最新还原糖的测定方法
食品中还原糖的测定方法
食品中还原糖的测定方法1. 概述还原糖（Reducing sugar）是指具有还原性的碳水化合物，能够还原其他物质。
在食品中，还原糖广泛存在于各种食材中，包括水果、蔬菜、谷物等。
准确测定食品中还原糖的含量对于食品质量的评估和营养分析具有重要意义。
本文将介绍食品中还原糖的测定方法。
2. 基本原理还原糖测定的基本原理是利用还原糖与碱性溶液中的某些金属离子（如铜离子）发生氧化还原反应产生沉淀物的特性。
在碱性条件下，还原糖与铜离子发生氧化反应，将铜离子还原为氧化铜（Cu2O），同时还原糖自身被氧化。
生成的氧化铜沉淀可以通过比色法或电化学法进行测定，从而确定还原糖的含量。
3. 还原糖测定方法3.1 Benedict’s试剂法Benedict’s试剂是一种常用于测定还原糖含量的试剂。
其成分包括硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸三钠。
该方法需要将待测溶液与Benedict’s试剂混合，加热反应一段时间后，观察溶液颜色的变化，通过比色法确定还原糖的含量。
实验步骤：1.准备试样：将待测食品样品加入适量的蒸馏水，搅拌均匀。
2.配制Benedict’s试剂：按照一定比例将硫酸铜、碳酸钠和柠檬酸三钠溶解在蒸馏水中，得到Benedict’s试剂。
3.反应：将试样加入Benedict’s试剂中，加热反应5分钟。
4.观察：根据溶液颜色的变化，可以初步估计还原糖的含量。
优缺点：•优点：操作简便、成本低廉。
•缺点：适用范围有限，无法测定低浓度还原糖。
3.2 蔗糖氧化法蔗糖氧化法是利用蔗糖与硫酸铜和氯化铜反应生成氧化铜沉淀的特性，间接测定还原糖的含量。
该方法适用于含有蔗糖的食品样品。
实验步骤：1.准备试样：将待测食品样品加入适量的蒸馏水，搅拌均匀。
2.氧化反应：将试样加入含有硫酸铜和氯化铜的试剂中，反应一定时间。
3.沉淀溶解：将反应后的沉淀溶解，并根据氧化铜溶液的颜色进行测定。
4.计算含量：根据溶液颜色的浓度，计算出还原糖的含量。
优缺点：•优点：适用范围广泛，可以测定含有蔗糖的食品样品。
还原糖的检验方法和具体步骤
还原糖的检验方法和具体步骤如下：
1. 检验方法：使用班氏试剂或斐林试剂检测还原糖。
首先观察试剂的颜色变化，然后加入待测样品，将试管放入水浴加热的烧杯中。
2. 具体步骤：
（1）在试管中加入2ml待测样品溶液。
（2）向试管中加入5滴班氏试剂或斐林试剂。
（3）将试管放入水浴加热的烧杯中，观察颜色变化。
如果试管中出现砖红色沉淀或蓝色沉淀，则说明待测样品中含有还原糖。
这是因为班氏试剂或斐林试剂主要用于检测还原性糖，如葡萄糖，而葡萄糖在加热条件下会与组织中的蛋白质生成砖红色沉淀。
此外，斐林试剂还可以与醛基反应生成蓝色沉淀。
需要注意的是，检测还原糖需要待测样品中的还原糖与试剂发生反应，因此需要确保待测样品溶液是新鲜的、未被污染的。
此外，检测过程中需要控制好温度、时间等条件，以确保实验结果的准确性。
还原糖的测定方法_国标.pdf
食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1）滴定管（2） 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3）真空泵（4）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
碱性酒石酸铜甲液：称取硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
L高锰酸钾标准溶液。
1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
5. 操作方法样品处理：乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约～ 2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。
还原糖的测定方法
还原糖的测定方法还原糖是指能够还原铜离子的糖类物质，通常用来测定葡萄糖、果糖、麦芽糖等在食品和生物样品中的含量。
测定还原糖的方法有很多种，其中包括费林试剂法、硫酸铜比色法、硼酸硫酸铜比色法等。
本文将介绍硫酸铜比色法和硼酸硫酸铜比色法两种测定还原糖的方法。
硫酸铜比色法测定还原糖的方法如下：1. 准备样品，将待测样品溶解于适量的水中，得到一定浓度的溶液。
2. 配制硫酸铜溶液，取一定容量的硫酸铜溶液，通常浓度为0.1mol/L。
3. 反应，将样品溶液与硫酸铜溶液混合，加热至沸腾，使得还原糖与硫酸铜发生反应，生成红色的氧化铜沉淀。
4. 沉淀析出，待反应结束后，将溶液冷却，沉淀析出。
5. 比色，用分光光度计在特定波长下测定溶液的吸光度，根据标准曲线计算出还原糖的含量。
硼酸硫酸铜比色法测定还原糖的方法如下：1. 准备样品，将待测样品溶解于适量的水中，得到一定浓度的溶液。
2. 配制硼酸硫酸铜试剂，将一定量的硼酸溶液与硫酸铜溶液混合制备硼酸硫酸铜试剂。
3. 反应，将样品溶液与硼酸硫酸铜试剂混合，加热至沸腾，使得还原糖与硫酸铜发生反应，生成蓝色的氧化铜沉淀。
4. 沉淀析出，待反应结束后，将溶液冷却，沉淀析出。
5. 比色，用分光光度计在特定波长下测定溶液的吸光度，根据标准曲线计算出还原糖的含量。
以上两种方法均是通过还原糖与硫酸铜发生反应生成沉淀，再通过比色法测定沉淀的吸光度来计算还原糖的含量。
在具体操作时，需要注意样品的处理、试剂的配制、反应条件的控制以及仪器的使用等细节，以确保测定结果的准确性和可靠性。
总结，硫酸铜比色法和硼酸硫酸铜比色法是常用的测定还原糖的方法，通过与硫酸铜发生反应生成沉淀，再通过比色法测定沉淀的吸光度来计算还原糖的含量。
在实际操作中，需要严格按照方法步骤进行操作，以获得准确可靠的测定结果。
还原糖的测定
还原糖的测定（直接滴定法） 还原糖的测定（直接滴定法） 1 原理样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定标定过的碱性酒石酸铜液，以次甲基蓝 作指示剂，根据样品液与标准葡萄糖消耗体积，计算还原糖量。
2 试剂2.1 碱性酒石酸铜甲液： 称取 15g 硫酸铜(CuSO4·5H2O)及 0.05g 次甲基蓝，溶于水中并稀 释至 1000ml。
2.2 碱性酒石酸铜乙液：称取 50g 酒石酸钾钠及 75g 氢氧化钠，溶于水中，再加入 4g 亚 铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至 500ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
2.3 盐酸。
2.4 葡萄糖标准溶液：精密称取 1.000g 经过 98～100℃干燥至恒量的纯葡萄糖，加水溶 解后加入 5ml 盐酸，并以水稀释至 1000ml。
此溶液每毫升相当于 1mg 葡萄糖。
3 操作方法3.1 样品处理：吸取 2～10 ml 液体样品，置于 100 ml 容量瓶中，加 50 ml 水，摇匀。
边 摇边慢慢加入 5 ml 乙酸锌溶液及 5 ml 亚铁氢化钾溶液，加水至刻度，混匀。
静置 30 min， 用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
（注意：乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等， 使它们形成沉淀，经过滤除去。
如果钙离子过多时，易与葡萄糖、果糖生成络合物，使滴定 速度缓慢；从而结果偏低，可向样品中加入草酸粉，与钙结合，形成沉淀并过滤。
） 3.2 标定碱性酒石酸铜溶液：吸取 5.0ml 碱性酒石酸铜甲液及 5.0ml 乙液，置于 150ml 锥形瓶中，从滴定管滴加约 9ml 葡萄糖标准溶液，控制在 2min 内加热至沸，趁沸以每两秒 1 滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖标准 溶液的总体积，同时平行操作三份，取其平均值，计算每 10ml(甲、乙液各 5ml)碱性酒石酸 铜溶液相当于葡萄糖的质量(mg)。
（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原 来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。
还原糖的检测研究方法
还原糖的检测研究方法
还原糖的检测研究方法主要包括以下几种：
1. 比色法：将还原糖与金属离子（如铜离子）反应生成有色产物。
该方法常用的还原糖指示剂有费林试剂和巴西林试剂，可以通过比色反应的颜色强度来定量分析还原糖的含量。
2. 电化学法：利用还原糖在电极上发生电化学反应，通过测量电流或电势的变化来定量分析还原糖的含量。
常用的电化学方法包括循环伏安法、方波伏安法和安培法。
3. 高效液相色谱法（HPLC）：通过将样品中的还原糖与某种反应试剂或色谱柱进行反应，在一定的条件下，测定生成物的色谱峰面积或峰高值与还原糖的含量成比例关系，以定量分析还原糖的含量。
4. 酶法：利用特定的酶催化还原糖与底物之间的反应，产生可测量的产物。
常用的酶法包括葡萄糖氧化酶法、葡萄糖去氢酶法和葡萄糖酸化酶法等。
5. 光度法：还原糖在酸性条件下能够与某些试剂发生特定的吸收峰，在特定波长下测量吸光度来定量分析还原糖的含量。
常用的试剂有安东氏试剂和费林试剂。
这些方法在还原糖的检测研究中应用广泛，可以根据具体实验需求选择合适的方
法进行研究。
还原糖的测定方法
还原糖的测定方法
还原糖是一种重要的碳水化合物，广泛存在于植物和动物体内。
它在食品加工中起着重要作用，也是一种重要的营养物质。
因此，
准确测定还原糖的含量对于食品加工和营养评估具有重要意义。
下
面将介绍几种常用的还原糖测定方法。
首先，最常用的还原糖测定方法是费林试剂法。
该方法利用费
林试剂与还原糖发生化学反应，生成可见的蓝色产物，通过比色法
测定产物的光密度来计算还原糖的含量。
费林试剂法操作简便，结
果准确，广泛应用于食品工业和科研领域。
其次，还原糖的测定方法还包括硫酸铜法。
该方法利用硫酸铜
与还原糖在碱性条件下发生化学反应，产生沉淀物，通过沉淀物的
重量来计算还原糖的含量。
硫酸铜法操作简单，结果准确，适用于
各种类型的食品样品。
此外，还原糖的测定方法还包括酚酞法。
该方法利用酚酞与还
原糖在碱性条件下发生化学反应，产生可见的红色产物，通过比色
法测定产物的光密度来计算还原糖的含量。
酚酞法操作简便，结果
准确，适用于各种类型的食品样品。
最后，还原糖的测定方法还包括高效液相色谱法。
该方法利用高效液相色谱仪对食品样品中的还原糖进行分离和测定，具有分离效果好、分析速度快、准确度高的优点，适用于各种类型的食品样品。
综上所述，还原糖的测定方法多种多样，各有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据样品的特点和实验条件选择合适的测定方法，以获得准确的测定结果。
希望本文介绍的内容对您有所帮助。
还原糖检测方法
还原糖检测方法
还原糖是指能够还原氧化铜溶液的单糖和部分双糖，如葡萄糖、果糖、麦芽糖等。
还原糖检测方法是一种常见的食品分析方法，也被广泛应
用于生物医学领域和环境监测中。
常用的还原糖检测方法有以下几种：
1. 贝氏试剂法
贝氏试剂法是一种常用的还原糖检测方法。
该方法利用还原糖与碱性
铜酸钠反应，生成红色沉淀，沉淀的颜色与还原糖的浓度成正比。
该
方法操作简单、灵敏度高，但对于一些其他物质的干扰较大。
2. 亚甲蓝法
亚甲蓝法是一种比贝氏试剂法更为灵敏的还原糖检测方法。
该方法利
用还原糖与亚甲蓝反应，生成蓝色复合物，复合物的颜色与还原糖的
浓度成正比。
该方法灵敏度高、操作简单，但对于一些其他物质的干
扰也较大。
3. 酚硫酸法
酚硫酸法是一种常用的还原糖检测方法。
该方法利用还原糖与酚硫酸反应，生成紫色复合物，复合物的颜色与还原糖的浓度成正比。
该方法操作简单、灵敏度较高，但对于一些其他物质的干扰也较大。
4. 酶法
酶法是一种常用的还原糖检测方法。
该方法利用还原糖与葡萄糖氧化酶反应，生成过氧化氢和酮酸，过氧化氢与间苯二酚反应生成紫色化合物，化合物的颜色与还原糖的浓度成正比。
该方法灵敏度高、特异性强，但操作较为复杂。
总的来说，还原糖检测方法各有优缺点，选择合适的方法需要根据具体情况进行考虑。
在实际应用中，还原糖检测方法可以用于食品中还原糖的含量测定，也可以用于生物医学领域和环境监测中。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
还原糖的测定方法食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1）滴定管（2） 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3）真空泵（4）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g 硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
4.5 碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。
4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
5. 操作方法5.1 样品处理：5.1.1 乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。
加入10 ml碱性酒石酸铜甲液及4 ml1mol/L氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。
静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
（注：此步骤目的是沉淀蛋白）5.1.2 酒精性饮料：吸取100 ml样品，置于蒸发皿中，用1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后（注：如果蒸发时间过长，应注意保持溶液pH为中性），移入250 ml容量瓶中。
加50 ml水，混匀。
以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。
5.1.3 含多量淀粉的食品：称取2～10 g样品，置于250 ml容量瓶中，加200 ml水，在45℃水浴中加热1 h，并时时振摇。
（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在高温条件下可糊化、水解，影响检测结果。
）冷却后加水至刻度，混匀，静置。
吸取200 ml 上清液于另一250 ml容量瓶中，以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。
5.1.4 含有脂肪的食品：称取2～10 g样品，先用乙醚或石油醚淋洗3次，去除醚层。
加入50ml 水混匀，以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。
5.1.5 汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取100 ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250 ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，备用。
5.2 样品测定：吸取50ml处理后的样品溶液，于400ml烧杯中，加入25ml碱性酒石酸铜甲液及25ml乙液，于烧杯上盖一表面皿，加热，控制在4min内沸腾，再准确煮沸2min，乘热用铺好石棉的古氏坩埚或G4垂融坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不成碱性为止。
（注：还原糖与碱性酒石酸铜试剂的反应一定要在沸腾状态下进行，沸腾时间需严格控制。
煮沸的溶液应保持蓝色，如果蓝色消失，说明还原糖含量过高，应将样品溶液稀释后重做。
）将古氏坩埚或垂融坩埚放回原400ml烧杯中，加25 ml硫酸铁溶液及25ml水，用玻棒搅拌使氧化亚铜完全溶解，以0.1mol/L高锰酸钾标准液滴定至微红色为终点。
同时吸取50ml水，加与测样品时相同量的碱性酒石酸铜甲、乙液，硫酸铁溶液及水，按同一方法做试剂空白实验。
6. 计算：X1=（V-V0）×N×71.54 （1）式中： X1--样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量，mg；V--测定用样品液消耗高锰酸钾标准液的体积，ml；V0--试剂空白消耗高锰酸钾标准液的体积，ml；N--高锰酸钾标准溶液的浓度；71.54--1ml 1mol/L高锰酸钾溶液相当于氧化亚铜的质量，mg。
根据（1）式中计算所得氧化亚铜质量，查附表"氧化亚铜质量相当于葡萄糖、果糖、乳糖、转化糖的质量表"，再计算样品中还原糖含量。
X2=（m1×V2）∕（m2×V1）×（100∕1000） (2)式中： X2--样品中还原糖的含量，g/100g（g/100ml）；m1--查表得还原糖质量，mg；m2--样品质量（或体积）， g（ml）；V1--测定用样品处理液的体积，ml；V2--样品处理后的总体积，ml。
7.举例：称取某食物样品3.00g，经过处理后用水定容至250ml。
取50ml进行测定，消耗0.1003 mol/L 高锰酸钾标准液5.20ml，同时测试剂空白为0.36ml，则样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量为：X1（mg） =（5.20-0.36）×0.1003×71.54 = 34.73查表得还原糖质量为相当于葡萄糖16.22 mg，样品中还原糖含量（以葡萄糖计）为：X2（g/100g）=（16.22×250）∕（3.00×50）×（100∕1000）= 2.708.注释：本法用碱性酒石酸铜溶液作为氧化剂。
由于硫酸铜与氢氧化钠反应可生成氢氧化铜沉淀，氢氧化铜沉淀可被酒石酸钾钠缓慢还原，析出少量氧化亚铜沉淀，使氧化亚铜计量发生误差，所以甲、乙试剂要分别配制及贮藏，用时等量混合。
二、直接滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，在加热条件下，直接滴定已标定过的费林氏液，费林氏液被还原析出氧化亚铜后，过量的还原糖立即将次甲基蓝还原，使蓝色褪色。
根据样品消耗体积，计算还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本方法适用于所有食品中还原糖的检测。
检出限0.1mg。
3.主要仪器滴定管4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）费林甲液：称取15 g硫酸铜（CuSO4·5H2O），及0.05 g次甲基蓝，溶于水中并稀释至1 L。
（2）费林乙液：称取50 g酒石酸钾钠与75 g氢氧化钠，溶于水中，再加入4 g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至500 ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
（3）乙酸锌溶液：称取21.9 g乙酸锌，加3 ml冰乙酸，加水溶解并稀释至100 ml。
（4）亚铁氰化钾溶液。
称取10.6g亚铁氰化钾，用水溶解并稀释至100ml。
（5）盐酸。
（6）葡萄糖标准溶液：精密称取1.000 g经过80 ℃干燥至恒量的葡萄糖（纯度在99%以上），加水溶解后加入5 ml盐酸，并以水稀释至1 L。
此溶液相当于1 mg/ml葡萄糖。
（注：加盐酸的目的是防腐，标准溶液也可用饱和苯甲酸溶液配制）5.操作方法5.1样品处理：5.1.1乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于100 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。
边摇边慢慢加入5 ml乙酸锌溶液及5 ml亚铁氢化钾溶液，加水至刻度，混匀。
静置30 min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。
（注意：乙酸锌可去除蛋白质、鞣质、树脂等，使它们形成沉淀，经过滤除去。
如果钙离子过多时，易与葡萄糖、果糖生成络合物，使滴定速度缓慢；从而结果偏低，可向样品中加入草酸粉，与钙结合，形成沉淀并过滤。
）5.1.2酒精性饮料：吸取50 ml样品，置于蒸发皿中，用1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后，移入100 ml容量瓶中。
加25 ml水，混匀。
以下按4.1.1自"加5 ml乙酸锌溶液"起依法操作。
5.1.3含多量淀粉的食品：称取2～5 g样品，置于100 ml容量瓶中，加50 ml水，在45℃水浴中加热1 h，并时时振摇（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在高温条件下可糊化、水解，影响检测结果。
）。
冷后加水至刻度，混匀，静置。
吸取50 ml上清液于另一100 ml容量瓶中，以下按4.1.1自"5 ml乙酸锌溶液"起依法操作。
5.1.4汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取50 ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入100 ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，备用。
（注意：样品中稀释的还原糖最终浓度应接近于葡萄糖标准液的浓度。
）5. 2标定费林氏液溶液：吸取5.0 ml费林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中（注意：甲液与乙液混合可生成氧化亚铜沉淀，应将甲液加入乙液，使开始生成的氧化亚铜沉淀重溶），加水10 ml，加入玻璃珠2粒，从滴定管滴加约9 ml葡萄糖标准溶液，控制在2 min内加热至沸，趁沸以每两秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液兰色刚好褪去并出现淡黄色为终点，记录消耗的葡萄糖标准溶液总体积，平行操作三份，取其平均值，计算每10 ml（甲、乙液各5 ml）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量（mg）。
（注意：还原的次甲基蓝易被空气中的氧氧化，恢复成原来的蓝色，所以滴定过程中必须保持溶液成沸腾状态，并且避免滴定时间过长。
）5.3样品溶液预测：吸取5.0 ml费林氏甲液及5.0 ml乙液，置于150 ml锥形瓶中，加水10 ml，加入玻璃珠2粒，控制在2 min内加热至沸，趁沸以先快后慢的速度，从滴定管中滴加样品溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每秒1滴的速度滴定，直至溶液兰色褪去，出现亮黄色为终点。
如果样品液颜色较深，滴定终点则为兰色褪去出现明亮颜色（如亮红），记录消耗样液的总体积。
（注意：如果滴定液的颜色变浅后复又变深，说明滴定过量，需重新滴定。