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EMSA实验详情

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EMSA实验详情Electrophoretic Mobility Shift Assay--电泳迁移率检测点击次数:137 发表于:2008-06-18 14:53转载请注明来⾃丁⾹园来源:互联⽹凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)是⼀种检测蛋⽩质和DNA序列相互结合的技术,最初⽤于研究DNA结合蛋⽩和其相关的DNA结合序列相互作⽤,可⽤于定性和定量分析。

这⼀技术⽬前已⽤于研究RNA结合蛋⽩和特定的RNA序列的相互作⽤,已经成为转录因⼦研究的经典⽅法。

其基本原理是蛋⽩质可以与末端标记的核酸探针结合,电泳时这种复合物⽐⽆蛋⽩结合的探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后。

该⽅法可⽤于检测DNA结合蛋⽩、RNA结合蛋⽩,并可通过加⼊特异性的抗体(supershift)来检测特定的蛋⽩质,并可进⾏未知蛋⽩的鉴定。

⽣物体内DNA转录成RNA是基因表达的关键过程,基因表达调控主要发⽣在转录⽔平。

近年来,基因分⼦⽣物学研究领域的趋势之⼀是逐渐从基因结构和功能分析转到基因顺式作⽤元件和转录因⼦及其转录调控机理上,对基因转录调控的研究将是今后相当长⼀段时期内功能基因组学研究的热点之⼀。

在转录⽔平,基因的转录⾏为是由顺式作⽤元件(cis-acting elements)和反式作⽤因⼦(trans-acting factors)(即转录因⼦)相互作⽤调控的,因此要探讨基因的表达调控规律,分离、鉴定基因的位点控制区(loci control region,LCR)中顺式作⽤元件和相应转录因⼦⾄关重要。

但仅仅如此还不够,对于基因表达调控,必须从三个层次展开:⼀是分离和鉴定基因5'端核⼼启动⼦等顺式作⽤元件,⼆是分离和鉴定与各顺式作⽤元件相对应的转录因⼦,三是检测各顺式作⽤元件与对应转录因⼦的相互作⽤。

鉴定顺式调控元件和转录因⼦是研究得⽐较多的内容,⽽对于顺式作⽤元件与对应转录因⼦的相互作⽤这个层次的研究相对较为薄弱。

emsa实验原理

emsa实验原理

emsa实验原理
实验原理:
EMSA(Electrophoretic Mobility Shift Assay,电泳迁移位移测
定法)是一种常用于研究DNA与蛋白质之间相互作用的实验
方法。

该方法通过电泳将带有特定序列的DNA与目标蛋白质
结合形成复合物,然后观察复合物在凝胶上的迁移行为,以间接判断DNA与蛋白质间的相互作用。

EMSA的基本原理是,DNA分子带有负电荷,而蛋白质带有
正电荷。

当DNA与蛋白质结合形成复合物后,复合物的总电
荷变为负电荷,从而使复合物在电场作用下具有较小的电泳迁移率。

而未结合的自由DNA分子则具有较大的迁移率。

因此,通过比较复合物与自由DNA的迁移位移差异,可以确定
DNA与蛋白质之间的相互作用情况。

实施EMSA实验时,通常将目标DNA序列标记上放射性同位
素或荧光染料,以便于检测。

标记后的DNA与目标蛋白质混
合并孵育一段时间,使其结合形成复合物。

接着,将混合物加载到凝胶上进行电泳分离。

随后,凝胶经过一定时间的电泳,蛋白- DNA复合物与自由DNA分子在凝胶中定位不同,可以
通过放射自显影或者荧光成像等方法来检测、定量复合物及自由DNA的存在与否。

总结来说,EMSA是一种通过观察DNA与蛋白质结合复合物
在电泳分离过程中的差异来研究DNA与蛋白质之间相互作用
的实验方法。

它可以用于研究转录因子与DNA结合、DNA修复酶与DNA结合等生物学过程。

EMSA原理简介

EMSA原理简介

EMSA实验技术及方法简介实验简介凝胶迁移或电泳迁移率实验(EMSA-electrophoretic mobility shift assay)就是一种研究DNA结合蛋白与其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性与定量分析。

这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白与特定的RNA序列的相互作用。

通常将纯化的蛋白与细胞粗提液与32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温,在非变性的聚丙烯凝胶电泳上,分离复合物与非结合的探针。

DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。

同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同,可就是双链或者就是单链。

当检测如转录调控因子一类的DNA结合蛋白,可用纯化蛋白,部分纯化蛋白,或核细胞抽提液。

在检测RNA结合蛋白时,依据目的RNA结合蛋白的位置,可用纯化或部分纯化的蛋白,也可用核或胞质细胞抽提液。

竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段与寡核苷酸片段(特异), 与其它非相关的片段(非特异),来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。

在竞争的特异与非特异片段的存在下,依据复合物的特点与强度来确定特异结合。

凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA)就是一种检测蛋白质与DNA序列相互结合的技术,最初用于研究DNA结合蛋白与其相关的DNA结合序列相互作用,可用于定性与定量分析。

这一技术目前已用于研究RNA结合蛋白与特定的RNA序列的相互作用。

由于很多研究的TF不具有结合的特异性,所以即使发现TF与被研究的寡核苷酸探针结合,也不表示在体内该TF不能与其它寡核苷酸结合,运用一些生物信息学软件,可以模拟表示TF与基因启动子区寡核苷酸结合的具体情况,发现TF可以与启动子区PUTA TIVE 结合。

同时,由于EMSA在体外不能模拟细胞内众多生物分子的相互作用,比如,某一TF在细胞内由于受到其它TF的协同或者修饰后才能与寡核苷酸结合的话,那么在体外就是不能重现这一结果的。

凝胶迁移阻滞实验(EMSA)实验操作方法及注意事项

凝胶迁移阻滞实验(EMSA)实验操作方法及注意事项

凝胶迁移阻滞实验(EMSA)实验操作方法及注意事项凝胶迁移阻滞实验(EMSA)转载丁香园大神的帖子!非常详细!EMSA实验技术作为一个经典的DNA/protein,RNA/protein的检测技术,不是很多简单的实验技术可以替代的! EMSA试验技术的独特性和复杂性决定了,要想做成功EMSA试验,拿到阳性结果可总结为一句话: 把握整体,注意细节!EMSA的整体性包括6大点:探针制备(设计,合成,标记,纯化,退火);个人实验设计(时间剃度浓度查阅文献等);核蛋白制备;浓度测定;EMSA 操作;实验时竞争设计. 这六大点都是会直接影响到EMSA试验的成功与否!简介:EMSA ( Electrophoretic Mobility Shift Assay ) 凝胶迁移实验是一种研究DNA与蛋白质或RNA与蛋白质相互作用的常用技术。

这项技术是基于DNA/蛋白质或RNA/蛋白质复合体在聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)中有不同迁移率的原理。

当核转录因子与一条人工合成的特异的DNA或RNA结合后,其在PAGE中的迁移率将小于未结合核蛋白转录因子的DNA,从而检测到活化的与DNA或RNA结合的蛋白转录或调节因子。

发展:从发展史来看,这项实验技术起初是用32P同位素标记人工合成的寡核苷酸形成探针,但是由于同位素的放射性很强,而且半衰期为14天,所以从定购到标记再到做完试验,必须14天完成,种种制约因素导致现代科技发展非同位素EMSA试验技术,这就出现了地高辛标记为探针的非放射EMSA实验技术.在实践中没多久,地高辛标记为探针的非放射EMSA实验技术就暴露了一个严重的缺陷,标记的探真纯化后灵敏度弱,导致实验结果的信号不行,最终就出现了现在的生物素标记探真的EMSA实验技术.配合化学发光技术良好的解决了灵敏度的问题,到目前为止, 生物素标记探真的EMSA实验技术广为应用!EMSA试验成功的关键因素:1.1.试验设计,主要是你用药品刺激细胞时,设计的药品浓度和时间剃度的问题,这个很关键,很多同学不注意这一点,最后试验确实是拿不到阳性结果,比如我一前一个朋友用药物处理SGC7901细胞,就是因为时间点设计的不好EMSA试验结果是阴性的,后来根据自己药品刺激的特性重新设计了刺激时间剃度,最终得到阳性结果! 所以这个设计很关键给一个个人的实验总结希望能帮助大家:一是受体结合类的直接刺激激活信号通路的方法,一般达到EMSA核转运高峰的时间比较短,大概控制在30min-2h之间,很多时候都是在45min和1h达到高峰,当然还有合适的浓度二是是你用的是药物刺激产生受体可能时间会长一些,因为药物还有一个渗透和刺激产生细胞因子的过程.时间可以长一些,主要根据自己的药物刺激特性确定时间点.2.核蛋白样品的制备;制备蛋白样品的关键是:1.注意用专用的和核蛋白抽提试剂来做,才能使制备的核蛋白保持蛋白原有的天然活性和构像.2.掌握好核蛋白的浓度和纯度,尤其是浓度. 能入核的蛋白本来就不是很多,所以核蛋白的浓度往往不会很高,但是EMSA试验对核蛋白的浓度要求还是听高的! 一般要求在1ug/ul以上!有时候稍微低于这个数量级也可以,但是不能太低,否则影响结合反应拿不到结果. 这就要求核蛋白抽提尽量避免核蛋白的损失.同时,一般制备核蛋白的材料为细胞和组织, 细胞要比组织好做的多,最重要的是用细胞得到核蛋白的纯度比组织要高很多. 而组织抽提后杂蛋白相对较多!杂蛋白多会影响试验结果不容易得到EMSA阳性结果!!3.探针的制备:又很多站友都在问我生物素标记到3’端还是5’端,其实我觉得最好还是两端都标记,这样才能更好的提高灵敏度, 国内的标记技术我还不是很了解,我们这边的探真都是国外定做的,还算可以,其制作程序如下: 合成寡核苷酸---标记生物素---纯化---退火合成双链.也是一个比较复杂的过程.4.EMSA实验技术. 这一点主要是操作的细节问题! 下面会更细的谈到.技术要点:关于技术要点,我在这里只提一下关键的几点需要注意的细节操作,其他的照正常程序就可以了!1. 制胶必须是非变性PAGE凝胶,我们实验室一般用6.5%的非变性胶.制胶很重要,直接影响电泳的效果!一般控制在5分钟凝固的效果.10X TBE 1.0ml40% Acrylamide(40%聚丙烯酰胺)3.3ml50% Glycerol(50%甘油)1.0mldH2O(蒸馏水)14.8mlTEMED(四甲基乙二氨)20μl脱气10min10% AP(过硫酸氨)120μl总量20.0ml2. 一般试剂盒包括的试剂l 10X Binding Buffer(10X 结合反应液)(-20 oC)l Poly (dI:dC) (dI:dC)(聚核苷酸竞争物)(-20 oC)l 6X Loading Buffer(10X 上样缓冲液)(4 oC)l Cold oligonucleotides(非标记竞争性寡核苷酸)(-20 oC)l Biotin-Labeled Probe(生物素标记探针)(-20 oC)l Streptavidin-HRP(链霉亲核素-HRP)(4oC)l 2×Blocking Buffer(2×封闭液)(4 oC)l 5×Washing Buffer(5×洗涤液)(4 oC)l Equilibration Solution(平衡液)(4 oC)l Binding-membrane(结合反应膜)(RT)3. 结合反应每次结合反应需1-5μl核蛋白(根据核蛋白浓度而定),根据不同的核提取物浓度加入核提取物用量,用双蒸蒸馏水将终体积调节到15μl (1)结合反应体系:10X 结合反应液1.5μlPoly(dI:dC)(dI:dC) 1.0μl细胞核提取物* ? μl双蒸水* ? μl混匀室温静置20 分钟生物素标记的探针0.5μl总量15μl混匀室温静置20分钟或以上。

凝胶迁移实验(EMSA)看这篇就够了!

凝胶迁移实验(EMSA)看这篇就够了!

凝胶迁移实验(EMSA)看这篇就够了!概念EMSA 称凝聚阻滞实验或凝胶电泳迁移率检测,是一种用于研究转录因子和其相关的 DNA 结合序列相互作用的技术,能对各类转录因子的 DNA 结合活性进行定性和半定量分析,是一项研究细胞信号转导通路的关键实验技术。

这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

原理EMSA 主要基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。

根据实验设计特异性和非特异性探针,当核酸探针与样本蛋白混合孵育时,样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物;这种复合物由于分子量大,在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时迁移较慢,而没有结合蛋白的探针则较快;孵育的样本在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳并转膜后,蛋白-探针复合物会在膜靠前的位置形成一条带,说明有蛋白与目标探针有互作。

分类同位素标记探针特点:特异性强、敏感性高达到10-18mol水平,对操作人员身体有害非同位素标记探针------应用最为广泛特点:无需放射显影,采用生物发光或化学发光原理。

灵敏度高,信号强EMSA的特异性常用实验技术中免疫组化、免疫印迹 ( WesternBlotting) 和 EMSA 均可用于转录因子检测,但三者的侧重点各有不同。

免疫组化或免疫荧光技术可以较准确的反应转录因子的表达部位和表达细胞, Western Blotting 可以精确定量转录因子。

但并非所有转录因子均可以与 DNA 结合以刺激基因转录,唯有EMSA 技术可以反映转录因子是否具有 DNA 结合活性,故 EMSA 是证明细胞信号转导通路最终效应的必要实验技术。

实验步骤(步骤来源与网络仅供参考)探针的标记①:探针标记的反应体系(1.75pmol/μl) 2μlT4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) 1μlNuclease-Free Water 5μl[γ-32P]ATP (3,000Ci/mmol at 10mCi/ml) 1μlT4 Polynucleotide Kinase (5-10u/μl) 1μl总体积10μl②:使用水浴或PCR仪37℃反应10min.③:加一定体积的终止液、混匀、终止探针标记.④:加入一定体积的TE、混匀.探针的纯化(视情况定)对于100μl标记好的探针,加入一定量的醋酸铵和无水乙醇在-70℃沉淀1h或在-20℃沉淀过夜在4℃12000g-16000g 离心30min 弃上清在4℃12000g-16000g 离心1min、吸去残余液体加入一定体积的 TE ,使沉淀溶解探针使用时间一般不超过3天,保存在-20℃实验中常见的问题:1、为什么看不到迁移带?1)蛋白样本提取质量不高,蛋白降解或者提取量不足。

EMSA原理和方法

EMSA原理和方法

凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA)是一种检测蛋白质和DNA序列相互结合的技术,最初用于研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用,可用于定性和定量分析。

这一技术目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

由于很多研究的TF不具有结合的特异性,所以即使发现TF和被研究的寡核苷酸探针结合,也不表示在体内该TF不能和其它寡核苷酸结合,运用一些生物信息学软件,可以模拟表示TF与基因启动子区寡核苷酸结合的具体情况,发现TF可以和启动子区PUTATIVE 结合。

同时,由于EMSA在体外不能模拟细胞内众多生物分子的相互作用,比如,某一TF在细胞内由于受到其它TF的协同或者修饰后才能与寡核苷酸结合的话,那么在体外是不能重现这一结果的。

03 年上一篇关于ChIP方法的介绍文献攻击EMSA 没有考虑细胞内完整自然的染色质结构和调节的影响而受到很大的限制!下面是在一个PROTOCAL1.探针的标记:(1) 如下设置探针标记的反应体系:待标记探针(1.75pmol/微升) 2微升T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) 1微升Nuclease-Free Water 5微升[γ-32P]A TP(3,000Ci/mmol at 10mCi/ml) 1微升T4 Polynucleotide Kinase (5-10u/微升) 1微升总体积10微升按照上述反应体系依次加入各种试剂,加入同位素后,V ortex混匀,再加入T4 Polynucleotide Kinase,混匀。

(2) 使用水浴或PCR仪,37℃反应10分钟。

(3) 加入1微升探针标记终止液,混匀,终止探针标记反应。

(4) 再加入89微升TE,混匀。

此时可以取少量探针用于检测标记的效率。

通常标记的效率在30%以上,即总放射性的30%以上标记到了探针上。

EMSA操作方法(原核表达纯化蛋白)

EMSA操作方法(原核表达纯化蛋白)

三、凝胶滞留试验(EMSA)凝胶迁移滞留试验(electrophoretic mobility shift assays,EMSA)是研究核酸与蛋白质相互作用简单、快速、敏感的方法,目前已经成为转录因子研究的经典方法,并且用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

其基本原理是蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合,电泳时这种复合物比无蛋白结合的自由探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后。

(一)转录因子-标签融合蛋白和标签蛋白的原核表达纯化以GST标签为例。

裂解液:25mM pH7.8Tris-HCl、100mM NaCl、2 mM NaEDTA、1mM DTT和21×Complete Protease InhibitorCocktail。

洗脱液:50 mMpH7.8Tris-HCl、200mM NaCl、1mM DTT、0.02%(v/v)Triton X-100和10 mM还原性谷胱甘肽。

EDTA、1mM DTT和1×Complete 透析液:25mM pH8.0 Tris-HCl、1mM Na2Protease InhibitorCocktail。

1将转化了pGEX-4T-2载体或者pGEX-4T-2-目的基因重组载体的BL21大肠杆菌在5 mL含100 μg mL-1氨苄青霉素的LB培养液中37℃、200 rpm震荡培养12 h。

2 取1 mL菌液加入100 mL 含100 μg mL-1氨苄青霉素的LB培养液中,37℃、200 rpm震荡培养至OD600为0.5左右。

3 加入IPTG至终浓度为0.5 mM,28℃、200 rpm培养6 h。

4 冰上放置10 min,4℃、3000×g离心15 min,收集菌体并称重。

5 每克菌体加入3 mL裂解液,重悬菌体,加入溶菌酶至终浓度为0.5 mgmL-1,在冰上温和地搅动菌液30 min。

6 超声波破碎30 s(破碎10 s停10 s)。

EMSA操作方法(原核表达纯化蛋白)

EMSA操作方法(原核表达纯化蛋白)

三、凝胶滞留试验(EMSA)凝胶迁移滞留试验(electrophoretic mobility shift assays,EMSA)是研究核酸与蛋白质相互作用简单、快速、敏感的方法,目前已经成为转录因子研究的经典方法,并且用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

其基本原理是蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合,电泳时这种复合物比无蛋白结合的自由探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后。

(一)转录因子-标签融合蛋白和标签蛋白的原核表达纯化以GST标签为例。

裂解液:25mM pH7.8Tris-HCl、100mM NaCl、2 mM NaEDTA、1mM DTT和21×Complete Protease InhibitorCocktail。

洗脱液:50 mMpH7.8Tris-HCl、200mM NaCl、1mM DTT、0.02%(v/v)Triton X-100和10 mM还原性谷胱甘肽。

EDTA、1mM DTT和1×Complete 透析液:25mM pH8.0 Tris-HCl、1mM Na2Protease InhibitorCocktail。

1将转化了pGEX-4T-2载体或者pGEX-4T-2-目的基因重组载体的BL21大肠杆菌在5 mL含100 µg mL-1氨苄青霉素的LB培养液中37℃、200 rpm震荡培养12 h。

2 取1 mL菌液加入100 mL 含100 µg mL-1氨苄青霉素的LB培养液中,37℃、200 rpm震荡培养至OD600为0.5左右。

3 加入IPTG至终浓度为0.5 mM,28℃、200 rpm培养6 h。

4 冰上放置10 min,4℃、3000×g离心15 min,收集菌体并称重。

5 每克菌体加入3 mL裂解液,重悬菌体,加入溶菌酶至终浓度为0.5 mgmL-1,在冰上温和地搅动菌液30 min。

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2、检查第三国的背景
EU registered ships are often manned by seafarers who are not nationals of EU Member States. This fact needs to be taken into account when determining the best ways of ensuring that crew members on board EU registered ships are appropriately educated and trained. The EU legislation introduced a specific procedure based on which the assessment of compliance with the requirements of the International Maritime Organization's STCW Convention (Standards of Training, Certification and Watchkeeping) by non-EU countries is conducted by the European Commission for a wider recognition of their certificates of competency by EU Member States. With the support of EMSA, the European Commission assesses seafarer certification procedures and maritime education and training (MET) establishments in non-EU countries on behalf of EU Member States and in line with the STCW Convention. All assessments take place based on a five year cycle so that, in addition to the occasional evaluation of proposed new countries, each country that has already been recognised at EU level will be inspected on a regular basis.
这和我们的习惯思维和做法不太一样,
我们审核时往往习惯于请受审方把一
个时间段内的记录统统都拿出来,自
己随意抽查一份。也即我们习惯于关
注“面”。
CMSA
检查方案(中英文)
LNMSA DMU/ SMU
检查一览表
序号 1 2
检查年份 2006 2007
检查国家数 9 8
3 4
5 6 7
2008 2009
countries in developing and implementing EU laws on maritime safety, pollution from shipping and maritime security. It also has responsibilities in the areas of preventing and responding to oil spills,
In practice, the inspections not only ensure that the STCW standards are properly implemented and applied, but also enable the inspected entities to identify areas which may need improvement. Both tasks together require 10 to 12 inspections per year to be carried out by the EMSA team. Maritime administrations and MET establishments in more than 80 countries are currently inspected, thus covering more than 90% of seafarers operating in EU waters, as well as all others operating on EU registered ships around the world.
3、检查的依据
检查的依据
• 根据经修正的《1978年海员培训、发证和书的承认”的规定,一缔约国可以承认另一缔约
国签发给船长、高级船员或无线电操作员的证书, 但需要对该缔约国进行评价,其中可包括对设施和 程序的检查,确认STCW公约有关适任标准、培训、 发证以及质量标准的要求得以完全遵守。 (国际准 则,检查和被检查的共同依据)
检查的依据
• STCW公约正文第I条“公约的一般义务”还规定,各缔约国承 担颁布一切必要的法律、法令、命令和规则,并采取一切必 要的其他措施,使公约充分和完全生效。欧盟议会和欧盟委 员会以立法的形式将STCW公约要求的检查评估成为强制性要 求,并于2008年11月19日颁布了经修订的2008/106/EC号行政 指令(on the Minimum Level of Training of Seafarers), 规定在欧盟成员国认可某一非欧盟成员国签发的船员适任证 书前,需要接受EMSA组织的检查评估,以确保该国海员教育、 培训、考试、评估和发证以及质量标准符合STCW公约的相关 要求。
面临的压力和困惑
关系到欧盟对中国的评价,压力和责任重大;
没有任何经验可以借鉴;
EMSA是按履约要求审核,还是按照体系审核 的原则审核我们拿捏不准。 新旧公约交替时期,审核的边界难以勘划; 大体系与小体系关系如何把握;
检查的思路
检查评估思路非常清晰,时时刻刻都体现了体系闭环的 原理。检查评估的整体思路是:STCW公约要求——是否 转化为国内立法——是否纳入质量体系控制——验证相
组织机构
• B.1.3 Training of Seafarers • To conduct inspections, using a common methodology, in Member States and third countries under Directive 2001/25/EC; to maintain an information system on education, training and certification of seafarers and to assist the Commission on related matters.
关记录。
具体检查评估某一项内容时(如认可和批准航海院校的 培训课程),往往依照否有标准(工作依据)——如何 执行的——查看相关记录——是否有不足——是否采取 了纠正和预防措施——是否验证了纠正效果的思路进行
审核,找一个切入点沿着各个环节“一条线”一查到底。
检查的思路
EMSA审核员更关注“点”和“线”。
vessel monitoring and long-range identification and
tracking of vessels.
EMSA in a Nutshell:
Tagline: Quality shipping, safer seas, cleaner oceans Set up in 2002, over 200 employees
EMSA对我国履行STCW公约的检查评估简介
2013年3月25日
饶 滚 金
船员考试中心 教授级高工
1、认识EMSA
European Maritime Safety Agency (EMSA) Based in Lisbon, the EMSA provides technical
assistance and support to the EU and member
Headquartered in Lisbon, Portugal Budget (2011): € 50.85m
One of 32 Agencies of the EU
• Mission Statements • EMSA's mission is to reduce the risk of maritime accidents, marine pollution from ships and the loss of human life at sea.
2010 2011 2012
8 10
11 14 6
4、检查的实施
Before travelling to a selected country, EMSA inspectors conduct a detailed analysis of the relevant national provisions adopted to implement the STCW Convention. After arriving in the country, the inspection plan involves visits to different parts of the national administrations responsible for setting-up and maintaining the maritime education, training and certification system of seafarers. Coupled with the visits to administrations are visits to the individual MET establishments. These allow EMSA inspectors to verify the system in place, including: the quality of the systems and procedures they have set in place; their operating methods and; the human resources and equipment they have assigned to the different activities.
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