不同固定液对冷冻组织病理切片HE染色质量比较
三种不同固定液和固定方法对脑组织冷冻切片的影响
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网 络 出版 时 间 ：２０１５—５—１８ １１：１７ 网络 出版 地 址 ：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０７３．Ｒ．２０１５０５１８．１１１７．０３０．ｈｔｍｌ
选择适合染 色机 使用 的染 色程 序 和染 色 液 ：在染 细 胞 核之 前 ，加一道 ２％冰 乙酸 ，因为 ２％冰 乙酸水 溶液 ｐＨ值更 接近 Ｈａｒｒｉｓ苏木精染 液 ，能有效保 护苏 木精染 液 Ｊ，有 效减 少 ＨＥ 染 色细胞核发灰 现象 。染 液尽 可 能选择 弱氧 化剂 氧化 的苏 木精 ，延缓苏木 精 的过度 氧化 ，从 而延 长使 用时 间 。本科 室 采用英 国 Ｓｉｇｍａ—Ａｌｄｒｉｃｈ公 司的 Ｈａｒｉｓ苏木精 ，使用前进 行过 滤 ，作者经 ５年 多的摸索 实践发现 ，１周 内无 氧化 膜产生 ，效 果 良好 ；同时保证 染色 室温 处于 常温 状态 ，以免室 温过低 影 响苏 木精的染色效果 。本组 采用醇 溶性 伊红 ，使 ＨＥ切 片红 蓝对 比分 明。（４）养 成 良好 的定期 保养 习惯 ：每天 使用 后打 扫清理 ，如染色机 冲洗缸 ，其进 出水 孔眼较小 ，易被堵塞 造成 流水 冲洗 不净影响切片染色 背景 ，滋 生细菌 或真菌污染 。应 定期 检测 机器下水道 的畅通 ，因 Ｌｅｉｃａ玻 片染 色机 内有一 液 位感应器 ，如底水槽液体超过 设定 的高度 ，进 水会停 止 ，造 成 冲洗不充 分。封片机 应及 时检 查并 清除装 载槽 、传动链 、拾 放模块 、滑道及 吸盘 区域 出现 的玻 璃碎 片 和残 留附着 物 ，同 时定期用 二甲苯清洗装 载架 上粘 连 的 中性 树胶 保持 装载 畅 通 ，以免封片不畅 。（５）其他注 意事 项 ：每天结束 工作时应观 察封片机 上装 载二 甲苯 的小瓶 ，保证 滴胶 针 头浸 没 ，以免 阻
4种固定液对快速冷冻切片的制片效果的影响
4种固定液对快速冷冻切片的制片效果的影响周君;谢明;彭茜茜;王养秀;刘正宇【摘要】目的通过研究固定液对冷冻切片质量的影响,筛选出理想的固定液,为寻找新型固定液提供新思路,从而提高快速冷冻切片成片质量.方法收集新鲜鸭肝组织30例,冷冻切片取材后用不同的固定液进行固定,然后进行HE染色,显微镜观察.结果经乙醚酒精固定的鸭肝组织和细胞结构清晰,核浆颜色对比度适宜,染色鲜艳.结论乙醚酒精最适宜用于快速冷冻切片的固定,进行HE染色.【期刊名称】《中国医学工程》【年(卷),期】2016(024)009【总页数】2页(P32-33)【关键词】固定液;快速冷冻切片;HE染色【作者】周君;谢明;彭茜茜;王养秀;刘正宇【作者单位】湘南学院病理学研究所湖南郴州423000;湘南学院病理学研究所湖南郴州423000;湘南学院临床系,湖南郴州423000;湘南学院临床系,湖南郴州423000;湘南学院临床系,湖南郴州423000【正文语种】中文【中图分类】R818.02冷冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法[1]。
冷冻切片是一种最省时最快速的制片方法，因此主要用于临床手术病理诊断。
其原理是：冷冻组织变硬代替石蜡做浸蜡。
将组织固定在标本拖上短时间内冻好进行切片。
术中确诊病变性质，决定手术范围，因此作出高质量的冷冻切片至关重要[2]。
冷冻切片染色前需要进行组织的固定，组织的固定是冷冻切片制造的一个非常重要的环节，本文主要选择了4种固定液对其进行研究，筛选出一种好的固定液。
1 材料与方法1.1 材料选用新鲜的鸭肝组织30例进行制片。
1.2 试剂4种固定液：①95%酒精；②AF液（乙醇，甲醛）；③AAF液（乙醇，乙酸，中性甲醛）；④乙醚酒精（乙醚：酒精=1：1）。
HE染色试剂：①苏木素；②尹红；③碳酸锂；④无水酒精。
1.3 方法1.3.1 取材及切片取材大小2cm×2cm，厚0.2～0.5cm的新鲜鸭肝组织30例，用普通胶水进行包埋后用德国莱卡CM1900恒温冷冻切片机和日本Feather一次性刀片在-18℃的温度下进行切片，厚度为5 μm，各切10张。
不同固定液对大鼠肝脏组织石蜡切片质量的影响
不同固定液对大鼠肝脏组织石蜡切片质量的影响
赵玉琼;陈华
【期刊名称】《实验动物与比较医学》
【年(卷),期】2014(034)006
【摘要】目的探讨不同固定液对大鼠肝脏组织石蜡切片HE染色效果.方法应用SD大鼠肝脏组织分别在动物空腹和空腹条件下,选择三种常规的固定液:体积分数10％甲醛固定液、Bouin's固定液和改良Davidson's固定液,对肝脏组织进行固定、石蜡包埋、切片和HE染色,观察动物空腹与未空腹条件下组织固定对切片质量的
影响,以及不同固定液对肝脏组织切片质量的影响.结果在未空腹的条件下,肝脏组
织结构显示不清晰,呈水样变性的形态改变;Bouin's固定液和改良Davidson's固定液固定的组织结构更清晰,但是切片色泽不如体积分数10％甲醛固定液的鲜亮.结论大鼠是否处于空腹状态对肝脏组织结构影响很大,三种固定方法对大鼠肝脏组织切
片质量影响差异不大.
【总页数】4页(P486-489)
【作者】赵玉琼;陈华
【作者单位】解放军总医院医学实验动物中心,北京100853;解放军总医院医学实
验动物中心,北京100853
【正文语种】中文
【中图分类】Q95-33
【相关文献】
1.不同温度和固定液对冰冻切片质量的影响 [J], 黄爱民
2.不同固定液固定淋巴结对切片质量的影响 [J], 沙音;巴艳;黄斌
3.不同固定液对冰冻切片质量的影响 [J], 黄柳明
4.三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响 [J], 赵玉琼;李瑞生;陈华
5.取材厚度对脂肪组织石蜡切片质量的影响 [J], 袁潇
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快速冰冻切片组织的固定冻切与新鲜冻切的比较汇总
快速冰冻切片组织的固定冻切与新鲜冻切的比较【关键词】快速冰冻切片；固定冻切；新鲜冻切手术中快速病理诊断以往在没有冷刀设备，尤其是没有恒冷低温切片机的条件下，都采用先将送检组织固定而后冷冻切片方法。
近年来我们采用德国Leica冰冻切片机对50例送检标本分别进行加温煮沸固定冻切与新鲜冻切做快速切片作了比较。
1 方法取材与固定取材组织不能水洗，以免发生冰晶，取组织块 1 cm×1 cm×0.2 cm 2块。
放入三合一固定液(95%乙醇150 ml＋10%甲醛40 ml+冰醋酸10 ml，加热煮沸固定1 min左右，使组织迅速固定至白色变硬时，再用冷水冲洗后，用干纱布沾干。
1．2 速冻与切片将固定后的组织块与新鲜组织分别用甲基纤维素作包埋剂，置切片机箱内按下PE键10 min左右开始切片。
组织进行速冻是为避免组织因缓慢冷冻形成大的冰晶造成组织变性而产生人为假象。
固定后组织与新鲜组织冰冻切片温度-18℃~20℃。
切片时，进刀要慢，缓慢摇转使切片平整。
2 体会固定组织的冰冻切片，因组织的黏液性物质己凝固，需用蛋白甘油附贴烤片，否则染色时易脱落，所以浪费时间。
新鲜组织冰冻切片无需用蛋白甘油粘贴，组织本身的组织液等粘性物质就能粘贴牢固，而且不用烤干，仅在常温下就很快凝固。
不但节省时间，而且组织的物质成分很少受到影响，不易出现人为假象。
固定后的组织冷冻慢或混进水分等原因，易产生有害的粗大冰晶。
新鲜组织冰冻切片或切片融化后再行固定，则冰晶很小甚至无显著影响。
我们配制的三合一固定液用于冰冻切片可提高染色效果，但固定取材的组织块时，其穿透力，即固定的速度满足不了紧急的要求。
加温煮沸固定虽然可以加快固定速度，减少固定时间，但往往造成组织严重收缩和硬脆等人为改变。
所以，在条件有限的单位采用组织固定后冻切是非常必要的。
具备了恒冷低温切片机的单位应尽量采用新鲜组织直接冻切。
几种常用病理组织固定液的比较
用 甲醛 固定 的组 织 ． 细胞 结 构清 晰 ， 且 能保 持 与
生活 时形 态相 似 。 甲醛 为病 理科 组 织 固定 的常规 固
定液 ， 这是 因为其有以下优 ￣［ １ ｏ ， １ １ １ ： ① 甲醛有较强 的
分子 生 物学 的发展 ． Ｎ Ｂ Ｆ已经 不 能满 足 现代 病 理 学 组织渗透力 ； ②可 以有效且均匀地 固定标本 ； ③固 的要求 。最新 的生 物 医学 和病理 学研 究及 诊 断依赖 定 所引 起 的回缩 力较小 ， 对 标本 的 形态 保存 较完 整 ；
１ 单 纯 固定 液分 类及 其优缺 点
的发 展 ， 但 是 病理 检 测依 然 是诊 断 很 多疾 病 的金 标 定 液及 复 合 固定 液 都 已经 被研 发 处 理 应用 于 临床 ， 术要求 的不 断提 高 ， 组 织 固定 效果越 来 越重 要 。 这既
与疾 病 的病 理 学诊 断 息息 相 关 ． 又直 接 关 系 到疾 病 后续 的分 子检 测指 标及治 疗方 式 的选择圈 。 病理 切 片
癌物 ” 嘲 。 此外 ， 利用 甲醛 进行 长时 间的组 织 固定 将 引 起核 酸 的广泛 降解 ． 这 既损 害 了核酸 的完 整性 ， 又 降 嗜碱 性强 ， 细 胞 核 染色 深 ， 组 织 收缩 大 ， 细 胞 形 态 与 生活 时相 比明显 缩小 ； 混合 固定 液 的 固定速 度较 快 ，
制作 技 术 的质 量涉 及 多 个环 节 ． 组织 固定 是 最基 本 １ ． １交联 固定 液 理 切片及 免疫 组织 化学技 术 的制作 质量等 级 。
交 联 固定剂包 含 甲醛 和戊二 醛 。 它
最 重要 的一个 步骤 。组 织 固定 的质量 可直 接评 定病 们 通过 与蛋 白质 的氨 基酸 ， 相邻 蛋 白质 之 间 。 氨基 酸 和核 酸之 间形成 的亚 甲基 桥 与组 织相 互作 用 。这种 却 阻 碍 了核 固定 指利 用一 些化 学试 剂处 理组 织 以保存 组 织 交联 机 制 虽然 保 持 了组 织 的 良好 形 态 ，
冷甲醇固定时间与不同组织冷冻切片染色质量的相关性分析
Nature. 2021 Jan;589(7840):131-136. doi: 10.1038/s41586-020-2977-2. Epub 2020 Nov 25.
腺肿物 19 例、肺部结节 14 例。根据冷甲醇固定
时间分为 A 组（40s）
、B 组（60s）
、C 组（80s）
，
A 组（n＝39 例）
：乳腺结节、卵巢肿物、甲状腺
肿物、肺部节结分别为 14 例、6 例、5 例、14 例；
B （n＝39）
：乳腺结节、卵巢肿物、甲状腺肿
物、肺部节结分别为 15 例、7 例、5 例、12 例；
有关。此外，切片质量还与其他环节有关，如切
片固定后使用冷风干燥可降低脱片概率。但也有
与之相反结论，认为无论冷风或热风均无法降低
脱片概率，且冷热风有损切片染色质量，尤其是
淋巴组织[5]。因此，本研究认为，冷甲醇固定时间
为 60s、80s 时，不同组织冷冻切片染色质量均较
优，但其对最终诊断结果的影响不显著。而最佳
预冷，制冷温度为-10℃~50℃，同时将术间取下组
织速冻，使用美国樱花 OCT 冷冻切片包埋剂（品
牌：美国樱花 SAKURA；货号：4583；产品规格：
118 ml/支），使用期间要清楚包埋剂所生成的气泡。
待组织物变硬后，使用切片机（英国 Campden
Instruments，型号：7000 smz /5100 mz）切片，
片质量达标，同一病理组织使用同一固定液后，
其病理分型固定时间基本接近。同时，本研究以
石蜡切片病理诊断结果为诊断金标准，A 组、B 组、
C 组乳腺结节、卵巢肿物及肺部节结节病理分型
三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响
三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响赵玉琼;李瑞生;陈华【摘要】Objective To compare the rat and mice intestine slides quality fixed with three different fixatives and embeded by paraffin.Methods Three kinds of conventional fixatives were selected for the test, they are 10% neutral buffered formalin,Bouin’s solution and modified Davidson’ s solution.SD rat’ s and KM mice’ s intestinal tissues were fixed with the three different fixatives, then embeded, sliced and stained with HE as routine rut.To observe the slides quality under microscope.Results Sheding and necrosis of intestine villus epithelia were observed in slides made from formalin fixed intestines, which is speculated due to the fixations.The phenomenon was not observed in Bouin's solution and modified Davidson’ s solution fixed tissues.And the tissue structure were more fine and clear in them.Conclusions The rat and mice intestine slides made from tissues fixed by Bouin's solution and modified Davidson's solution are better than from the 10%neutral buffered formalin fixed ones.%目的：对比三种固定液对大、小鼠肠道组织石蜡切片质量的影响，优选大、小鼠肠道组织切片固定液。
冷甲醇固定时间对不同组织冷冻切片染色效果的影响
组别
粤组 月组 悦组
表 2 各组标本病理分型分布
例数
良性增生
导管内癌
乳腺结节 乳头状癌 鳞癌
浸润性导管癌
腺癌
61
4
5
3
4
4
3
81
5
2
5
4
4
4
39
6
3
2
3
5
4
腺瘤 3 5 4
甲状腺肿物 结节性甲状腺肿 乳头状腺癌
3
4
3
2
3
3
组别
粤组 月组 悦组
例数
61 81 39
鳞癌 2 3 4
乳头状腺癌 2 2 1
以石蜡切片为对照，粤 组卵巢肿物切片细胞形 态完整，核无明显肿大，核膜清晰，染色质收缩不明 显，核质对比良好。但乳腺结节、甲状腺肿物、肺部 结节等组织切片细胞形态、结构不清晰，细胞核肿 大，核膜模糊，染色质松散，核及核浆对比不明显。 月 组卵巢肿物切片染色质量较 粤 组差别不明显， 细胞轮廓清晰，核无肿胀，核染色及核质对比好；乳 腺结节、甲状腺肿物、肺部结节等组织切片较 粤 组 明显改善，组织结构完整性好，细胞核及胞浆染色 清晰，对比明显。悦 组各组织切片质量与 月 组差别 不明显。具体见表 员。各组标本病理分型见表 圆。 3讨 论
尽管自动恒温冷冻切片机的技术日益精进，但 减少冷冻切ห้องสมุดไป่ตู้的误诊、漏诊是永恒的话题。切片的
山西医药杂志 2019 年 2 月第 48 卷第 4 期 Shanxi Med J，February 2019，Vol. 48. No.4
窑 493 窑
组别 粤组 月组 悦组 1）与 粤 组比较 孕约园援园员
例数 61 81 39
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不同固定液对冷冻组织病理切片
HE染色质量比较
发表时间：
2019-12-12T12:59:46.697Z 来源：《医药前沿》2019年32期 作者： 黄荣
[导读] 结论：新型的环保固定液的冷冻组织病理切片HE染色质量与常规固定液无较大差异，但图像清晰度较高。
（海门市第四人民医院
江苏 海门 226141）
【摘要】 目的：探讨不同固定液对冷冻组织病理切片HE染色的质量。方法：选取我院2016年1月—2018年12月检测的280例冷冻组织
病理切片，随机分成对照组和观察组各
140例。对照组用常规固定液做HE染色，观察组用新型固定液做HE染色，比较两组冷冻组织病理切
片
HE染色质量。结果：相较于对照组的HE染色质量，观察组的色彩、对比度和渗透力以及图像呈现速度比较无显著差异（P＞0.05）；但
观察组的
HE染色图像清晰度与对照组比较有差异，I级率和Ⅱ级率均比对照组高，差异显著（P＜0.05）。结论：新型的环保固定液的冷冻
组织病理切片
HE染色质量与常规固定液无较大差异，但图像清晰度较高。
【关键词】 冷冻组织病理切片；不同固定液；HE染色质量
【中图分类号】R446.8 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）32-0228-02
近年临床上可使用的固定液较多，但均存在一定的局限性，同时HE染色的质量也存在不同，故而本次研究中采用不同固定液对280例
冷冻组织病理切片做
HE染色，旨在比较其HE染色质量以及相关情况。
1.
资料与方法
1.1
一般资料
选择的280例组织主要源自甲状腺和胃、乳腺以及肠、肺、脑、子宫、平滑肌等，均是患者活检、术后遗留的组织；资料源自我院
2016
年1月—2018年12月检测的280例冷冻组织病理切片，随机将280例对象分成对照组和观察组各140例：对照组男性患者83例和女性患
者
57例，年龄19～63岁、平均（35.8±5.6）岁；观察组男性患者81例和女性患者59例，年龄21～62岁、平均（35.2±5.4）岁。两组一般资
料比较无差异，
P＞0.05，有可比性。
1.2
方法
对照组：常规试剂采用的是二甲苯和无水乙醇、分化液、含汞苏木素以及伊红等，HE染色根据规定步骤进行。
观察组：新型试剂采用的是环保试剂，把140例患者的病理组织切片后，将其用无苯切片脱蜡液I和Ⅱ各处理5min，随后再用Ⅲ号脱蜡
液将其处理
10min；采用无水乙醇I将其处理1min，并用Ⅱ号再处理1min，随后以95%和85%的乙醇将其处理10s；将病理组织放在自来水
龙头下将其缓流清洗
1min，之后采用苏木素稳定剂将其再处理30s，再者是用苏木素染色液将其处理9min，用自来水将其再进行缓流冲洗
1min
；随即用0.5%分化液将其处理2s，并再次用自来水缓流清洗1min；再用返蓝染色液将其处理5s，并用自来水对其缓流清洗1min；用
伊红染色液将其处理
2min，再用自来水缓流清洗5s；以85%的乙醇将其处理5s，并用95%的乙醇将其再处理10s；随后再用无水乙醇I和Ⅱ
对标本各处理
10s；随后再用无苯切片透明液I对其进行20s的处理，Ⅱ号液体再处理1min，Ⅲ号液体再处理2min；上述各项操作完成后则
将标本湿封。
1.3
观察指标和评价标准
选取的280例患者病理组织标本均采用LED型光学显微镜进行观察，用MRNN型高清数字显微镜相机对CCD图像进行采集，观察病理
组织的色彩颜色及其渗透性、对比度和组织结构等情况。
HE染色质量等级划分标准参照[1]。
1.4
统计学方法
统计学软件选择SPSS24.0，性别占比和HE染色I级、Ⅱ级以及Ⅲ级资料用（%）表示，行χ2检验；年龄资料用（x-±s）表示，行t检
验；
P＜0.05时，表示差异有统计学意义。
2.
结果
相较于对照组的HE染色质量，观察组的色彩、对比度和渗透力以及图像呈现速度比较无差异（P＞0.05）；但观察组的HE染色图像清
晰度与对照组比较有差异，
I级率和Ⅱ级率均比对照组高，差异显著（P＜0.05）。
表 两组冷冻组织病理切片HE染色质量比较 （例）
3.
讨论
冷冻切片的质量与切片的固定有关，常用的固定液中主要含有乙醇、贡等物质，乙醇虽然能够去除切片上的水分，对切片的组织结构
保存有效，但会导致组织切片中的球蛋白和白蛋白等物质沉淀，这时核蛋白沉淀并会溶解在水中，造成着色异常或者不佳；贡会对人体组
织造成较大的破坏，极易造成切片组织出现黄色的氧化汞，从而影响组织病理诊断
[2]。
本次采用的新型环保固定液中不含汞，切片组织可以在短时间内着色，进行分化后则用流水冲洗，促使组织切片快速返蓝，缩短了组
织着色时间。由于是采用无汞固定液，病理组织不会被破坏，固定液的稳定性得到加强，消除了常规固定液的一些不足，确保了病理组织
的着色质量，同时新试剂更换时无需再做相关处理。固定液的改良，使得其中的有害物质均被分离，不会出现大量挥发或者生物降解的问
题，亦不会造成病理组织标本异常收缩，可以获得色彩良好且对比度佳的图像
[3]。
综上所述，新型试剂HR染色色彩对比度和渗透力以及图像呈现速度与常规试剂无较大差异，但其染色图像清晰度较高，这对病理组织
的快速诊断有着积极作用。
【参考文献】
[1]
陈杰，常秀青.质量永远是病理诊断的生命线[J].中华病理学杂志，2016，45(1):1.
[2]
周君，谢明，彭茜茜，等.4种固定液对快速冷冻切片的制片效果的影响[J].中国医学工程，2016，24(9):32-33.
[3]
林红.GS环保固定与传统固定染色在冷冻切片中应用[J].中国医药科学，2014，4(20):139-141.