实验1大肠杆菌的培养和分离
大肠杆菌培养的基本操作
大肠杆菌培养的基本操作介绍如下：
1.紫外线灭菌：将需要使用的培养物和培养器具放置在紫外线灯
下，进行消毒处理。
2.制备培养基：制备适当的培养基。
常用的培养基包括LB培养基
和M9培养基等。
3.接种：选取一定数量的大肠杆菌，将其接种到培养基中。
4.培养：将接种后的培养基放置在恒温摇床上，以适当的温度和
湿度条件下进行培养。
5.观察：观察培养物的生长情况，记录生长速度和菌落形态等信
息。
6.分离：将培养物分离，进行纯化处理。
7.储存：将分离后的纯化菌株储存，并进行标记和记录。
以上是大肠杆菌培养的基本操作，需要注意消毒、无菌操作和记录等方面的细节。
大肠杆菌培养实训报告模板
一、实训目的1. 熟悉大肠杆菌的生物学特性。
2. 掌握大肠杆菌的纯培养方法。
3. 学习无菌操作技术。
4. 了解大肠杆菌的培养条件及其对实验结果的影响。
二、实训时间2023年X月X日三、实训地点实验室微生物实验室四、实训器材与试剂1. 器材：无菌培养皿、无菌接种环、无菌吸管、无菌试管、酒精灯、酒精棉、无菌滤纸、恒温培养箱、显微镜等。
2. 试剂：大肠杆菌菌种、LB液体培养基、LB固体培养基、无菌水、酚红指示剂、无菌甘油等。
五、实训内容1. 大肠杆菌的纯培养2. 大肠杆菌的形态观察3. 大肠杆菌的生长曲线测定4. 大肠杆菌的接种方法5. 大肠杆菌的保存方法六、实训步骤1. 准备工作- 检查实验器材是否齐全，并进行消毒处理。
- 准备LB液体培养基和LB固体培养基，并调节pH值至7.0。
- 将大肠杆菌菌种从冰箱中取出，恢复至室温。
2. 大肠杆菌的纯培养- 将无菌培养皿打开，用酒精棉擦拭消毒。
- 将菌种接种于LB固体培养基上，用无菌接种环进行划线分离。
- 将培养皿倒置放入恒温培养箱中，培养24小时。
3. 大肠杆菌的形态观察- 取出一部分培养24小时的大肠杆菌菌落，涂片。
- 用酒精灯进行固定，用结晶紫染色。
- 在显微镜下观察大肠杆菌的形态。
4. 大肠杆菌的生长曲线测定- 将大肠杆菌接种于LB液体培养基中，放入恒温培养箱中培养。
- 每隔一定时间取样，测量菌液的吸光度，绘制生长曲线。
5. 大肠杆菌的接种方法- 将无菌吸管插入LB固体培养基中，吸取少量菌液。
- 将菌液滴加于无菌培养皿上，用无菌接种环进行划线分离。
6. 大肠杆菌的保存方法- 将培养24小时的大肠杆菌菌液，加入无菌甘油。
- 将菌液置于-80℃的冰箱中保存。
七、实验结果与分析1. 大肠杆菌的纯培养- 成功分离出纯的大肠杆菌菌落。
2. 大肠杆菌的形态观察- 大肠杆菌呈杆状，两端钝圆，单个或成对排列。
3. 大肠杆菌的生长曲线测定- 大肠杆菌的生长曲线分为四个阶段：迟缓期、对数生长期、稳定期和衰亡期。
分离大肠杆菌的方法
分离大肠杆菌的方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，也是微生物学研究中的重要模式生物。
分离大肠杆菌是许多实验室中常见的操作，这里将介绍几种常用的分离方法。
1.无菌技术准备在进行分离大肠杆菌之前，必须保证实验环境的无菌。
操作前要用75%乙醇对操作台面进行消毒，使用无菌培养皿和试管，并佩戴无菌手套。
2.样品采集从目标样品中采集含有大肠杆菌的样品。
常见的样品类型包括食品、水样、粪便等。
采集样品时要注意避免污染，使用无菌容器收集样品。
3.预处理样品将采集到的样品进行预处理，以提高大肠杆菌的分离效率。
常用的预处理方法包括：(1) 粪便样品：将粪便样品稀释于无菌生理盐水中，通过离心操作去除大部分固体颗粒。
(2) 食品样品：将食品样品加入适量的无菌生理盐水中，进行均匀搅拌。
(3) 水样：直接使用无菌容器收集水样，避免污染。
4.选择培养基根据实验需要选择适合分离大肠杆菌的培养基。
常用的培养基包括营养琼脂糖平板（Nutrient Agar Plate）、MacConkey琼脂糖平板（MacConkey Agar Plate）等。
这些培养基含有适合大肠杆菌生长的营养物质，并可以通过某些特殊成分选择性地抑制其他细菌的生长。
5.涂布法涂布法是最常用的分离大肠杆菌的方法之一。
具体操作步骤如下：(1) 取一支无菌的鉴别环，将其蘸取预处理后的样品。
(2) 将鉴别环均匀地涂布在培养基平板的表面上。
(3) 使用无菌铁环或无菌玻璃杆均匀涂布，以保证样品的均匀分布。
(4) 将涂布好的培养基平板放置在恒温培养箱中，以适当的温度（通常为37摄氏度）进行培养。
6.滤膜法滤膜法是一种通过滤膜来分离大肠杆菌的方法。
具体操作步骤如下：(1) 准备无菌滤膜和滤膜培养基。
(2) 将预处理后的样品滤过滤膜，将滤膜放置在滤膜培养基平板上。
(3) 将滤膜培养基平板放置在恒温培养箱中进行培养。
7.生物化学试验分离大肠杆菌后，需要进行进一步的鉴别和确认。
大肠杆菌的培养方法
大肠杆菌的培养方法
大肠杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界中，也是一种重要的实验室模式生物。
在生物学、医学、食品工业等领域中，大肠杆菌的培养方法是非常重要的。
下面我们来了解一下大肠杆菌的培养方法。
1. 培养基的选择
大肠杆菌可以在多种培养基上生长，但最常用的是LB培养基。
LB 培养基是一种富含营养物质的培养基，可以提供大肠杆菌所需的所有营养物质。
此外，还有一些特殊的培养基，如M9培养基、TB培养基等，可以根据实验需要选择。
2. 培养条件的控制
大肠杆菌的生长需要一定的温度、pH值和氧气含量等条件。
一般来说，大肠杆菌的最适生长温度为37℃，pH值为7.0左右，需要充足的氧气供应。
因此，在培养大肠杆菌时，需要控制好这些条件，以保证细菌的正常生长。
3. 培养方法的选择
大肠杆菌的培养方法有液体培养和固体培养两种。
液体培养适用于大规模培养，可以在较短时间内获得大量的细菌。
固体培养适用于单个菌落的分离和纯化，可以使不同菌株之间不互相干扰，方便后
续的实验操作。
4. 培养时间的控制
大肠杆菌的生长速度较快，一般在液体培养中可以在12-16小时内达到对数生长期，而在固体培养中需要24-48小时。
因此，在培养大肠杆菌时，需要控制好培养时间，以避免过度生长或过早停止生长。
大肠杆菌的培养方法是实验室中非常重要的一部分。
通过选择合适的培养基、控制好培养条件和时间，可以获得高质量的大肠杆菌菌株，为后续的实验操作提供保障。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案实验原理：1、大肠杆菌的性质：大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：沙门氏杆菌是G-直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
（2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
（3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。
（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
大肠杆菌的复壮
二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌 落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落
2.3.2稀释涂布平板法
操作方法
•梯度稀释
•涂布分离
问题：涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系 列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？
实验一 大肠杆菌的复壮 (培养、分离与提纯)
实验目的
1.了解菌种的保藏与复壮。 2.掌握大肠杆菌固体平面培养基的配制。 3.进行大肠杆菌的培养、分离（复壮），
用固体平面培养基进行细菌的划线培养。
1. 基础知识 1.1.菌种的保藏与复壮 1.2.细菌培养基 1.3无菌技术
2. 微生物实验所需的操作技术
纯化分离 培养保存
放斜面 倒平板
培养接种用菌种
固体培养基置于试管中灭菌后，斜靠在平放铅笔上，冷却 超净台和双手消毒 点燃酒精灯创造无菌环境
倒平板操作
倒平板操作
倒平板操作中的问题讨论
倒平板操作中的问题讨论
（1）培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒 平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温 度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了 （2）为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基 （3）平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿 度也比较大，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好 地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
（4）在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿 底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生， 因此最好不要用这个平板培养微生物
大肠杆菌培养步骤方法
大肠杆菌培养步骤方法大肠杆菌是一种重要的细菌，它在实验室中被广泛用于分子生物学研究和基因工程。
下面是大肠杆菌的培养步骤方法，共50条，并展开详细描述：1. 准备所需的培养基及试剂，包括琼脂、培养基粉、蔗糖、牛肉膏、酵母提取物、氯化钠、磷酸二氢钾等。
2. 将琼脂及培养基粉加入适量蒸馏水中，搅拌均匀后加热至沸腾，然后灭菌。
3. 将灭菌后的琼脂培养基倒入培养皿中，使其凝固成固体琼脂。
4. 取出实验室保存的大肠杆菌菌种，用无菌吸管从存储容器中取出适量菌液。
5. 将菌液均匀地涂布在琼脂培养皿表面，待其吸收后轻轻晃动培养皿使其均匀分布。
6. 将涂布好的培养皿倒置放入孵化箱中，以37℃恒温孵育。
7. 每隔一段时间观察培养皿上的菌落形成情况，选择合适的菌落进行分离和培养。
8. 在培养过程中，注意观察是否有任何异常，如细菌变异、污染等情况。
9. 定期检查培养基的PH值和温度，保持在适宜的范围内。
10. 当需要保存大肠杆菌菌株时，可以将单一菌落悬浮在无菌离心管中，并添加10%甘油保藏在-80℃低温库中。
11. 每次操作前要做好无菌操作，以避免外源菌的污染。
12. 大肠杆菌培养时，应严格控制氧气供应，可以选择静态培养或者摇瓶培养。
13. 在摇瓶培养中，要保持培养液的充分通气，防止细菌缺氧而死亡。
14. 对于含氧厌恶的大肠杆菌菌株，可以选择在含葡萄糖并定期通氮气的缺氧箱中进行培养。
15. 大肠杆菌培养皿观察时，可使用显微镜进行观察，观察菌落形态、大小和颜色等特征。
16. 对于选择性培养基的应用，可以根据需要添加抗生素或者其他选择性物质来筛选感兴趣的菌株。
17. 在进行大肠杆菌培养时，要注意控制培养基的含盐量和碳源，以及其他微量元素的添加。
18. 可以通过PCR或者其他分子生物学方法快速鉴定大肠杆菌的种属和亚种属。
19. 在大肠杆菌的培养中，要注意排放生物危害废弃物，并采取相应的安全防护措施。
20. 大肠杆菌培养时，要做好相关记录，包括菌种信息、培养条件、观察结果等。
大肠杆菌一般培养方法
大肠杆菌一般培养方法大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，也是生物学研究中最常用的模式菌株之一、大肠杆菌具有广泛的分布范围，可以在许多环境中生存和繁殖。
本文将介绍大肠杆菌的一般培养方法。
一、培养基的制备大肠杆菌的培养基通常包括两个主要组分：固体培养基和液体培养基。
固体培养基用于菌落计数和细菌分离，并可用于培养单个菌落。
液体培养基则可用于扩大菌种和进行大规模的培养。
1.固体培养基的制备最常用的固体培养基为琼脂培养基。
制备过程如下：（1）称取所需琼脂，加入适量的蒸馏水中，进行均匀搅拌。
（2）加热至100摄氏度，溶解琼脂。
（3）煮沸1-2分钟，消毒琼脂。
（4）冷却至约50摄氏度。
（5）加入所需的培养基成分，如营养物质和抗生素等。
（6）倒入培养皿中，待凝固后即可使用。
2.液体培养基的制备最常用的液体培养基包括LB培养基（Lysogeny Broth）和TB培养基（Terrific Broth）。
制备过程如下：（1）称取所需培养基成分，加入适量蒸馏水中。
（2）加入琼脂和洗涤剂等成分，以调整液体的黏度和表面张力。
（3）调整pH值。
（4）加热并搅拌溶解，待溶解后冷却。
（5）过滤培养基，以去除不溶性杂质。
（6）分装到培养瓶中。
二、大肠杆菌的预培养将保存的大肠杆菌菌种(如冻存菌)挑取一高洁净的培养皿上贴菌，通常可采用菌板上交叉涂布法，用三角稀菌棒反复涂抹菌落。
之后用无菌瓷珠轻压菌落，使其均匀分散于培养皿上。
贴菌后将培养皿倒置，避免水分凝结在盖子上。
培养皿翻转的目的是避免水珠滴入培养基内，影响气体交换。
然后将培养皿放入培养箱中，37℃保温，24小时后进行预培养。
三、大肠杆菌的正式培养预培养后，取适量的大肠杆菌菌落液，加入培养基中，并进行摇床培养。
有时候，还需要在培养基中添加相应的抗生素，以筛选具有特定基因或表现的菌株。
培养条件一般为37摄氏度、摇床转速为200-250转/分钟。
培养时间根据需要和实验目的而定。