大肠杆菌生化实验
肠杆菌的培养实验报告
一、实验目的1. 掌握肠杆菌的培养方法。
2. 熟悉肠杆菌的形态、染色和生化反应。
3. 了解肠杆菌的分离、鉴定和纯化方法。
二、实验原理肠杆菌属于革兰氏阴性杆菌，广泛分布于自然界、人和动物的肠道中。
在实验室中，可以通过培养、染色和生化反应等方法对肠杆菌进行分离、鉴定和纯化。
本实验主要采用普通琼脂培养基进行肠杆菌的培养，通过革兰氏染色观察其形态，通过生化反应进行鉴定。
三、实验材料1. 肠杆菌菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）。
2. 培养基：普通琼脂培养基、双糖铁琼脂培养基、营养肉汤培养基。
3. 试剂：革兰氏染色液、酚红指示剂、葡萄糖、乳糖、甘露醇、氯化钠、硝酸盐还原剂、葡萄糖氧化酶、吲哚产生试剂、硫化氢产生试剂等。
4. 仪器：高压灭菌锅、恒温培养箱、显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌操作台等。
四、实验方法1. 培养基制备（1）普通琼脂培养基：称取琼脂粉15g，加入500ml蒸馏水，加热溶解后加入10g 氯化钠，调节pH值为7.0-7.2，高压灭菌后备用。
（2）双糖铁琼脂培养基：称取琼脂粉15g，加入500ml蒸馏水，加热溶解后加入10g氯化钠，调节pH值为7.0-7.2，高压灭菌后备用。
（3）营养肉汤培养基：称取牛肉膏10g，蛋白胨5g，氯化钠5g，加入1000ml蒸馏水，加热溶解后调节pH值为7.0-7.2，高压灭菌后备用。
2. 肠杆菌培养（1）将菌种接种于营养肉汤培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
（2）取培养好的菌液，用接种环取少量菌液，接种于普通琼脂培养基平板上，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
3. 革兰氏染色（1）将培养好的菌落用无菌镊子挑取，置于载玻片上。
（2）滴加革兰氏染色液，染色时间为1-2分钟。
（3）水洗、干燥，观察菌落形态。
4. 生化反应（1）将培养好的菌液接种于双糖铁琼脂培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养18-24小时。
（2）观察菌落是否产生红色沉淀，判断葡萄糖和乳糖是否发酵。
大肠杆菌生化实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生化特性，掌握大肠杆菌的鉴定方法。
2. 掌握微生物生化实验的基本操作技术，提高实验技能。
3. 通过实验，加深对微生物生化反应原理的理解。
二、实验原理大肠杆菌是一种革兰氏阴性细菌，属于肠杆菌科。
在微生物学中，生化实验是鉴定细菌的重要手段之一。
通过观察细菌对特定底物的代谢能力，可以判断细菌的种类和特性。
本实验主要采用糖发酵实验、吲哚试验、甲基红试验等方法对大肠杆菌进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：大肠杆菌菌种、葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、吲哚试剂、甲基红试剂、卢戈氏碘液、乙醚、蒸馏水等。
2. 实验仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管、电子天平、纱布、脱脂棉、灭菌锅、PH计或PH试纸、电炉、石棉网、铁架台、100ml量筒、橡皮手套、超净台等。
四、实验步骤1. 糖发酵实验（1）将大肠杆菌接种于葡萄糖发酵培养基中，37℃培养24小时。
（2）观察培养基中是否产生气泡，若有气泡产生，则说明大肠杆菌能够利用葡萄糖。
2. 吲哚试验（1）将大肠杆菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃培养24小时。
（2）取少量培养液加入吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀。
3. 甲基红试验（1）将大肠杆菌接种于乳糖发酵培养基中，37℃培养24小时。
（2）加入甲基红试剂，观察培养基颜色变化。
五、实验结果与分析1. 糖发酵实验：大肠杆菌在葡萄糖发酵培养基中产生气泡，说明其能够利用葡萄糖。
2. 吲哚试验：大肠杆菌在蛋白胨水培养基中产生红色沉淀，说明其具有吲哚酶活性。
3. 甲基红试验：大肠杆菌在乳糖发酵培养基中不产生红色沉淀，说明其不能发酵乳糖。
根据实验结果，可以判断该菌株为大肠杆菌。
六、实验总结通过本次实验，我们掌握了微生物生化实验的基本操作技术，加深了对微生物生化反应原理的理解。
在实验过程中，我们学会了如何观察细菌对特定底物的代谢能力，从而对大肠杆菌进行鉴定。
微生物大肠杆菌实验报告
一、实验目的1. 了解大肠杆菌的生物学特性。
2. 掌握大肠杆菌的分离、纯化和鉴定方法。
3. 掌握大肠杆菌的培养和计数方法。
二、实验原理大肠杆菌（Escherichia coli）是肠杆菌科的一种细菌，广泛存在于人体肠道中。
本实验通过分离、纯化和鉴定大肠杆菌，了解其生物学特性，并掌握其培养和计数方法。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜粪便、营养琼脂平板、营养肉汤、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌试管、无菌培养皿、无菌移液器、酒精灯、显微镜等。
2. 实验仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、无菌操作台等。
四、实验方法1. 大肠杆菌的分离（1）取新鲜粪便样品，用无菌生理盐水进行稀释。
（2）取适量稀释液，用无菌棉签涂布于营养琼脂平板上。
（3）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
2. 大肠杆菌的纯化（1）观察平板上的菌落，挑选单菌落，用无菌移液器移至新的营养琼脂平板上。
（2）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
3. 大肠杆菌的鉴定（1）观察纯化后的菌落，记录菌落特征，如大小、形状、颜色等。
（2）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（3）取培养液，用显微镜观察细菌形态，并进行革兰氏染色。
（4）对培养液进行生化试验，如乳糖发酵试验、吲哚试验等。
4. 大肠杆菌的培养与计数（1）将纯化后的菌株接种于营养肉汤中，37℃培养24小时。
（2）用无菌移液器取适量培养液，进行系列稀释。
（3）取稀释液，涂布于营养琼脂平板上。
（4）将平板放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
（5）观察平板上的菌落，记录菌落数，并计算大肠杆菌的浓度。
五、实验结果与分析1. 大肠杆菌的分离：在平板上观察到圆形、光滑、白色、半透明的菌落，说明已分离出大肠杆菌。
2. 大肠杆菌的纯化：经过纯化后，菌落特征与分离菌落相同，证明已得到纯化的大肠杆菌。
3. 大肠杆菌的鉴定：通过显微镜观察，发现细菌为革兰氏阴性短杆菌，生化试验结果显示该菌株能发酵乳糖，产生吲哚，表明已鉴定为大肠杆菌。
肠杆菌生化实验报告
一、实验目的1. 掌握肠道杆菌的生理生化特性。
2. 熟悉并掌握肠杆菌科细菌的鉴定方法，如IMViC试验等。
3. 通过实验，提高对微生物学实验技能的运用和操作能力。
二、实验原理肠杆菌科细菌是一类革兰氏阴性、无芽孢、无荚膜的杆菌，广泛分布于自然界、人和动物的肠道中。
本实验通过对肠杆菌进行一系列生理生化试验，包括吲哚试验（I）、甲基红试验（M）、V.P试验（V）、柠檬酸盐利用试验（C）等，以鉴定和区分不同肠杆菌科细菌。
三、实验材料1. 菌株：大肠杆菌、产气肠杆菌、变形杆菌等。
2. 培养基：蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨培养基、柠檬酸盐培养基、双糖铁培养基等。
3. 试剂：吲哚试剂、甲基红试剂、V.P试剂、40%KOH、-茶酚、溴麝香草酚蓝、苯酚红等。
4. 仪器：酒精灯、试管、试管架、烧杯、量筒、接种环、接种针、无菌玻片、显微镜等。
四、实验方法1. 吲哚试验（I）（1）将试验菌接种于蛋白胨水培养基，37℃培养24小时。
（2）取1 mL培养液，加入1 mL乙醚，充分振荡，使乙醚层浮于培养液表面。
（3）沿管壁加入吲哚试剂10滴，静置片刻。
（4）观察培养液颜色变化，呈玫瑰红色为阳性，不变色为阴性。
2. 甲基红试验（M）（1）将试验菌接种于葡萄糖蛋白胨培养基，37℃培养24小时。
（2）沿管壁加入甲基红试剂3-4滴。
（3）观察培养液颜色变化，呈红色为阳性，黄色为阴性。
3. V.P试验（V）（1）将试验菌接种于葡萄糖蛋白胨培养基，37℃培养24小时。
（2）加入40%KOH 10-20滴，再加入等量-茶酚，用力振荡。
（3）37℃培养4小时后观察，仍无色产生为阴性。
4. 柠檬酸盐利用试验（C）（1）将试验菌接种于柠檬酸盐培养基斜面上，37℃培养24-28小时。
（2）观察培养基颜色变化，若含有溴麝香草酚蓝的斜面呈现蓝色为阳性，呈绿色为阴性；含苯酚红的斜面呈现红色为阳性，呈黄色为阴性。
五、实验结果1. 吲哚试验：大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
肠道细菌生化实验报告
一、实验目的1. 了解肠道细菌的生理生化特性。
2. 掌握肠道细菌生化实验的基本原理和方法。
3. 通过实验，鉴别肠道细菌的种类。
二、实验原理肠道细菌生化实验是通过观察细菌对特定底物的代谢反应，如糖类、蛋白质、脂肪等的分解能力，以及产生某些特定代谢产物的能力，来鉴别细菌种类的一种方法。
实验中常用的生化反应包括糖发酵实验、吲哚试验、甲基红试验、V-P试验等。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、吲哚试剂、甲基红试剂、V-P试剂等。
3. 仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管等。
四、实验方法1. 糖发酵实验：将待测菌接种于糖发酵培养基中，37℃恒温培养24小时，观察菌落周围是否出现红色圈，红色圈表示该菌能够发酵该糖类。
2. 吲哚试验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃恒温培养24小时，加入吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀。
3. 甲基红试验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃恒温培养24小时，加入甲基红试剂，观察培养基颜色变化。
4. V-P试验：将待测菌接种于V-P试剂中，37℃恒温培养24小时，观察是否产生红色沉淀。
五、实验结果与分析1. 糖发酵实验：大肠杆菌发酵葡萄糖，产酸产气；产气肠杆菌发酵乳糖，产酸产气；普通变形杆菌发酵葡萄糖，产酸产气；枯草芽孢杆菌不发酵葡萄糖。
2. 吲哚试验：大肠杆菌产生吲哚，呈阳性；产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌不产生吲哚，呈阴性。
3. 甲基红试验：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性。
4. V-P试验：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性。
根据实验结果，可以初步判断待测菌为大肠杆菌。
六、实验结论通过肠道细菌生化实验，我们掌握了肠道细菌生化实验的基本原理和方法，成功鉴别了待测菌为大肠杆菌。
【报告】大肠杆菌培养实验报告
【关键字】报告大肠杆菌培养实验报告篇一：大肠杆菌检测实验报告国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl实验步骤：一：10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml 量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。
灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。
用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min二：1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。
2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。
3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。
4：灭完菌后放入超净台中备用。
三：1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。
3：取4只试管，编号1—44：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。
6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。
9：取4只平皿，编号1—410：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。
缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。
大肠杆菌实验结果与分析
2、实验结果与分析2.1、细菌总数检测结果2.1.2、细菌总数的计算与报告根据菌落总数的计算方法：1、若只有一个稀释度平板上的菌落术在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。
2、若有两个连续稀释度的平均菌落数载适宜计数范围内时，按下式计算：N=∑c/[(n1+0.1n2)d]式中：N—样品中菌落数；∑C—平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1—第一个适宜稀释度平板上的菌落数；n2—第二个适宜稀释度平板上的菌落数；d—稀释因子（第一稀释度）为1.75x107；在浓度10—6(g/ml)的时候，大肠杆菌的细菌总数约为1.60x107；在浓度10—7(g/ml)的时候，大肠杆菌的细菌总数约为2.01x107。
分析数据可知，在浓度10—7(g/ml)的时候，细菌总数远大于其他两个梯度，这与常理不符。
那么有可能是实验过程中的错误导致，可能是稀释不够、密封不紧、没有进行无菌操作等因素有关。
2.2、大肠菌群检测结果2.1.1、初发酵各浓度梯度阳性管数统计附：检验原始记录检验原始记录检测记录与结果培养基配制：样品配制：1、 固体样品，无菌称取25g 样品加225ml 生理盐水，均质。
2、 液体样品，需稀释的，吸取25ml 于225生理盐水，混匀。
菌落总数：检验依据：GB/T4789.2-2008大肠杆菌：检验一句GB/T4789.3-2003大肠杆菌：检验一句GB/T4789.3-2003注：“P ”表示阳性结果，“N ”表示阴性结果检验起止时间：2011年09月25日至2011年09月27日检测人:复核人：。
生化反应鉴定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解生化反应在微生物鉴定中的重要性。
2. 掌握常见生化反应的原理和方法。
3. 通过实验，对给定的微生物进行鉴定。
二、实验原理生化反应是指微生物在生长过程中，通过酶的催化作用，将营养物质转化为自身所需的物质，同时产生一些代谢产物。
这些代谢产物可以用来鉴定微生物的种类。
常见的生化反应包括糖发酵试验、吲哚试验、甲基红试验等。
三、实验材料与仪器1. 材料：- 菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。
- 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、V-P试剂、甲基红试剂、吲哚试剂等。
- 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等。
- 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等。
2. 仪器：- 酒精灯- 接种环- 超净工作台- 恒温培养箱- 高压灭菌锅- 试管- 移液枪- 滴管四、实验方法1. 菌种培养：将菌种接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
2. 糖发酵试验：- 将培养好的菌种接种于糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖），置于恒温培养箱中培养24小时。
- 观察培养基颜色变化，记录发酵结果。
3. 吲哚试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入吲哚试剂，观察颜色变化，记录结果。
4. 甲基红试验：- 将培养好的菌种接种于蛋白胨水培养基，置于恒温培养箱中培养24小时。
- 加入甲基红试剂，观察颜色变化，记录结果。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验：- 大肠杆菌：发酵葡萄糖、乳糖，不发酵蔗糖。
- 金黄色葡萄球菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 枯草芽孢杆菌：不发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
- 变形杆菌：发酵葡萄糖、乳糖、蔗糖。
2. 吲哚试验：- 大肠杆菌：吲哚试验阳性。
- 金黄色葡萄球菌：吲哚试验阴性。
- 枯草芽孢杆菌：吲哚试验阴性。
- 变形杆菌：吲哚试验阳性。
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细菌常用生理生化反应实验结果观察
一结果观察
１葡萄糖发酵实验
直接观察试管, 试管变黄者为葡萄糖发酵阳性菌,不变者为阴性菌.
左边为恶臭假单胞菌，有气泡并变为黄色；右边为大肠杆菌,
２V. P. 反应和甲基红试验:
将培养好的液体培养基分装于两个干净的小试管中,在一管中滴入2-3滴甲基红试剂, 溶液变红的为甲基红阳性菌,不变的为甲基红阴性菌. 在另一管中加入V. P. 试剂,在37℃保温15分钟, 变红者为阳性菌,不变者为阴性菌.
VP，图为右边为大肠杆菌，溶液变红，为阳性菌。
３吲哚实验
在培养好的液体培养基中加入1厘米高的乙醚,振荡,静置分层,加入2-4滴吲哚试剂,在掖面交界出现红色者为吲哚反应阳性菌,不变者为阴性菌.
左边为大肠杆菌，出现红色阳性菌；右边为产气杆菌，颜色不变，阴
性菌。
４硝酸盐还原实验
在点滴板上滴入革里斯试剂A液和B液，如过溶液变红说明有亚硝酸盐，为硝酸盐还原阳性菌，如果不变色需要再倒出部分培养基在另外的小孔中再滴如耳苯胺试剂，如果变蓝，说明此菌为阴性菌；如果不变色，说明此菌为硝酸盐还原强阳性菌．
右下方恶臭假单胞菌，加入革里斯试剂A、B后不变色，再加入二苯
胺试剂后变蓝，为阴性菌；左上方大肠杆菌为红色。
５柠檬酸盐实验
直接观察斜面，斜面变兰色者为柠檬酸盐利用阳性菌，不变者为阴性菌．
左边产生蓝色，产气杆菌阳性；右边为大肠杆菌，阴性。
６明胶水解
向培养好的明胶培养基中加入酸性氯化汞或三氯乙酸溶液，并铺满平板，菌落周围出现透明圈的菌为明胶水解阳性菌，没有透明圈的菌为阴性菌．
左边为大肠杆菌，出现透明圈，阳性；右边为枯草杆菌，阴性菌。
7 淀粉水解实验
向培养好的淀粉培养基平板上加入碘液，并铺满平板，菌落周围出现透明圈的菌为淀粉水解阳性菌，没有透明圈的菌为阴性菌．
左边枯草杆菌，出现透明圈，阳性；右边大肠杆菌，无透明圈，阴形。
8 硫化氢产生实验
直接观察培养好的培养基，出现黑色沉淀者为阳性菌，不变者为阴性菌．
左边为变形杆，菌出现黑色沉淀，阳性菌；右边为大肠杆菌，阴性菌。
二思考题
１你的实验结果与实验预期是否相同？如果不同试分析原因．
答：与试验预期部分相符。
不相符的结果多处于大肠杆菌接种处，可能原因—大肠杆菌不足。
２你认为在做生理生化反应实验中应注意什么问题？
答：1）要严格按照培养基配方配制培养基。
2）观察结果时要注意滴加药量及反应时间。