病理切片的特殊染色方法
特殊染色和组织化学
⒉粘蛋白
在同一种上皮和腺体内常可同时分泌2种 粘液物质，而在同部位的分泌物中两者 的比例和含量都有所不同。
⒉粘蛋白
粘液物质一般具有下列性质： ①对异染性染料具有异染性； ②对碱性染料具有很强的亲和力； ③除胃粘蛋白外，其他粘液遇醋酸时 都会发生沉淀； ④可溶于弱碱性溶液。
2．在心肌病变及其他心血管疾病的研究 用显示糖原的特殊染色，可以观察到由缺 血缺氧所致急性早期心肌坏死病灶内的糖 原明显减少甚至消失，呈均质的浓染状态， 而病灶周围则出现反应性异常糖原增多； 已愈合的心肌梗死灶周围的心肌纤维内可 有糖原颗粒浸润；心肌的横纹肌瘤也有大 量糖原存在。
3．糖原累积病的诊断及研究 用显示糖原的 特染方法可观察到由先天性遗传缺陷引起的 糖原累积病时，心、肝、肾、骨骼肌、单核 吞噬系统等器官内均有大量的糖原堆积。
1、有学者认为从物理学角度看，染色剂和组织 细胞的结合是“溶解”或“吸收”。例如苏丹类染 色剂使脂质着色，就是利用染色剂在脂质中的溶解 度大于在酒精等溶剂中的溶解度这一特性。有些染 色剂是染色剂分子通过渗透和毛细血管作用而被吸 收或沉淀到组织、细胞的小孔中去而着色的‘这种 机制的染色是很少的。
2、另有学者认为染色是染色剂与组织、细胞之间 的化学性结合。如显示含铁血黄素的普鲁士反 应是最典型的例子。
5)蒸馏水洗涤数次。
6)用Schiff试剂浸染5一 10min，如温度低时 可延长浸染时间。
7)倾去Schiff试剂，直 接流水冲洗10min。
8)用明砚苏木素染液浅 染胞核2—3min，过 染时可用o5％盐酸乙 醇液稍分化。
9)流水冲洗5一l0min。
10)乙醇脱水，二甲苯运 明，中性树胶封固。
注意事项
2、类化学方法 有少数方法的染色反应有特 殊性，但机制不明。
病理学特殊染色技术：Gomori醛品红染色法（弹性纤维、肥大细胞）
病理学特殊染色技术：Gomori醛品红染色法（弹性纤维、肥
大细胞）
Gomori醛品红染色法
（弹性纤维、肥大细胞）
试剂：
①醛品红液：酸性品红0.5克，70%酒精99毫升，三聚乙醛（副醛）1毫升
将酸性品红溶于70%酒精，加入鹴2和三聚乙醛，充分溶解，室温放24 48小时自然成熟，溶液呈紫色，4摄氏度冰箱保存2~3朋
②橘黄G液：橘黄G 0.5克，磷钨酸2克，95%酒精100毫升
③Lugol碘液：碘化钾2克溶于蒸馏水20毫升，再加碘1克，完全溶解后，加蒸馏水80毫升
方法：
⑴石蜡切片常规脱蜡至水
⑵碘液5~10分钟，水洗2~3分钟
⑶5%硫代硫酸钠水溶液5分钟，流水冲洗3~5分钟
⑷70%酒精稍洗
⑸醛品红液5~10分钟
⑹70%酒精洗至弹性纤维清晰，水洗2~3分钟
⑺橘黄G液10~20秒，水洗2~3分钟
⑻各级酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片
结果：
弹性纤维深紫色；
黏液紫色；
肥大细胞颗粒、胰腺B细胞颗粒、脑垂体腺细胞同时着色；
背景黄色。
病理学技术—特殊染色最最全总结
病理学技术—特殊染色最最全总结病理学技术是医学研究领域中的一个重要分支，它利用各种不同的方法和技术，对组织和细胞进行分析和研究。
其中，特殊染色技术是病理学技术中的一个重要组成部分，通过使用不同的染色剂，有助于观察并区分不同的细胞和组织结构，以辅助诊断和研究。
以下是对特殊染色技术的最全总结。
1. PAS染色（Periodic Acid-Schiff染色）：PAS染色可以用于检测细胞和组织中的多糖物质，如糖原、粘多糖和黏多糖等。
PAS染色通过一系列的化学反应，将含有醛基的物质氧化，然后与PAS染料反应生成染色物质。
2. 铁染色：铁染色可用于检测细胞和组织中的铁含量，它可以帮助鉴别铁负荷过多或过少的情况。
常用的铁染色方法包括Perls染色和Prussian blue染色。
3.去脂酸和酶染色：去脂酸和酶染色用于检测细胞和组织中的脂质和酶活性。
去脂酸染色通过将组织切片浸泡在油酸中，然后用溴化黄染色，观察脂质的分布情况。
酶染色通过使用特定的染色剂来观察细胞中的酶活性，如碘化物染色用于检测过氧化物酶活性。
4.免疫组织化学染色：免疫组织化学染色是通过使用特异性抗体来检测细胞和组织中的蛋白质和其他分子。
常见的免疫组织化学染色方法包括免疫荧光染色和酶联免疫组化染色。
这些染色技术可以用于确定特定抗原的存在和定位，从而帮助确定疾病的诊断和预后。
5.组织切片染色：组织切片染色是一种常见的特殊染色技术，它可以用于检测细胞和组织中的结构和细胞器。
常用的组织切片染色方法包括伊红染色、苏木素-伊红染色和单色染色等。
6.核酸染色：核酸染色用于检测细胞和组织中的核酸结构和功能，其中最常用的核酸染色方法是荧光原位杂交（FISH）和DAPI染色。
荧光原位杂交可以用来检测染色体异常和基因重排等。
7.肉眼可见染色：肉眼可见染色是一种用于检测显微镜下不易观察到的细胞和组织结构的染色技术。
常见的肉眼可见染色方法包括钙化染色和淀粉样变染色等。
总结以上所述，特殊染色技术在病理学领域中具有重要的应用意义，通过使用不同的染色剂，可以对细胞和组织进行全面和准确的分析和研究。
病理制片技1
病理制片技术——常用特殊染色一、六胺银染色1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。
2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。
3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。
4．注葸事项(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。
(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。
二、黏液卡红染色1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入5 0％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。
2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。
3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．4．注意事项(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。
(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。
(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。
三、石碳酸品红染色1．第一步准备工作(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。
病理切片染色方法
病理切片染色方法
病理切片染色是一种常用的病理学检查方法，可以帮助病理医师观察和诊断疾病。
常用的病理切片染色方法有以下几种：
1. 高尔基染色法：可以染色细胞核为蓝色，细胞质为粉红色，便于观察细胞形态和排列情况。
2. 血液涂片染色：常用的涂片染色方法有吉姆萨染色法、健康那染色法等，可以帮助观察血细胞的类型和数量。
3. 组织切片染色：常用的组织切片染色方法有血红素-伊宁染色法、苏木精-伊宁染色法等，可以染色细胞核和细胞质，以及观察组织结构和病理变化。
4. 免疫组化染色：通过特定抗体与组织中的特定抗原结合，来观察和诊断疾病。
常用的免疫组化染色方法有免疫组织化学染色法、免疫荧光染色法等。
5. 特殊染色：用于染色特定的结构或化合物，例如透明质酸染色、银染色等。
以上是一些常见的病理切片染色方法，根据具体需要和疾病类型，病理医师会选择不同的染色方法来进行诊断和研究。
几种常用特殊染色操作过程中的要点
一、网状纤维染色 ——氢氧化银氨法（Gomori法）
5
（一）网状纤维的形态结构
较细的纤维组织、短、分支多，交织成网状
（与胶原纤维共同为细胞丰富的器官起到支撑作用）
HE呈淡红色，银氨液浸染、甲醛还原后呈黑色
（嗜银性/嗜银纤维：黑色）
主要由Ⅲ型胶原蛋白构成，表面被覆糖蛋白
（PAS染色：淡紫红色）
6
＋蒸馏水，洗涤沉淀（50-100ml蒸馏水） <反复/3次，沉淀不浑浊>
留下沉淀及少许上清液（4ml）
<保留沉淀物质>
逐滴＋氢氧化铵（一次1-2滴加入）
<边加摇晃>
至沉淀逐渐完全溶解
<无色溶液>
逐滴＋10%硝酸银，至刚出现浑浊 加氢氧化铵一至数滴，使沉淀消失
＋蒸馏水至40ml，2-8°C冰箱
<浑浊状态>
2
四、淀粉样物 刚果红法（甲醇刚果红、碱性刚果红）、甲基紫法 五、色素 含铁血黄素（Perls）、黑色素（Masson-Fontana）铜（罗 丹明、红氨酸） 六、糖类物质 糖原（PAS）、黏液物质（AB-PAS、AB） 七、脂内物质 中性脂肪（苏丹Ⅲ、Ⅳ、油红O）
3
八、神经组织 尼氏体（硫瑾、甲苯胺蓝）、神经髓鞘（变色酸2R、砂罗 铬花青） 九、肝脏穿刺 Masson、网状纤维、含铁血黄素、PAS、铜等。 十、肾脏穿刺组织 Masson、六胺银、PAS、刚果红等
1.氧化（KMnO4）：使网状纤维内羟基转变为醛基。<选择性> 2.漂白（H2C2O4）：棕色变为无色。 3.媒染（铁明矾）：增加网状纤维对银氨液的选择性。 4.浸银（氢氧化银氨）：银氨液中Ag（NH3）2+被组织吸附后与醛基结合。 5.还原（甲醛）：与网状纤维结合的银氨配位化合物还原成黑色的金属 银。
病理制片技术――常用特殊染色
病理制片技术――常用特殊染色1．第一步准备工作：配制六胺银染液，将10％硝酸银2．5ml倒入干净的染色缸内，加入2％硼砂5ml，液体呈乳白色，再加入3％乌洛托品40ml，染液逐渐呈透明状。
2．第二步染色过程：事先把温箱调至60℃备用，切片经脱蜡至水，用1％过碘酸氧化10 min，水洗，然后切片放人六胺银染液放置60℃温箱1 h，染真菌时间要相对短一些，一般情况下肉眼看到染液变色，切片呈棕色时从温箱取出染色缸，倒掉染液，自来水冲洗1min，用0．25％氯化金调色1 min，水洗后，用3％硫代硫酸钠染5 min,水洗，用苏木精染液浅染，水洗、分化、冲水返蓝，伊红染10 s，最后经脱水、透明、封固。
3．图示结果：基底膜与毛细血管间质性物质、真菌呈棕黑色，核呈蓝色。
4．注葸事项(1)掌握染色温度和时间，如60℃染1 h，80℃染30～40 min。
(2)真菌类染色时间相对要短，染色时间过长，切片染色过深，可用分色剂处理。
二、黏液卡红染色1．第一步准备工作：配制黏卡染液，将称好的胭脂1 g、氢氧化铝1 g倒入瓶内，加入50％L醇100 rnl混合摇匀，再加入氯化铝0．5g，水浴加温逐渐煮沸并搅动液体，使其充分溶解(注意染液容易外溅)，数分钟后，染液由红色变成透明深紫红色，冷却后将液体倒入量筒，再加入50％乙醇至原量，过滤，放人冰箱备用。
2．第二步染色方法：染液使用时原液与蒸馏水比例为1：4稀释.切片厚5 um，脱蜡至水，经苏木精染色2 min、水洗、分化、返蓝后进人黏卡液染色2 h以上，染液可以重复使用多次，但要适当延长染色时间．切片水洗后，脱水、透明、封固。
3．图示结果：黏液为红色，胞核为蓝色．4．注意事项(1)染液使用时比例为1份黏卡原液，4份蒸馏水。
(2)用酶消化对照染色特异性很大，消化时间为20 min。
(3)配制黏卡染液时要防止液体溅出。
三、石碳酸品红染色1．第一步准备工作(1)配制盐基性品红饱和液：盐基性品红溶于乙醇内。
特殊染色
高碘酸-无色品红法
蒸馏水 偏重亚硫酸钠 170ml 3.96g
活性炭 2.0g(第二天称) 碱性品红(用研钵磨细更佳)加入蒸馏水中溶 解后依次加入盐酸及偏亚硫酸钠，塞住瓶口(锥 形瓶、小口瓶比较好)摇动容器以充分混和(此时 颜色会有明显变化)放置过夜后加入活性炭摇动 数分钟静止1小时后过滤，呈无色或淡稻草黄色 为佳。（不用时冰箱4℃左右保存）
应用：
明确含铁血黄素的存在。如长期的肺郁 血、出血；陈旧性出血灶；肝硬化时慢性脾 郁血的含铁结节；硬化性血管瘤；动脉瘤性 骨囊肿；绒毛色素性滑膜炎等。
胆色素
三氯醋酸三氯化铁（Hall）法：
试剂配制： ㈠Fouchet 液： 甲液：三氯醋酸 25 克 蒸馏水 100 毫升， 乙液：三氯化铁 1克 蒸馏水 10 毫升 两者均宜少量新鲜配制，棕色瓶贮存。 临用时取甲液 30ml 乙液 3ml 等份混合。
Masson 法
•1 切片脱蜡至水.
•2 苏木素染核（可略）
•3 丽春红酸性品红5分钟
•4 快速水洗.蒸馏水洗
•5 1%磷钼酸滴染1-3分钟 •6 倾去余液直接滴加亮绿液5分钟 •7 快速水洗后烤箱烘干,透明封固 •结果：胶原纤维绿色 肌纤维红色
胶原纤维染色的应用 1. 区别胶原纤维与肌纤维。 2. 观察某些病变组织的纤维化及 程度等。
染色方法： 1 常规切片 、脱蜡至蒸馏水 2 0.5%高碘酸氧化5-10分钟 3 流水冲洗数分钟，蒸馏水洗一次 4 无色品红20分钟 5 水洗 5分钟后苏木素染核 6 常规脱水(或烤箱烘干)透明封固 结果：糖原或中性粘液或霉菌等 鲜红色，核蓝色。
注意事项
•1 配制过程中玻璃器皿要干净，试剂要纯。
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1.Van Gieson苦味酸和酸性品红法
【染色方法】
（1）中性甲醛固定组织，石蜡切片；
（2）组织切片脱蜡至水；
（3）用Van Gieson液染1～5分钟；
（4）倾去染液，直接用95％乙醇分化和脱水；
（5）无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
【结果】胶原纤维呈红色，肌纤维、胞质及红细胞呈黄色。
2.Masson氏结缔组织三合染色法
【染色方法】
（1）石蜡切片厚6μm，脱蜡至水；
（2）0.2％冰醋酸水溶液浸泡片刻；
（3）Masson氏染色液中5分钟或更长时间；
（4）0.2％冰醋酸水溶液浸泡片刻；
（5）5％磷钨酸水溶液2～3分钟，再入0.2％冰醋酸水溶液浸洗（6）投入淡绿、冰醋酸水溶液浸染5分钟或更长时间；
（7）再入0.2％冰醋酸水溶液浸洗片刻；
（8）脱水、透明和封固。
【结果】胞浆和神经胶质纤维染红色，胶原纤维染绿色。
【染色方法】
（1）石蜡切片、脱蜡至水；
（2）0.25％高锰酸钾液3分钟；
（3）蒸馏水洗2次；
（4）1％草酸漂白即可；
（5）蒸馏水洗2次；
（6）2.5％铁明矾水溶液媒染5～10分钟，蒸馏水洗多次；（7）二氨氢氧化银浸染1分钟，蒸馏水洗3次；
（8）10％甲醛液还原2分钟，蒸馏水洗3次；
（9）0.2％氯化金液调色1～2分钟，蒸馏水洗3次；
（10）5％硫代硫酸钠固定5分钟；
（11）蒸馏水洗，需要时复染；
（12）水洗、脱水、透明和封固。
【结果】网状维呈黑色，其他组织呈复染的颜色。
显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法
【染色方法】
（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水；
（2）切片入70％乙醇中洗2分钟；
（3）将切片浸入盛有维多利亚蓝液中染0.5～2小时；
（4）直接入95％乙醇中分色数秒钟；
（5）浸入蒸馏水洗2分钟；
（6）用丽春红S液滴染切片5分钟；
（7）直接用无水乙醇冲洗多余染色液2次；
（8）将切片在空气中或冷风干燥；
（9）二甲苯透明，中性树胶封固。
【结果】弹性纤维呈蓝绿色，胶原纤维呈红色，背景呈淡黄色。
【染色方法】
（1）冰冻切片厚度8～15μm；
（2）Harris苏木素，染约1分钟；
（3）自来水洗后，用0.5％盐酸乙醇分化，再水洗直至胞核返蓝为止；
（4）蒸馏水洗后移入70％乙醇内浸洗一下；
（5）浸入苏丹III染液中约30分钟或更长时间（如果置于56℃温箱中可适当缩短时间）；
（6）在70％乙醇分化数秒钟；
（7）待切片在空气中稍凉干或用冷风机吹干；
（8）及时用明胶甘油封片。
【结果】脂肪呈橘红色，脂肪酸不着色，胞核淡蓝色。
高碘酸－Schiff（Periodic acid Schiff，PAS）染色法
【染色方法】
（1）切片脱蜡至蒸馏水；
（2）浸入高碘酸氧化液中10～20分钟；
（3）蒸馏水洗2次；
（4）Schiff液染色10～30分钟；
（5）流水冲洗5分钟；
（6）用苏木素染细胞核3～5分钟；
（7）在盐酸酒精中分化，自来水洗至细胞核变蓝为止；
（8）脱水、透明和封固。
【结果】糖原和粘蛋白呈紫红色，细胞核染蓝色，霉菌也呈紫红色等。
【染色方法】
（1）切片入二甲苯，后递次向下直到入水；
（2）3％冰醋酸溶液3分钟；
（3）在奥辛兰溶液中染5分钟；
（4）入3％冰醋酸3分钟，蒸馏水洗（3次）；
（5）用1％过碘酸处理10分钟，蒸馏水洗；
（6）入Schiff液10～30分钟；
（7）流动自来水洗10分钟；
（8）逐级酒精脱水，二甲苯透明；
（9）中性树胶封固。
【结果】酸性粘多糖染兰色；中性粘蛋白染品红色；中性和酸性粘蛋白混合物染紫色。
Mallory磷钨酸－苏木素染色法PTAH
【染色方法】
（1）切片脱蜡至水；
（2）在酸性高锰酸钾液中氧化5～10分钟；
（3）自来水充分洗，蒸馏水洗2次；
（4）用1％草酸液漂白2分钟；
（5）自来水洗，蒸馏水洗2次；
（6）浸入MalloryPTAH液中12～48小时；
（7）直接用95％乙醇分化；
（8）无水乙醇急速脱水，二甲苯透明和树胶封固。
【结果】胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维素、横纹肌等均呈蓝色；胶质纤维、网状纤维、软骨基质及骨呈黄色或玫瑰红色；粗弹力纤维有时被染成微紫色；有缺血缺氧早期病变的心肌呈紫蓝色或棕黄色。
【染色方法】
（1）石蜡切片，脱蜡至水；
（2）在1％刚果红水溶液中1小时或更长时间；
（3）投入饱和碳酸锂水溶液中15秒钟；
（4）用80％酒精分化，直至无多余燃料溜下为止；
（5）水洗后用苏木素进行核染色；
（6）等干后进行二甲苯透明和树胶封固。
【结果】淀粉样物质呈红色，细胞核呈兰色。
【染色方法】
（1）中性甲醛固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水；
（2）0.2mol／L醋酸缓冲液洗2次；
（3）将切片置入1％硝酸银液内1小时左右（温箱56℃）；
（4）直接把切片取出，立即浸入显影液内2～3分钟；
（5）将切片浸入56℃蒸馏水中洗1～2分钟；
（6）蒸馏水洗1次；
（7）无水乙醇脱水，二甲苯透明和中性树胶封固。
【结果】胃幽门弯曲菌呈棕黑色或黑色，背景呈淡黄色。
【染色方法】
（1）石蜡切片厚6μm，脱蜡至水；
（2）用1％甲苯胺蓝水溶液置于50～60℃温箱内浸染20～40分钟；
（3）蒸馏水稍洗；
（4）95％乙醇迅速分化；
（5）无水乙醇脱水，二甲笨透明，中性树胶封固。
【结果】尼氏小体紫蓝色，胞核棕红色。
【染色方法】
（1）石蜡切片厚6μm，脱蜡至水；
（2）投入新鲜配置的20％盐酸和10％亚铁氰化钾等量混合液（用前过滤）中30分钟，必要时可延长时间；
（3）蒸馏水洗；
（4）在0.5％的碱性品红（溶剂为50％酒精）进行1分钟对比染色；
（5）在95％酒精中分化后晾干，透明，封固。
【结果】含铁血黄素呈蓝色，血棕色素呈红色。
【染色方法】
（1）石蜡切片，脱蜡至水；
（2）投入硝酸银染色液中，并置于暗处12～18小时；（3）蒸馏水洗2分钟；
（4）以0.2％氯化金水溶液增色5－10分钟；
（5）蒸馏水洗；
（6）投入5％硫代硫酸钠水溶液2分钟；
（7）自来水洗；
（8）如需复染，可用苏木素－伊红染色法；
（9）酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。
【结果】黑色素呈黑色。