固定液
常用固定液的配制
常用固定液的配制常用固定液的配制1. 福尔马林-醋酸-酒精固定液(FAA)50%或70%酒精90ml + 冰醋酸5ml + 福尔马林(37%~40%甲醛)5ml可用作固定植物的一般组织,但不适用于单细胞及丝状藻类,也不适宜作细胞学研究。
幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，可防止材料收缩。
若材料坚硬，可略减冰醋酸，略增福尔马林。
若材料易收缩，可稍增加冰醋酸。
久置时另加入5ml甘油以防蒸发和材料变硬。
此液又可作保存液。
固定时间最多10h。
如果用在植物胚胎的材料上，改用下面的配方，效果较好：50%酒精89ml + 冰醋酸6ml + 福尔马林5ml2. 福尔马林-丙酸-酒精固定液（FPA）福尔马林5ml + 丙酸5ml + 70%酒精90ml固定一般的植物组织，通常固定8~24h，可长久保存。
3. 酒精-醋酸-氯仿固定液（卡诺固定液，Carnoy fixative）配方Ⅰ：纯酒精3份+ 乙酸1份配方Ⅱ：纯酒精6份+乙酸1份+ 氯仿3份配方Ⅲ：甲醇6份+乙酸1份+ 氯仿3份适用于植物组织和细胞学材料，为研究细胞分裂和染色体的优良固定液。
固定时间不宜过久。
4. 酒精-福尔马林固定液福尔马林2~6（6~10）ml + 70%酒精100ml固定植物一般组织，尤其适用于萌发的花粉管的固定。
通常固定24h，亦可长久保存。
5. 酒精-福尔马林-甘油固定液95%酒精150ml + 5%福尔马林100ml + 甘油50ml此液也可长期储存材料。
6. 铬酸-醋酸固定液根据固定对象的不同，可分为强、中、弱3种配方：（1）弱液配方：10%铬酸2.5ml + 10%醋酸5ml + 蒸馏水92.5ml（2）中液配方：10%铬酸7ml + 10%醋酸10ml + 蒸馏水83ml（3）强液配方：10%铬酸10ml + 10%醋酸30ml + 蒸馏水60ml弱液配方用在固定较柔软的材料，如藻类、苔藓和蕨类的原叶体等。
固定时间较短，一般为数小时，最长可固定12~24h，但藻类和蕨类的原叶体可缩短到几分钟至1h。
固定液总结
固定液总结什么是固定液？固定液是一种化学试剂，主要用于固定组织或细胞以保持其形态和结构。
固定液可以阻止生物材料的腐败和变性，防止其在处理和染色过程中失去结构和功能。
固定液在组织学、细胞学和病理学等领域中广泛应用，有助于观察和研究生物组织和细胞的形态、结构和功能。
常见的固定液福尔马林（Formalin）福尔马林是一种常见的固定液，广泛用于组织学研究和病理学诊断中。
它是一种含有37%甲醛的溶液，能够固定组织并保持其形态和结构。
福尔马林固定的组织可用于组织切片制备、免疫组化染色等进一步的实验。
福尔马林固定组织的优点是固定效果好、保存时间长，能够保存大部分的组织结构和抗原表达情况。
然而，福尔马林固定液会对细胞核和某些蛋白质产生交联作用，可能导致染色效果差，同时还有潜在的致癌风险，因此在使用福尔马林固定液时需要注意安全操作和废液处理。
乙醛（Glutaraldehyde）乙醛是一种常用的电子显微镜固定液，主要用于固定细胞和亚细胞结构以进行电子显微镜观察。
与福尔马林不同，乙醛固定液能够更好地保持细胞和细胞器的形态和结构，有利于观察细胞内部的细节。
乙醛固定液的使用需要注意浓度和固定时间的控制，过高的浓度和过长的固定时间可能会导致组织和细胞的变性和损伤。
此外，乙醛固定液对某些酶和蛋白质具有灭活作用，因此在使用乙醛固定液时需要根据实验需要选择合适的条件。
缓冲盐水（Buffered Saline）缓冲盐水是一种用于固定组织和细胞的温和固定液。
它通常由含有适当浓度的盐水和缓冲剂混合而成，能够保持组织和细胞的形态和结构，并且对某些抗原和酶具有较好的保存效果。
缓冲盐水固定液的优点是温和、安全、易于制备和使用，适用于一些对固定条件要求较宽松的实验。
然而，由于其固定效果不如福尔马林和乙醛固定液，保存时间较短，因此在实验设计时需要根据实验目的和需求来选择合适的固定液。
固定液的使用注意事项使用固定液需要注意以下几个方面：1.安全操作：固定液常常含有有害化学物质，使用时需要佩戴防护手套、口罩等个人防护装备，避免直接接触和吸入液体或气体，注意实验室通风。
病理组织常用固定液的配制
病理组织常用固定液的配制（免疫组化）一、常规固定液的配制（1）10%甲醛液浓甲醛 10ml蒸馏水 90ml(2 ) 缓冲中性甲醛液浓甲醛10mlPBS缓冲液（Ph7.2）90ml(3 ) 10%中性甲醛液浓甲醛10ml蒸馏水90ml碳酸钙加至饱和(4 ) Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液75 ml甲醛2 ml冰醋酸5 ml该固定液中的冰醋酸，对胶原纤维等组织有膨胀作用，而甲醛对组织有收缩作用，两种试剂的混合使用，用以抵消彼此间的副作用，使组织固定达到优良的固定水平。
（5）醛糖钙固定液甲醛100ml蔗糖300ml乙酸钙20g蒸镏水90ml先将蔗糖和乙酸钙溶于蒸镏水，后加入甲醛。
该固定液对于做酶的组织化学的研究效果较好，组织固定后，做冰冻切片，再给予显示。
当前国内外基本上都还是要用甲醛来固定组织。
从免疫组织化学的角度来说，甲醛固定的组织大部分都可以用免疫组化的手段来检测，据多人认为，它对lgA ，lgM，J链，K 链和λ链的标记效果较好，且背景清晰。
但美中不足的是：经它固定的组织，可与蛋白形成醛交联蛋白，这种醛键可封闭抗原。
固此，在免疫组化实际检测中，应根据不同的要求和需要，采用酶消化或者其它抗原修复如微波、高压等的方法，以便破坏醛键重新暴露抗原。
（6）Zenker氏固定液：重铬酸钾25g升汞50g蒸馏水1000ml冰醋酸50ml先将重铬酸钾和升汞溶于水中，尢其是重铬酸钾，应用热水或加温的方法将其溶解，然后过滤贮存于带盖的玻璃瓶中，如暴露于空气中，该溶液将会被慢慢氧化而便颜色加深，导致失效。
临用时，取贮存液950ml，加入50ml的冰醋酸，即可使用。
应用该固定液固定的组织，一般不要超过24h，取出组织，流水冲冼12小时以上，然后保存于75%-80%的酒精中，在切片染色前，必须用碘除去汞盐的沉着。
应用该固定液的组织，细胞核及细胞浆染色十分清晰，特别是要显示骨骼肌的横纹时，应用本液可获得满意的结果，但由于其含有醋酸，故不能用于保存细胞颗粒，红细胞及含铁血黄素。
色谱分析中常用的固定液
苏州市莱顿科学仪器有限公司 TEL：*************
色谱分析中常用的固定液
一、非极性
1、100%Dimethyl polysiloxane，100%聚二甲基硅氧烷，商品名：AC1，OV-101，OV-1，DB-1，SE-30，HP-1，RTX-1，BP-1
二、弱极性
2、5%Phenyl dimethyl polysiloxane, 5%二苯基(95%)二甲基聚硅氧烷，商品名：AC5，SE-52，
3、5% Phenyl 1%vinyl dimethylpolysiloxane，5%二苯基1%乙烯基(94%)二甲基聚硅氧烷，商品名：OV-5，DB-5，SE-54，HP-5，RTX-5，BP-5<BR><BR>注：2、3常无严格区分，通常混称。
三、中等极性
4、50%Phenyl dimethyl polysiloxane, 50%二苯基(50%)二甲基聚硅氧烷，商品名：OV-17，HP-50，RTX-50
5、14%Cyanopropyl phenyl polysiloxane, 14%氰丙基苯基(其中7%氰丙基7%苯基)(86%)二甲基聚硅氧烷，商品名：AC10，OV-1701，DB-1701，RTX-1701
6、50% Cyanopropyl phenyl polysiloxane，50%氰丙基苯基(其中25%氰丙基25%苯基)(50%)二甲基聚硅氧烷，商品名：AC225，OV-225，BP-225，DB-225，HP-225，RTX-225
四、强极性
7、polyethylene glycol,聚乙二醇，商品名：AC20，PEG20M，HP-INNOWAX(FFAP是其与2-硝基对苯二甲酸的反应产物)
第1页共1页。
固定液的选择原则
固定液的选择原则固定液的选择原则如下：1. 根据待分离组分的性质选择。
（1）分离非极性物质时，一般选用非极性固定液。
（2）分离极性物质时，一般选用极性固定液。
（3）分离极性和非极性物质时，一般选用极性或氢键型固定液。
（4）分离能形成氢键的物质时，一般选用氢键型固定液。
（5）分离具有不同程度极性或氢键的物质时，一般选用能形成氢键型的混合固定液。
2. 根据流动相的性质选择。
（1）当流动相极性小于固定相极性时，对非极性物质具有良好的分离效果。
（2）当流动相极性大于固定相极性时，对极性物质具有良好的分离效果。
（3）当流动相中含有亲水性的离子或粒子时，对极性物质具有良好的分离效果。
（4）当流动相中含有亲油性的分子或粒子时，对非极性物质具有良好的分离效果。
3. 根据分离模式选择。
（1）正相色谱：一般选用极性或氢键型固定液，对于极性较大的组分，可选用非极性固定液。
（2）反相色谱：一般选用非极性或中等极性的固定液，对于某些极性较大的组分，也可选用极性或氢键型固定液。
（3）离子色谱：一般选用离子交换型的固定液，根据所带电荷的性质选择合适的固定液。
（4）分子排阻色谱：一般选用凝胶型的固定液，根据分子尺寸的大小选择合适的固定液。
（5）疏水作用色谱：一般选用疏水型的固定液，根据疏水作用的强弱选择合适的固定液。
4. 根据实验条件和要求选择。
（1）对于需要高分辨率的分离，一般选用选择性较高的固定液。
（2）对于需要在较短时间内完成分离的，一般选用速度较快的固定液。
（3）对于需要在较高温度下进行分离的，一般选用高温稳定的固定液。
（4）对于需要痕量分析的分离，一般选用灵敏度较高的固定液。
5. 注意保护环境：选择环保型的固定液，避免使用对环境不友好的有机溶剂作为固定液。
总之，在选择固定液时，需要根据待分离组分的性质、流动相的性质、分离模式、实验条件和要求以及环保因素综合考虑，以得到最优的分离效果。
组织固定液的类型
组织固定液的类型
组织固定液的类型有很多，主要包括以下几种：
1.福尔马林固定液：福尔马林是一种广泛使用的固定剂，可以固定细胞和组织的结构，同时起到杀菌的作用。
2.酒精固定液：酒精固定液是一种常用的组织固定液。
酒精具有良好的杀菌作用，可以使组织保持良好的形态结构。
3.缓冲福尔马林固定液：缓冲福尔马林固定液是在福尔马林固定液中添加缓冲剂，使其pH值接近细胞内液，更适合某些特定的实验和研究。
4.寡聚肽固定液：寡聚肽固定液是一种对蛋白质固定效果较好的固定液，可以保持细胞和组织的蛋白质结构。
5.甲醛固定液：甲醛是一种常用的固定剂，可以使细胞和组织固定并保持其形态结构。
它有很好的杀菌作用，并且可以使细胞和组织保持较好的染色性能。
以上是几种常见的组织固定液类型，不同类型的固定液具有不同的特点和适用范围，根据不同的实验目的和要求选择合适的固定液非常重要。
固定液的要求
固定液在气相色谱、液相色谱以及组织学等领域中有着重要的作用，其主要要求如下：
1. 挥发性低：在操作温度下，固定液的蒸气压应尽可能低，以减少在分析过程中固定液的流失，确保色谱柱的稳定性和使用寿命。
2. 热稳定性好：在工作温度范围内，固定液必须具有良好的化学和热稳定性，避免因受热分解而影响分析结果或损坏色谱柱。
3. 适宜的粘度：固定液的粘度不宜过高，较低的粘度可以加快样品组分在两相之间的传质速度，提高色谱柱的分离效率。
高粘度会降低分子扩散速率，从而降低柱效。
4. 选择性匹配：对于不同的样品类型和分析目标，应选择具有合适选择性的固定液。
固定液的选择性决定了它对不同极性、沸点相近的物质的保留能力差异，以便有效分离复杂混合物中的各组分。
5. 溶解性能：固定液需要有足够的溶解能力来溶解待测样品的部分或全部组分，同时又不能与样品发生不可逆反应。
6. 无毒或低毒：尤其在生物样品分析时，所选用的固定液应尽量无毒或低毒，不会对人体健康和环境造成危害。
7. 兼容性：固定液需与色谱柱填料（载体）、载气及样品兼容，不产生不良反应。
总结来说，选择合适的固定液是保证色谱分析准确、高效的关键步骤之一，需要综合考虑多种因素，确保满足实验需求。
固定液的分类和选择原则
固定液的分类和选择原则以固定液的分类和选择原则为标题，我们来探讨一下固定液的相关知识。
一、固定液的分类固定液是一种用于固定生物组织或细胞的溶液，根据不同的固定目的和化学成分，可以将固定液分为以下几类：1. 醇类固定液：如乙醇、甲醇等。
这类固定液常用于快速固定和保存细胞和组织的形态结构，同时具有很好的保护作用，适用于常规组织学检查。
2. 酸类固定液：如酸性酒精、酸性硫酸铜等。
这类固定液主要用于固定某些特定的细胞或组织结构，例如染色体或胶原纤维等。
酸类固定液对脂质物质的固定效果较差，因此不适用于脂质含量较高的样本。
3. 中性缓冲液：如PBS（磷酸盐缓冲液）、Hank's液等。
这类固定液主要用于固定细胞和组织的生物学活性，能够较好地保持细胞和组织的形态和功能，适用于免疫组化和分子生物学实验。
4. 有机溶剂固定液：如乙酸、乙酸乙酯等。
这类固定液在固定过程中对细胞和组织的脂质物质和溶胀性物质具有较好的固定效果，适用于脂质或溶胀性物质含量较高的样本。
二、固定液的选择原则在选择固定液时，我们需要考虑以下几个原则：1. 根据固定目的选择：不同的实验目的需要选择不同的固定液。
例如，要观察细胞形态结构，可以选择醇类固定液；要进行免疫组化实验，可以选择中性缓冲液。
2. 根据样本性质选择：不同的样本性质对固定液的选择有所差异。
例如，脂质含量较高的样本适合选择有机溶剂固定液；而含有胶原纤维的样本可以选择酸类固定液。
3. 考虑固定液的渗透性：固定液的渗透性对于固定效果至关重要。
一般来说，较强的渗透性可以提高固定效果，但同时也可能对细胞或组织的形态和功能产生一定影响。
因此，需要根据具体实验要求选择合适的固定液。
4. 考虑固定液的毒性和安全性：固定液中可能含有一些有毒物质，因此在选择固定液时，需要考虑其对实验人员和环境的安全性。
同时，在实验过程中也要注意安全操作，避免接触到固定液。
总结：固定液的分类和选择原则是进行组织学和细胞学研究中非常重要的一环。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
7、常用固定剂的种类和配方是什么？
（1）4%多聚甲醛磷酸缓冲液pH7.4（多聚甲醛40g，0.1mol/LPBS液pH7.4500ml，两者混
合加热至60℃，搅拌并滴加1NNaOH至清晰为止，冷却后加PBS液至总量1000ml）。
（2）10%中性缓冲福尔马林液（浓甲甲醛10ml，0.01mol/lpH7.4PBS90ml）。
（3）100%冰丙酮。
（4）戊二醛-甲醛液（戊二醛1ml，浓甲醛10ml，蒸馏水加至100ml）。
（5）甲醛升汞固定液（即B5固定液。
浓甲醛10ml，氯化汞6g，醋酸钠1.25g，蒸馏水90 ml）。
（6）醋酸-甲醛液（浓甲醛10ml，冰醋酸3ml，生理盐水加至100ml）。
（7）Bouin’s液。
（8）Zamboni’s液。
采用2.5%多聚甲醛和30%饱和苦味酸，更可增加对组织穿透力和固定效果，以保存更多的组织抗原。
（9）PLP液（过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液）。
（10）碳化二亚胺（1-ethyl-3（3-dimethyl-aminopropyl）cardodiimi-HCI）液：2g溶于100 ml0.01mol/L，pH7.4PBS中。
此液宜用于标记多肽类激素的组织，对标记IgA、IgG效果不佳。
（11）碳二亚胺-戊二醛液（ECD-G液）。
（12）Zenker’s液（重铬酸钾2.5g，氯化汞5g，硫酸钠1g，蒸馏水100ml，混合溶解后，临用时加水醋酸5ml）。
（13）Clarke氏改良剂（100%酒精95ml，冰醋酸5ml），用于冰冻切片的后固定。
（14）乙醚（或氯仿）与乙醇等量混合液。
（15）AAF液：95%-100%酒精85ml，冰醋酸5ml，浓甲醛10ml。
（16）Carnoy氏液：100%酒精60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml，混合后4℃保存备用。
（17）Methacarn氏液：甲醇60ml，氯仿30ml，冰醋酸10ml，混合后4℃保存备用。
丙酮的组织穿透性和脱水性更强，常用于冰冻切片及细胞涂片的后固定，保存抗原性较好，平时4℃低温保存备用，临用时，只需将涂片或冰冻切片插入冷丙酮内5-10min，取出后自然干燥，贮存于低温冰箱备用。