试验2还原糖的测定方法
还原糖的测定方法
还原糖的测定方法还原糖是指能够还原铜离子的糖类物质，通常用来测定葡萄糖、果糖、麦芽糖等在食品和生物样品中的含量。
测定还原糖的方法有很多种，其中包括费林试剂法、硫酸铜比色法、硼酸硫酸铜比色法等。
本文将介绍硫酸铜比色法和硼酸硫酸铜比色法两种测定还原糖的方法。
硫酸铜比色法测定还原糖的方法如下：1. 准备样品，将待测样品溶解于适量的水中，得到一定浓度的溶液。
2. 配制硫酸铜溶液，取一定容量的硫酸铜溶液，通常浓度为0.1mol/L。
3. 反应，将样品溶液与硫酸铜溶液混合，加热至沸腾，使得还原糖与硫酸铜发生反应，生成红色的氧化铜沉淀。
4. 沉淀析出，待反应结束后，将溶液冷却，沉淀析出。
5. 比色，用分光光度计在特定波长下测定溶液的吸光度，根据标准曲线计算出还原糖的含量。
硼酸硫酸铜比色法测定还原糖的方法如下：1. 准备样品，将待测样品溶解于适量的水中，得到一定浓度的溶液。
2. 配制硼酸硫酸铜试剂，将一定量的硼酸溶液与硫酸铜溶液混合制备硼酸硫酸铜试剂。
3. 反应，将样品溶液与硼酸硫酸铜试剂混合，加热至沸腾，使得还原糖与硫酸铜发生反应，生成蓝色的氧化铜沉淀。
4. 沉淀析出，待反应结束后，将溶液冷却，沉淀析出。
5. 比色，用分光光度计在特定波长下测定溶液的吸光度，根据标准曲线计算出还原糖的含量。
以上两种方法均是通过还原糖与硫酸铜发生反应生成沉淀，再通过比色法测定沉淀的吸光度来计算还原糖的含量。
在具体操作时，需要注意样品的处理、试剂的配制、反应条件的控制以及仪器的使用等细节，以确保测定结果的准确性和可靠性。
总结，硫酸铜比色法和硼酸硫酸铜比色法是常用的测定还原糖的方法，通过与硫酸铜发生反应生成沉淀，再通过比色法测定沉淀的吸光度来计算还原糖的含量。
在实际操作中，需要严格按照方法步骤进行操作，以获得准确可靠的测定结果。
还原糖的测定
四、操作步骤 1． 制作葡萄糖标准曲线
葡萄糖标准液、蒸馏水和 3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂
摇匀,沸水浴加热5min 反应液冷却至室温
蒸馏水定容至25mL(混匀) 540nm下测光密度值
绘出标准曲线
表1 葡萄糖标准曲线制作
管号
0
1mg/mL葡萄糖标准液 （mL）
0
蒸馏水 （mL）
2
1
0.2
1.8
蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。
面粉中还原糖含量较少，计算总糖时可将其
将6.
定容为100mL,待用
学习比色法测定还原糖的操作方法和分光光பைடு நூலகம்计的使用。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是
非还原糖。
3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖进行取测进定的行?检测
取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。
面粉中还原糖含量较少，计算总糖时可将其
（2）显色和比色
取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入 待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。 加热、定容和比色等其余操作与制作标准曲线相同。
3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖进行测定的?
1mg/mL葡萄糖标准液 三、实验材料、主要仪器和试剂
收集上清液
表1 葡萄糖标准曲线制作
取4支20mL具塞刻度试管，编号，按表2所示分别加入待测液和显色剂，空白调零可使用制作标准曲线的0号管。
还原糖的检测研究方法
还原糖的检测研究方法
还原糖的检测研究方法主要包括以下几种：
1. 比色法：将还原糖与金属离子（如铜离子）反应生成有色产物。
该方法常用的还原糖指示剂有费林试剂和巴西林试剂，可以通过比色反应的颜色强度来定量分析还原糖的含量。
2. 电化学法：利用还原糖在电极上发生电化学反应，通过测量电流或电势的变化来定量分析还原糖的含量。
常用的电化学方法包括循环伏安法、方波伏安法和安培法。
3. 高效液相色谱法（HPLC）：通过将样品中的还原糖与某种反应试剂或色谱柱进行反应，在一定的条件下，测定生成物的色谱峰面积或峰高值与还原糖的含量成比例关系，以定量分析还原糖的含量。
4. 酶法：利用特定的酶催化还原糖与底物之间的反应，产生可测量的产物。
常用的酶法包括葡萄糖氧化酶法、葡萄糖去氢酶法和葡萄糖酸化酶法等。
5. 光度法：还原糖在酸性条件下能够与某些试剂发生特定的吸收峰，在特定波长下测量吸光度来定量分析还原糖的含量。
常用的试剂有安东氏试剂和费林试剂。
这些方法在还原糖的检测研究中应用广泛，可以根据具体实验需求选择合适的方
法进行研究。
还原糖的测定实验报告
还原糖的测定实验报告实验目的：通过实验，掌握还原糖的测定方法，了解还原糖在生活中的应用。
实验原理：还原糖是指具有还原性的糖类物质，如葡萄糖、果糖等。
在碱性条件下，还原糖能与铜离子发生氧化还原反应，将Cu2+还原为Cu+，同时还原糖被氧化为酸。
通过测定还原糖溶液对氧化铜的还原作用，可以确定还原糖的含量。
实验仪器和试剂：1. 分光光度计。
2. 玻璃烧杯。
3. 还原糖试剂。
4. 氢氧化钠溶液。
5. 硫酸铜溶液。
6. 蒸馏水。
实验步骤：1. 取一定量的还原糖溶液放入玻璃烧杯中。
2. 加入适量的氢氧化钠溶液，并混合均匀。
3. 加入适量的硫酸铜溶液，再次混合均匀。
4. 将混合溶液放入水浴中加热，使其发生反应。
5. 反应结束后，冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度线。
6. 用分光光度计测定溶液吸光度，记录数据。
实验数据处理：根据实验数据，利用标准曲线法计算出还原糖的含量。
实验结果：通过实验测定，得到还原糖的含量为Xg/L。
实验结论：通过本次实验，我们成功掌握了还原糖的测定方法，并且得到了还原糖的含量。
还原糖在食品工业中有着重要的应用，我们需要进一步了解还原糖的性质和用途，为日后的实际应用提供参考。
实验注意事项：1. 实验过程中要注意安全，避免溶液溅出。
2. 操作仪器时要轻拿轻放，避免损坏。
3. 实验后要及时清洗玻璃器皿，保持实验台面整洁。
总结：本次实验成功测定了还原糖的含量，掌握了还原糖的测定方法。
通过实验，我们深入了解了还原糖的性质和应用，为今后的学习和工作打下了良好的基础。
希望大家能够在日常生活中多加利用所学知识，不断提高自己的实践能力。
以上是本次实验的实验报告，谢谢！。
还原糖的测定方法_国标
还原糖的测定方法（1）食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1）滴定管（2）25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3）真空泵（4）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g 硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
4.5 碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。
4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
实验二 还原糖及总糖的测定
实验二还原糖及总糖的测定（3、5——二硝水杨酸比色法）目的和要求：1．掌握3、5-二硝基水杨酸比色法测定糖量的原理及方法。
2．熟悉722分光光度计基本工作原理和操作方法。
原理：各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与3、5—二硝基水杨酸共热，3、5—二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，可在分光光度计540nm波长测定棕红色物质的吸光值。
查标准曲线计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
多糖水解时，在单糖残基上加了一分子水，因而在计算中须扣除已加入的水量，测得所得到的总糖量乘以0.9即为实际的总糖量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
试剂和材料：1．试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100ml分析纯葡萄糖（预先在105℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml容量瓶中，以蒸馏水定容到刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
（2）3、5—二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）甲液——溶解6.9g结晶酚（苯酚）于15.2ml 10%NaOH中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g亚硫酸氢钠。
乙液——称取22.5g酒石酸钾钠，加到300ml 10% NaOH中，再加入880ml 1%的3、5—二硝基水杨酸溶液。
将甲液和乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，放置7—10天使用。
（3）碘—碘化钾溶液（碘试剂）：称取5g碘和10g碘化钾，研匀后溶于100ml蒸馏水中。
（4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞溶于70%乙醇中。
（5）6 mol·L-1 HCl（6）6 mol·L-1NaOH（7）面粉2．器材比色管、离心管、量筒、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、玻璃漏斗、滤纸、白瓷板、电热恒温水浴槽、离心机、天平、分光光度计。
实验二 总糖和还原糖的测定
实验内容
1. 葡萄糖标准曲线的制备； 2. 样品（藕粉）中还原糖的提取和含量测定； 3. 样品（藕粉）中总糖的水解和含量测定。
1、葡萄糖标准曲线制作
1、取6支1. 5 cm×15 cm试管，按下表加入1 mg/ml葡萄糖 标准液和蒸馏水。
管号
0 1 2 3 4 5
葡萄糖标准液 (ml) 0
0.2 0.4 0.6 0.8 1
5、计 算
按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：
式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/mL； V──还原糖或总糖提取液的总体积，mL； m──样品重量，g； 1000──mg换算成g的系数。
思考题
1、比色时为什么要设计空白管？ 2、糖测定过程中的干扰物质有那些？如何除去？ 3、总糖和还原糖的提取有何不同？
2、样品中还原糖的提取
准确称取1g藕粉，放在100 ml烧杯中，先以少 量蒸馏水调成糊状，然后加入40 ml蒸馏水，混 匀，于50℃恒温水浴中保温20 min，不时搅拌， 使还原糖浸出。全部收集在50 ml的容量瓶中定 容，过滤出5ml，即为还原糖提取液。
3、样品总糖的水解及提取
准确称取0.5g藕粉，放在大试管中，加入6 M HCl 5ml，蒸馏水8ml，在沸水浴中加热15min，取出 1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是 否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕， 冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6M NaOH 溶液中和至溶液呈微红色，定容到50ml，取5ml 再次定容至50ml，过滤，取滤液用于总糖测定。
4、样品中含糖量的测定
1、取7支1.5 cm×15 cm试管，分别按下表加入试剂：
项目 试管号
样品溶液（ml）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
还原糖 测定实验报告
还原糖测定实验报告还原糖测定实验报告引言：还原糖是一类具有还原性的糖类物质，能够还原某些化学试剂。
测定还原糖的含量在食品工业和生化实验中具有重要意义。
本实验旨在通过还原糖的测定实验，掌握还原糖的测定方法以及实验操作技巧。
实验材料和仪器：1. 实验材料：葡萄糖溶液、蔗糖溶液、还原糖标准溶液、硫酸铜溶液、碱式碘液、硫酸、氢氧化钠溶液等。
2. 仪器：分光光度计、试管、移液管、烧杯、量筒等。
实验步骤：1. 制备还原糖标准溶液：取一定量的葡萄糖溶液，用蒸馏水稀释至一定体积，得到一定浓度的还原糖标准溶液。
2. 实验组的操作：取一定体积的蔗糖溶液，加入硫酸铜溶液和碱式碘液，混合均匀后加入硫酸，使溶液变为无色。
然后加入氢氧化钠溶液，使溶液呈现深蓝色。
最后，用分光光度计测定溶液的吸光度。
3. 对照组的操作：取一定体积的还原糖标准溶液，按照实验组的操作步骤进行操作。
4. 分光光度计测定：将实验组和对照组的溶液分别放入分光光度计中，设置适当的波长，测定吸光度。
结果与分析：根据实验数据，在分光光度计上测得实验组和对照组的吸光度值，通过计算可以得到实验组中还原糖的含量。
通过对比实验组和对照组的含量，可以得出蔗糖溶液中还原糖的含量。
实验误差的分析：1. 实验操作误差：由于实验操作中的仪器使用、试剂的取用等步骤，可能会产生一定的误差。
为减小误差，应严格按照实验步骤进行操作，尽量减少操作上的差异。
2. 仪器误差：分光光度计的测量结果也可能存在一定的误差。
为减小仪器误差，应在测量前校准分光光度计，确保其准确性。
实验结论：通过本实验的测定，可以得出蔗糖溶液中还原糖的含量。
实验结果可用于食品工业中对糖类产品的质量控制和生化实验中对还原糖的研究。
总结：本实验通过测定蔗糖溶液中还原糖的含量，掌握了还原糖的测定方法和实验操作技巧。
同时，还了解了实验误差的来源，并提出了减小误差的方法。
这些知识和技能对于食品工业和生化实验具有重要意义。
通过实验的过程，我们不仅学到了实验操作的技巧，还加深了对还原糖测定原理的理解。
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实验2 还原糖的测定方法食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚铜含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1） 滴定管（2） 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3） 真空泵（4） 水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
4.5碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
4.6精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜乙液浸泡数小时，用水洗净。
再以3mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软纤维，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。
4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
5. 操作方法5.1 样品处理：5.1.1 乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50ml水，摇匀。
加入10 ml碱性酒石酸铜甲液及4ml1mol/L氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。
静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液滤液备用。
（注：此步骤目的是沉淀蛋白）5.1.2 酒精性饮料：吸取100 ml样品，置于蒸发皿中，用1mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后（注：如果蒸发时间过长，应注意保持溶液pH为中性），移入250ml容量瓶中。
加50 ml水，混匀。
以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。
5.1.3 含多量淀粉的食品：称取2～10 g样品，置于250 ml容量瓶中，加200 ml水，在45℃水浴中加热1h，并时时振摇。
（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在高温条件下可糊化、水解，影响检测结果。
）冷却后加水至刻度，混匀，静置。
吸取200ml上清液于另一250 ml容量瓶中，以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。
5.1.4 含有脂肪的食品：称取2～10g样品，先用乙醚或石油醚淋洗3次，去除醚层。
加入50ml水混匀，以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。
5.1.5 汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取100 ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，备用。
5.2 样品测定：吸取50ml处理后的样品溶液，于400ml烧杯中，加入25ml碱性酒石酸铜甲液及25ml乙液，于烧杯上盖一表面皿，加热，控制在4min内沸腾，再准确煮沸2min，乘热用铺好石棉的古氏坩埚或G4垂融坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不成碱性为止。
（注：还原糖与碱性酒石酸铜试剂的反应一定要在沸腾状态下进行，沸腾时间需严格控制。
煮沸的溶液应保持蓝色，如果蓝色消失，说明还原糖含量过高，应将样品溶液稀释后重做。
）将古氏坩埚或垂融坩埚放回原400ml烧杯中，加25ml硫酸铁溶液及25ml水，用玻棒搅拌使氧化亚铜完全溶解，以0.1mol/L高锰酸钾标准液滴定至微红色为终点。
同时吸取50ml水，加与测样品时相同量的碱性酒石酸铜甲、乙液，硫酸铁溶液及水，按同一方法做试剂空白实验。
6. 计算：X1=（V-V0）×N×71.54 （1）式中： X1--样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量，mg；V--测定用样品液消耗高锰酸钾标准液的体积，ml；V0--试剂空白消耗高锰酸钾标准液的体积，ml；N--高锰酸钾标准溶液的浓度；71.54--1ml 1mol/L高锰酸钾溶液相当于氧化亚铜的质量，mg。
根据（1）式中计算所得氧化亚铜质量，查附表"氧化亚铜质量相当于葡萄糖、果糖、乳糖、转化糖的质量表"，再计算样品中还原糖含量。
∕） (2)X2=（m1×V2）∕（m2×V1）×（1001000式中： X2--样品中还原糖的含量，g/100g（g/100ml）；m1--查表得还原糖质量，mg；m2--样品质量（或体积）， g（ml）；V1--测定用样品处理液的体积，ml；V2--样品处理后的总体积，ml。
7.举例：称取某食物样品3.00g，经过处理后用水定容至250ml。
取50ml进行测定，消耗0.1003mol/L 高锰酸钾标准液5.20ml，同时测试剂空白为0.36ml，则 样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量为：X1（mg） =（5.20-0.36）×0.1003×71.54 = 34.73查表得还原糖质量为相当于葡萄糖16.22 mg，样品中还原糖含量（以葡萄糖计）为：∕）= 2.70X2（g/100g）=（16.22×250）∕（3.00×50）×（10010008.注释：本法用碱性酒石酸铜溶液作为氧化剂。
由于硫酸铜与氢氧化钠反应可生成氢氧化铜沉淀，氢氧化铜沉淀可被酒石酸钾钠缓慢还原，析出少量氧化亚铜沉淀，使氧化亚铜计量发生误差，所以甲、乙试剂要分别配制及贮藏，用时等量混合。
二、直接滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定已标定过的费林氏液，费林氏液被还原析出氧化亚铜后，过量的还原糖立即将次甲基蓝还原，使蓝色褪色。
根据样品消耗体积，计算还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本方法适用于所有食品中还原糖的检测。
检出限0.1mg。
3.主要仪器滴定管4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1） 费林甲液：称取15 g硫酸铜（CuSO4·5H2O），及0.05 g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1 L。
（2） 费林乙液：称取50 g酒石酸钾钠与75 g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁***，完全溶解后，用水稀释至500ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
（3） 乙酸锌溶液：称取21.9 g乙酸锌，加3 ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100 ml。
（4）亚铁氰化钾溶液。
称取10.6g亚铁***，用水溶解并稀释至100ml。
（5） 盐酸。
（6） 葡萄糖标准溶液：精密称取1.000 g经过80 ℃干燥至恒量的葡萄糖（纯度在99%以上），加水溶解后加入5ml盐酸，并以水稀释至1 L。
此溶液相当于1 mg/ml葡萄糖。
（注：加盐酸的目的是防腐，标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制）5.操作方法5.1样品处理：5.1.1乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml 液体样品），置于100 ml容量瓶中，加50ml水，摇匀。
边摇边慢慢加入5 ml乙酸锌溶液及5 ml亚铁氢化钾溶液，加水至刻度，混匀。
静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
（注意：乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等，使它们形成沉淀，经过滤除去。
如果钙离子过多时，易与葡萄糖、果糖生成络合物使滴定速度缓慢；从而结果偏低，可向样品中加入草酸粉，与钙结合，形成沉淀并过滤。
）5.1.2酒精性饮料：吸取50 ml样品，置于蒸发皿中，用1mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后，移入100 ml容量瓶中。
加25ml水，混匀。
以下按4.1.1自"加5 ml乙酸锌溶液"起依法操作。
5.1.3含多量淀粉的食品：称取2～5 g样品，置于100 ml容量瓶中，加50 ml水，在45℃水浴中加热1h，并时时振摇（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在高温条件下可糊化、水解，影响检测结果。
）。
冷后加水至刻度，混匀，静置。
吸取50ml上清液于另一100 ml容量瓶中，以下按4.1.1自"5ml乙酸锌溶液"起依法操作。
5.1.4汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取50 ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入100ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，备用。
（注意：样品中稀释的还原糖最终浓度应接近于葡萄糖标准液的浓度。
）5. 2标定费林氏液溶液：吸取5.0 ml费林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150ml锥形瓶中（注意：甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀，应将甲液加入乙液，使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶），加水10ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9 ml葡萄糖标准溶液，控制在2min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液兰色刚好褪去并出现淡黄色为终点，记录消耗的葡萄糖标准溶液总体积，平行操作三份，取其平均值，计算每10ml（甲、乙液各5ml）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。
（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。
）5.3样品溶液预测：吸取5.0 ml费林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每秒1滴的速度滴定，直至溶液兰色褪去，出现亮黄色为终点。
如果样品液颜色较深，滴定终点则为兰色褪去出现明亮颜色（如亮红），记录消耗样液的总体积。
（注意：如果滴定液的颜色变浅后复又变深，说明滴定过量，需重新滴定。
）5.4样品溶液测定：吸取5.0 ml碱性酒石酸铜甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，在2min内加热至沸，快速从滴定管中滴加比预测体积少1ml的样品溶液，然后趁沸继续以每两秒1滴的速度滴定直至终点。