Wnt5a基因在乳腺癌细胞株MCF-7中的表达及其与E-钙黏蛋白、波形蛋白基因的关系要点
Wnt5a基因对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响
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WNT5A信号通路调控骨肉瘤细胞迁移和侵袭的机制研究
分类号：R738.1 密级：公开研 究 生 学 位 论 文论文题目（中文） WNT5A 信号通路调控骨肉瘤细胞迁移和侵袭的机制研究论文题目（外文）The mechanism of WNT5A-mediated migration and invasion of osteosarcoma cells研究生姓名王兴文学科、专业临床医学·外科学（骨外）研究方向骨肿瘤学位级别硕士导师姓名、职称王栓科 教授 论文工作起止年月2015年10月至2018年3月论文提交日期2018年3月论文答辩日期2018年5月学位授予日期校址：甘肃省兰州市WNT5A信号通路调控骨肉瘤细胞迁移和侵袭的机制研究摘要目的：作为一种非经典WNT信号通路中具有代表性的配体，WNT5A在肿瘤发生和肿瘤抑制中发挥着重要作用。
已有研究表明，非受体酪氨酸激酶SRC 在WNT5A引起的骨肉瘤细胞侵袭中具有一定作用。
然而，WNT5A/SRC信号调控骨肉瘤细胞侵袭作用的详细分子机制仍不十分清楚。
本研究的目的是探索ERK1/2在WNT5A/SRC引起骨肉瘤细胞侵袭中的作用，以及SRC/ERK1/2信号通路的下游靶点。
方法：本研究使用人体骨肉瘤MG-63细胞系，体外实验包括划痕愈合试验、Transwell迁移和侵袭实验等。
另外，还包括小干扰RNA（siRNA）转染实验，蛋白质免疫印迹实验以及免疫荧光实验。
结果：我们发现WNT5A（100 ng/mL）能够明显刺激MG-63细胞的迁移和侵袭，而通过使用siRNA沉默SRC 或者通过使用PD98059抑制ERK1/2的磷酸化作用可以抑制迁移和侵袭作用，这就表明SRC和ERK1/2的活化作用对WNT5A引起的MG-63细胞的迁移和侵袭作用是必要的。
而且，WNT5A引起的ERK1/2磷酸化作用可以被SRC siRNA显著抑制。
另外，我们的研究进一步表明，WNT5A处理可以使MG-63细胞的MMP-14表达上调，且其上调能够被SRC siRNA或PD98059抑制。
Wnt5a基因对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响
Wnt5a基因对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响毕利泉;刘晓红;陈英剑;曹永成;毛蕊琪;耿明【摘要】Purpose To explore the biological effects of Wnt5a gene on hepatocellular carcinoma ( HCC ) cell line MHCC97L. Methods Using Lipofectamine 2000, MHCC97L cells were transfected with the pcDNA3. 1-Wnt5a and the empty vector controls, respectively. The integration of the plasmid DNA and the expression of Wnt5a were confirmed by RT-PCR and Western blot, respectively. The growth curves of different cells, plate clone formation test, flow cytometry ( FCM ) and scratch asssays were used to detect the biological behaviors of the transfected cells. Results Growth curve showed that after transfection the pcDNA3. I group cells grew faster than Wnt5a transfected group cells. The clone formation rates of pcDNA3.I group was significantly higher than that of the cells with Wnt5a expression vectors transfected ( P <0. 05 ). FCM analysis showed thatWnt5a expression vectors transfection blocked the progression of G,→S phase in cell cycle. The result of scratch assays showed that cells transfected with Wnt5a expression vectors displayed lower motility than vectors control transfected cells. Blocking this pathway using antibodies to Wnt5a, there was an increase in cell migration. Conclusion Wnt5a expression results in inhibition of cell proliferation and invasion, suggesting that Wnt5a plays a role of a tumor suppressor gene in HCC.%目的探讨Wnt5a基因对人肝癌细胞MHCC97L生物学行为的影响.方法脂质体法介导Wnt5a表达及阴性对照质粒转染MHCC97L细胞;RT-PCR及Western blot法检测质粒DNA片段插入和Wnt5a蛋白的表达;借助生长曲线、平板克隆形成、细胞周期和划痕试验对转染细胞的生物学活性进行检测.结果 pcDNA3.1组细胞生长速度明显快于Wnt5a表达组细胞;pcDNA3.1组细胞克隆形成率明显高于Wnt5a表达组(P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示Wnt5a表达能抑制细胞由G1期→S期的进程;划痕试验显示,Wnt5a表达组较阴性对照组细胞迁移速度明显减慢,当加入Wnt5a抗体阻遏信号通路时,细胞迁移速度加快.结论 Wnt5a可抑制人肝癌细胞MHCC97L的增殖和迁移能力,在肿瘤生长过程中发挥肿瘤抑制基因样作用.【期刊名称】《临床与实验病理学杂志》【年(卷),期】2012(028)008【总页数】5页(P857-861)【关键词】肝肿瘤;肝细胞癌;Wnt5a【作者】毕利泉;刘晓红;陈英剑;曹永成;毛蕊琪;耿明【作者单位】济南军区总医院,病理科、济南,250031;济南军区总医院,病理科、济南,250031;济南军区总医院,实验诊断科,济南,250031;济南军区总医院,病理科、济南,250031;济南军区总医院,病理科、济南,250031;济南军区总医院,病理科、济南,250031【正文语种】中文【中图分类】R735.7Wnt5a基因是Wnt家族中的重要成员之一，与多种肿瘤的发生、发展相关［1］。
Wnt5a在宫颈鳞状细胞癌中的表达及其临床意义
Wnt5a在宫颈鳞状细胞癌中的表达及其临床意义
Wnt5a是Wnt家族中的成员之一，参与调控细胞增殖、分化、迁移和细胞间信号传递。
它的广泛参与使得其在许多生理和病理过程中扮演着重要的角色。
近年来，研究人员对于Wnt5a
在宫颈鳞状细胞癌中的表达及其临床意义进行了深入研究。
研究结果表明Wnt5a在宫颈鳞状细胞癌中的表达水平与患者
的预后密切相关。
一项研究发现，Wnt5a的低表达水平可能是宫颈鳞状细胞癌预后不良的一个预测指标。
病理分析显示，表达Wnt5a的宫颈鳞状细胞癌组织中CD8+T淋巴细胞数量明显
增加，而这些细胞在肿瘤微环境中的存在能够预示着患者的预后良好。
另外，研究表明Wnt5a能够影响宫颈鳞状细胞癌的侵袭能力。
Wnt5a的高表达可抑制癌细胞的侵袭和迁移，而对Wnt5a表达水平进行干预则能够促进癌细胞侵袭和迁移。
此外，Wnt5a缺失还与宫颈鳞状细胞癌的放射治疗抵抗有关。
总的来说，Wnt5a在宫颈鳞状细胞癌中的表达及其临床意义还
需要更深入的研究。
但已有的研究结果表明，Wnt5a可能成为一种新的治疗模式和预后评估指标，以提高患者的生存率和生活质量。
Wnt5a和β-catenin在子宫内膜腺癌中的表达及意义
Wnt5a和β-catenin在子宫内膜腺癌中的表达及意义Wnt5a和β-catenin在子宫内膜腺癌中的表达及意义简介子宫内膜腺癌是女性常见的一种恶性肿瘤，对妇女的生活和健康造成了严重的威胁。
Wnt5a和β-catenin是两个重要的信号通路蛋白，在多种癌症中具有重要的调节作用。
本文将探讨Wnt5a和β-catenin在子宫内膜腺癌中的表达及其意义。
Wnt5a信号通路Wnt5a是Wnt家族中的一个成员，它在维持组织和器官正常发育过程中发挥重要作用。
研究表明，在肿瘤中Wnt5a通路的异常表达与细胞极性重建、细胞增殖和浸润能力的改变等密切相关。
Wnt5a通过与其受体Frizzled结合，进而激活蛋白激酶C （PKC）和非经典β-吲哚酮酸（β-catenin）信号通路，从而促进细胞的迁移和浸润。
因此，Wnt5a通路在子宫内膜腺癌中的表达情况可能与其浸润和转移能力密切相关。
β-catenin信号通路β-catenin是一种在维持细胞黏附和极性方面起重要作用的蛋白。
在正常细胞中，β-catenin存在于细胞膜的细胞间连接位置。
然而，在致癌过程中，β-catenin的异常表达和功能失调导致其进入胞浆并进一步进入细胞核，在转录因子Tcf/Lef的结合下激活其下游靶基因的转录。
研究表明，β-catenin信号通路在调控细胞生长、增殖、分化和凋亡过程中发挥关键作用。
因此，β-catenin在子宫内膜腺癌中的表达情况也可能与肿瘤的发展和转移有关。
Wnt5a和β-catenin在子宫内膜腺癌中的表达及意义多项研究发现，Wnt5a在子宫内膜腺癌中的表达显著上调。
具体来说，Wnt5a的高表达与肿瘤的侵袭性和转移能力增强密切相关。
实验发现，Wnt5a能够促进细胞的迁移和侵袭，与肿瘤的浸润能力正相关，这可能是通过激活PKC和β-吲哚酮酸通路，从而增加细胞的浸润能力。
此外，研究发现Wnt5a还能够激活β-catenin信号通路，进一步促进肿瘤细胞的生长和分化。
WNT5B 过表达对人乳腺癌 MCF－7细胞活力及凋亡的影响
WNT5B 过表达对人乳腺癌 MCF－7细胞活力及凋亡的影响周凡涵;厉红元【摘要】目的：检测 WNT5B 在人正常乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞株中的表达，及过表达 WNT5B 后对人乳腺癌 MCF－7细胞活力及凋亡的影响，探讨 WNT5B 在乳腺癌发生发展中的作用。
方法：采用 RT－PCR 法检测正常乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞中 WNT5B 的 mRNA 表达水平，将 WNT5B 的表达载体 pcDNA3．1／WNT5B 和空白对照载体 pcDNA3．1分别瞬时转染人乳腺癌 MCF－7细胞，通过 real－time PCR 和 Western blotting 法分别在 mRNA 和蛋白水平验证WNT5B 的表达效率；并通过 CCK－8的方法检测 WNT5B 过表达对人乳腺癌MCF－7细胞活力的影响，通过流式细胞术分别检测过表达 WNT5B 对 MCF－7细胞周期分布及凋亡比例的影响。
结果：与正常乳腺上皮细胞相比， WNT5B 在乳腺癌细胞中低表达；在乳腺癌细胞 MCF－7中转染 WNT5B 表达质粒后，WNT5B 表达上调，差异有统计学显著性（P ＜0．05）；与对照组相比，过表达WNT5B 后，MCF7细胞的活力明显降低，处于 S 期细胞的量明显增加， G1和G2／M 期细胞明显减少，且细胞凋亡比例明显增加，差异均有统计学显著性（P ＜0．05）。
结论：WNT5B 在乳腺癌细胞中低表达，过表达 WNT5B 可使人乳腺癌细胞 MCF－7阻滞在 S 期，抑制细胞增殖，促进细胞凋亡。
%AIM: To detect the expression of WNT5B in normal breast epithelial cells and different breast cancer cell lines, and to investigate the effects of WNT5B over-expression on the viability and apoptosis of human breast cell line MCF-7.METHODS: The mRNA expression of WNT5B was detected by RT-PCR in different breast cancer cells. MCF-7 cells were transfected with plasmid pcDNA3.1 /WNT5B or pcDNA3.1, and the expression of WNT5B at mRNAand protein levels was examined in the 2 groups by real-time PCR and Western blotting, respectively.Subsequently, the chan-ges of cell viability and cell apoptosis were analyzed by CCK-8 assay and flow cytometry, respectively.RESULTS: The ex-pression of WNT5B in the breast cancer cell lines was lower than that in MCF10A cells.The WNT5B expression in the MCF-7 cells in experimental group was significantly higher than that in vector group (P <0.05).However, the cell viabili-ty in experimental group decreased significantly as compared with vector group (P <0.05).The number of the cells in S-phase obviously increased, while the percentage of the cells in G1-phase and G2 /M-phase decreased compared with vector group.The number of apoptotic cells in WNT5B group was significantly higher than that in vector group.CONCLUSION:The expression of WNT5B is decreased in breast cancer cells.WNT5B over-expression significantly inhibits the cell growth and promotes the cell apoptosis in breast cancer MCF7 cells.【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2016(032)009【总页数】5页(P1594-1598)【关键词】WNT5B;MCF-7细胞;细胞凋亡【作者】周凡涵;厉红元【作者单位】重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科，重庆 400016;重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科，重庆 400016【正文语种】中文【中图分类】R730.23乳腺癌是严重威胁妇女身心健康的恶性肿瘤之一，其发病率在国内有逐年上升趋势，虽然近年来对乳腺癌发病机理的研究已越来越广泛，并且发现了多种因子及信号通路参与了乳腺癌的发生发展，但其在分子水平的发病机制尚需继续探讨[1-2]。
E钙粘蛋白调控乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的研究
E钙粘蛋白调控乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的研究摘要】目的：通过抑制E钙粘蛋白（E-cadherin）的表达，研究其是否调控乳腺癌细胞凋亡。
方法：向乳腺癌细胞株MCF-7转染E-cadherin siRNA并应用实时聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction，RT-PCR）及Western Blot验证siRNA的效果。
CCK-8实验研究E-cadherin siRNA对MCF-7药物敏感性的影响。
Annexin-V实验研究E-cadherin siRNA对MCF-7凋亡的影响。
Western Blot研究E-cadherin siRNA对凋亡相关蛋白表达的影响。
结果：RT-PCR证明，转染E-cadherin siRNA的实验组MCF-7细胞中的E-cadherin mRNA表达量较转染negative control组的阴性对照组明显减低。
Western Blot证明，实验组MCF-7中的E-cadherin蛋白表达量较阴性对照组减低。
CCK-8实验发现实验组的MCF-7对化疗药物的敏感性低于阴性对照组。
Annexin-V实验提示实验组MCF-7凋亡率较阴性对照组降低。
转染E-cadherin siRNA后MCF-7中死亡受体4（death recptor 4，DR4）蛋白的表达量低于阴性对照组。
结论：在MCF-7中，E-cadherin siRNA能通过抑制DR4的表达，进而抑制癌细胞的凋亡。
【关键词】乳腺癌；E钙粘蛋白；凋亡；远处转移【中图分类号】R737.9 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）32-0127-02对于晚期乳腺癌患者，耐药和远处转移严重影响化疗的疗效[1]。
肿瘤远处转移过程中的转移灶及发生转移的细胞常出现抗凋亡及耐药。
同时，肿瘤细胞会发生细胞表面黏附蛋白的改变。
这些黏附蛋白的缺失是否参与晚期乳腺癌的耐药及抗凋亡。
Wnt-5a基因在神经母细胞瘤表达的研究的开题报告
Wnt-5a基因在神经母细胞瘤表达的研究的开题报告研究题目：Wnt-5a基因在神经母细胞瘤表达的研究研究背景：神经母细胞瘤是一种神经外胚层肿瘤，是儿童最常见的恶性肿瘤之一。
目前治疗神经母细胞瘤的主要方法是手术切除、放疗和化疗，然而这些方法的效果并不理想。
因此，对神经母细胞瘤的分子机制研究具有重要意义。
最近的研究发现，Wnt-5a基因在神经系统肿瘤的发生和发展中扮演着重要角色。
然而对于Wnt-5a基因在神经母细胞瘤中的表达及其作用机制的研究还比较有限。
研究目的：本研究旨在探究Wnt-5a基因在神经母细胞瘤中的表达及其与神经母细胞瘤的发生发展之间的关系，为神经母细胞瘤的治疗提供新思路和基础数据。
研究内容：本研究将采集神经母细胞瘤组织和正常组织，通过实时荧光定量PCR 和免疫组织化学的方法，检测Wnt-5a基因在神经母细胞瘤中的表达水平，并分析其与神经母细胞瘤患者的临床特征之间的关系。
另外，本研究还将通过Western blotting和免疫荧光染色的方法，进一步研究Wnt-5a基因在神经母细胞瘤中的功能与机制。
研究意义：Wnt-5a基因在神经母细胞瘤中的表达及其作用机制的研究对于神经母细胞瘤的治疗和预防具有重要意义。
本研究结果可为神经母细胞瘤的治疗提供新的靶点和药物研发的方向，同时也可完善和丰富神经母细胞瘤的分子机制，为神经母细胞瘤的早期诊断提供依据。
预期进展：通过本研究，预计可以揭示Wnt-5a基因在神经母细胞瘤中的表达及其作用机制，提出其作为神经母细胞瘤治疗新靶点的可能性。
同时，本研究还可引导未来的进一步研究，进一步探讨神经母细胞瘤的分子机制，提高神经母细胞瘤的治疗效果。
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【关键词】 乳腺肿瘤； Wnt5a； E-钙黏蛋白； 波形蛋白； 上皮间质转化 基金项目：湖南省自然科学基金（11jj3122）；湖南省中医药管理局项目（2013115）；长沙市科技计划 （K1406035-11）
Expression of Wnt5a gene in breast cancer cell line MCF-7 and its relationship with E-cadherin or vimentin Qiu Xia, Yang Guorong, Liu Li, Huang Yong, Zeng Ruolan, Yao Xiaoyi, Shi Jing, Wu Zhifo, Wang Ling, Liu Gui, Cai Xinjia, Huang Junhui Department of Geriatrics, Changsha NO.2 Social Welfare House, Changsha 410007, China (Qiu X); Department of Oncology, Xiangya Hospital of Central South University, Changsha 410008, China (Yang GR, Liu L, Huang Y, Zeng RL, Yao XY, Shi J, Wu ZF, Wang L, Huang JH); Department of Pathology, Xiangya Stomatological Hospital of Central South University, Changsha 410000, China (Liu G, Cai XJ) Corresponding author: Huang Junhui, Email: 808003@
1.3 反转录 PCR 法检测各基因表达
采用 TRIzol 试剂一步法分别提取 Wnt5a、E-钙黏 蛋白和波形蛋白的总 RNA［6］，各取 2 μg 总 RNA 行反 转录， 获得 Wnt5a、E-钙黏蛋白和波形蛋白的 cDNA， 以 GAPDH 为内参照。 反应条件：94 ℃ 30 s，58 ℃ 1 min，72 ℃ 90 s，30 个循环。 对扩增产物进行 1 %琼 脂糖凝胶电泳，凝胶成像后，利用凝胶吸光度分析 软件进行分析，测量条带的吸光度值，计算目标条 带与各自内参条带的吸光度比值的百分比，即相对 表达水平。 实验重复 3 次，计算各条带表达水平的 平均值。
452
1.2 细胞培养与分组
常规方法培养细胞并传代，MCF-7 和 MCF-10A 细胞分别放入装有 10 %灭活小牛血清培养液的培养 瓶中，于恒温 37 ℃、5 % CO2 培养箱中培养，每 2～3 d 传代 1 次， 取对数生长期 MCF-7 和 MCF-10A 细胞， 用 0.25 %胰蛋白酶消化成单细胞悬液， 以 MCF-7 细胞为试验组，MCF-10 A 细胞为对照组。 对照组和 试验组各选取 9 份样品，分别用于检测 Wnt5a、E-钙 黏蛋白和波形蛋白的表达， 每种标志物各重复检测 3 次。
Байду номын сангаас
表 1 各基因聚合酶链反应引物序列
基因
引物序列
Wnt5a
上游：5'-GGACCTGACCTGCCGTCTAG-3'
下游：5'-TAGCCCAGGATGCCCTTGAG-3'
E-钙黏蛋白 上游：5'-ACCATTAACAGGAACACAGG-3'
下游：5'-CAGTCACTTTCAGTGTGGTG-3'
DOI：10.3760/cma.j.issn.1006-9801.2016.10.001
【摘要】 目的 探讨 Wnt5a 基因在人乳腺癌细胞株 MCF-7 中的表达及其与 E-钙黏蛋白、 波形蛋白 基因表达的相关性。 方法 采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测 Wnt5a、E-钙黏蛋白 mRNA 和波形蛋 白 mRNA 在 MCF-7 细胞和人正常乳腺上皮细胞株 MCF-10A 中的表达， 分析 Wnt5a 表达与 E-钙黏蛋白 mRNA、波形蛋白 mRNA 的关系。 结果 MCF-7 细胞中，Wnt5a、E-钙黏蛋白 mRNA 水平均低于 MCF-10A 细胞［（16.93±2.97） %比（27.47±2.76） %，（12.97±1.35） %比（20.43±2.60） %，均 P＜0.05］，波形蛋白 mRNA 水平高于 MCF-10A 细胞［（16.53±0.85） %比（6.33±2.08） %，P＜0.05］。 在 MCF-7 细胞中，Wnt5a 与 E-钙黏蛋白 mRNA 的表达呈正相关（r＝0.997，P＜0.05），与波形蛋白 mRNA 的表达呈负相关（r＝-0.998， P＜0.05）。 结论 Wnt5a 在人乳腺癌细胞株 MCF-7 中的表达低于人正常乳腺上皮细胞株 MCF-10A，其在 乳腺癌的发生与发展中可能发挥抑癌基因的作用。 Wnt5a 在乳腺癌细胞中的表达与 E-钙黏蛋白 mRNA 的表达呈正相关，与波形蛋白 mRNA 的表达呈负相关。 Wnt5a 可能通过影响乳腺癌上皮细胞的转化导致 乳腺癌的侵袭和转移。
肿瘤研究与临床 2016 年 10 月第 28 卷第 10 期 Cancer Research and Clinic, October 2016, Vol. 28, No. 10
Wnt5a 基因在乳腺癌细胞株 MCF-7 中的表达 及其与 E-钙黏蛋白、波形蛋白基因的关系
邱霞 杨国荣 刘利 黄勇 曾若兰 姚晓艺 石静 吴至佛 汪灵 刘桂 蔡鑫嘉 黄俊辉 410007 长沙市第二社会福利院老年科（邱霞）；410008 长沙，中南大学湘雅医院肿瘤科 （杨国荣、刘利、黄勇、曾若兰、姚晓艺、石静、吴至佛、汪灵、黄俊辉）；410000 长沙，中南大 学湘雅口腔医院病理科（刘桂、蔡鑫嘉） 通信作者：黄俊辉，Email：808003@
万方数据
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·论著·
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肿瘤研究与临床 2016 年 10 月第 28 卷第 10 期 Cancer Research and Clinic, October 2016, Vol. 28, No. 10
cause invasion and metastasis of breast cancer cell through the breast epithelial mesenchymal transitions. 【Key words】 Breast neoplasms; Wnt5a; E-cadherin; Vimentin; Epithelial-mesenchymal transition Fund program: Natural Science Foundation of Hunan Province (11jj3122); Project of Hunan Provincial
Administration of Traditional Chinese Medicine (2013115); Science and Technology Poject of Changsha (K1406035-11)