中药饮片药典方法——含量HPLC检验方法确认实施方案(参考)

中药饮片药典方法——含量HPLC检验方法确认实施方案(参考)————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：款冬花中款冬酮含量HPLC检验方法确认方案方案编号：XXXX确认方案审批表职能部门/职务签名日期起草QC主管审核质量管理部副经理生产负责人批准质量负责人XXXX有限公司XX年xx月目录1、确认目的 (5)2、确认委员会、项目组主要成员及其职责 (5)3、文件控制 (3)4、风险识别、分析、评估与控制 (3)5、确认时间 (6)6、试剂与样品： (6)7、仪器及色谱条件 (6)8、确认内容及可接受标准 (7)9、实验步骤与结果 (5)10、偏差处理 (6)11、确认失败处理 (6)12、检验方法的再新确认 (6)13、确认结果评定与结论 (7)附：确认方案修改申请及批准书1、确认目的中国药典2010年版规定款冬花中款冬酮含量测定，采用高效液相色谱法分离、紫外检测器检测的方法。

本公司QC部门检验时使用的是岛津型高效液相色谱仪。

配有双元泵、柱温箱及紫外检测器。

为保证本公司QC部门用此方法检测款冬花中款冬酮含量能够达到中国药典2010年版的检测要求，须对高效液相色谱法测定款冬花中款冬酮含量的方法进行确认。

2、确认委员会、项目组主要成员及其职责部门/职务确认工作中职务姓名职责质量负责人确认委员会主任负责确认方案及报告的批准。

生产负责人确认委员会副主任负责确认方案及报告的审核。

质量管理部副经理项目经理负责协调领导确认工作，负责确认方案审核、确认报告的审核等各项工作。

QC主管项目主管确认方案起草、确认数据的审查、确认工作协调安排。

QC 组员负责取样及提供确认所需检测数据，实验记录，并对试验结果进行分析。

QC 组员负责收集各项确认、实验记录，并对试验结果进行分析。

QC 组员确认过程监督检查，确保结果可靠性。

3、文件控制下列文件资料齐全，并且符合GMP要求文件/资料存放地点岛津XX型高效液相色谱仪操作规程编号：xxxxxQC实验室款冬花检验操作xxx编号：xxxxxQC实验室中国药典2010年版QC实验室4、风险识别、分析、评估与控制风险问题描述款冬花中款冬酮含量HPLC检验方法确认的质量风险风险评估小组xxxxx风险简述(可附件) 从人、机、料、法、环五个方面对确认过程进行风险识别、分析及控制，对高风险项目采取控制措施，使其降低到可接受水平。

风险管理工具RRF-风险等级过滤法分度(可附件)文字高、中、低来衡量风险的严重性和可能性矩阵(可附件) 行动限使用标准矩阵“当高风险时,需采取行动”(中风险时考虑)风险项目风险点现有控制措施风险分析和评估建议行动或风险控制措施负责人计划完成日期可能性严重性可检测性评估结果“人员”风险分析员技能不熟练；不够细心导致不必要失误产已制定相应的操作规程和检验复核制度。

中中/ 中对参与方法确认的分析员进行仪器操作与维护规确认开始前仪器风险高效液相未经校正确认。

已制定高效液相校验管理文件。

低高/ 中及时进行企业自校和送计量部门校正。

按规定效期执行试剂试药风险试剂试药保存不当或过期；称量、溶液配制过程的已制定试剂试药、溶液配制等管理规程。

低高/ 中试剂试药定期进行检查；称量、溶液配制等过程要进行复核。

按文件规定执行操作间温湿度风险操作间温湿度波动大导致仪器不稳定。

操作间相对密闭，并安装有空调。

中中/ 中分析过程中减少频繁开关门和长时间开启门；避免人员走动时触碰仪器。

随时评估结果经过风险小组的评估，认为在款冬花中款冬酮含量HPLC检验方法确认过程中不存在高水平风险；有4个中等水平风险可能会对确认结果有效性有影响，在确认过程和日常运行中需要加强监管；其他未识别风险点皆认作低风险(可接受风险)。

5、确认时间需在2015 年1月10日前完成。

6、试剂与样品：试剂：甲醇（HPLC级），批号：，生产厂家：；乙醇（xx级），批号：，生产厂家：；纯化水，批号：，生产厂家：；款冬酮对照品（来源：，批号：，有效期）样品款冬花批号：，来源：；7、仪器及色谱条件7.1 仪器设备名称/型号生产厂家设备编号校验周期校验单位校验日期7.2 色谱条件：流动相：甲醇—水(85:15)检测波长：220nm色谱柱：Agilent XDB-C18 ，4.6mm×150mm, 5μ柱温：25℃流速：1.0ml/min进样量：20μl运行时间30分钟8、确认内容及可接受标准系统适用性：在对照品溶液色谱图中，以款冬酮峰计理论板数不得小于5000；专属性：在供试品溶液色谱图中，款冬酮峰与相邻杂质峰的分离度应不小于1.5；精密度（重复性）：供试品溶液的平行进样（至少6次），按外标法计算款冬酮含量，其相对标准偏差不得大于1.0%。

9、实验步骤与结果9.1 流动相制备：流动相：按甲醇：水=85:15混合，摇匀，超声脱气；或甲醇、水各自脱气后按85:15比例输送混合成流动性。

9.2 系统适应性试验：对照品溶液的制备:取款冬酮对照品约2.5mg,精密称定,置50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为50µg/ml的溶液。

操作方法：取对照品溶液连续6次按方法规定的色谱条件进样20μl，记录色谱图（需附在确认报告中）。

根据保留时间和半峰宽，利用计算机自动积分系统计算分离度及塔板数；计算相对标准偏差。

表I 系统适应性试验数据进样号款冬酮峰款冬酮峰和相邻峰的分离度RS理论塔板数，N拖尾因子，T RT 峰面积123456平均RSD，%标准RSD ≤1% ≤2%结论：以款冬酮峰计理论板数为（不得小于5000），符合规定标准。

执行人：日期复核人：日期9.3 专属性试验（分离度试验）供试品溶液的制备：取款冬花样品粉末(过四号筛约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入乙醇20ml,称定重量,超声处理(功率200W,频率40kHz)1小时,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。

操作方法：取供试品溶液连续6次按方法规定的色谱条件进样20μl，记录色谱图（需附在确认报告中）。

根据保留时间和半峰宽，利用计算机自动积分系统计算分离度（选择第1次进样得到的分离度）。

结论：款冬酮峰与相邻峰的分离度Rf为（应不小于1.5），符合规定标准。

执行人：日期复核人：日期9.4 精密度试验（重复性）：操作方法：选择系统适用性试验最后2次进样得到的结果和分离度试验6次得到的结果，按外标法计算出样品中款冬酮的含量，其相对标准偏差应不得过1.0%。

表Ⅱ精密度试验结果测定次数 1 2 3 4 5 6含量（≥0.070%）相对标准偏差%注：含量按干燥品计，款冬花水分（≤13.0%）：结论：本法的精密度RSD小于1.0%，符合规定。

执行人：日期复核人：日期10. 偏差处理在确认中发现的任何偏差均应记录，并按《偏差调查和处理管理规程》进行处理，偏差对确认结果是否影响，影响多大，应经过确认领导小组进行最后评估和评价。

对于特殊的检测，如果有“重大”偏差，经过确认领导小组最后评估检测无效的，QC必须修订确认方案重新进行确认试验。

结果报告：11. 确认失败处理如果在确认过程中出现的偏差无法查明原因，或确认结果达不到确认接受标准中设定的要求，则认为本次确认失败。

应在对失败原因做出正确的调查并处理后重新进行确认。

结果报告：12. 检验方法的再确认在以下情况之一必须进行再确认a、当分析方法发生较大变更需要再确认；b、在日常监测中发现分析方法异常需进行再确认；c、再确认时应按照前期确认采用的方法对检验分析方法进行再确认，或根据实际情况修订补充确认方案后进行再确认。

13、确认结果评定与结论13.1确认结果汇总和评价：确认项目小组成员对确认过程进行记录和汇总分析；项目主管对确认结果进行分析评价，并做出确认结论。

结论：确认项目主管/日期：13.2确认报告的审批：确认报告由项目经理和确认委员会审核批准并在确认报告封面的审批栏中签名，同时由确认委员会主任签发确认合格证书。

个人收集整理，勿做商业用途XXXX中药有限公司确认方案修改申请及批准书确认方案名称确认方案编号修改原因及依据修改内容修改后方案起草人/日期：审核人（QA）/日期：批准意见项目经理/日期：。