实验一大肠杆菌的分离和培养培训课件
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实验一大肠杆菌的培养和分离
３.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅 在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培 养微生物吗？为什么？
答：皿盖与皿底之间的培养基易滋生杂菌，因 此不宜用此皿继续培养。
连续划线法
2.为什么要研究微生物？
90%以上对人类有利的，少数能引起传染病。 1.利用微生物生产食品、药品，如酒类、抗生素等； 2.微生物治理环境污染； 3.利用微生物生产新能源。 4.用于基因工程
一、实验目的（教学要求）
1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌 培养的操作； 2.进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的 划线培养。 3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
稀释→涂布→培养
玻璃 三角 刮刀
划线分离法：简单。涂布分离法：单菌落更易 分开，但操作复杂些。
4.扩大培养过程和分离过程
（1）制备５０ml的LB（液体和固体）培养基
①配制：： 蛋白胨：０.５g 酵母提取物：０.２５g 氯化钠：０.５g 溶于热水并加水至５０ml，并调pH（７.６）
固体培养基： 上述物质中再加１g琼脂。
答：利用标记基因所对应的性状（如抗青霉素） 保留转基因大肠杆菌，杀死普通大肠杆菌。
６.本实验的目的是什么？
答：尝试培养微生物的基本技术；学习培养、 分离提纯大肠杆菌的方法。
７.本实验的实验原理是什么？
答：微生物能够利用培养基中的各种营养物质 进行生长和繁殖。划线或涂布可以使单个细菌 繁殖成单个菌落，从而分离。
②灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，
塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭
菌锅，在压力为1kg/cm2、温度为121℃，灭菌
15min。 ③倒平板:
待培养基冷却到６0 ℃左右时，在酒精灯附 近倒平板。（倒平板操作见课本）(试管斜面的 制作方法类似)
答：皿盖与皿底之间的培养基易滋生杂菌，因 此不宜用此皿继续培养。
连续划线法
2.为什么要研究微生物？
90%以上对人类有利的，少数能引起传染病。 1.利用微生物生产食品、药品，如酒类、抗生素等； 2.微生物治理环境污染； 3.利用微生物生产新能源。 4.用于基因工程
一、实验目的（教学要求）
1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌 培养的操作； 2.进行大肠杆菌的分离，用固体培养基进行细菌的 划线培养。 3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
稀释→涂布→培养
玻璃 三角 刮刀
划线分离法：简单。涂布分离法：单菌落更易 分开，但操作复杂些。
4.扩大培养过程和分离过程
（1）制备５０ml的LB（液体和固体）培养基
①配制：： 蛋白胨：０.５g 酵母提取物：０.２５g 氯化钠：０.５g 溶于热水并加水至５０ml，并调pH（７.６）
固体培养基： 上述物质中再加１g琼脂。
答：利用标记基因所对应的性状（如抗青霉素） 保留转基因大肠杆菌，杀死普通大肠杆菌。
６.本实验的目的是什么？
答：尝试培养微生物的基本技术；学习培养、 分离提纯大肠杆菌的方法。
７.本实验的实验原理是什么？
答：微生物能够利用培养基中的各种营养物质 进行生长和繁殖。划线或涂布可以使单个细菌 繁殖成单个菌落，从而分离。
②灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，
塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭
菌锅，在压力为1kg/cm2、温度为121℃，灭菌
15min。 ③倒平板:
待培养基冷却到６0 ℃左右时，在酒精灯附 近倒平板。（倒平板操作见课本）(试管斜面的 制作方法类似)
实验1---大肠杆菌的培养和分离
实验1 大肠杆菌的培养和别离高二年级班学号：实验日期：____月日【知识准备】1．背景知识：大肠杆菌〔Escherichia coli，E.coli〕是微生物学和遗传学常用的实验材料，为单细胞原核生物，宽约0.5×1～3微米；具有由肽聚糖组成的细胞壁；周身具鞭毛，能运动。
大肠杆菌是在人和动物肠道中生活的、不会致病的正常栖居菌，但假设进入胆囊、膀胱等处也会引起炎症。
它能利用多种糖类物质产酸、产气，其代谢类型为异养兼性厌氧型；其代谢活动能产生大肠杆菌素〔抑制肠道内其他分解蛋白质的微生物生长〕，还能合成维生素B和K。
它们在肠道中大量繁殖，几乎占粪便干重的1/3。
实验室中用于培养微生物的营养物质称为培养基。
按培养基的物理状态可分为：液体培养基和固体培养基。
将已知的菌种引入新配制的培养基的过程称为接种。
而在固体培养基外表用蘸有菌种的接种环连续划线，既可以到达接种的目的，又可以实现别离菌种的目的。
这是因为划线过程中接种环与培养基外表接触，接种环上的菌液逐渐减少，因此划线最后部分细菌间的距离加大，经过培养后可出现由单个细菌细胞形成单菌落，这样就到达了别离细菌的目的。
2．实验原理：使用通用的细菌培养基〔如LB液体培养基〕可扩大培养大肠杆菌，使大肠杆菌迅速扩增。
在LB固体平面培养基上对大肠杆菌进行划线别离，经培养后培养基上每一个菌体会形成一个单独的菌落。
这是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选突变菌株的最简便方法之一。
为保证配制的培养基上只生长大肠杆菌，而不被其他微生物污染，实验过程中要进行无菌操作。
3．思考题〔1〕为什么培养过程中会出现被其他微生物污染的现象？〔2〕进行了无菌操作是否肯定就不会出现被其他微生物污染的现象吗？〔3〕本实验的关键步骤——划线别离的目的是什么？〔4〕在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线?在操作过程中应注意什么？【实验目的】1．利用液体培养基进行大肠杆菌的扩增2．用固体平面培养基进行大肠杆菌的划线别离3．了解微生物实验的操作原理和培养条件【材料用具】大肠杆菌菌种装有固体培养基的、已灭菌培养皿；装有LB液体培养基的、已灭菌的250ml三角瓶封口膜和橡皮圈酒精灯接种环镊子装有酒精棉球的广口瓶恒温培养箱摇床【操作流程】灭菌、消毒划线、接种培养、观察【实验步骤】1．接种前的准备进行接种操作前，应先洗手，再用70%的酒精棉球擦拭双手和桌面。
浙科版高中生物选修一 第一部分 实验1 大肠杆菌的培养和分离(共15张PPT)精品课件
2.常用方法 巴氏消毒法：牛奶 化学药剂：双手、水源 灼烧灭菌：接种环等（金属） 干热灭菌：160-170℃ 1-2h （玻璃器皿、金属） 高压蒸汽灭菌：121℃ 100KPa 15-30min（培养基） 紫外线消毒法：30min（空气中的微生物） 酒精灯火焰附近操作；超净工作台上操作。
回忆有关细胞的元素组成、分子 组成的知识，想一想微生物应该生活 在什么环境中呢？
1.平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌 要求：
（1）每四人一组，每组均需完成两种方法； （2）组内成员可任选一种分离方法。 2.培养 将培养皿倒置放在培养箱内，于36℃培养 24h。
课题1 大肠杆菌的培养与分离
思考： 1.为什么培养皿在培养箱内要倒置呢？ 2.菌落是种群吗？
作业： 1.对比实验，说出自己操作过程中的
3.用途：★ ★ ★ ①选择培养基：缺某种物质或多加某种物质 ②鉴别培养基：加指示剂或化学药品
月桂基硫酸盐 胰蛋白胨肉汤
（LST）
配置培养基：
溶化（溶解）
分装
倒平板：
倒平板：
接种：
接种针灼烧灭菌
平板划线
大肠杆菌的纯化方法：
稀释涂布平板法
平板划线法
大肠杆菌的分离纯化
——结晶紫中性红胆盐琼脂
不足； 2.简述实验操作注意事项； 3.通过实验注意事项完善实验设计。
每个人都会有自己的特长。一个人做某些事会比其他事做的更好。但许多人从未找到最适合自己的事情，其根本原因往往是他们没有进 果你对一切都随遇而安，那总是会有一天你会后悔莫及的。心，只有一颗，不要装的太多。人，只有一生，不要追逐的太累。心灵的愉 有；简单的快乐，来自心态的知足。家，很平淡，只要每天都能看见亲人的笑脸，就是幸福的展现。爱，很简单，只要每天都会彼此挂 暖。幸福并不缥缈，在于心的感受。爱并不遥远，在于两心知的默契。人与人之间，尊重是相互的，心与心相交，尊重是必须的，尊重 体现在做人做事，尊重，是一个人的人品尊重，让人与人走近。人无所舍，必无所成。心无所依，必无所获。自己的路只有自己去走， 去度。能抓住希望的只有自己，能放弃自己的也只有自己。能怨恨嫉妒的是自己，能智慧温暖的还是自己。心中有岸，才会有渡口，心 安然。每个人都会有自己的想法、做法、活法。理念不同，做法不同，活法就不同，我们没必要去干涉别人，影响别人，甚至攻击别人 不会报复；他不好，不去打击，不去鄙视。人人都有自尊，人人都有苦衷，生活中没有谁，不希望自己活得更好，走得更顺。学会理解 一个优秀的人，都有一段苦逼的时光。或许是因为一份学业，一份工作，一段爱情，离开了爸爸妈妈，去了一座别的城市。当你倦了厌 母正在为你打拼，这就是你必须坚强的理由。不管发生什么，记住不是只有你一个人在努力不要轻易放弃。一个人在外面，很不容易， 强！每一个闪光的人，都在不为人知的地方默默努力。穿越孤独，战胜恐惧，完善自己。可以流泪，可以休憩，可以抱怨，但绝不放弃 圆缺，都会途经，也都将过去。内心的宁静，是最有力量的修行。佛说，人的痛苦，源于追求了错误的东西。常常，我们苦苦的追逐， 殊不知，有些不甘放下的，往往不是值得争取的，有些苦苦追逐的，往往不是生命需要的。我们要做的是让心静下来，心静下来才知道 什么，让心静下来，静观自在。人，要么像辣椒一样有脾气。要么像白菜一样有层次。要么像莲藕一样有心眼。可我做不到！我就像一 拐弯抹角，一就是一，二就是二。虽然这样的性格吃不开，容易得罪人，但我还是喜欢这样的自己，不虚伪，不算计别人，喜欢做真实 人有傻福。人的善良一定要有底线，大度要讲原则，道德讲底线。你不发脾气，别人就以为你没脾气，你不争取，别人就会占尽你的便 机，也不要活得太单纯。不要别人跟你说几句好听的，你就不管不顾地对人家好，到头来辜负了自己的一片好意。生活是自己的，你的 乐，都得靠自己去感受，去捕捉。改变别人是事倍功半，改变自己是事半功倍。相信自己，美好的生活从改变自己开始！自信，是走向 胜困难的利剑，是达向理想彼岸的舟楫。有了它，就迈出了成功的第一步；有了它，就走上了义无反顾的追求路。诚信是人最美丽的外 的鲜花。人有见识，就不轻易发怒。宽恕人的过失，便是自己的荣耀。青春赚的钱，难赚回青春；生命赚的钱，难买回生命；幸福换来 爱情索取的钱，难索回爱情；时间挣来的钱，难挣回时间。即使用一生得到全世界的钱，全世界的钱也买不回你的一生，请记住金钱不 的时候要休息，该放松的时候要放松，快乐生活才是最给力的。人这一辈子，不可能事事如人意，遇到困难和烦心的事情；要学会自己 快乐的心境和乐观的心态。前行路上，遇见烦恼的时候，不妨学说三句话，第一句话：“算了吧”；第二句话：“不要紧”；第三句话 的”。没有过不去的事情，只有过不去的心情；心若晴朗，人生便没有雨天。别人拥有的，不必羡慕；只要努力，时间都会给你。总想 者必赢。令狐冲说：“有些事情本身我们无法控制，只好控制自己。”考前两个月就是冲刺。养兵千日，用兵一时更快、更高、更强。 的母亲是失败，成功的父亲是汗水面对目标，信心百倍，人生能有几次搏？面对成绩，心胸豁达，条条大陆通罗马。如果敌人让你生气 胜他的把握，如果朋友让你生气，那说明你仍然在意他的友情高考试卷是一把刻度不均匀的尺子：对于你自己来说，难题的分值不一定 平线留给世界的就只能是背影 。没有平日的失败，就没有最终的成功。重要的是分析失败原因并吸取教训。能冲刷一切的除了眼泪，就 推移感情，时间越长，冲突越淡，仿佛不断稀释的茶。不怕考不上，就怕不敢考。积一时之跬步，臻千里之遥程在冷峻的雪山上很多朝 学习与坐禅相似，须有一颗恒心。时间太瘦，指缝太宽调节好兴奋期，学习一浪高一浪名列前茅是银，日新月异是金怨言是上天得至人 是人类祷告中最真诚的部分不必每分钟都学习，但求学习中每分钟都有收获人非要经历一番不同平时的劫难才能脱胎换骨，成为真正能 须咬牙厉志，蓄其气而长其志，切不可恭然自馁也生活比电影狠多了，从来不给弱者安排大逆转的情节。即使赚得了全世界，却失去了 义呢？不要把时间、财力和劳动，浪费在空洞多余的话语上。永远以用心乐观的心态去拓展自我和身外的世界。人的一生，有许多事情 慢慢回味的，过去的就莫要追悔，一切向前看吧 任何打击都不足以成为你堕落的借口，即使你改变不了这个世界，你却依然可以改变自 路永远走下去。不肯下一点功夫，永远不会明白自己从何而来，又将立足于何处。. 凡事不要想得太复杂，手握的太紧，东西会碎，手 路，走的人多了，也便成了路。通过云端的道路，只亲吻攀登者的足迹。不是每个人都适合与你白头偕老。有的人是拿来成长的，有的 有的人是拿来一辈子怀念的。闪光的未必都是金子，而沉默的也不一定就是石头。世界上那些最轻易的事情中，拖延时间最不费力。每 为了让远方变得更近一些。你多学一样本事，就少说一句求人的话。我们是如何一步步落后于别人的，自己心里特别清楚，无非是从生 开始的。人在千里，家在心里；家在千里，人在心里。只有创造，才是真正的享受，只有拚搏，才是充实的生活。 世上真正厉害的 不 牌，而是哪怕你拿到的是一副差牌，也能赢得胜利！别抱怨生活的无聊生活嘛，就是无聊中自己找些乐子。我可以被打败但我不允许自 聪明人之所以没有成功，缺少的不是智慧，而是那种为成功而拼搏的干劲 成功不是将来才有的，而是从决定去做的那一刻起，持续累 怀，让是一种修养，退、让则是一种智慧。所谓天才，只不过是把别人喝咖啡的功夫都用在工作上了。善于利用零星时间的人，才会做 现实会告诉你 不努力就会被生活踩死，无需找什么借口，一无所有 就是拼的理由。靠山山会倒，靠水水会流，靠自己永远不 精诚所至 坎坎坷坷，跌跌撞撞那是在所难免。但是，不论跌了多少次，你都要坚强地再次站起来。任何时候，无论你面临着生命的何等困惑，抑 无论道路如何的艰难，无论希望变得如何渺茫，请你不要绝望，再试一次，成功一定属于你一个家庭没有书，就好像一间房子没有窗户 和快乐看作是生活目的的本身。手指有长有短，知识有高有低。学无前后，达者为师。任何不能打倒你的，将会使你更加坚强。如果你
回忆有关细胞的元素组成、分子 组成的知识，想一想微生物应该生活 在什么环境中呢？
1.平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌 要求：
（1）每四人一组，每组均需完成两种方法； （2）组内成员可任选一种分离方法。 2.培养 将培养皿倒置放在培养箱内，于36℃培养 24h。
课题1 大肠杆菌的培养与分离
思考： 1.为什么培养皿在培养箱内要倒置呢？ 2.菌落是种群吗？
作业： 1.对比实验，说出自己操作过程中的
3.用途：★ ★ ★ ①选择培养基：缺某种物质或多加某种物质 ②鉴别培养基：加指示剂或化学药品
月桂基硫酸盐 胰蛋白胨肉汤
（LST）
配置培养基：
溶化（溶解）
分装
倒平板：
倒平板：
接种：
接种针灼烧灭菌
平板划线
大肠杆菌的纯化方法：
稀释涂布平板法
平板划线法
大肠杆菌的分离纯化
——结晶紫中性红胆盐琼脂
不足； 2.简述实验操作注意事项； 3.通过实验注意事项完善实验设计。
每个人都会有自己的特长。一个人做某些事会比其他事做的更好。但许多人从未找到最适合自己的事情，其根本原因往往是他们没有进 果你对一切都随遇而安，那总是会有一天你会后悔莫及的。心，只有一颗，不要装的太多。人，只有一生，不要追逐的太累。心灵的愉 有；简单的快乐，来自心态的知足。家，很平淡，只要每天都能看见亲人的笑脸，就是幸福的展现。爱，很简单，只要每天都会彼此挂 暖。幸福并不缥缈，在于心的感受。爱并不遥远，在于两心知的默契。人与人之间，尊重是相互的，心与心相交，尊重是必须的，尊重 体现在做人做事，尊重，是一个人的人品尊重，让人与人走近。人无所舍，必无所成。心无所依，必无所获。自己的路只有自己去走， 去度。能抓住希望的只有自己，能放弃自己的也只有自己。能怨恨嫉妒的是自己，能智慧温暖的还是自己。心中有岸，才会有渡口，心 安然。每个人都会有自己的想法、做法、活法。理念不同，做法不同，活法就不同，我们没必要去干涉别人，影响别人，甚至攻击别人 不会报复；他不好，不去打击，不去鄙视。人人都有自尊，人人都有苦衷，生活中没有谁，不希望自己活得更好，走得更顺。学会理解 一个优秀的人，都有一段苦逼的时光。或许是因为一份学业，一份工作，一段爱情，离开了爸爸妈妈，去了一座别的城市。当你倦了厌 母正在为你打拼，这就是你必须坚强的理由。不管发生什么，记住不是只有你一个人在努力不要轻易放弃。一个人在外面，很不容易， 强！每一个闪光的人，都在不为人知的地方默默努力。穿越孤独，战胜恐惧，完善自己。可以流泪，可以休憩，可以抱怨，但绝不放弃 圆缺，都会途经，也都将过去。内心的宁静，是最有力量的修行。佛说，人的痛苦，源于追求了错误的东西。常常，我们苦苦的追逐， 殊不知，有些不甘放下的，往往不是值得争取的，有些苦苦追逐的，往往不是生命需要的。我们要做的是让心静下来，心静下来才知道 什么，让心静下来，静观自在。人，要么像辣椒一样有脾气。要么像白菜一样有层次。要么像莲藕一样有心眼。可我做不到！我就像一 拐弯抹角，一就是一，二就是二。虽然这样的性格吃不开，容易得罪人，但我还是喜欢这样的自己，不虚伪，不算计别人，喜欢做真实 人有傻福。人的善良一定要有底线，大度要讲原则，道德讲底线。你不发脾气，别人就以为你没脾气，你不争取，别人就会占尽你的便 机，也不要活得太单纯。不要别人跟你说几句好听的，你就不管不顾地对人家好，到头来辜负了自己的一片好意。生活是自己的，你的 乐，都得靠自己去感受，去捕捉。改变别人是事倍功半，改变自己是事半功倍。相信自己，美好的生活从改变自己开始！自信，是走向 胜困难的利剑，是达向理想彼岸的舟楫。有了它，就迈出了成功的第一步；有了它，就走上了义无反顾的追求路。诚信是人最美丽的外 的鲜花。人有见识，就不轻易发怒。宽恕人的过失，便是自己的荣耀。青春赚的钱，难赚回青春；生命赚的钱，难买回生命；幸福换来 爱情索取的钱，难索回爱情；时间挣来的钱，难挣回时间。即使用一生得到全世界的钱，全世界的钱也买不回你的一生，请记住金钱不 的时候要休息，该放松的时候要放松，快乐生活才是最给力的。人这一辈子，不可能事事如人意，遇到困难和烦心的事情；要学会自己 快乐的心境和乐观的心态。前行路上，遇见烦恼的时候，不妨学说三句话，第一句话：“算了吧”；第二句话：“不要紧”；第三句话 的”。没有过不去的事情，只有过不去的心情；心若晴朗，人生便没有雨天。别人拥有的，不必羡慕；只要努力，时间都会给你。总想 者必赢。令狐冲说：“有些事情本身我们无法控制，只好控制自己。”考前两个月就是冲刺。养兵千日，用兵一时更快、更高、更强。 的母亲是失败，成功的父亲是汗水面对目标，信心百倍，人生能有几次搏？面对成绩，心胸豁达，条条大陆通罗马。如果敌人让你生气 胜他的把握，如果朋友让你生气，那说明你仍然在意他的友情高考试卷是一把刻度不均匀的尺子：对于你自己来说，难题的分值不一定 平线留给世界的就只能是背影 。没有平日的失败，就没有最终的成功。重要的是分析失败原因并吸取教训。能冲刷一切的除了眼泪，就 推移感情，时间越长，冲突越淡，仿佛不断稀释的茶。不怕考不上，就怕不敢考。积一时之跬步，臻千里之遥程在冷峻的雪山上很多朝 学习与坐禅相似，须有一颗恒心。时间太瘦，指缝太宽调节好兴奋期，学习一浪高一浪名列前茅是银，日新月异是金怨言是上天得至人 是人类祷告中最真诚的部分不必每分钟都学习，但求学习中每分钟都有收获人非要经历一番不同平时的劫难才能脱胎换骨，成为真正能 须咬牙厉志，蓄其气而长其志，切不可恭然自馁也生活比电影狠多了，从来不给弱者安排大逆转的情节。即使赚得了全世界，却失去了 义呢？不要把时间、财力和劳动，浪费在空洞多余的话语上。永远以用心乐观的心态去拓展自我和身外的世界。人的一生，有许多事情 慢慢回味的，过去的就莫要追悔，一切向前看吧 任何打击都不足以成为你堕落的借口，即使你改变不了这个世界，你却依然可以改变自 路永远走下去。不肯下一点功夫，永远不会明白自己从何而来，又将立足于何处。. 凡事不要想得太复杂，手握的太紧，东西会碎，手 路，走的人多了，也便成了路。通过云端的道路，只亲吻攀登者的足迹。不是每个人都适合与你白头偕老。有的人是拿来成长的，有的 有的人是拿来一辈子怀念的。闪光的未必都是金子，而沉默的也不一定就是石头。世界上那些最轻易的事情中，拖延时间最不费力。每 为了让远方变得更近一些。你多学一样本事，就少说一句求人的话。我们是如何一步步落后于别人的，自己心里特别清楚，无非是从生 开始的。人在千里，家在心里；家在千里，人在心里。只有创造，才是真正的享受，只有拚搏，才是充实的生活。 世上真正厉害的 不 牌，而是哪怕你拿到的是一副差牌，也能赢得胜利！别抱怨生活的无聊生活嘛，就是无聊中自己找些乐子。我可以被打败但我不允许自 聪明人之所以没有成功，缺少的不是智慧，而是那种为成功而拼搏的干劲 成功不是将来才有的，而是从决定去做的那一刻起，持续累 怀，让是一种修养，退、让则是一种智慧。所谓天才，只不过是把别人喝咖啡的功夫都用在工作上了。善于利用零星时间的人，才会做 现实会告诉你 不努力就会被生活踩死，无需找什么借口，一无所有 就是拼的理由。靠山山会倒，靠水水会流，靠自己永远不 精诚所至 坎坎坷坷，跌跌撞撞那是在所难免。但是，不论跌了多少次，你都要坚强地再次站起来。任何时候，无论你面临着生命的何等困惑，抑 无论道路如何的艰难，无论希望变得如何渺茫，请你不要绝望，再试一次，成功一定属于你一个家庭没有书，就好像一间房子没有窗户 和快乐看作是生活目的的本身。手指有长有短，知识有高有低。学无前后，达者为师。任何不能打倒你的，将会使你更加坚强。如果你
实验一大肠杆菌的培养与分离(最新)
恒温培养箱
实验设备和用品： 1、灭菌锅或高压锅 2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈P22 P26 3、直径90mm的培养皿 4、接种环和玻璃三角刮刀 5、恒温培养箱 6、摇床
摇床
实验设备和用品： 1、灭菌锅或高压锅 2、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈 3、直径90mm的培养皿 4、接种环和玻璃三角刮刀 5、恒温培养箱 6、摇床 7、酒精灯和超净台
1-1什么是生物技术
• 生物技术=生物工程
应用自然科学及工程学原理，以微生 物体、动物体、植物体或其组成部分作为 生物反应器将物料进行加工，以提供产品 来为社会服务的技术。
1-2 传统生物技术
• 传统生物技术指主要通过微生物 的发酵来生产商品.如:酱、醋、 酒、面包、奶酪、酸奶等
1-3 现代生物技术
②保护细胞免受外力的损伤； ③阻拦大分子物质进人细胞； ④使细胞具有致病性及对 噬菌体的敏感性。
伤 寒 杆 菌 细 胞 壁 中 含 毒 素
有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠 体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环 境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才 死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水 分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.
特点：结构简单，形体微小，通常要用光学显微镜或 电子显微镜才能看到，有的甚至没有细胞结构。 用途：90%以上的微生物是对人类有利的。如抗生素 多数来源放线菌和霉菌；酒由酵母菌发酵产生，腐乳 由红曲霉和毛霉发酵制成；微生物也能消除环境污染， 在新能源领域将发挥巨大作用。
1）放线菌
1、结构： 单细胞原核 分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）
分离后,一个菌体 便会形成一个菌 落,这是消除污染 杂菌的通用方法, 也是用于筛选高 表达量菌株的最 简便方法之一
实验1大肠杆菌的培养与分离
实验1-大肠杆菌的培养与分离实验1：大肠杆菌的培养和分离一、教学要求二、基本内容1．培养基的种类和化学成份培养基的种类有很多划分标准，按物理性质分：固体培养基和液体培养基（加入琼脂多少）。
液体培养基用于扩大培养和工业生产，固体培养基用于菌种分离，鉴定，计数（菌落数量）。
培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
按照微生物的同化作用类型是自养还是异养，碳源不同，自养微生物为无机碳源，如硝化细菌是二氧化碳或碳酸盐，异养微生物为有机碳源，如大肠杆菌是葡萄糖等有机物。
2．常见微生物类群原核生物（如细菌大肠杆菌――二分裂、革兰氏阴性、异养兼性厌氧性肠道杆菌、蓝藻、支原体、衣原体、放线菌等）、原生生物（草履虫、变形虫等）、真菌（酵母菌――出芽生殖.异养兼性厌氧性微生物、霉菌、食用菌）、病毒等。
细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核，只有一环状DNA分子（拟核）。
以分裂（二分裂）的方式繁殖，分裂速度很快。
用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌（革兰氏染液染色后，再脱色处理，细菌仍保留染色液的颜色）和革兰氏阴性菌两大类，区别在细胞壁的成分不同。
大肠杆菌是革兰氏阴性（细胞壁薄，有荚膜）、兼性厌氧的肠道杆菌。
3．无菌技术对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。
灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法。
②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱。
③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。
④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。
4．培养基的配制原则目的要明确：根据培养的微生物种类、培养的目的等确定培养基的类型和配制量。
营养要协调：培养基中各种营养物质的浓度和比例要适宜。
实验1 大肠杆菌的培养和分离
（1)简述甘蔗大规模快速繁殖技术的过程。
（2）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行 诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。 步骤2:制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意＿和 ＿，加琼脂后灭菌，制成
本图来自十一学校
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
细菌的分离方法
1.种类: 划线分离法和涂布分离法。 划线分离法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操 作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面. 划线时不能划破培养基
2.作用: 是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表 达量菌株的最简便方法之一。
实验一
大肠杆菌的培养和分离
微生物
定义:结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有 细胞结构的低等生物，包括病毒、原核生物、原生 生物和某些真菌。
曲霉
酵
母
菌
草履虫
细菌：是单细胞的原核生物。 结构组成：细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，拟核 分裂方式：二分裂
菌落：由单个细菌（或其他微生物）在适宜固体培养 基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有 一定形态结构等特征的子细胞的群落。
为什么要倒置培养？
培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，正放培养 皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并 且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落间相互 影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。
1.下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接 种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。
（2）具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行 诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。 步骤2:制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意＿和 ＿，加琼脂后灭菌，制成
本图来自十一学校
二、实验流程 配制培养基
包器材
灭菌
倒平板(或斜面)
接种扩大培养 分离
单菌落培养
接种保存
细菌的分离方法
1.种类: 划线分离法和涂布分离法。 划线分离法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操 作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面. 划线时不能划破培养基
2.作用: 是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表 达量菌株的最简便方法之一。
实验一
大肠杆菌的培养和分离
微生物
定义:结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有 细胞结构的低等生物，包括病毒、原核生物、原生 生物和某些真菌。
曲霉
酵
母
菌
草履虫
细菌：是单细胞的原核生物。 结构组成：细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，拟核 分裂方式：二分裂
菌落：由单个细菌（或其他微生物）在适宜固体培养 基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有 一定形态结构等特征的子细胞的群落。
为什么要倒置培养？
培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，正放培养 皿会使水蒸气凝结成水滴后，落入培养基的表面并 且扩散，菌落中的细菌也会随水扩散，菌落间相互 影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的。
1.下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接 种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。
实验1：大肠杆菌的培养和分离
养基
天然培养基
(根据用途)：
全营养培养基：含有微生物生长所需各种营养，
用于微生物生长和增殖
选择培养基：添加或减少某种成分，从多种微
生物中分离出所需的微生物
鉴别培养基：加入某种指示剂或化学药品，鉴
定是否含有所要测定的微生物
一、基础知识
（二）培养基： 2、培养基的营养成分：
种 类 查氏培养基 成 分 NaNO3 0.3g 、 KCl 0.05g 、 K2HPO4 0.1g 、 FeSO4 0.001g 、MgSO4•7H2O 0.05g、蔗糖 3g 、 H2O 100g
麦芽汁培养基
干麦芽粉加四倍水
一、基础知识
（二）培养基： 供微生物等生长繁殖所需的人工配制的营养
液体培养基 1、分类(按物理状态)： 半固体培养基 固体培养基
60~80℃烘 箱中烘干
•操作步骤： 加塞封口、包扎 —— 灭菌 ——烘干
•通常试管用棉塞(2/3在试管 内)，三角瓶用封口膜或纱布。 •作用：既通气又阻止杂菌进 入 •不能用脱脂棉(易吸水引起污 染)。 用牛 皮纸 或报 纸包 扎 •放入高压蒸汽灭菌锅, 在121℃(1Kg/cm2压 力)下灭菌15min。 •培养基中若有葡萄糖, 用500g/cm2压力(90 ℃以上)灭菌30min。 防止葡萄糖分解碳化 •不能加热灭菌的化合 物(如尿素)，只能用 G6玻璃砂漏斗过滤。 细菌不能滤过G6
灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌
灼烧灭菌
用于接种工具(接 种环、接种针)或 其他金属用具。
干热灭菌
160－170℃；1－2h 用于能耐高温的需要保持干燥 的物品(如玻璃器皿)。
高压蒸汽灭菌
121℃(1Kg/cm2压力)；15min 最常用。通常用于培养基及各种 器具的灭菌。
天然培养基
(根据用途)：
全营养培养基：含有微生物生长所需各种营养，
用于微生物生长和增殖
选择培养基：添加或减少某种成分，从多种微
生物中分离出所需的微生物
鉴别培养基：加入某种指示剂或化学药品，鉴
定是否含有所要测定的微生物
一、基础知识
（二）培养基： 2、培养基的营养成分：
种 类 查氏培养基 成 分 NaNO3 0.3g 、 KCl 0.05g 、 K2HPO4 0.1g 、 FeSO4 0.001g 、MgSO4•7H2O 0.05g、蔗糖 3g 、 H2O 100g
麦芽汁培养基
干麦芽粉加四倍水
一、基础知识
（二）培养基： 供微生物等生长繁殖所需的人工配制的营养
液体培养基 1、分类(按物理状态)： 半固体培养基 固体培养基
60~80℃烘 箱中烘干
•操作步骤： 加塞封口、包扎 —— 灭菌 ——烘干
•通常试管用棉塞(2/3在试管 内)，三角瓶用封口膜或纱布。 •作用：既通气又阻止杂菌进 入 •不能用脱脂棉(易吸水引起污 染)。 用牛 皮纸 或报 纸包 扎 •放入高压蒸汽灭菌锅, 在121℃(1Kg/cm2压 力)下灭菌15min。 •培养基中若有葡萄糖, 用500g/cm2压力(90 ℃以上)灭菌30min。 防止葡萄糖分解碳化 •不能加热灭菌的化合 物(如尿素)，只能用 G6玻璃砂漏斗过滤。 细菌不能滤过G6
灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌
灼烧灭菌
用于接种工具(接 种环、接种针)或 其他金属用具。
干热灭菌
160－170℃；1－2h 用于能耐高温的需要保持干燥 的物品(如玻璃器皿)。
高压蒸汽灭菌
121℃(1Kg/cm2压力)；15min 最常用。通常用于培养基及各种 器具的灭菌。
实验1大肠杆菌的培养和分离ppt课件
2、成分
水、碳源、氮源、 无机盐、生长因子
(生长因子即细菌生长必需，而自身不能合成的 化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)
不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方
调节pH
真菌：5～6 细菌：6.5 ～ 7.5
有时会加一定量的氯化钠以维持一定的渗透压
四、无菌操作
1.无菌操作的概念
无菌操作杂泛菌指在培养微生物的操作中，所有防止________污染的方法。
每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下 一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的 增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。
2、在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？ 为什么？
划线结束后灼烧接种环，及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和 感染操作者。
大肠杆菌在人体的_____中一肠般道对人体无害，但任何 大大肠肠杆杆菌菌如是_果_进__入_____工__程__中_被__广_泌都泛尿会采系对用统人的体工产具生。危害。
基因
质粒、 EcoRⅠ限制酶、
E.coli-DNA连接酶、
受体细胞
菌落的概念
菌落：单个或少数细菌在固体培养基上大量生长 繁殖时，所形成的肉眼可见的具有一定形态结构 的子细胞群体。
天然培养基：
天然培养基有血清、 血浆、和组织提取液 （如鸡胚和牛胚浸 液）。 优点：营养成分丰富， 培养效果好 缺点：来源受限;成分 复杂，影响对某些实 验产物的提取和实验 结果的分析;易发生支 原体污染;
人工合成培养基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和 繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。
主要包括：
_各__种__器__具__必须无菌、 __培__养__基___也必须要无菌、 ___________时不能带入其他杂菌
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b. 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h
能耐高温的需要保持干 燥的物品( 玻璃器皿)
c.高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min
通常用于培养基的灭菌
实验一大肠杆菌的分离和培养
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二、实验操作 • （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
• 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板
• （二）分离纯化大肠杆菌
实验一大肠杆菌的分 离和培养
实验目的：
• 1.进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基 进行细菌培养的操作。
• 2.进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养 基本进行细菌的划线培养。
• 3.说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。
实验一大肠杆菌的分离和培养
பைடு நூலகம்
2
一、基础知识 • (一)微生物:
1.特点：结构都相当简单,个体多数十分微小.通常要 用光学显微镜或电子显微镜才能看到，有的甚至没 有细胞结构.且体内一般不含有叶绿素.不能进行光 合作用.
病毒
细菌
2.微生物包括五类 放线菌
真菌
原生动物
实验一大肠杆菌的分离和培养
3
(二)培养基
• 1.分类(按物理形态分)
• (1)液体培养基
• (2)固体培养基
①常用的固体培养基: 琼脂固体培养基.
②微生物在固体培养基 表面生长,可以形成 肉眼可见的菌落.
实验一大肠杆菌的分离和培养
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2.培养基内所含的基本物质
• (5)单菌落接种培养：在无菌操作下将单菌落用接种环取 出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h, 4℃冰箱保存。
实验一大肠杆菌的分离和培养
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单菌落
实验一大肠杆菌的分离和培养
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实验讨论 实验完成后，接触过细菌的器皿应如何处理？
• 实验完成后，所有接触过细菌的器皿都必须 先高压灭菌后再洗涤，特别是培养基，有可 能被有害菌体污染，在培养繁殖后，大量有 害菌体影响人畜健康，也污染环境，因此必 须高压灭菌。使用后的废弃物也要高压灭菌 后再抛弃。对于取样器的取样头，通常是灭 菌后在超声波清洗器中加洗衣粉洗涤纶30 min ,再用清水洗净，仍可再用。封口膜也可 再用。
实验一大肠杆菌的分离和培养
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• (1)水 • (2)碳源 • (3)氮源 • (4)无机盐
实验一大肠杆菌的分离和培养
5
3.培养基内所需的其他条件 • (1)pH值 • 如:培养霉菌需酸性、培养细菌需中性或微碱
性
• (2)特殊营养物质---- ? 生长因子
• 如：培养乳酸杆菌需要在培养基中添加维生 素
• (3)氧气的含量 • 如:培养厌氧微生物时需要提供无氧的条件
实验一大肠杆菌的分离和培养
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(三)无菌技术
• 1、获得纯净培养物的关键: 防止外来杂菌的入侵 • 2、无菌技术 的四个方面(参看教材20页) • 3、消毒与灭菌 (1)消毒： ① 概念：使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体
表面或内部一部分对人体有害的微生物。包括芽孢 和孢子吗？ (不包括芽孢和孢子) ② 方法: a. 煮沸消毒法 b. 巴氏消毒法:如牛奶的消毒 c. 化学药剂消毒:酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等 d. 紫外线消毒
• 接种方法有：
• 划线分离法和涂布分离法
• （三）将接种后的培养基和一个未接 种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h 和24h后，观察并记录
实验一大肠杆菌的分离和培养
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实验1：大肠杆菌的培养和分离
设备及用品：
灭菌锅或高压锅、250ml的三角瓶、封口膜和橡皮圈、 直径90mm的培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培 养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有 酒精棉球的广口瓶、镊子、有棉塞的试管 （15mm×120mm）5支
实验一大肠杆菌的分离和培养
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（2）灭菌
① 概念：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的 微生物，包括芽孢和孢子。
② 方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌
a.灼烧灭菌
注意适用范围
微生物的接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰的充分燃烧层灼烧
实验一大肠杆菌的分离和培养
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实验材料：
(1)50mlLB液体培养基：蛋白胨0.5g、酵母提取物0.25g、 NaCl 0.5g、加水50ml。
(2)大肠杆菌菌种斜面 (3)空白斜面
实验一大肠杆菌的分离和培养
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实验步骤
• (1) 灭菌：将配制好的50mlLB液体培养基和50mlLB液体 培养基分别装入两个250ml
• 的三角瓶中，加上封口膜，用高压锅进行灭菌。
• (2) 制平板：在酒精灯火焰旁将固体培养基分别倒在4个 培养皿中，使培养基铺平皿底部，待凝，使之形成平面。
• (3)接种扩大培养：靠近酒精灯火焰将大肠杆菌接种到三 角烧瓶的液体培养基中，三角烧瓶在37℃摇床振荡培养 12h。
• (4) 划线分离：将摇床上培养12h的菌液在固体培养基的 平板上连续划线，然后将盖好的培养皿倒置，放在37℃ 恒温培养箱中进行培养。