大肠杆菌和沙门氏菌生化试验鉴定表
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案实验原理：1、大肠杆菌的性质：大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：沙门氏杆菌是G-直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：（1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
（2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
（3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：（1）取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。
（2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：（1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案
实验原理：1、大肠杆菌的性质:大肠杆菌是G无芽抱直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。
在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。
三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。
生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。
MR试验，口引噪试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S,不能利用xx酸盐。
半固体中沿穿刺线向四周生长。
2、沙门氏杆菌的性质：-沙门氏杆菌是G直杆菌。
在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。
能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产呵噪，不分解尿素。
实验材料：含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SQ、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油）实验内容及操作程序：一、培养基制备：制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备：(1) 取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。
(2) 用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。
(3) 用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37 C恒温培养24小时。
三、细菌分离培养：(1) 取出培养了24小时的麦康凯平板。
挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37 C恒温培养24小时。
(2) 取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37 C恒温培养24小时。
四、细菌的鉴定纯化：(1) 检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。
实验五大肠杆菌与沙门氏菌
实验六 细菌生化特性试验
扬州大学兽医学院
2019年10月3日星期四
实验原理
各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养 物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦 不同，所以利用这点进行生化试验，可达 到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆 菌时，生化试验是极其常用的一种方法。
5. 吲哚、M.R、V-P试验结果
大肠杆菌
沙门氏菌
吲 M.R V-P 哚试 试 试验 验 验
吲 M.R V-P 哚试 试 试验 验 验
六、思考题
大肠杆菌与沙门氏菌：
1. 革兰氏染色特性与形态特点？ 2. 在麦康凯平板上的生长表现？ 3. 在三糖铁琼脂上的生长表现？ 4. 常规糖发酵情况？ 5. IMViC试验结果？
0.02g 60mL 40mL
• V-P试剂
甲液：α萘酚酒精溶液 （α萘酚5g无水乙醇100mL）
乙液：KOH溶液 （KOH 40g，水100ml）
将甲液和乙液分装棕色瓶中，于4-10℃保存。
五、结果观察
1. 大肠杆菌的生长表现
普通琼脂：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落， 直径约2~3mm；
一、目的要求
1. 学习常用的生化实验方法； 2. 掌握大肠杆菌与沙门氏菌的主要生化特点。
二、背景知识介绍
1. 大肠杆菌
G－
个体为杆状 散在或成对
① 大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原；
② 与广泛的兽医临床病征有关，如：
• 犊牛的肠道感中染和等水大泻小；
实训二十三 大肠杆菌、沙门菌属生化反应试验
四、结果分析
1、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一套肠
编码
鸟 赖 葡 纤 山 侧 鼠 木 蔗 丙 甘 氨 氨 磷 维 梨 金 李 糖 糖 二 露 酸 酸 胨 二 醇 盏 糖 酸 醇 水 糖 花 盐 醇 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 0 1 4 2 1 4 2 1 4 2 1 阿 拉 伯 糖 蛋 七 半 氨 白 叶 固 基 胨 苷 体 酸 水 对 照 1 13 14 15 2 4 2 1
4 2 1
－
+ 3
+
－
+ 2
－ －
+ 2
－ － + + 3
+
+ 7+来自 该菌序号为32237
2、鸟氨酸、赖氨酸、氨基酸对照需要加石蜡
封口（氨基酸对照不能变色，如不变色，鸟 氨酸与氨对同色，为阴性；不同色，为阳 性）； 3、1、2、3、4号菌分别用接种针接种一支 KIA； 4、放置温箱37度24h培养后观察结果。
实验十一、大肠杆菌、沙门菌属 生化反应试验
一、目的：
1、掌握肠道杆菌鉴定方法和原则； 2、掌握肠道杆菌生化反应（肠编码）名称、
试验原理。
二、内容：
1、观察记录上次试验结果－画图、描述菌落
特点、颜色； 2、挑取可疑单个菌落接种生化反应培养基； 3、记录生化培养基初始颜色。
三、操作：
沙门菌检验
科玛嘉 显色培 养基
菌落为紫红色
接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养 基的同时，可直接接种蛋白胨水 (供做靛基 质试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、氰化钾 (KCN) 培养基，也可在初步判断结果后从营养琼 脂平板上挑取可疑菌落接种。于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h, 必要时可延长至48 h。
分别用接种环取增菌液1环, 划线接种于一 个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE 琼脂平板或显色培养基平板）。于36 ℃±1 ℃分别培养18 h～24 h (XLD琼脂平板、HE 琼脂平板、显色培养基平板) 或40 h～48 h (BS琼脂平板)，观察各个平板上生长的菌落。
沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的 菌落特征
甲型副伤寒沙门氏菌(要求血清 学鉴定结果) 沙门氏菌Ⅳ或Ⅴ(要求符合本群 生化特性) 沙门氏菌个别变体(要求血清学 鉴定结果)
反应序号2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门菌靛基质阳性变体两项结 果均为阳性；
反应序号3：补做ONPG，ONPG阴性，同时赖氨酸脱羧酶阳性为沙门菌； 但甲型副伤寒沙门菌赖氨酸脱羧酶为阴性。
沙门菌检验
沙门菌概况
沙门菌是1885年由Salmon氏等在猪霍乱流行 时，分离出的猪霍乱沙门菌，由于Salmon氏 对本属细菌的发现贡献卓越，故定名为沙门 菌属。
沙门菌属是肠杆菌科中最重要的病原菌。它 是一群抗原结构、生化特性相似的革兰氏阴 性杆菌。血清型繁多，目前已发现的沙氏菌 有2500多个血清型和变种。我国自1911年至 90年代初已有255个血清型。
沙门菌的分离培养基
亚硫酸铋琼脂（BS）：含有煌绿、亚硫酸铋 能抑制大肠杆菌、变形杆菌和革兰氏阳性菌的 生长，但对伤寒、副伤寒等沙门菌的生长无影 响。伤寒杆菌及其他沙门菌能利用葡萄糖将亚 硫酸铋还原成硫酸铋，形成黑色菌落周围绕有 黑色和棕色的环，对光观察可见有金属光泽。 该培养基制备过程不宜过分加热，以免降低其 选择性，应在临用时配制，超过48h不宜使用。
沙门氏菌检验原始记录
D
E
阳性
报告
检验员： 审核员：
4.分别划线BS和沙门氏显色培养基；于36℃±1℃培养40～48h（BS）或18～24h（沙门氏显色培养基）观察典型菌落；
5.据生化鉴定试剂盒要求做沙门氏菌生化鉴定；据生化鉴定结果做沙门氏菌血清学鉴定；
样品
观察结果
项目
是否典型菌落
血清学鉴定
三糖铁琼脂
靛基质
尿素
KCN
赖氨酸
ONPG
甘露醇
山梨醇
抗原O
抗原H
□液体样品：吸取25mL于样品置于盛有225mLBPW的无菌均质袋内,振荡混匀。
检验程序
1.实验采集抽样方案来自GB4789.1；
2.上述样品匀液于36℃±1℃培养8～18h；
3.移取1mL转种于10mLTTB内42℃±1℃培养18～24h；移取1mL转种于10mLSC内36℃±1℃培养18～24h；
沙门氏菌检验原始记录表
样品名称
样品编号
检验项目
沙门氏菌检验
检验日期
检验地点
BSL-2实验室
温湿度（℃，RH%）
检验依据
GB 4789.4—2016
判定依据
检验仪器
生化培养箱均质器电子天平
生物安全柜
检验试剂
BPW，TTB、SC增菌液，BS平板，沙门氏显色平板，生化鉴定试剂盒，诊断血清等
样品制备
□固体和半固体样品：无菌称取25g样品，置于盛有225mLBPW的无菌均质袋内，拍击式均质器均质1min～2min。
大肠菌群、沙门氏菌GBT23780检测原始记录
大肠菌群、沙门氏菌GB/T23780检测原始记录1.样品名称：样品编号：洁净室编号：温度: ℃ 湿度: %2.检测标准：GB/T 23780-2009附录A A.23.检测仪器：恒温水浴锅KJ-E-WSW-025-18恒温培养箱□KJ-E-WSW-001-17 □KJ-E-WSW-002-17 □ KJ-E-WSW-044-18□KJ-E-WSW-023-17 □KJ-E-WSW-041-18 □ KJ-E-WSW-048-19□KJ-E-WSW-101-20□KJ-E-WSW-102-204.培养基：LST肉汤BPW肉汤TTB增菌液SC增菌液BS琼脂沙门显色琼脂XLD琼脂培养基5.检测项目及步骤：采样方法：□涂抹法将经过灭菌的方框（框内面积为50cm2）放在待测面上，用经过灭菌的镊子取无菌医用棉拭子，蘸上无菌生理盐水擦拭方框中间部分后，将棉球投人盛有50mL无菌生理盐水的三角瓶中送检。
贴纸法将无菌规格纸（5X5cm2，纸质要薄而软）用无菌生理盐水泡湿后，用经过灭菌的镊子取两张分别贴合于待测面后，取下放人盛有50mL无菌生理盐水的三角瓶中送检。
大肠菌群：检测步骤：采样生理盐水即为待测原液，选取2个～3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种3管LST肉汤，每管1 mL至与LST 肉汤中，36 ℃培养( )。
沙门氏菌：检测步骤：取取样生理盐水25mL到225mL BPW中于36℃培养( ~ )；移取1mL前增菌培养液，转种于10mL TTB内，于42℃培养，同时另取1mL，转种于10mL SC内，于36℃培养( ~ )；分别用接种环取增菌培养液1环，划线接种BS琼脂平板和沙显琼脂平板。
挑取平板上5个可疑菌落进行鉴定。
检测员/日期：复核人/日期：。
肠杆菌生化鉴定表
肠杆菌生化鉴定表引言肠杆菌是一种常见的细菌，广泛存在于自然界中，包括土壤、水体和动植物的肠道中。
肠杆菌在人体中有益和有害的作用，可以发酵食物残渣，帮助消化吸收，也可以引起多种感染性疾病。
为了准确鉴定肠杆菌的种类和性质，科学家们开发了肠杆菌生化鉴定表，用于对肠杆菌进行鉴定和分类。
概述肠杆菌属于革兰氏阴性菌的一类，形态特征为细长的棒状。
肠杆菌的生化特性具有一定的差异，这为其鉴定提供了依据。
肠杆菌生化鉴定表是通过对肠杆菌在不同生化反应中的表现进行观察和比较，从而确定其种类和性质的一种方法。
理论基础肠杆菌生化鉴定的理论基础是肠杆菌对不同物质的代谢方式的差异。
根据肠杆菌在不同生化反应中产生的酶的活性和产物的产生情况，可以确定其在鉴定表中的位置。
肠杆菌生化鉴定表中列出了常见的生化反应和产物，通过观察菌株在这些反应中的表现，可以确定其属于何种类型的肠杆菌。
肠杆菌生化鉴定表的组成肠杆菌生化鉴定表主要包括以下几个方面的内容：1. 嗜氧和厌氧反应嗜氧和厌氧反应是肠杆菌生化鉴定中的重要指标之一。
肠杆菌可以通过观察其在氧气氛下和无氧气氛下的生长情况来确定其嗜氧和厌氧特性。
2. 糖类代谢反应糖类是肠杆菌常见的营养来源之一，肠杆菌对不同种类的糖类的代谢能力也有所差异。
肠杆菌生化鉴定表中列出了常见的糖类，如葡萄糖、乳糖、麦芽糖等，通过观察菌株对这些糖类的发酵情况，可以确定其种类和特性。
3. 酮酸和气体的产生肠杆菌在代谢过程中产生的酮酸和气体也是鉴定中的重要指标之一。
肠杆菌生化鉴定表中列出了常见的酮酸和气体的产生情况，通过观察菌株在代谢过程中产生的酮酸和气体的情况，可以确定其种类和特性。
4. 其他生化特性除了上述的参数外，肠杆菌生化鉴定表还包括一些其他的生化特性，如蛋白质的降解和产生硫化氢等。
这些特性也可以帮助我们进一步鉴定和分类肠杆菌。
肠杆菌生化鉴定的步骤进行肠杆菌生化鉴定的步骤一般包括以下几个方面：1. 菌种培养首先需要从样品中分离出肠杆菌，并进行纯化培养，以获取纯种菌株用于后续的实验。
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大肠杆菌和沙门是杆菌鉴定表
1．糖发酵试验取纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇和蔗糖发酵管，37℃培养2～3d，观察结果。
2．吲哚试验取纯培养物接种蛋白胨水，37℃培养2～3d，加入吲哚指示剂，观察结果。
3．MR试验和VP试验取纯培养物接种葡萄糖蛋白胨水，37℃培养2～3d，分别加入MR和VP指示剂，观察结果。
4．枸橼酸盐试验取纯培养物接种枸橼酸盐培养基上，37℃培养18～24h，观察结果
5．硫化氢试验取纯培养物接种醋酸铅琼脂，37℃培养18～24h，观察结果。
大肠杆菌与沙门氏菌生化试验鉴别表
注：⊕产酸产气、+ 阳性、- 阴性、+/- 大多数菌株阳性/少数阴性、v 种间有不同反应。
（四）运动性检查及在鉴别培养基上的培养特性
1．运动性有周鞭毛，镜检可见呈圆周运动；半固体培养基穿刺培养使培养基呈云雾状。
2．培养特性钩取纯培养物分别接种远滕氏琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板、SS琼脂平板，37℃温箱培养18～24ｈ，观察菌落特征。
1、给出周鞭毛菌镜下观察结果的动态图片画
2、给出在半固体培养基上的结果观察图片
大肠杆菌与沙门氏菌在鉴别培养基上的菌落特征
由于大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、胺盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。
最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。
在普通营养琼脂上生长表现3种菌落形态：（1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中容易分散。
（2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝。
（3）粘液型：常为含有荚膜的菌株。
此菌兼性厌氧，在有氧条件下生长良好，最适生长pH为，所用培养基pH为若pH值低于或高于则生长缓慢。
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