大肠杆菌实验
大肠杆菌实验报告
大肠杆菌实验报告大肠杆菌实验报告引言：大肠杆菌（Escherichia coli）是一种常见的肠道细菌，广泛存在于人和动物的肠道中。
尽管大肠杆菌在正常情况下对人体没有害处，但某些菌株可能引起食物中毒和其他健康问题。
本实验旨在探究大肠杆菌的特性和其对环境的适应能力。
实验目的：1. 了解大肠杆菌的形态和结构特征；2. 探究大肠杆菌的生长条件和适应能力；3. 研究大肠杆菌在不同环境下的生长情况。
实验材料和方法：1. 实验材料：- 大肠杆菌培养基- 灭菌培养皿- 灭菌试管- 灭菌移液管- 微量移液器- 恒温培养箱- 显微镜2. 实验步骤：1. 准备培养基：将大肠杆菌培养基按照说明书配制好，并灭菌处理。
2. 接种：使用微量移液器，将大肠杆菌接种到灭菌培养皿中。
3. 培养：将接种好的培养皿放入恒温培养箱中，并设置适当的温度和湿度条件。
4. 观察生长情况：每隔一段时间，观察培养皿中大肠杆菌的生长情况，并记录下来。
5. 形态和结构观察：取一部分培养物放在载玻片上，使用显微镜观察大肠杆菌的形态和结构特征。
实验结果：1. 大肠杆菌的形态和结构特征：在显微镜下观察，大肠杆菌呈现为短杆状，长度约为2-4微米，直径约为0.5微米。
细菌的表面有许多纤毛，这些纤毛有助于细菌的运动和附着。
大肠杆菌呈现为革兰阴性菌，其细胞壁主要由脂多糖和蛋白质组成。
2. 大肠杆菌的生长条件和适应能力：大肠杆菌在适宜的环境条件下能够迅速生长和繁殖。
它对温度、pH值和营养物的要求较为宽容。
一般来说，大肠杆菌的最适生长温度为37摄氏度，pH值在6.5-7.5之间。
此外，大肠杆菌对葡萄糖等简单糖类具有较高的利用能力，能够利用这些营养物进行代谢和生长。
3. 大肠杆菌在不同环境下的生长情况：大肠杆菌在不同环境条件下的生长情况可能有所不同。
例如，在高温环境下，大肠杆菌的生长速度会加快，而在低温环境下则会减慢。
此外，在酸性环境中，大肠杆菌的生长可能受到抑制。
然而，尽管大肠杆菌对环境的适应能力较强，但在极端条件下，如高温、高盐度等，它的生长可能会受到抑制或甚至死亡。
大肠杆菌生化实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生化特性，掌握大肠杆菌的鉴定方法。
2. 掌握微生物生化实验的基本操作技术，提高实验技能。
3. 通过实验，加深对微生物生化反应原理的理解。
二、实验原理大肠杆菌是一种革兰氏阴性细菌，属于肠杆菌科。
在微生物学中，生化实验是鉴定细菌的重要手段之一。
通过观察细菌对特定底物的代谢能力，可以判断细菌的种类和特性。
本实验主要采用糖发酵实验、吲哚试验、甲基红试验等方法对大肠杆菌进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌菌种、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、吲哚试剂、甲基红试剂、卢戈氏碘液、乙醚、蒸馏水等。
2. 实验仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管、电子天平、纱布、脱脂棉、灭菌锅、PH计或PH试纸、电炉、石棉网、铁架台、100ml量筒、橡皮手套、超净台等。
四、实验步骤1. 糖发酵实验（1）将大肠杆菌接种于葡萄糖发酵培养基中，37℃培养24小时。
（2）观察培养基中是否产生气泡，若有气泡产生，则说明大肠杆菌能够利用葡萄糖。
2. 吲哚试验（1）将大肠杆菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃培养24小时。
（2）取少量培养液加入吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀。
3. 甲基红试验（1）将大肠杆菌接种于乳糖发酵培养基中，37℃培养24小时。
（2）加入甲基红试剂，观察培养基颜色变化。
五、实验结果与分析1. 糖发酵实验：大肠杆菌在葡萄糖发酵培养基中产生气泡，说明其能够利用葡萄糖。
2. 吲哚试验：大肠杆菌在蛋白胨水培养基中产生红色沉淀，说明其具有吲哚酶活性。
3. 甲基红试验：大肠杆菌在乳糖发酵培养基中不产生红色沉淀，说明其不能发酵乳糖。
根据实验结果，可以判断该菌株为大肠杆菌。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了微生物生化实验的基本操作技术，加深了对微生物生化反应原理的理解。
在实验过程中，我们学会了如何观察细菌对特定底物的代谢能力，从而对大肠杆菌进行鉴定。
大肠杆菌实验报告
大肠杆菌实验报告
实验目的：研究大肠杆菌的生长规律和影响因素。
实验原理：
大肠杆菌是一种常见的革兰氏阴性菌，广泛存在于自然环境中，如土壤、水体和动物的消化道中。
大肠杆菌是一种强大的生物工程工具，被广泛用于基因克隆、蛋白表达和生物制药等领域。
大肠杆菌的生长主要受到以下因素的影响：
1. 温度：大肠杆菌的适宜生长温度一般为37℃。
过高或过低
的温度都会抑制细菌的生长。
2. pH值：大肠杆菌对酸碱度有一定的耐受能力，适宜生长的pH范围为6.5-7.5。
3. 氧气含量：大肠杆菌是一种厌氧菌，但也可以在氧气存在的条件下进行生长。
4. 营养物质：大肠杆菌需要碳源、氮源、磷源等营养物质来进行生长。
实验步骤：
1. 准备培养基：将大肠杆菌营养琼脂混合溶解，并进行高温高压灭菌处理。
2. 用无菌移液管取一小滴大肠杆菌液，滴入含有营养琼脂的平板培养基上，轻轻摇晃平板，使细菌均匀分布于培养基上。
3. 将培养基置于恒温培养箱中，调节温度为37℃，培养一定
时间，观察菌落的形成和生长情况。
4. 在不同温度、pH值、氧气含量和营养物质条件下，重复步
骤2和3。
实验结果：
根据实验观察，大肠杆菌在37℃左右的温度下生长最好，pH 值在6.5-7.5之间时生长最快，适宜的氧气含量是气体和液体的界面。
实验结论：
大肠杆菌的生长受到温度、pH值、氧气含量和营养物质的影响。
掌握这些影响因素，能够更好地培养和利用大肠杆菌进行实验和工程应用。
微生物大肠杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生物学特性。
2. 掌握大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。
3. 掌握大肠杆菌的培养和计数方法。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是肠杆菌科的一种细菌，广泛存在于人体肠道中。
本实验通过分离、纯化和鉴定大肠杆菌，了解其生物学特性，并掌握其培养和计数方法。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜粪便、营养琼脂平板、营养肉汤、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌试管、无菌培养皿、无菌移液器、酒精灯、显微镜等。
2. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台等。
四、实验方法1. 大肠杆菌的分离（1）取新鲜粪便样品，用无菌生理盐水进行稀释。
（2）取适量稀释液，用无菌棉签涂布于营养琼脂平板上。
（3）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
2. 大肠杆菌的纯化（1）观察平板上的菌落，挑选单菌落，用无菌移液器移至新的营养琼脂平板上。
（2）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
3. 大肠杆菌的鉴定（1）观察纯化后的菌落，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
（2）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（3）取培养液，用显微镜观察细菌形态，并进行革兰氏染色。
（4）对培养液进行生化试验，如乳糖发酵试验、吲哚试验等。
4. 大肠杆菌的培养与计数（1）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）用无菌移液器取适量培养液，进行系列稀释。
（3）取稀释液，涂布于营养琼脂平板上。
（4）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（5）观察平板上的菌落，记录菌落数，并计算大肠杆菌的浓度。
五、实验结果与分析1. 大肠杆菌的分离：在平板上观察到圆形、光滑、白色、半透明的菌落，说明已分离出大肠杆菌。
2. 大肠杆菌的纯化：经过纯化后，菌落特征与分离菌落相同，证明已得到纯化的大肠杆菌。
3. 大肠杆菌的鉴定：通过显微镜观察，发现细菌为革兰氏阴性短杆菌，生化试验结果显示该菌株能发酵乳糖，产生吲哚，表明已鉴定为大肠杆菌。
大肠杆菌的原核表达实验过程结果
大肠杆菌的原核表达实验过程结果
大肠杆菌的原核表达实验一般分为以下几个步骤：
1. 构建表达载体：将待表达的基因克隆到适当的表达载体上,如常用的pET、pGEX等载体中。
2. 转化大肠杆菌：将表达载体转化到大肠杆菌细胞中。
可以通过化学方法、电转化、冷冻复苏、热激转化等方法进行。
3. 诱导表达：在大肠杆菌细胞进行生长至适当时期后,添加适宜浓度的诱导剂,如IPTG等,诱导待表达基因蛋白的合成。
4. 细胞收获和破碎：诱导一定时间后,收获大肠杆菌细胞并进行破碎,以获得待表达蛋白。
5. 蛋白提取：对细胞破碎物进行离心、超滤等步骤,去除残余细胞构成和杂质,得到含有待表达蛋白的上清液。
6. 纯化和分析：将上清液进行分离、纯化、鉴定,以确定表达蛋白相应的分子量、酶活性等。
在以上步骤中,实验者需要进行质控和评估,确认实验步骤是否正确和表达蛋白是否达到预期,以确保实验结果的可靠性和准确性。
实验一大肠杆菌的分离和培养
细菌
2.微生物涉及五类 放线菌
真菌
原生动物
(二)培养基
• 1.分类(按物理形态分) • (1)液体培养基 • (2)固体培养基
①常用旳固体培养基: 琼脂固体培养基.
②微生物在固体培养基 表面生长,能够形成 肉眼可见旳菌落.
2.培养基内所含旳基本物质
• (1)水 • (2)碳源 • (3)氮源 • (4)无机盐
a.灼烧灭菌
注意合用范围
微生物旳接种工具 (接 种环、接种针)或其 他金属用具直接在火 焰旳充分燃烧层灼烧
b. 干热灭菌 160－170℃ ；1－2h
能耐高温旳需要保持干 燥旳物品( 玻璃器皿)
c.高压蒸汽灭菌 100kPa 121℃ 15-30min
一般用于培养基旳灭菌
二、试验操作 • （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
• 计算－称量－溶化－灭菌－倒平板
• （二）分离纯化大肠杆菌
• 接种措施有：
• 划种未接 种旳培养基放入37℃恒温箱中培养12h 和24h后，观察并统计
三、课题延伸：菌种旳保藏
• 1、斜面保藏 • （临时保存） • 2、甘油保藏
（长久保 存）
试验1：大肠杆菌旳培养和分离
角烧瓶旳液体培养基中，三角烧瓶在37℃摇床振荡培养 12h。 • (4) 划线分离：将摇床上培养12h旳菌液在固体培养基旳 平板上连续划线，然后将盖好旳培养皿倒置，放在37℃ 恒温培养箱中进行培养。 • (5)单菌落接种培养：在无菌操作下将单菌落用接种环取 出，再用划线法接种在空白斜面上，在37℃下培养24h, 4℃冰箱保存。
设备及用具：
灭菌锅或高压锅、250ml旳三角瓶、封口膜和橡皮圈、 直径90mm旳培养皿、接种环和玻璃三角刮刀、恒温培 养箱、摇床、酒精灯和超净台、一次性塑料手套、装有 酒精棉球旳广口瓶、镊子、有棉塞旳试管 （15mm×120mm）5支
大肠杆菌检测实验报告
一、实验目的1. 掌握大肠杆菌检测的基本原理和方法；2. 学会使用国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数；3. 提高微生物实验操作技能，为后续相关实验奠定基础。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是一种革兰氏阴性菌，广泛存在于人类和动物肠道中，属于条件致病菌。
本实验采用国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数，主要利用大肠杆菌在LB培养基上生长繁殖的特性，通过计数菌落数来估算大肠杆菌的浓度。
三、实验器材1. 培养箱；2. 移液管（10只）；3. 锥形瓶（250ml，12只）；4. 大试管（5只）；5. 试管架；6. 平皿（45个）；7. 大烧杯（500ml，1个）；8. 电子天平；9. 纱布；10. 脱脂棉；11. 灭菌锅；12. pH计或pH试纸；13. 电炉；14. 石棉网；15. 铁架台；16. 量筒（100ml，1个）；17. 橡皮手套；18. 超净台。
四、实验药品1. 磷酸盐缓冲液；2. 蒸馏水；3. LB培养基；4. 琼脂；5. 5%NaOH；6. 5%HCl。
五、实验步骤1. 培养基制备（1）称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中；（2）用量筒量取125ml的蒸馏水加入锥形瓶中，制成培养基；（3）用棉花堵住锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢；（4）将培养基放入灭菌锅中，在121摄氏度下灭菌20min；（5）灭菌后放入超净台中备用。
2. 样本处理（1）取适量样本（如食品、水等）；（2）用无菌生理盐水进行梯度稀释；（3）取适量稀释液加入平皿中，制成平板；（4）将平板放入培养箱中，在37摄氏度下培养24h。
3. 菌落计数（1）观察平板，找出菌落数在30-300之间的平板；（2）用移液管吸取适量菌液，加入锥形瓶中；（3）在锥形瓶中加入适量的5%NaOH溶液，充分振荡；（4）将锥形瓶放入培养箱中，在37摄氏度下培养24h；（5）观察锥形瓶中的菌落生长情况，记录菌落数。
大肠杆菌实验结果与分析
2、实验结果与分析2.1、细菌总数检测结果2.1.2、细菌总数的计算与报告根据菌落总数的计算方法：1、若只有一个稀释度平板上的菌落术在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。
2、若有两个连续稀释度的平均菌落数载适宜计数范围内时，按下式计算：N=∑c/[(n1+0.1n2)d]式中：N—样品中菌落数；∑C—平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1—第一个适宜稀释度平板上的菌落数；n2—第二个适宜稀释度平板上的菌落数；d—稀释因子（第一稀释度）为1.75x107；在浓度10—6(g/ml)的时候，大肠杆菌的细菌总数约为1.60x107；在浓度10—7(g/ml)的时候，大肠杆菌的细菌总数约为2.01x107。
分析数据可知，在浓度10—7(g/ml)的时候，细菌总数远大于其他两个梯度，这与常理不符。
那么有可能是实验过程中的错误导致，可能是稀释不够、密封不紧、没有进行无菌操作等因素有关。
2.2、大肠菌群检测结果2.1.1、初发酵各浓度梯度阳性管数统计附：检验原始记录检验原始记录检测记录与结果培养基配制：样品配制：1、 固体样品，无菌称取25g 样品加225ml 生理盐水，均质。
2、 液体样品，需稀释的，吸取25ml 于225生理盐水，混匀。
菌落总数：检验依据：GB/T4789.2-2008大肠杆菌：检验一句GB/T4789.3-2003大肠杆菌：检验一句GB/T4789.3-2003注：“P ”表示阳性结果，“N ”表示阴性结果检验起止时间：2011年09月25日至2011年09月27日检测人:复核人：。
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大肠杆菌感受态细胞制备与质粒DNA的转化
一、实验目的
1）掌握用CaCl2法制备感受态细胞的原理和方法。
2）学习和掌握质粒DNA的转化和筛选方法及操作步骤。
二、实验原理
本实验以E.coli DH 5α菌株为受体细胞，并用CaCl2处理，使其处于感受态，然后与pBS质粒共保温实现转化。
由于所用pBS质粒带有长那霉素抗性基因。
因此可以通过长那霉素抗性来筛选转化子。
如果受体细胞没有转入pBS，则在含长那霉素的培养基上不能生长。
能在长那霉素培养基上生长的受体细胞肯定已经导入了pBS。
转化子扩增后，可将转化的质粒提取出，进行电泳酶切等进一步鉴定。
三、仪器及试剂
仪器：恒温摇床、CO2细胞培养箱、台式高速冷冻离心机、超净工作台、低温冰箱、恒温水浴锅、制冰机、分光光度计、移液枪、Eppendrof管。
试剂：LB培养基(在950mL水中加入10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、10gNaCl、用1mol/L NaOH调制pH=7.2.加入至1L，121℃高压灭菌20min)
长那霉素储存液：100mg/mL
含长那霉素的LB固体培养基：(1L LB液体培养基中加入20g琼脂粉，将配好的LB固体培养基高压灭菌后，冷却至60℃左右，加入长那霉素储存液，使其终浓度为50μg/mL。
摇匀后铺板，每皿倒15mL，室温放置过夜至冷凝水挥发干净)
1mol/L CaCl2储存液质粒DNA10ng/Μl
四、实验步骤
1 感受态细胞的制备
1）从LB平板上挑选新活化的E.coli DH 5α单菌株，接种于3~5mL LB液体培养基中，37℃下震荡过夜培养，12h左右，直至对数生长后期。
2）将该菌悬浮液以1:50的比例接种于5mL LB液体培养基中，37℃振荡培养2~3h至OD600为0.5左右。
3）将5mL培养液转入4个1.5mL离心管中，冰上放置10min，然后于4℃下，5000rpm离心5min。
4）弃去上清液，用预冷的1mL 0.1 mol/L CaCl2溶液轻轻悬浮细胞，冰上放置15~20min后，40℃下5000rpm离心5min。
2 铺平板
将配好灭菌的LB固体培养基加热融化，待冷却至60℃左右后，加入长那霉素储存液，使其终温度为50μg/mL，摇匀后铺板，每皿倒约15mL。
室温放置过夜至冷凝水挥发干净。
3 感受态细胞的转化
1）取100μl感受态细胞悬浮液，加入5μLpBS质粒DNA溶液，轻轻摇匀，冰上放置30min。
2）42℃水浴热激70s，热激后迅速置于冰上冷却3~5min。
3）向管中加入400μl LB液体培养基（不含抗生素），混匀后37℃震荡培养1h。
使细菌恢复到正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因。
4）将上述菌液摇匀，取200μl涂布于含长那霉素的筛选平板上，正面放置0.5h。
待菌液完全被吸收后倒置培养皿，37℃培养16~24h，
5）对照实验：
对照组1：以同体积的无菌二次水代替DNA溶液，其他操作与上面相同。
此组正常情况下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。
对照组2：以同体积的无菌二次水代替DNA溶液，取5μl菌液，稀释100万倍，涂布于不含抗生素的LB平板上，此组正常情况下应产生大量菌落。
五、实验数据记录处理
转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，各培养皿中的菌落数如下表所示：
平板序号DNA溶液无菌水抗生素稀释倍数菌落数
1+—+134
2+—+144
3—++10
4—+—1*106145
表 1 各平板数据记录
① 转化子总数=菌落数*稀释倍数*转化反应原液总体积/涂板菌液总体积
1号平板：转化子总数=34*1*505/200=86
2号平板：转化子总数=44*1*505/200=111
② 转化频率（转化子数/每毫DNA）=转化子总数/质粒DNA加入量(mg)
1号平板：转化频率=86/(50*10-6)=1.72*106
2号平板：转化频率=111/(50*10-6)=2.22*106
③ 感受态细胞总数=对照组2的菌落数*稀释倍数*菌液总体积/涂板菌液体积
4号平板：感受态细胞总数=145*106*505/200=3.66*108
④ 感受态细胞转化效率=转化子总数/感受态细胞总数
对1号平板：感受态细胞转化效率=86/(3.66*108)*100%=2.35*10-5%
对2号平板：感受态细胞转化效率=111/(3.66*108)*100%=3.03*10-5%
3号平板上没有菌落生成，说明未转化的细胞在有抗生素的环境中完全不能生存。
六、思考题讨论
1）感受态细胞：细菌收诱导后产生的一种短暂的、易于摄取外源DNA的状态。
2）CaCl2法制备感受态细胞的原理：细菌处于0℃的CaCl2低渗溶液中，细胞膨胀成球形。
转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基钙磷酸复合物黏附于细胞表面，在经42℃短时间热休克处理，可制备成感受态细胞，促进细胞吸收DNA复合物。
3）制备感受态和转化细胞时注意事项（提高效率方法）：倒平板时应避免培养基温度过高，否则加入的抗生素会失效；OD600值需合适，即细菌应处于对数前期，对数中期；热激时间，热激温度需合适，且热激前加入相当于转化液体积1/10的DMSO可提高效率100倍左右，加入DMSO后不要剧烈振荡；实验过程中需
保证无菌操作、避免引入杂菌；涂板时应小心，防止细胞死亡。