人白细胞介素-2受体(IL-2R)酶联免疫分析
白细胞介素2的调节作用及其应用
白细胞介素・2的调节及应用摘要：白细胞介素-2是淋巴淋巳细胞受抗原刺激后所分泌的具有免疫调节作用的淋已因子。
白细胞介素-2除能在体外维持T淋巴细胞长期増殖与分化外，还具有増强自然杀伤细胞的杀伤活性及增进B细胞分化与增喳的能力，和诱导淋巴因于激活的杀伤细(LAK)产生等重要生物学作用。
研究发觉，白细胞介素-2在抗肿瘤、抗毒素、免疫调节及感染性疾病的医泊等方面具有重要作用。
关键词：细胞因于；白细胞介素-2;免疫；前言：1976年,Morgan D A等在鼠脾淋巴细胞培育上清液中发觉了鼠白细胞介素-2,因其可増进和维持T淋巴细胞的生长，故被称为刑巴细胞生长因于(TCGF), 1979年在日内瓦免疫学会上被命名为白细胞介素-2。
1979年，Wastson第一次取得纯化的小鼠白细胞介素-2, 1983年Tail iguchi 等第一次成功地克隆了人白细胞介素-2cDNA o自此以后，大鼠、猪、牛尊动物的白细胞介素-2墓因接踵被克隆，迄今为止至少巳克隆了30多种动物的白细胞介素-2 基因。
白细胞介素-2是免疫细胞产生的细胞因于。
此刻就白细胞介素-2的组织结构尺其研究进展迸行了简单总结。
1白细胞介素・2的蛋白结构和理化性质白细胞介素-2是一种具有普遍生物活性的细胞因于，由位于第4号染色体上的单个墓因编码的一种单链多肽分于，主要由激活的CD4+T淋已细胞分泌，分于质長为ku o静息的T淋已细胞既不能台成也不能分泌白细胞介素-2,但在适当的抗原和共刺激因于联台刺激或暴露多克隆配基情形下可诱导这两种功能。
在体内白细胞介素主要由活化的T型辅助淋E(Thi)细胞分泌,等电点(P】)为〜，有3个半胱氨酸残基(Cys),别离位于第58,105,125位。
因此,翻译后修饰还包括Thr 位点的糖基化和在第58位与第105位残墓形成二硫键。
二硫键对其活性的维持具有重要的作用，而Thr糖基化对于其活性没有彫响，因此重组的白细胞介素-2通常将125位游商的半胱氨酸残基突变成丝氨酸或丙氨酸，如此就有利于重组蛋白产生正确的二蔬键。
重组人白细胞介素—2制备工艺的研究
重组人白细胞介素—2制备工艺的研究白细胞介素-2（Interleukin-2，IL-2）是一种由T细胞分泌的免疫调节因子，对细胞免疫和体液免疫调控起着重要作用。
由于其广泛的生物活性和临床应用价值，人白细胞介素-2的制备工艺研究一直备受关注。
人白细胞介素-2可以通过多种方法进行制备，其中最常用的方法是采用重组DNA技术。
该方法首先需要在合适的表达载体中克隆人白细胞介素-2的基因，将其转染至适当的宿主细胞中，通过大规模培养和纯化过程得到目标产物。
重组人白细胞介素-2的制备工艺主要包括以下几个步骤：1.基因克隆：将人白细胞介素-2基因放入适合的表达载体中。
载体通常是质粒，具有能够稳定细胞内基因组的特性。
该载体还包含了启动子、终止子等序列，以调控基因的表达。
2.转染：将已构建好的表达载体转染至宿主细胞中。
常用的宿主细胞包括大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞等。
3.培养：经过转染的宿主细胞在适当的培养条件下进行大规模培养。
培养基中会加入适当的抗生素，以筛选出含有重组基因的细胞群。
4.表达：通过培养过程中的细胞生长和代谢活性，使重组基因在细胞内被转录和翻译成蛋白质。
这样，大量的重组人白细胞介素-2就会被产生出来。
5.纯化：将培养基中的细胞分离出来，通过离心、滤过等操作得到细胞上清液。
然后利用离子交换、凝胶过滤、亲和层析等方法进行层析纯化，去除杂质，得到纯净的重组人白细胞介素-2。
重组人白细胞介素-2的制备工艺需要考虑多个因素。
首先，合适的宿主细胞选择对产量和纯度影响很大。
常用的宿主细胞是大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞，每种细胞系统有其优势和限制。
其次，可以通过优化培养条件来提高人白细胞介素-2的表达水平，如调节培养基成分、温度和pH等。
此外，纯化过程的选择和优化也是影响产品质量的重要因素。
目前，人白细胞介素-2的制备工艺已经相对成熟，并且在临床上得到了广泛的应用。
重组人白细胞介素-2的制备工艺研究不断进步，将为更好地利用白细胞介素-2的免疫调节作用，提供更好的疾病治疗手段和提高临床疗效。
IL-2白细胞介素2医学免疫学
用于自身免疫性疾病的治疗1
• IL-2对免疫反应的影响：它作为一种信号介 质把信号从激活的CIM+T细胞传递给调节性T 细胞，并控制免疫反应，限制潜在的破坏性免 疫副作用。随后，IL-2促进其他抗原异性 CD4+T细胞增殖发育，并发挥其免疫功能 • lL-2与T细胞凋亡：成熟的的α β T淋巴 细胞经抗原激活后可能发生细胞凋亡。细胞凋 亡可以一步导致胸腺细胞和成熟T淋巴细胞克 隆的缺失
展望
人们对IL-2的研究已经有30多年的历史了， 但IL-2仍然是目前研究最多的细胞因子之一，它 在免疫系统中的作用还有待于继续研究。IL-2能 有效增强免疫能力，提高机体免疫水平，广泛的 生物学作用使其在临床上具有较大的应用价值。 随着不断的研究开发，IL-2的应用必定还会得到 进一步发展。
产生
• CD4阳性或CD8阳性细胞T细胞: 有丝分裂原刺激亚群可产 生IL-2，同种异体抗原主要刺激CD4阳性T细胞产生IL-2。 PBMC、脾脏、淋巴结和扁桃体中的T细胞刺激产生IL-2 • T细胞肿瘤细胞系或白血病细胞系：人和动物某些T细胞白 血病细胞系或肿瘤细胞在有丝分裂原、钙离子载体（如 A23187）或PMA刺激下可产生高水平的ＩＬ－２． • Ｔ淋巴细胞杂交瘤：Ｔ淋巴细胞杂交瘤１２３，ＦＳ６－１ ４．１３，ＨＴ－２４Ａ等在ＣｏｎＡ刺激下产生ＩＬ－２ • 应用基因工程技术制备：１９８３年Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ等 从ＣｏｎＡ刺激的ｊｕｒｋａｔ白血病Ｔ细胞中克隆成功Ｉ Ｌ－２ｃＤＮＡ，并在大肠杆菌中得到高水平的表达。
医学免疫学PBL
--IL-2
(PPT制作：momo）
病例
• 45 岁男性, 因黑色素瘤转移至肺和右心房而接 受IL-2 和大剂量顺铂实验性治疗。除了常见的IL-2 毒性反应外, 在第一疗程后很快出现膝关节疼痛和肿 胀外周血WBez3700 又10 . / L , 血沉7om m / 小时。因怀疑是IL 一2 相关性菌血症而开始静脉 万古霉素治疗。发热消退后停用抗生素, 并用消炎痛 治疗持续的关节疼痛。膝关节积液完全消失, 但在应 用第二疗程大剂量IL 一2 后很快复发。A N A I : 160, 核仁型( 治疗前阴性) , RF ( 一),H L A 一D R 4 ,D R 7 ,n Qw Z , D Qw Z和n Q3 阳性1 5 年前曾因关节病变诊为浪e it o r综合征。
白细胞介素(IL-2)检测及临床意义
白细胞介素（IL-2）检测及临床意义
一、概述
白细胞介素-2 (IL-2)又称T细胞生长因子。
主要由T细胞产生。
是在淋巴细胞增殖分化过程中重要的细胞生长因子，生理作用有刺激T细胞生长、诱导细胞毒作用和对B细胞的生长及分化均有一定的促进作用等
二、检测方法
IL-2主要检测方法为生物素亲合素系统的双抗体夹心ELISA 法。
三、临床意义
1、IL-2可提高人体对病毒、细菌、真菌和原虫等感染的免疫应答，促进细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、自然杀伤细胞(NK 细胞)、淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK 细胞)和肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)增殖，并使其杀伤活性增强，进而清除体内肿瘤细胞和病毒感染细胞等。
2、IL-2 还可以增加抗体和干扰素 (IFN)等细胞因子的分泌，在机体免疫应答中具有非常重要的作用，是一种免疫增强剂，具有抗病毒、抗肿瘤和提高机体免疫功能等作用。
3、IL-2的表达异常与临床多种疾病有密切关系，尽管外周血、尿液中IL-2 水平，或激活淋巴细胞上清液中IL-2水平的异常没有疾病特异性，但是可作为相关疾病的辅助诊断、预后及疗效观察提供可靠数据。
4、IL-2升高：肿瘤、心血管病、肝病等疾病时均可使 IL-2 水平升高，在器官移植后早期排斥反应时也出现IL-2表达升高。
5、IL-2降低：在多种原发性免疫缺陷病和继发性免疫缺陷病时均可伴有 IL-2 水平降低，如 SLE、麻风和艾滋病等。
人Human白细胞介素2IL2ELISA检测试剂盒利用方式
人(Human) 白细胞介素-2（IL-2）ELISA 检测试剂盒利用方式用途：人IL-2 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各类体液中的IL-2 。
本试剂盒能够检测天然和重组的IL-2 。
本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。
实验原理：人IL-2 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知IL-2 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。
先将IL-2 和生物素标记的抗体同时温育。
洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。
再通过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。
产生颜色。
颜色的深浅和样品中IL-2 的浓度呈比例关系。
试剂盒内容及其配制自备材料1．蒸馏水。
2．加样器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。
3．振荡器及磁力搅拌器等。
平安性1．此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性，但没有实验室可完全保证此血制品可不能传染肝炎、AIDS或其它传染病，依据本地的平安条例处置本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。
2．幸免直接接触终止液和底物A、B。
一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
3．实验中不要吃喝、抽烟或利用化妆品。
4．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项1．试剂应按标签说明书贮存，利用前恢复到室温。
稀稀事后的标准品应抛弃，不可保留。
2．实验中不用的板条应当即放回包装袋中，密封保留，以避免变质。
3．不用的其它试剂应包装好或盖好。
不同批号的试剂不要混用。
保质前利用。
4．利用一次性的吸头以避免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，幸免利用带金属部份的加样器。
5．利用干净的塑料容器配置洗涤液。
利用前充分混匀试剂盒里的各类成份及样品。
6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反映孔中吸水。
7．底物A应挥发，幸免长时刻打开盖子。
底物B对光灵敏，幸免长时刻暴露于光下。
白细胞介素-2的研究进展
白细胞介素-2的研究进展细胞因子是由多种细胞分泌的小分子蛋白的总称，具有调节细胞生长、免疫应答和参与炎症反应等多种生物学功能，而白细胞介素-2（IL-2）即是其中一种。
1976年Morgan等在小鼠脾细胞上清液中首次发现有一种能促进和维持T细胞体外生长的因子，并称其为T细胞生长因子（TCGF）,1979年被正式命名为IL-2.随后有关IL-2的应用研究取得了突飞猛进的发展。
1.白细胞介素-2及其受体1.1白细胞介素-2结构天然hIL-2在体内主要由活化的I型辅助淋巴细胞(THl细胞)分泌，除此之外，B细胞、NK细胞及单核－巨噬细胞亦能产生IL-2。
IL-2为分子量约为15.5kDa的糖蛋白，pI在6.6~8.2。
成熟的IL-2分子由153个氨基酸肽链N端剪掉20个氨基酸残基的信号肽后剩下的133个氨基酸残基组成，它与其它的细胞因子在序列上无同源性。
翻译后加工的过程还包括第三位Thr位点的糖基化和二硫键的形成。
蛋白链中有三个半胱氨酸残基(Cys)，位于第58、105和125位。
58位和105位半胱氨酸残基结合形成二硫键，使肽链折叠，125位半胱氨酸残基游离。
研究者发现将125位游离的半胱氨酸残基突变为丝氨酸或丙氨酸时，仍具有生物活性，且不会与第58位半胱氨酸残基形成错误二硫键，增加了IL-2的稳定性，同时也消除了由第125半胱氨酸残基造成的二聚体，但是这样新型IL-2容易产生抗体，这是一大不足之处。
IL-2肽链折叠后才呈现活性，直链是无活性的，正确的二硫键对于IL-2活性的保持是必需的，但糖基化却与活性无关。
IL-2的二级结构有4个α螺旋区和一对β反平行折叠，各螺旋相互折叠使IL形成球状蛋白分子。
磁共振 (NMR)确定IL-2的四个α螺旋，分别为A、1l-29．B、53-73，C、81-97，D、116-131。
对IL-2的α螺旋结构研究结果说明α螺旋的破坏对其生物活性必定有影响。
另外，IL-2与其受体结合需要酸性基团(Asp)，而较长的疏水侧链基团则妨碍这种结合，使其活性降低，甚至完全丧失。
人白细胞介素2(IL-2)说明书
人白细胞介素2（IL-2）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T40pg/ml-1200pg/ml使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素2（IL-2）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素2（IL-2）水平。
用纯化的人白细胞介素2（IL-2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素2（IL-2），再与HRP标记的白细胞介素2（IL-2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素2（IL-2）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素2（IL-2）浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
白细胞介素-2(IL-2)的应用研究
白细胞介素-2（IL-2）的应用研究加州大学圣克鲁斯分校化学和生物化学助理教授Nikolaos Sgourakis说：“在不同情况下，IL-2可以起到促进或是抑制免疫反应的作用。
我们利用了详细的生物物理方法来研究它是如何做到的。
”在免疫应答中，IL-2作为生长因子刺激T细胞扩增。
不同类型的T细胞扮演着不同的角色，IL-2既可以刺激效应T细胞，也可以刺激调节性T细胞，后者可以在威胁消失后控制免疫系统。
白细胞介素2 (IL-2)是15 kDa的糖蛋白，在人类中，由位于4号染色体q26–28 区域的单基因编码。
它是免疫系统中的一类信号分子，调控对具有免疫功能的白血球(白细胞，通常是淋巴细胞)的活性。
IL-2 是机体对微生物感染的天然应答，区别外来和自身抗原。
（图源：百度百科）重组IL-2蛋白，货号：PRP100274；IL-2抗体，货号：ABP51612；白介素-2 ELISA定量试剂盒，货号：KET7006；IL-2试剂盒，货号：KET9002IL-2应用研究由于IL-2能诱导和增强细胞毒活性，应用IL-2治疗某些疾病、特别是对肿瘤治疗的研究得到了广泛开展，单独使用IL-2或与LAK细胞等（详见链接第四章）联合使用治疗肿瘤取得了一定的疗效；还可望用于病毒感染、免疫缺陷病及自身免疫病的治疗。
但IL-2的副作用也日益引起人们的注意：IL-2可引起发热、呕吐等一般症状，还可导致水盐代谢紊乱和肾、肝、心、肺等功能异常；最常见、最严重的是毛细血管渗漏综合征，使患者不得不中止治疗。
IL-2的副作用常与IL-2的剂量及用药时间呈相关，停止用药后症状多迅速减轻或消失。
IL-2引起副作用的机制是多方面的，但主要是间接性的，即IL-2诱导产生的某些因子或杀伤性细胞起着重要作用；现已知LAK细胞可通过溶解血管内组织而导致多种副作用。
给予适当药物（如吲哚美辛、哌替啶、对乙酰基氨酚等）、采取联合用药、改进给药方式（如少量多次短时间输注）和给药途径（如改全身用药为肿瘤局部用药）等将有效地减轻不良反应。
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人白细胞介素-2受体（IL-2R）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T
15ng/L - 400ng/L
使用目的：
本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-2受体（IL-2R）含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素-2受体（IL-2R）水平。
用纯化的人白细胞介素-2受体（IL-2R）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-2受体（IL-2R），再与HRP标记的白细胞介素-2受体（IL-2R）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的白细胞介素-2受体（IL-2R）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素-2受体（IL-2R）浓度。
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤
1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此
重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。
测定应在加终止
液后15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。
一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。
如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6个月。