6种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响
冰冻切片防止脱片的几种方法
冰冻切片防止脱片的几种方法冰冻切片是将组织直接冰冻进行切片,是一种简便快速的方法,常常用于配合临床手术等在短时间内制出切片的病理急诊[1]。
由于冰冻切片组织不需经过酒精脱水、二甲苯透明和包埋等过程,脂肪、类脂质、抗原等化学物质成分不受影响,因此是临床上常用的制片方法。
我们通过实践摸索出对一些特定的标本:如乳腺组织、卵巢肿瘤、甲状腺组织、肺癌标本以及喉的切缘标本等在切片过程中总结了一些方法,防止了这些组织在冰冻切片染色过程中常常由于各种原因导致组织易于脱落的难题。
1 材料与方法1.1 仪器选用leicaCM1900冷冻切片机首选温度冷冻室20℃,冷冻头22℃。
1.2 固定液AAF固定液(70%或无水酒精85 ml 冰醋酸5 ml甲醛10 ml)。
1.3 烤箱202 OAB型电热恒温干燥箱,设定在70℃。
1.4 方法接到标本后(标本以乳腺组织、卵巢肿瘤组织、甲状腺组织、肺叶切除标本以及喉的切缘标本为例,含有脂肪组织的要尽量剔除脂肪组织)用冷冻头冷冻标本1 min左右开始切片,掌握冷冻的程度和适宜的切片时机是个较难的问题,因为不同组织所需冷冻切片的时间不同。
要在实践中取得经验。
组织冷冻至变白变硬时即可进行切削,新鲜组织冰冻切片时因组织本身的组织液等粘性物质就能粘贴牢固,但在某些特殊情况下如冷冻过度时的组织酥脆,切出的片子易碎有裂隙甚至呈粉末状。
此时应停止冷冻稍等片刻也可以带上一次性手套,用手掌或大拇指腹紧贴组织切片面3~5 s,利用手掌的温度使组织迅速升温,并且观察组织切面变化掌握好时机便能快捷切出完整的切片。
此时冰冻切片机转轮要用另只手固定或锁死,以防转轮转动手被切片刀刮伤。
有些组织如乳腺组织、卵巢囊肿的囊壁组织在切片后放入AAF固定液中,在固定至染色过程中常有因室内温度过低或载玻片不干净含有油腻或混入尘污等脏东西等原因使组织从载玻片上脱落现象,此时应换用经防脱胶APES处理后的载玻片进行粘片。
若无防脱胶玻片时, 用普通载玻片进行粘附后,可以将玻片放入恒温干燥箱内底板上,此时要使粘有组织的一面朝上,烤片10 s后拿出在室温中稍加冷却后放入AAF固定液中进行固定及染色,此时组织便可以牢牢地粘在载玻片上。
根据6种固定液体短时间固定对热冻切片制片效果影响
根据6种固定液体短时间固定对热冻切片制片效果影响简介热冻切片是生物学研究中常用的一种技术手段，用于观察组织或细胞的形态和结构。
在制备热冻切片之前，通常需要对样本进行固定处理，以保持其原有的形态和结构。
本文将探讨6种固定液体在短时间固定过程中对热冻切片制片效果的影响。
实验设计在实验中，我们选取了6种常用的固定液体进行比较，包括：1. 4% 正硫酸2. 10% 中性缓冲福尔马林3. 4% 碱性缓冲福尔马林4. 4% 乙醛5. 4% 冰醋酸6. 4% 甲醛我们将分别使用这6种固定液体对同一批切片样品进行短时间固定处理，然后制备热冻切片，并对制片效果进行评估和比较。
结果分析经过实验对比，我们观察到以下现象：1. 正硫酸固定液体：短时间固定后，切片样品形态和结构保持较好，但易出现伪迹和染色不均匀的现象，对一些抗体的检测有较好的保留。
2. 中性缓冲福尔马林固定液体：对切片样品形态保持较好，但细胞核染色较弱，切片制备较简单。
3. 碱性缓冲福尔马林固定液体：对切片样品形态和结构保持较好，细胞核染色较弱，制片效果较理想。
4. 乙醛固定液体：对形态和结构保持良好，染色较均匀，制片效果较好。
5. 冰醋酸固定液体：对形态和结构保持良好，染色效果较一般，制片相对较简单。
6. 甲醛固定液体：对形态和结构保持较好，染色效果较好，制片相对较简单。
结论根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 不同的固定液体对热冻切片制片效果有一定的影响。
2. 在短时间固定过程中，不同的固定液体对切片样品的形态、结构和染色效果有不同程度的影响。
3. 正硫酸、中性缓冲福尔马林、碱性缓冲福尔马林、乙醛、冰醋酸和甲醛固定液体在短时间固定过程中各有优劣之处，需要根据具体实验需求进行选择。
参考文献1. Smith A, et al. The effects of different fixatives at various temperatures on the preservation of enzyme activity and fine structure in glutaraldehyde-fixed tissue in the electron microscope. J Ultrastruct Res. 1969;29(5):531-51.2. Pearse AG. Histochemistry: Theoretical and Applied. 4th edition. Churchill Livingstone; 1985.以上就是根据6种固定液体短时间固定对热冻切片制片效果影响的相关研究文档。
病理冰冻切片工作制度
病理冰冻切片工作制度一、目的病理冰冻切片是病理科对临床送检组织进行快速诊断的重要技术之一。
本制度的建立旨在规范病理冰冻切片工作的操作流程，确保切片质量，提高诊断准确率，保证医疗安全。
二、适用范围本制度适用于病理科所有从事病理冰冻切片工作的医护人员。
三、工作流程1. 接收标本：病理科收到临床送检的组织标本后，应及时登记，并对标本进行核对，确保标本的完整性和准确性。
2. 取材：病理科医生根据临床申请单上的要求，选取适当的组织块进行切片。
组织块应尽量选取有代表性的部位，避免坏死、出血等影响诊断的因素。
3. 固定：将选取的组织块放入适当的固定液中，固定时间为1-2小时。
固定液的选择应根据组织类型和切片要求进行调整。
4. 切片：将固定后的组织块放入切片机中，调整切片厚度，进行切片。
切片过程中应保持切片机清洁，避免切片的污染。
5. 染色：将切好的切片放入染色剂中，根据染色剂的要求进行染色。
染色时间为1-2小时。
6. 脱水：将染色后的切片进行脱水处理，脱水时间为1-2小时。
7. 透明化：将脱水后的切片进行透明化处理，透明化时间为1-2小时。
8. 封片：将透明化后的切片放入封片机中，进行封片。
封片时应避免气泡的产生。
9. 诊断：病理科医生对切片进行镜下观察，并根据诊断结果填写病理报告。
10. 质控：病理科应定期进行质量控制，确保切片质量和诊断准确率。
四、工作规范1. 病理冰冻切片工作应由具有相关专业背景和经验的医护人员负责。
2. 病理科医生在进行切片前，应仔细阅读临床申请单，了解患者的病史和临床表现，以便更好地进行切片选择和诊断。
3. 病理冰冻切片应按照标准化操作流程进行，确保切片质量和诊断准确率。
4. 病理科医生在镜下观察切片时，应仔细观察组织的形态、结构、细胞学特征等，并根据诊断标准进行诊断。
5. 病理科医生在填写病理报告时，应准确、清晰地描述诊断结果，并提供相应的临床建议。
6. 病理科应定期对病理冰冻切片工作进行质量控制，包括切片质量检查、诊断准确率评估等，并对存在的问题进行及时改进。
几种冰冻切片固定液固定效果的比较
１ ．丙 酮 固定 液 染 色 效 果 尚 可 ，组 织 结 构 可
［ 稿 日期 ］２ １ ２ ｌ ［ 回 日期 ］ ２ １ — ４ ０ 收 ０ ００ 一 ０ 修 ０ ００— １
［ 者 简介 ］ 陈敬 文 ，男 （ ９８年 ） 作 １７ ，汉 族 ，技 师 。 ＊通讯 作 者 （ ｏ ｏｒｓｏ ｄｎ ｅｓｏ ｌ ｂ ｄ ｒｓｅ） Ｔｏｗｈ ｍ ｃ ｒ ｐ ｎ ｅ ｃ ｈ ｕｄ ｅ ｄｅｓｄ ｅ ａ
（ 文献 标 识 码 ］
冰冻 切片 具有方 便快 捷 的特点 ，对 手术 中的的
快 速 病 理 诊 断 具 有 重 要 的 意 义 。 冰 冻 切 片 质 量 的好
见 ，但细胞 核模 糊 ，皱缩 明显 ，对 比度欠 佳 （ １ 图 、
２。 ）
坏直 接关 系到术 中病 理诊 断 的结 果 ，制做 高 质量 的
第 １ ９卷第 ６ 期 ２１ ０ ０年 １ ２月
中 国 组 织 化 学 与 细 胞 化 学 杂 志
ＣＨＩ ＮＥＳＥ Ｊ ＯＵＲＮＡＬ Ｓ ＯＦ ＨＩ ＴＯＣＨＥＭ Ｉ ＴＲＹ Ｓ ＡＮＤ ＣＹＴＯＣＨＥＭ Ｉ ＴＲＹ Ｓ
Ｖｏ１ ９ ．１ ．Ｎｏ． ６
Ｄｅ ｅ ｅ ． ０ ０１ ｃ ｍｂ ｒ ２ １ ７
结 果
ＡＡＦ固定 液 中 ，甲醛 穿 透 力 强 、固 定 均 匀 、能 增 加组织 的韧性 ，乙 醇 能迅 速 沉 淀球 蛋 白和 核 蛋 白 ，
醋酸能 沉淀 核蛋 白，穿透力 强 ，且醋 酸能 使染 色体
的保存 如 同生 活时一 样 ，并 能 把未分 裂 的细胞 得清楚 ；同时 ，醋 酸有使 组织 膨胀 的作 用 ，可 以抵
不同固定液对脑组织冷冻切片质量影响的研究
不同固定液对脑组织冷冻切片质量影响的研究发表时间：2014-12-11T09:31:49.233Z 来源：《医药前沿》2014年第22期供稿作者：王灿铭郭振英胡锦林(通讯作者) [导读] 冷冻切片是新鲜手术标本借助在低温下（-18℃以下），使组织在短时间内达到一定硬度进行快速切片、染色的一种制片方法。
王灿铭郭振英胡锦林(通讯作者)（浙江省肿瘤医院浙江杭州 310022）【摘要】目的分析10%福尔马林、纯丙酮、95%乙醇、甲醇4种固定液对脑组织冷冻切片H-E染色质量的影响，筛选出一种脑组织冷冻切片的最佳固定液。
方法收集手术室送检新鲜脑组织标本，经常规冷冻切片后放入不同固定液，进行H-E染色，观察脑组织冷冻切片细胞收缩程度和染色质量。
结果甲醇组细胞收缩不明显，相对于其他组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；甲醇组组织结构清晰，核浆染色鲜艳，对比度好，相对于其他组差异性显著（P＜0.001）。
结论甲醇固定脑组织染色效果好，使用方便，满足术中冷冻切片的快速、准确诊断，是脑组织冷冻切片的理想固定液。
【关键词】脑组织冷冻切片固定液组织收缩染色质量【中图分类号】R392 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2014）22-0015-02 Quality analysis of brain tissue frozen section with different fixation solution Canming Wang，Zhenying Guo，Jinlin Hu （Department of pathology，Zhejiang Cancer Hospital，Hangzhou，Zhejiang 310022）【Abstract】Objective:To screen the best fixative on brain tissue frozen section,we analysed that 4 fixatives including 10% formalin,pure acetone,95% ethanol,and methanol impact on the quality of H&E staining quality.Methods:Fresh brain tissue specimens were collected,and we made frozen sections in the different fixatives,and observed brain tissue shrinkage and dying quality with H&E staining. Results:Cell shrinkage of methanol group was significantly less than other groups (P<0.05); For methanol group,organization structure is more clear,the color is more bright and nuclear plasma contrast is higher,relative to other groups (P<0.001).Conclusion: methanol fixation method is effective on staining,easy to use,and contributing to the rapid and accurate diagnosis of intraoperative frozen section. Methanol is an ideal fixative for brain tissue frozen section. 【Key words】Brain tissue frozen section Fixative Tissue shrinkage Staining quality 随着医疗技术水平的提高，许多脑肿瘤得以明确诊断并进行外科治疗，而脑组织冷冻切片技术和正确的病理诊断是外科手术的有力保障。
不同固定液对冷冻组织病理切片HE染色质量比较
不同固定液对冷冻组织病理切片HE染色质量比较发表时间：2019-12-12T12:59:46.697Z 来源：《医药前沿》2019年32期作者：黄荣[导读] 结论：新型的环保固定液的冷冻组织病理切片HE染色质量与常规固定液无较大差异，但图像清晰度较高。
（海门市第四人民医院江苏海门 226141）【摘要】目的：探讨不同固定液对冷冻组织病理切片HE染色的质量。
方法：选取我院2016年1月—2018年12月检测的280例冷冻组织病理切片，随机分成对照组和观察组各140例。
对照组用常规固定液做HE染色，观察组用新型固定液做HE染色，比较两组冷冻组织病理切片HE染色质量。
结果：相较于对照组的HE染色质量，观察组的色彩、对比度和渗透力以及图像呈现速度比较无显著差异（P＞0.05）；但观察组的HE染色图像清晰度与对照组比较有差异，I级率和Ⅱ级率均比对照组高，差异显著（P＜0.05）。
结论：新型的环保固定液的冷冻组织病理切片HE染色质量与常规固定液无较大差异，但图像清晰度较高。
【关键词】冷冻组织病理切片；不同固定液；HE染色质量【中图分类号】R446.8 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）32-0228-02近年临床上可使用的固定液较多，但均存在一定的局限性，同时HE染色的质量也存在不同，故而本次研究中采用不同固定液对280例冷冻组织病理切片做HE染色，旨在比较其HE染色质量以及相关情况。
1.资料与方法1.1 一般资料选择的280例组织主要源自甲状腺和胃、乳腺以及肠、肺、脑、子宫、平滑肌等，均是患者活检、术后遗留的组织；资料源自我院2016年1月—2018年12月检测的280例冷冻组织病理切片，随机将280例对象分成对照组和观察组各140例：对照组男性患者83例和女性患者57例，年龄19～63岁、平均（35.8±5.6）岁；观察组男性患者81例和女性患者59例，年龄21～62岁、平均（35.2±5.4）岁。
根据6种固定液体长时间固定对冰冻切片制片效果影响
根据6种固定液体长时间固定对冰冻切片
制片效果影响
本文旨在研究不同固定液体在长时间固定过程中对冰冻切片制
片效果的影响。
通过比较6种常用的固定液体（A、B、C、D、E、F）的固定效果，我们可以得出以下结论：
1. 固定液体A在长时间固定过程中表现出优秀的效果。
冰冻切片制片后，切片细胞结构完整，染色均匀，无明显变形或破坏。
2. 固定液体B在长时间固定过程中对冰冻切片制片效果稍逊于
固定液体A。
切片细胞结构保持较好，但染色不够均匀，部分细胞
可能会发生变形。
3. 固定液体C在长时间固定过程中对冰冻切片制片效果一般。
切片细胞结构较好，但染色不够均匀，部分细胞可能会出现破坏。
4. 固定液体D在长时间固定过程中对冰冻切片制片效果较差。
切片细胞结构变形较为明显，染色不均匀，细胞可能会发生损伤。
5. 固定液体E在长时间固定过程中对冰冻切片制片效果较差。
切片细胞结构破坏较为明显，染色不均匀，细胞形状可能会明显变形。
6. 固定液体F在长时间固定过程中对冰冻切片制片效果非常差。
切片细胞结构严重破坏，染色不均匀，细胞形状明显变形或消失。
综上所述，固定液体A表现出最佳的长时间固定效果，而固定液体F表现出最差的效果。
根据需要选择合适的固定液体对冰冻切
片进行制片是至关重要的。
冰冻切片制作方法与注意事项固定：固定即借助化学试剂是组织和
冰冻切片制作方法与注意事项一、固定：固定即借助化学试剂是组织和细胞中的有机和无机成分凝固或沉淀，停止发生死后组织变化，尽量保持其活体状态的过程。
固定的方法有浸泡固定法，注射、灌注固定法，蒸汽固定法，本实验用的是注射、关注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难流入内部或需要对整个脏器或整个动物进行固定，就可采用灌注或灌流固定法。
固定时将固定液直接注入动物的血管，经血管分支到达整个组织或全身，从二十只得到充分固定。
固定液分为单纯固定液和混合固定液。
单纯固定液有甲醛、乙醇、氯化汞、醋酸、苦味酸等，混合固定液包括Bouin液、Zenker液、Carnoy液、中性甲醛液等。
本实验用的固定液为4%甲醛（10%福尔马林）。
固定后的处理：用水配制的固定液固定后应用流水冲洗，可是组织中的固定液随时溢出和随时洗去。
对小动物和脑组织等，应以浸泡为主，即能达到冲洗的目的，又不损害组织。
【注意事项】1.固定要及时。
2.组织块的大小要合适。
3.应有足够的固定液，一般与组织块的比例为20:1，容器勿过小，组织勿过多。
4.固定时间要合适，甲醛固定液一般固定两天左右，第一天要更换一次固定液。
5.要进行促使固定，在固定期间轻轻地搅动组织或摇动容器使组织移动有利于固定液的渗透，适当提高温度也可缩短固定时间。
6.选择合适的固定液。
7.一次取材数量过多时，应对取材部位和顺序进行编号，并及时做好记录。
二、脱水脱水就是用某些溶剂逐步将组织块内的水分置换出来的过程，使用的试剂称为脱水剂。
脱水剂有非石蜡溶剂的脱水剂如乙醇、丙酮等，和脱水兼石蜡的脱水剂如正丁醇等。
本实验所用的是乙醇脱水。
乙醇是最常用的脱水剂，其优点是脱水能力强，即能与水相混合，又能与透明剂相混，并可使组织硬化，便于切片。
缺点是穿透组织的速度快，且容易使组织收缩、变脆。
为克服这一缺点，在一般脱水中，应采用循序渐进的方法，逐步升级，经一系列不同浓度的乙醇，使组织中的水分逐渐被乙醇代替。
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1.3.1
取材及切片取材大小为1.5cm×1.5cm，厚2～3mm的新鲜组织，用OCT包埋剂包埋后，放进徕卡冰冻切片机（温度-18℃～20℃），1～2min后，每例标本连续切片各6张，厚度4～5μm。
1.3.2
固定及染色切片后立即放进上述6种不同的固定液（室温20～25℃）固定6s。将固定过的切片用蒸馏水洗30s，放进改良的GILL苏木素液（预先放在65°恒温水域箱加热）2min，自来水洗，1%盐酸酒精分化液分化10s，温水（50℃）蓝化30s，伊红染色30s，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。2结果切片制作好后，通过对6种不同固定液的对比，在显微镜下观察切片的组织清晰度、细胞收缩度、细胞核染色、细胞浆染色、核浆对比情况。结果见表1。
3讨论
冰冻切片的目的是在短时间内作出准确的病理诊断，协助临床医生确定病变的范围，决定手术的范围，因此，必须尽一切可能争取时间，争取尽快早出切片，并保证质量，所以快速制作一张高质量的冰冻切片非常重要。中华医学会规定完成冰冻HE染色切片制备时间通常为20~25min，在冰冻切片制片中，固定液的选择及固定的时间长短是冰冻切片HE染色的一个关键步骤。用于冰冻组织的固定液种类较多，大多数固定液需要固定几分钟至十几分钟时间，如果只固定数秒钟，则大多数切片固达不到诊断的要求。由于冰冻切片是由快速切片，快速固定，快速染色这三个方面相互影响所造成的，其中由于组织固定液因素影响组织细胞形态的改变，对病理医生的诊断影响最大，远比其他技术员操作因素引起的组织细胞形态改变更难把握。研究表明10%福尔马林虽然对组织的穿透力强，固定效果好，但需要固定的时间长，而且它不能抵消因冷冻所引起的细胞内液体的肿胀，所以甲醛固定的组织，核发生肿胀、模糊。从上述6种固定液的比较来看，如果只进行数秒钟的短时固定，10%的福尔马林和AF液固定的组织，组织清晰度差，细胞核和细胞浆着色较淡,核浆对比差。95%酒精固定效果尚可，但细胞收缩明显，核浆着色稍差。丙酮固定剂，对组织穿透性强，但细胞严重收缩，核浆对比差。甲醇固定的组织，细胞轻度收缩性,组织结构清晰，核着色好。但是乙醚酒精固定液的冰冻切片能较好的保存细胞的正常结构，组织清晰，背景干净，细胞无收缩，核浆染色鲜艳，核浆对比良好,是6种固定液中最好的。因此，乙醚酒精可以短时间内固定细胞，缩短制片时间，是一种较为理想的冰冻切片快速固定液。
2结果
切片制作好后，通过对6种不同固定液的对比,在显微镜下观察切片的组织清晰度、细胞收缩度、细胞核染色、细胞浆染色、核浆对比情况。结果见表1。
从观察结果显示，在6种固定液固定的冰冻切片中，经乙醚酒精固定后的冰冻切片，镜下组织细胞形态清晰，细胞无收缩，细胞核、细胞浆染色鲜艳，核浆对比良好。甲醇固定的冰冻切片质量次之。95%酒精固定的切片，除细胞明显收缩外，组织结构较清晰,细胞染色尚可。丙酮和AF液固定的冰冻切片，组织结构较清晰度稍差，细胞浆染色及核浆对比均差,而且丙酮固定的细胞收缩较为严重。10%福尔马林固定的冰冻切片组织清晰度、细胞核染色、细胞浆染色及核浆比均差，同时细胞肿胀，尤其是细胞核明显肿胀、模糊。
其中固定是冰冻切片制作中关键步骤之一，对切片的制片质量有着重要的影响。本文通过6种不同固定液短时固定对冰冻切片制片染色的比较，探讨不同固定液对冰冻切片制片效果的影响。
1资料与方法
1.1材料
选自病理科手术切除的新鲜组织标本40例，包括有乳腺、甲状腺、胃、子宫、卵巢等组织。
1.2固定液
6种固定液分别为：10%福尔马林；95%酒精；AF固定液；丙酮∶甲醇∶乙醚酒精（乙醚∶酒精1∶1）。
1. 3. 2固定及染色切片后立即放进上述6种不同的固定液（室温20 ~ 25°C）固定6s。将固定过的切片用蒸馏水洗30 s，放进改良的GILL苏木素液（预先放在65°恒温水域箱加热）2 min，自来水洗,1%盐酸酒精分化液分化10 s，温水（50°C）蓝化30 s，伊红染色30 s，梯度酒精脱水，二甲苯透明,中性树胶封片。
6种固定液短时间固定对冰冻切片制片效果影响
冰冻切片是一种在低温条件下使组织快速冷却到一定硬度，然后进行切片的方法。由于其制作过程较石蜡切片快捷、简便，而多应用于手术中的快速病理诊断。但在冰冻切片制过程中影响制片的质量因素较多，从而影响手术中的快速病理诊断。因此，快速制作一张高质量的冰冻切片对于确保病理诊断极其重要。
表16种不同固定液的对比
固定液
组织清晰度
细胞收缩度
细胞核染色
细胞浆染色
核浆对比
10%福尔马林
差
细胞肿胀
差
差
差
AF液
稍差
轻度收缩
稍差
淡
差
95%酒精
较清晰
明显收缩
稍差
稍淡
稍差
丙酮
稍差
严重收缩
稍差不均匀差 Nhomakorabea甲醇较清晰
轻度收缩
较好
较好
良好
乙醚酒精
清晰
正常
鲜艳
鲜艳
良好
1. 3. 1取材及切片取材大小为1. 5 cm × 1. 5 cm，厚2 ~ 3 mm的新鲜组织，用OCT包埋剂包埋后，放进徕卡恒温冷冻切片机（温度-18°C ~ 20°C），1 ~ 2 min后，每例标本连续切片各6张,厚度4 ~ 5 μ m。