方法开发报告： 2012-APP-RLC-018 2D-UHPLC 分析苦荞麦

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苦荞中D-手性肌醇的纯化及其抗氧化活性研究

ＣｅｎｔｅｒｆｏｒＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＦｏｏｄ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ４０００６７，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅＤ —ｃｈｉｒｏ— ｉｎｏｓｉｔｏｌｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｕｌｔｒａｓｏｎｉｃｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｆｒｏｍｔａｒｔａｒｙｂｕｃｋｗｈｅａｔ．ＴｈｅｔｏｔａｌＤ — ｃｈｉｒｏ— ｉｎｏｓｉｔｏｌｃｏｎｔｅｎｔｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙｓｏｄｉｕｍｐｅｒｉｏｄａｔｅｏｘｉｄａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ．ＴｈｅＤ—ｃｈｉｒｏ—ｉｎｏｓｉｔｏｌｗａｓｐｕｒｉｉｅｆｄｂｙａｃｔｉｖａｔｅｄｃａｒｂｏｎｃｏｌｕｍｎ．Ｔｈｅ
较好的还原性，且ＤＣＩ纯化产物的抗氧化活性要明显强于ＤＣＩ粗提物。
关键词：苦荞，Ｄ一手性肌醇，活性炭，高效液相色谱法，抗氧化
ＳｔｕｄｙｏｎｐｕｒｉｉｃｆａｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＤ— — ｃｈｉｒｏ— — ｉｎｏｓｉｔｏｌｆｒｏｍｔａｒｔａｒｙｂｕｃｋｗｈｅａｔ
ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆＤ—ｃｈｉｒｏ—ｉｎｏｓｉｔｏｌｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ．

荞麦和商品苦荞茶中总黄酮的含量测定

荞麦和商品苦荞茶中总黄酮的含量测定一、背景介绍荞麦是一种传统的粮食作物，也是一种天然的保健食品。

荞麦中含有丰富的总黄酮，具有抗氧化、抗炎、降血糖、降血脂等多种保健功效。

商品苦荞茶是以苦荞为原料加工而成的茶类产品，同样富含总黄酮。

因此，测定荞麦和商品苦荞茶中总黄酮的含量对于了解其保健功效具有重要意义。

二、测定方法测定荞麦和商品苦荞茶中总黄酮的含量通常采用高效液相色谱法（HPLC）。

1. 样品制备将干燥的荞麦粉或商品苦荞茶粉称取5g左右，加入50ml乙腈-水（80:20）混合溶液中，在常温下超声提取30min，离心10min后收集上清液备用。

2. 色谱条件色谱柱：Kromasil C18（250mm×4.6mm）流动相：甲醇-乙腈-0.1%磷酸水溶液（15:30:55）流速：1.0ml/min检测波长：360nm3. 标准曲线绘制取总黄酮标准品，分别加入不同浓度的乙腈-水混合溶液中制成一系列浓度不同的标准溶液。

以每个浓度的标准溶液为样品进行HPLC测定，并绘制出标准曲线。

4. 样品检测将样品提取液过滤，取适量注入色谱柱中进行HPLC检测。

根据标准曲线计算出样品中总黄酮的含量。

三、结果分析经过HPLC检测，荞麦和商品苦荞茶中总黄酮的含量均较高。

其中，荞麦中总黄酮的含量一般在100-150mg/100g左右，而商品苦荞茶中总黄酮的含量则更高，一般在300-500mg/100g左右。

四、结论荞麦和商品苦荞茶均富含总黄酮，具有多种保健功效。

通过HPLC法可以快速、准确地测定其总黄酮含量，为进一步研究其保健功效提供了科学依据。

HPLC法测定苦荞茶中芦丁槲皮素的含量5页word文档

HPLC法测定苦荞茶中芦丁槲皮素的含量苦荞是我国独有的药食两用粮食作物，主要分布于我国内蒙古、陕西、甘肃、宁夏、四川、云南等高寒地区[1]，近年来苦荞茶作为人们最热衷的保健饮品之一，在降低血压胆固醇，防治心脑血管疾病及高脂血症方面疗效显著[2]。

苦荞茶中富含黄酮类物质，其主要成分为芦丁、槲皮素等[3,4]，能够降低毛细血管脆性，改善微循环功能，具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血脂、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏等作用[5]，在临床上主要用于糖尿病、高血压的辅助治疗[6,7]。

本实验通过优化提取工艺，进行了方法学考察，建立了苦荞茶的HPLC含量测定方法，并对不同苦荞茶中两种黄酮类组分进行了比较，为更好地控制苦荞茶的质量提供了一种简便、可行、重复性好的质量控制方法。

1、仪器与试药LC210AT型高效液相色谱仪（岛津公司），二极管阵列检测器，CLASS2vp510色谱数据处理工作站，CDT26A色谱柱温箱；SZ293型自动双重纯水蒸馏器。

芦丁、槲皮素对照品，由中国药品生物制品检定所提供。

4种苦荞茶样品购于绵阳专卖店，（生产企业及批号见表2），甲醇为色谱纯，磷酸等其他试剂为分析纯，水为高纯水。

2、方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：SHIMDZU VP反相色谱柱；流动相：甲醇-0.08%磷酸溶液（6∶4）；检测波长：360 nm；流速：0.95 mL?min-1；柱温：35℃。

进样量：5 µL。

在选定条件下，芦丁、槲皮素色谱峰与其他杂质峰达到基线分离，分离度（R）大于1.5，以芦丁、槲皮素计理论塔板数均不低于3500。

2.2 对照品溶液制备精密称量芦丁对照品8.0 mg、槲皮素对照品4.7 mg，分别置25 mL容量瓶，甲醇定容至刻度，分别精密吸取1 mL稀释10倍，制成每1 mL中含有32 µg芦丁18.8 µg槲皮素的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备取苦荞茶样品适量，研细，精密称定约0.5 g，置于25 mL锥形瓶中，加入甲醇15 mL，避光超声处理40 min，上清液转入25 mL容量瓶。

不同来源的苦荞茶中4种黄酮的含量测定

ｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｗａｓｍｅｔｈａｎｏｌ一０．１％ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃａｃｉｄａｑｕｅｏｕｓｗｉｔｈｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎ．Ｔｈｅｌｏｆｗｒａｔｅｗａｓ１．０ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ３５５ａｍａｎｄｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓａｔ３０ ℃ ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓ
第３８卷第１期
不同来源的苦荞茶中４种黄酮的含量测定
黄萍，何兵，刘艳，田吉・
（１．四川省食品药品检验检测院，四川成都６１１７３１；２．西南医科大学药物研究中心，四川泸州６４６０００）
摘要：采用ＨＰＬＣ法同时测定不同来源的苦荞茶中芦丁、山柰酚一３ — ０一芸香糖苷、槲皮素和山柰酚四种成分含量，
ｏｆｕｔｒｉｎａｎｄｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ一３ — ０一ｕｔｒｉｎｏｓｉｄｅｉｎｂｕｃｋｗｈｅａｔｔｅａｍａｄｅｏｆｆｒｕｉｔｗａｓｍｕｃｈｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｍａｄｅｏｆｃｏ卜ｔｅｘａｎｄｔｈｅｗｈｏｌｅｐｌａｎｔ，ｂｕｔｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｑｕｅｒｃｅｔｉｎａｎｄｋａｅｍｐｆｅｒｏｌｉｎｔｈｅｆｏｒｍｅｒｗａｓｍｕｃｈｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｔｈｅｌａｔｔｅｒ．Ｉｔｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔｂｕｃｋｗｈｅａｔｔｅａｍａｄｅｏｆｆｒｕｉｔｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｍｏｒｅｌａｆｖｏｎｏｉｄｇｌｙｃｏｓｉｄｅｉｓｍｏｒｅｓｕｉｔａｂｌｅｏｒｆ

HPLC法测定苦荞叶中芦丁的含量

３０ｍ，３ｎ柱温：室温２ ℃。线性范围５Ｏ０～５０ｇｍ，Ｅ．９９０ｔ／ＬＲ＝０９９。在上述条件下对苦荞叶中所含芦￣丁进行了含量测定，分析结果表明，此法简单快速、高效灵敏、重现性好。关键词：高效液相色谱；荞叶；苦芦丁中图分类号：６７７０５．２文献标识码：文章编号：０７— ５１２０）３７— ２Ａ１０７６（０７０ —５０
，
（．ｒｉａｄＯｌｕｌｙＩｓｅｔｎＳａｏ，Ｃｏｇｉ４０９；１ＧａｎｉＱａｔｎｐｃｏｔｉｎｉｉｔｎｈｎｑｇ００４ｎ
２．ｐｒｍｅｔｏｏｎｉｅｒｎＤｅａｔｎｆＢｉｅｇｎｅｉｇ，ＹｉｉｌｅｅＳｃｕｂｎ６４０ｂｎＣｏｌｇ，ｉｈａＹｉｉ４０７；ｎ
采用ＨＰ高效液相色谱系统，括Ｈ１０包Ｐ１０可变
学证实
】麦有较高的药用价值，荞主要活性成分
波长紫外检测器（１１Ａ）Ｐ１０单元泵Ｇ３４、Ｈ１０
ｔｅｌｎａａｇｓａｎ０～５Ｏｔ／ｍＬ．Ｒ２＝０９９Ｔｅｐｒｐｓｄｍｅｈｄｓｏｉｈｒａｃｒｃｎｈｉｅｒｒｅｉｍｕｄ５ｎｏ￣ｇ９９．ｈｏｏｅｔｏｈｗｓａｈｓｅｃｕａｙａｄ
３．ｏｌｇｆＦｏｃｅｃ，ＳｕｈｅｔＵｉｅｓｙｈｎｑｎ４０）ＣｌｅｏｏｄＳｉｎｅｏｔｗｓｎｖｒｉ，Ｃｏｇｉｇ０７６ｅｔ１

苦荞麦黄酮含量的测定

苦荞麦黄酮含量的测定概述苦荞麦是一种优质的谷物，其种子中含有丰富的黄酮类化合物。

黄酮类化合物具有多种生物活性，如抗氧化、抗炎、抗肿瘤等作用。

因此，测定苦荞麦黄酮含量对研究与应用苦荞麦具有重要意义。

本文将介绍苦荞麦黄酮含量的测定方法及其应用。

测定方法UV-Vis分光光度法1.准备样品：将苦荞麦样品研磨成粉末，称取适量样品备用。

2.提取黄酮：将样品加入乙醇中，超声处理30分钟，然后过滤得到提取液。

3.分光光度法测定：将提取液取一定体积，根据黄酮的最大吸收波长（通常为350nm），使用分光光度计测定吸光度。

4.绘制标准曲线：取不同浓度的黄酮标准溶液，进行相同测定步骤，得到吸光度与浓度的关系曲线。

5.计算黄酮含量：根据标准曲线，计算样品中黄酮的含量。

高效液相色谱法（HPLC）1.准备样品：将苦荞麦样品研磨成粉末，称取适量样品备用。

2.提取黄酮：将样品加入乙醇中，超声处理30分钟，然后过滤得到提取液。

3.色谱条件设置：选择适当的色谱柱和移动相，设置流速和梯度条件。

4.进样和检测：将提取液注入色谱仪中，通过检测器检测黄酮成分。

5.计算黄酮含量：根据标准品的峰面积和样品的峰面积，计算黄酮的含量。

比色法1.准备样品：将苦荞麦样品研磨成粉末，称取适量样品备用。

2.提取黄酮：将样品加入乙醇中，超声处理30分钟，然后过滤得到提取液。

3.获取吸收光谱：将提取液置于分光光度计中，获取100-500nm范围内的吸收谱。

4.分析计算：根据吸收峰的位置和强度，计算黄酮的含量。

应用苦荞麦黄酮具有多种生物活性，因此其含量的测定在食品、保健品、药品等领域具有广泛的应用。

保健品开发苦荞麦黄酮作为保健品的主要活性成分，测定其含量可以指导保健品的开发和生产，保证产品质量。

食品添加剂苦荞麦黄酮可以增强食品的营养价值和功能，测定其含量可以指导食品添加剂的添加量和使用效果。

药物研究苦荞麦黄酮具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种作用，测定其含量可以为药物研究提供依据，寻找新的药物开发方向。

苦荞中总黄酮的含量测定

苦荞中总黄酮的含量测定苦荞又称鞑靼荞麦（Tartary buckwheat），为双子叶蓼科荞麦属植物，在我国西南、北方种植广泛，资源丰富。

苦荞含有黄酮类化合物、多种氨基酸、多糖、不饱和脂肪酸等许多化学成分。

药理和化学成分的研究表明，苦荞具有较明显的降血糖、降血脂、增强免疫功能等作用，其有效成分主要是芦丁、槲皮素等黄酮类化合物。

民间亦以食用苦荞防治糖尿病、高血压、高血脂等病。

目前，荞麦黄酮的测定方法有分光光度法、高效液相色谱法、毛细管电泳法。

本实验采用芦丁法直接测定黄酮含量，并与另外两种显色后的分光光度法进行比较，期望为苦荞中总黄酮含量的测定提供参考。

1、材料、试剂与仪器1.1 材料与试剂材料：苦荞样品分别取自会泽火红、云南大山包、罗平牛街。

芦丁对照品（批号：09072231，上海同田生物技术XX 公司），试剂均为分析纯。

1.2仪器紫外可见分光光度计（北京普析，TU1810）,超声提取器（上海仪器制造厂，SK3200H）,电子天平（德国赛多利斯CP-224S）。

2、方法与结果2.1 对照品和样品溶液制备2.1.1对照品溶液的配制精密称取芦丁对照品9.5mg置于25mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得芦丁对照品溶液浓度为0.38mg/mL。

2.1.2 供试品溶液的配制分别取苦荞粉末(过60 目筛)约100mg 精密称定，置于25mL容量瓶中，加入60%乙醇2mL在常温下超声(59KHz)提取20min，用乙醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.2 总黄酮含量测定2.2.1 标准曲线的制定2.2.1 芦丁法精密移取2.1.1 项下的对照品溶液0.5 、0.8 、1.0、1.2、1.5ml于25mL容量瓶中，用60%乙醇溶液稀释并定容至刻度后，在360mn波长处进行测定，绘制标准曲线，得到回归方程为：Y= 0.028X + 0.0172(r = 0.9998)。

2.2.1.2 氯化铝法精密移取2.1.1 项下的对照品溶液0.6 、0.7、0.8、0.9、1.0mL于25mL容量瓶中，加入60%乙醇溶液5mL 5%氯化铝溶液3mL, 100mg/mL乙酸钠溶液5mL,再用60% 乙醇溶液定容至刻度后，放置40min,在420mn波长处进行比色测定，绘制标准曲线，得到回归方程为：Y= 0.0365X + 0.0278(r=0.9994)。

苦荞麦中总黄酮和芦丁的含量测定方法的研究

４．０
保留值
７０．０５８８９０．０５４３８０．０５７６２０．０５９２３０．０５９３６０．０５７８２
３．６
１２．４１２．４１２．３９２．４５２．４２２．４２０．９
２１．７４１．７６１．７５１．７９１．７５１．７６１．１
相对保留时间
３
４
５
１０．７３１．９１
１０．７２１．９１
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各１０ｌ注入液相色谱仪测定计算供试品中芦丁含量
线性关系考察准确称取芦丁对照品溶于色谱纯甲醇配制成含量１．２６ｍｇ／ｍｌ的芦丁对照品溶液分别精密吸取２４６１５和２０ｌ进样按上述条件测定得回归线性方程Ｙ１．５８１０６Ｘ＋９．７４１０５ｒ＝０．９９９８Ｙ为响应值Ｘ芦丁量（ｇ）当芦丁含量在２．５２２５．２ｇ范围内呈线性关系
５．１
相对峰面积
３
４
５
１０．７６１４０．０９０８０
１０．７７５３０．０９１２０
１０．７８４２０．０９００２
１０．７７３６０．０９３２８
１０．７９３００．０９１２２
１０．７７７５０．０９１３０
０１．５
６．３
６０．０９０７１０．０９１２３０．０９０３４０．０９０９２０．０９３５６０．０９１３５
分析检验
食品科学
2003, Vol. 24, No. 7 113
表２沙枣花挥发油指纹图谱相对值
批号１
１１７８．７２１７３．７３１７５．７４１７８．４５１７９．２平均值１７７．１ＲＳＤ（％）１．３

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方法开发报告：2012-APP-RLC-0182D-UHPLC分析苦荞麦中12个主要化学成分（LC-UV）(1为Quercetin-3-O-β-D-galactoside，2为Quercetin-3-O-β-D-glucoside, 3为Kaempferol-3-O-β-D-galactoside，4为N-trans-feruloyltyramine, 5为Kaempferol-3-O-β-D-glucoside, 6为Quercetin-3-O-α-L-rhamnoside, 7为Quercetin-3-O-[β-D-xyloxyl-(1→2)-α-L-rhamnoside]，8为1, 3, 6-tri-p-coumaroyl-6′-feruloyl sucrose, 9为3,6-di-p-coumaroyl-1, 6-di-feruloyl sucrose, 10为1, 6,6′-tri-feruloyl-3-p-coumaroyl sucrose，11为1, 3, 6,126′-tetra-feruloyl sucrose，12为rutin)苦荞麦又名乌麦、花麦、三角麦，是蓼科取苦荞麦药材粉末0.1000 g, 精密称定，置具塞圆底玻璃试管中，精密加入70% 乙醇2 mL ，密塞，称定重量。

室温浸泡30 min 后，超声处理（功率100W ，频率40 kHZ ）30min ，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，4500 rpm 离心10 min 。

用0.22μm 微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。

3. 标准曲线和线性范围取系列浓度的标准曲线样品，从低浓度到高浓度连续进样，以被测物浓度（X ）为横坐标，被测物的峰面积之比（Y ）为纵坐标，按最小二乘法进行标准曲线的I C -10 0m m拟合，获得标准曲线线性回归方程和线性相关系数r2值。

结果见表1。

结果表明，12个化学成分在各自考察的浓度范围内，线性关系良好，线性相关系数r2均大于0.999。

表1 Calibration curves, LOD and LOQ data of investigated compounds by 2D-UHPLCAnalytes Calibration curves a r2Linearrange(μg/m l)LOD(μg/ml)LOQ(μg/ml)1. Quercetin-3-O-rutinoside y =0.1258x -0.1089 0.99971.02 -162.800.20 0.302. Quercetin-3-O-β-D-galactoside y =0.1582x -0.0800 0.99960.50 -80.800.15 0.203. Quercetin-3-O-β-D-glucoside y =0.1319x -0.1375 0.99951.03 -165.200.21 0.414. Kaempferol-3-O-β-D-galactoside y =0.1956x -0.0660 0.99980.52 -82.400.10 0.215. N-trans-feruloyltyramine y =0.5018x -0.2307 0.99960.52 -83.600.05 0.166. Kaempferol-3-O-β-D-glucoside y =0.1932x -0.1552 0.99961.01 -162.00.10 0.307. Quercetin-3-O-α-L-rhamnoside y =0.1700x -0.1644 0.99961.0 -160.00.20 0.408. Quercetin-3-O-[β-D-xyloxyl-(1→2)-α-L- rhamnoside]y =0.1288x -0.14290.99941.01 -161.200.20 0.409. 1, 3, 6-tri-p-coumaroyl-6′-feruloyl sucrosey =0.5425x -0.15720.99950.26 -42.200.05 0.1010. 3, 6-di-p-coumaroyl-1, 6-di-feruloyl sucrosey =0.5627x -0.16270.99950.25 -40.00.05 0.1011. 1, 6, 6′-tri-feruloyl-3-p-coumaroyl sucrosey =0.5642x -0.33070.99950.49 -78.800.05 0.1512. 1, 3, 6, 6′-tetra-feruloyl sucrose y =0.4061x -0.1296 0.99960.24 -39.200.07 0.12a y is the logarithmic value of peak area and x is the logarithmic value of the reference compound’s concentration (μg/ml).4.精密度和质控样品溶液稳定性通过测定日内及日间质控样品浓度变化来验证方法的精密度，测定低、中、高三种不同浓度的质控样品，将峰面积带入相应的标准曲线计算浓度，日内精密度实验中质控样品连续测定6次，日间精密度实验中质控样品每天测定1次，连续测定6天，测定浓度的RSD作为衡量精密度的指标。

结果表明（Table 2）所建立的分析方法日内精密度RSD小于3.3%，日间精密度RSD小于3.9%。

82.60 2.3 2.0 2.4 2.01.032.83.14.1 3.14. Kaempferol-3-O-β-D-galactoside5.15 3.3 3.0 2.9 3.041.20 2.5 3.8 2.8 3.81.04 0.3 0.9 0.6 0.95. N-trans-feruloyltyramine 5.22 2.8 3.7 2.8 3.741.80 2.6 3.9 2.8 3.92.02 1.9 1.3 1.3 1.36. Kaempferol-3-O-β-D-glucoside10.12 2.6 3.1 2.9 3.181.0 2.5 3.6 2.7 3.62.0 1.4 1.9 1.8 1.97. Quercetin-3-O-α-L-rhamnoside10.0 2.3 2.0 2.1 2.080.0 2.8 2.8 2.9 2.82.02 0.9 2.1 2.1 2.1 8. Quercetin-3-O-[β-D-xyloxyl-(1→10.083.0 0.9 2.5 0.9 2)-α-L- rhamnoside] 80.60 2.6 2.3 2.6 2.30.53 2.0 2.1 1.7 2.1 9. 1, 3, 6-tri-p-coumaroyl-6′-feruloyl 2.64 2.4 3.3 2.3 3.3 sucrose 21.10 2.5 3.0 2.6 3.00.50 2.3 2.9 2.3 2.9 10. 3, 6-di-p-coumaroyl-1, 6-di- 2.50 2.4 3.3 2.4 3.3 feruloyl sucrose 20.0 2.6 2.5 2.5 2.50.98 1.1 1.4 1.0 1.4 11. 1, 6, 6′-tri-feruloyl-3-p- 4.92 2.5 3.0 2.6 3.0Stability StabilityRSD (%) (n=6) RSD (%)(n=6)RSD (%) (n=6)1. Quercetin-3-O-β-D-galactoside 1.0 1.12.32. Quercetin-3-O-β-D-glucoside 1.8 2.3 1.03. Kaempferol-3-O-β-D-galactoside 2.5 2.7 3.24. N-trans-feruloyltyramine 1.2 1.9 0.95. Kaempferol-3-O-β-D-glucoside 1.8 2.7 0.86. Quercetin-3-O-α-L-rhamnoside 3.2 4.4 3.37.Quercetin-3-O-[β-D-xyloxyl-(1→2)-α-L-rhamnoside]1.1 3.02.0 8. 1, 3, 6-tri-p-coumaroyl-6′-feruloyl sucrose 1.3 2.0 1.49. 3, 6-di-p-coumaroyl-1, 6-di-feruloyl sucrose 1.1 1.8 0.810. 1, 6, 6′-tri-feruloyl-3-p-coumaroyl sucrose 1.4 1.7 0.911. 1, 3, 6, 6′-tetra-feruloyl sucrose 1.8 2.0 1.16.回收率称取苦荞麦茎粉末9份，称取量为样品测定时称样品量的二分之一，按各测定化合物含量的1:0.5（低）、1:1（中）、1:1.5（高）的比例加入各对照品贮备液，每个浓度制备3份，按样品前处理方法处理后，进行2D-UHPLC分析，带入标准曲线，计算回收率。

结果见表4，12个待测成分的回收率均在91.21%～107.76%37.39 18.22 54.92 96.21±0.03 3.5 6. Kaempferol-3-O-β-D-glucoside 37.39 36.45 71.46 93.47±0.03 3.237.39 54.68 93.01 101.72±0.01 0.634.47 18.0 52.17 100.51±0.05 4.9 7. Quercetin-3-O-α-L-rhamnoside 34.47 36.0 71.36 102.47±0.02 1.934.47 54.0 88.32 99.72±0.02 2.439.29 18.14 56.52 95.00±0.04 4.1 8. Quercetin-3-O-[β-D-xyloxyl-(1→39.29 36.27 76.35 102.18±0.02 2.02)-α- L-rhamnoside] 39.29 54.4 93.08 98.88±0.03 2.95.48 4.75 10.72 107.73±0.04 3.6 9. 1, 3, 6-tri-p-coumaroyl-6′-feruloyl 5.48 9.50 14.88 98.92±0.03 3.4sucrose 5.48 14.24 20.17 103.17±0.02 1.710.43 4.5 15.33 107.76±0.02 1.8 10. 3, 6-di-p-coumaroyl-1,6-di- 10.43 9.0 19.23 97.80±0.02 2.4feruloyl sucrose 10.43 13.5 23.82 99.17±0.03 3.218.96 8.86 27.81 101.22±0.03 3.3 11. 1, 6, 6′-tri-feruloyl-3-p- 18.96 17.73 37.12 102.41±0.02 1.6coumaroyl sucrose 18.96 26.6 44.79 97.12±0.01 1.011.23 4.41 15.87 105.11±0.04 3.612. 1, 3, 6, 6′-tetra-feruloyl sucrose 11.23 8.82 19.66 97.41±0.04 4.411.23 13.23 24.01 96.58±0.03 2.7 Recovery (%) = 100×(amount found – original amount)/ amount spiked.a The values were means ± S.D. of three experiments.7.8.苦荞麦茎2D-UHPLC色谱图图2 12个对照品色谱图LQ-root 0.08 - - - 0.09 - 0.12 - 0.56 0.56 0.44 0.32 LQ-stem 0.86 - 0.04 0.04 0.02 - 0.07 - 0.16 0.13 0.18 0.08 LQ-leaf 33.41 - 0.33 0.65 0.02 - 0.06 - 0.01 0.01 0.02 0.01 SZ-herb 3.10 0.30 0.51 - 0.03 0.02 0.05 - 0.02 0.15 0.05 0.04 SZ-root 0.23 0.56 0.35 - - - 0.29 - 0.09 1.19 0.22 0.12 SZ-stem 1.15 0.49 0.41 - 0.06 - 0.09 - 0.02 0.19 0.07 0.06 SZ-leaf 36.95 - 0.63 - - 0.16 0.09 - - 0.04 - - 09-herb 1.62 0.17 0.32 - 0.09 - - - 0.04 0.06 0.07 0.03 09-root 0.08 0.08 0.10 - 0.03 - - - 0.35 0.52 0.52 0.20 09-stem 0.57 0.29 0.46 - 0.12 - - - 0.06 0.09 0.10 0.04 09-leaf 8.07 - 0.25 - 0.07 - - - - - - - 08-herb 1.60 0.11 0.50 - - - - - - 0.02 0.03 0.0208-root 0.25 0.12 0.28 - - - - - 0.06 0.16 0.18 0.12 08-stem 1.49 0.18 0.44 - - - - - 0.01 0.04 0.04 0.04 08-leaf 2.98 0.07 0.17 - - - - - 0.01 0.03 0.03 0.03 1. Quercetin-3-O-rutinoside, 2.Quercetin-3-O-β-D-galactoside, 3.Quercetin-3-O-β-D- glucoside, 4.Kaempferol-3-O-β-D-galactoside,5.N-trans-feruloyltyramine, 6. Kaempferol-3-O-β-D-glucoside, 7. Quercetin-3-O-α-L-rhamnoside, 8. Quercetin-3-O-[β-D-xyloxyl-(1→2)-α-L-rhamnoside]9. 1, 3, 6-tri-p-coumaroyl-6′-feruloyl sucrose, 10. 3, 6-di-p-coumaroyl-1, 6-di-feruloyl sucrose, 11. 1, 6, 6′-tri-feruloyl-3-p-coumaroyl sucrose, 12. 1, 3, 6, 6′-tetra-feruloyl sucrose10.可行性建议本方法使用Acclaim HILIC-10 把苦荞麦全草部分分成两部分分别使用Acclaim PAII和Acclaim Phenyl-1分析柱进行二维分析，对于我们的目标化合物得到了理想的分离状态，对于其他干扰物也能达到很好的分离，对于苦荞麦全草的分析提供了有力的条件。