(032)002【总页数】1页(P66)【作者】何顺福【作者单位】西宁野生动物园,青海西宁810000【正文语种】中文2014年8月，西宁野生动物园繁育的2只3月龄雪豹出现腹泻，经过抗生素药物对症治疗数天后效果不佳，随后青海大学农牧学院动物医学系传染病实验室对患病雪豹的腹泻粪便进行了采集，采取常规的病原分离及药敏试验技术进行微生物学诊断，最后，确诊为大肠杆菌与沙门氏菌混合感染，药敏试验结果显示此次分离的病菌对左氧氟沙星、头孢曲松、依诺沙星敏感。
1.1 材料1.1.1 病料采集发病雪豹的粪便，待检。
1.1.2 培养基伊红亚甲蓝平板、SS平板、TSA平板和TSB肉汤培养基。
1.1.3 试验动物健康小白鼠10只。
1.1.4 药敏纸片 14种药敏纸片。
1.2 方法1.2.1 病料的采集采集西宁野生动物园发病雪豹粪便无菌种到TSB肉汤中37℃培养18～24h。
1.2.2 病菌的分离、纯化分别划线种于伊红亚甲蓝平板、SS平板和TSA平板进行分离、纯化。
1.2.3 生化试验将纯化后的分离株种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、鼠李糖、棉子糖、阿拉伯糖、木糖、卫矛醇、肌醇、山梨醇、水杨苷、MR、V-P、明胶、鸟氨酸脱羧酶肉汤、硫化氢、西蒙氏枸橼酸钠、硝酸盐、半固体和尿素等各种生化培养基中进行生化鉴定。
1.2.4 动物致病性试验将纯化后的分离株种到鲜血琼脂斜面培养基上，37℃培养18～24h制成菌悬液，并与麦氏浊管进行比浊，选取浓度为3.0×109个/ml的菌悬液分别腹腔注射6只小白鼠，0.2ml每只作为实验组。
同时应用0.22μm细菌滤器分别对上述菌悬液过滤，各取滤液腹腔注射4只小白鼠，0.2ml每只，作为对照组。
对注射后的小白鼠隔离饲养，观察发病及死亡情况，对死亡白鼠立即进行剖检，观察病理学变化，无菌采取肝脏、脾脏组织涂片、染色。
家禽大肠杆菌和沙门氏菌分离及药敏试验
家禽大肠杆菌和沙门氏菌分离及药敏试验方法鸡大肠杆菌病主要依靠药物防治，但药物的大量使用带来了大肠杆菌多重耐药性和药物残留等诸多问题。
目前世界许多地方开展了调查研究试验材料1.病料来源。
养殖户送检样本有典型大肠杆菌和沙门氏菌病变的病死鸡，孵化后期死亡鸡胚（没有出壳鸡苗）作病料。
毛蛋没有出壳小鸡小鸡卵黄囊青年鸡病料2.细菌分离用的培养基：麦康凯培养基、普通培养基、SS培养基、亚硫酸铋培养基等二、试验方法1.大肠杆菌的分离培养。
无菌采取死鸡的肝、孵化后期死胚卵黄囊（没有出壳鸡苗）在麦康凯平板上分区划线37℃培养12~24小时，在麦康凯培养基上生长出边缘整齐稍凸起、表面光滑湿润、直径1～2毫米的红色圆形菌落，革兰氏阴性，接种到SS培养基37℃培养12~24小时，生长出粉红菌落。
亚硫酸铋琼脂大肠杆菌不生长。
2.沙门氏菌分离培养。
无菌采取死鸡的肝、孵化后期死胚卵黄囊在在麦康凯平板上分区划线37℃培养12~24小时，然后挑取麦康凯琼脂平板上淡黄色半透明单个菌落，接种到SS培养基37℃培养12~24小时，生长出黄色半透明或黑色菌落。
亚硫酸铋琼脂沙门氏菌生长绿色单个菌落。
如图：SS培养基沙门氏亚硫酸铋琼脂沙门氏菌麦康凯培养基大肠杆菌SS培养基大肠杆菌和沙门氏菌普通培养基大肠杆菌和沙门氏菌三．药敏试验分离到的大肠杆菌和沙门氏菌混合在一起，涂匀营养培养基，选用的药敏片做好标号，平整贴在培养基上37℃培养12~24小时，观察细菌抑菌圈大小，选抑菌圈越大药物敏感度越高，使用疗效越好。
同时考虑某些药物肠道不吸收问题。
四．药敏分析及预防：该地区的大肠杆菌和沙门氏菌对粘杆菌素、痢菌净、氟苯尼考、硫酸阿米卡星、头孢噻呋、硫酸新霉素较敏感。
合理搭配抗生素使用减少细菌耐药性的产生，临床上长期大量使用不规范抗菌药物，致使大肠杆菌沙门氏菌耐药菌株不断产生，敏感的药物越来越少，也可以据本场的大肠杆菌和沙门氏菌血清型做疫苗预防。
这提示我们每隔一定时间要对本地区的大肠杆菌耐药性进行检测，以便更好地选择敏感有效的药物，以控制该病的流行。
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青岛农业大学
兽医微生物学课程论文
题目：大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定
姓名：
学院：动物科技学院
班级：马业科学1201班
学号： 2012
任课教师：温建新
二0一四年四月一日
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定
马业科学1201
任课教师温建新
摘要：为了鉴别大肠杆菌和沙门氏菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴
别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。
关键词：大肠杆菌沙门氏菌三糖铁糖发酵麦康凯琼脂
引言：大肠杆菌是肠杆菌中埃希氏菌中的代表种。
根据O、H、K抗原的不同，可将大肠杆菌株分为不
同的血清型。
自然界中大肠杆菌的血清型可分为数万种，但致病性大肠杆菌的数量有限。
沙门氏菌属是有一大群血清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽孢杆菌组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对任何动物均有致病性，可以欺人的伤寒、副伤寒、肠炎和食物中毒，对动物能致多
种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。
大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特征，如形态、染色特性等。
但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。
目录
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关键词...................................... 错误！未定义书签。
引言........................................ 错误！未定义书签。
1 材料 (1)
1.1 菌种 (1)
1.2 培养基 (1)
1.3 生化试剂 (1)
1.4 沙门氏菌诊断血清 (1)
1.5 器材 (1)
2 方法 (1)
2.1 增菌培养 (1)
2.2 直接分离培养 (1)
2.3 形态观察 (1)
2.4 培养特性观察 (1)
2.5 生化试验 (2)
2.5.1糖发酵管接种 (2)
2.5.2 蛋白胨水接种 (2)
2.5.3 葡萄糖蛋白胨水接种 (2)
2.5.4 尿素琼脂接种 (2)
2.5.5 枸橼酸盐琼脂接种 (2)
2.6 生化特性的观察 (2)
2.6.1 糖发酵实验 (2)
2.6.2 MR实验 (2)
2.6.3 VP实验 (2)
2.6.4 吲哚实验 (3)
2.6.5 枸橼酸盐利用实验 (3)
2.6.6硫化氢实验 (3)
2.7 药物敏感试验-扩散法 (3)
3 结果观察 (3)
3.1 大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况错误！未定义书签。
3.2 细菌的染色、镜检 (4)
3.3 生化管的接种培养 (4)
3.4 吲哚、MR、V-P实验 ................ 错误！未定义书签。
3.5 药物敏感试验 (6)
4 结论 (7)
参考文献 (7)
1材料
1.1菌种
大肠杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液
1.2 培养基
普通培养基: 肉汤、普通琼脂、半固体培养基。
鉴别培养基：SS琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂。
生化鉴别基：糖发酵管、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水、尿素琼脂、醋酸铅琼脂。
1.3 生化试剂
MR试剂、VP试剂、吲哚试剂、乙醚、硝酸盐还原试剂等。
1.4 沙门氏菌诊断血清
A~E群多价O血清及单因子血清。
1.5 器材
革兰氏染液、显微镜、吸管等。
2 方法
2.1 增菌培养
用无菌刻度吸管吸取大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液2ml，分别加入已有亚砷酸盐量绿增菌液100ml的试管和四磺酸钠增菌液10ml的试管个1ml.接种后轻轻混匀，置37摄氏度温箱内培养18-24h。
2.2 直接分离培养
2.3 形态观察
以无菌接种环分别挑取麦康凯琼脂平板或SS琼脂平板上新鲜培养的大肠杆菌和沙门
氏菌单个菌落，在在载玻片上制成涂片，待自然干燥后，以火焰固定，进行革兰氏染色，
镜检。
观察两种细菌的形态，大小与排列方式并做比较。
这两种都是革兰氏阴性、两端钝
圆的球杆菌，菌体大多单个存在，大小差异不显著。
2.4 培养特性观察
将大肠杆菌和沙门氏菌的纯培养物分别接种肉汤、普通琼脂、三糖铁琼脂、SS琼脂和麦康凯琼脂。
三糖铁琼脂接种时，先涂布斜面，后穿刺底层。
置37摄氏度温箱内培养24h 后，取出观察两种细菌的培养特性并比较。
2.5 生化试验
生化实验前，须对菌种进行纯度检查，以保证不被污染杂菌。
检查方法同一般培养物
的制片、染色、镜检。
镜检时要适当多看几个视野，每个视野中细菌形态也染色特性菌须
符合该种菌种的特性。
凡污染杂菌者，此菌种不可用。
2.5.1糖发酵管接种
每种菌纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、卫矛醇微量生化反
应管，每种唐一管，穿刺接种。
后置于37℃温箱培养2-3d。
2.5.2 蛋白胨水接种
每种菌纯培养物接种一管，培养后作吲哚实验。
后置于37℃温箱培养2-3d。
2.5.3 葡萄糖蛋白胨水接种
每种菌纯培养物接种两管，培养后一管作MR实验，另一管作VP实验。
后置于37℃温箱培养2-3d。
2.5.4 尿素琼脂接种
每种菌纯培养物接种一管，接种量要大。
后置于37℃温箱培养数小时。
2.5.5 枸橼酸盐琼脂接种
每种菌纯培养物接种一管，接种量要少。
后置于37℃温箱培养2-3d。
2.6 生化特性的观察
2.6.1 糖发酵实验
取经2-3d培养后的两种细菌的糖发酵管一一观察，凡培养基变为黄色的，表示该菌
发酵此糖产酸气；凡凡培养基不变色的，表示该菌不发酵此糖。
2.6.2 MR实验
取一支经2-3d培养后的葡萄糖蛋白胨水的糖发酵管，加入MR试剂数滴，凡液体呈红色者为阳性反应，呈黄色者为阴性反应，橙黄色者为可疑反应。
2.6.3 VP实验
取另一支葡萄糖蛋白胨水的糖发酵管，加入VP试剂3ml，再加入VP试剂乙液1ml，充分摇匀后静置与试管架上，在数分钟内出现红色者为阳性反应，不出现红色者应放在
37℃继续观察1-2h，仍然不变色者判为阴性。
2.6.4 吲哚实验
去蛋白胨水培养管先加乙醚少量，塞紧棉塞摇振试管，是一米与培养基充分混匀，静
置片刻，待乙醚浮于液面上层时，沿管壁加入吲哚试剂2-3滴。
凡在乙醚层内出现玫瑰红色者为阳性反应，不变色者位阴性反应。
2.6.5 枸橼酸盐利用实验
观察经2-3d培养的枸橼酸盐琼脂管是否有细菌生长，并观察其颜色变化。
凡有细菌
生长，培养基变为天蓝色为该菌利用枸橼酸盐，否则为阴性反应。
2.6.6 硫化氢实验
观察经2-3d培养的醋酸铅琼脂管，凡沿穿刺线或其周围出现黑色沉淀者，为硫化氢
反应阳性，无黑色者为反应阴性。
2.7 药物敏感试验-扩散法
曲松纳、红霉素、硫酸链霉素、磷霉素、多面环素对大肠杆菌或沙门氏菌生长的影响。
3 结果观察
3.1大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况
大肠杆菌
反应模式表示：
沙门氏菌
反应模式表示：
3.2细菌的染色、镜检
3.3生化管的接种培养
接种培养前：
接种培养后：
实图：
3.4 吲哚、MR、V-P实验
实验结果;
3.5药物敏感试验
4结论
大肠杆菌和沙门氏菌生化反应结果综合汇表
菌三糖铁糖发酵
甲
基
红
VP 吲
哚
硫
化
氢
尿
素
酶
枸
橼
酸
盐
利
用
运
动
力
种斜
面底
层
硫
化
氢
葡
萄
糖
乳
糖
甘
露
醇
蔗
糖卫矛
醇
A A A - ⊕⊕
/-
⊕ v + + - + - + - +
B K A +/- ⊕- ⊕- - - + - +/
-
- + +/-
注：⊕产酸产气、+ 阳性、- 阴性、+/- 大多数菌株阳性/少数阴性、v 种间有不同反应。
A：大肠杆菌
B：沙门氏菌
参考文献：
【1】李一经，兽医微生物学，2011年1月第一版。
【2】陆承平，兽医微生物学第四版。
【3】兽医微生物学(原书第2版）。