黄芩苷提取条件的实验设计(精)
黄芩苷提取条件的实验设计(精)
黄芩苷提取条件的实验设计【摘要】目的：优选黄芩苷的提取工艺。
方法：通过正交设计试验，以黄芩苷的得率为指标，考察粒度、温度、超声时间对提取效果的影响。
结果：黄芩苷的最佳提取工艺为0.6~0.9mm的中档片加50%乙醇50倍量，温度60℃，超声振荡15min。
结论：该提取工艺提净率高、简单方便。
【关键词】黄芩；黄芩苷；正交试验黄芩（Radix Scutellariae）为唇形科植物黄芩（Scutellariae baicalensiS Georgi）的干燥根，具有清热燥湿，泻火解毒、止血、安胎的作用［1］。
其主要成分有黄芩苷元（Baicalein）、黄芩苷（Baicalin）、汉黄芩素（Wogonin）,此外尚含β-谷固醇（β-Sitosterol）等,其中黄芩苷是主要有效成分，具有抗菌、消炎之作用［2］。
传统的提取方法有温浸法、煎煮法、加热回流法、索氏法等。
超声波提取法是利用超声波的空化作用加速有效成分浸出的一种新发展起来的技术。
超声方法与传统方法相比较，具有设备简单，提取时间短，提取率高等特点。
本实验利用超声波提取法，设置L9(34)正交试验，以黄芩的含量为指标，紫外法检测，寻求超声提取的最佳提取工艺条件［3］。
1 仪器与试药 V-530型紫外分光光度计；AS 5150A型超声波清洗器；普利赛斯92SM-202A型电子分析天平。
黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所生产，批号：0715-200111）。
黄芩为市售药村，经周口市药检所鉴定。
乙醇为分析纯，水为蒸馏水。
2 方法与结果 2.1 原料的预处理将黄芩净洗切制分为3档，厚度1~2mm为厚档片，0.6~0.9mm为中档片，0.5mm以下的为薄档片。
干燥后分装样品袋中，备用。
2.2 黄芩苷的含量测定方法2.2.1 测定波长的选择精密称取黄芩苷对照品适量，用50%的乙醇溶液配制成为15μg/ml的溶液，以50%乙醇为空白，用V-530型紫外分光光度计，在200~350nm的波长范围内扫描，在278nm波长处有最大吸收。
黄芩苷提取方案110707
1.1黄芩苷结构式1.2黄芩苷的理化性质黄芩苷（Baicalin，BA，C21H18O11）是唇形科植物黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi.）的干燥根中提取的一种黄酮类化合物。
分子量446.35，淡黄色针晶，熔点223-225℃，化学名baicalin 7-O-glucuronide （5,6-dihydroxy-4-oxo-2-bhenyl-4H-1-benzopyran-7-yl），为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮衍生物，水解后产生黄芩素和葡萄糖醛酸，是黄芩主要的有效成分之一。
黄芩苷在不同的溶媒中溶解度差异较大，具有一定的脂溶性，易溶于N,N-二甲基甲酰胺、吡啶中，可溶于碳酸氢钠、碳酸钠、氢氧化钠等碱性溶液中，在甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、水中溶解度分别为1.569、1.458、0.166、0.122、0.16mg/mL，由此可见，黄芩苷在甲醇、乙醇中微溶。
微溶于热冰醋酸，难溶于甲酸、乙酸、丙酮，几乎不溶于水、乙醚、苯、氯仿等。
遇三氯化铁显绿色，遇乙酸铅生成橙红色沉淀，溶于碱及氨水初显黄色，不久则变为黑棕色。
黄芩苷pKa值为5.047，显示其为弱酸性药物。
黄芩苷在趋碱性溶液中极不稳定，在pH﹥3时稳定性也有所下降，故在不考虑其他因素作用下在提取和制剂的生产中其pH值应控制在3-4之间。
黄芩苷在有机溶剂中的稳定性较好，提示体内分析中，萃取溶剂选择余地较大；黄芩苷在生物样品中稳定性较差，尤其在肝匀浆中为最，似乎与肝组织中含有多种且数量巨大的肝药酶有关，故在体内分析时应注意酶的影响。
黄芩苷还可被药材中的酶水解成黄芩素。
1.3实验器材仪器；LDZ5－2离心机、DE－52AA旋转蒸发仪、SHB－B95A型循环水式多用真空泵、恒温水浴锅药材：黄芩试剂：乙醇（60%）、盐酸、氢氧化钠（20%）、乙酸乙酯、丙酮、甲醇1.4黄芩苷的提取（1）准确称取黄芩粗粉200g置于1000ml回流烧瓶中，用4倍量60％乙醇浸泡过夜；（2）次日，90℃回流提取三次（加醇量依次为4，3，2倍），过滤，合并滤液，回收乙醇至无醇味；（3）浓缩液加热至80℃，盐酸调pH＝1-2，保温30min，室温静置，沉淀，离心（4000rpm，15min），取沉淀；（4）沉淀物用10倍量水搅拌成混悬液，加20％NaOH调pH＝7，静置，离心，留上清液；（5）上清液加热至40℃左右，在搅拌下加入等体积乙醇，混匀，静置，离心，取上清液；（6）上清液用盐酸调pH＝1-2，80℃保温30min，室温放置，沉淀，离心，得粗黄芩苷。
黄芩中黄芩苷的提取分离与鉴定修订稿
黄芩中黄芩苷的提取分离与鉴定Coca-cola standardization office【ZZ5AB-ZZSYT-ZZ2C-ZZ682T-ZZT18】药学专业综合实验（二）题目：黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定学院：医药学院班级： xxxxxxxxxxx姓名： xxxxxxxxxxxxxxx学号： xxxxxxxxx黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定黄芩简介：黄芩又名山茶根、黄芩茶、土金茶根；为唇形科植物，以根入药。
有清热燥湿，凉血安胎，解毒等功效。
含多种黄酮类化合物，主要为黄芩甙，黄芩素，汉黄芩甙，汉黄芩素，７-甲氧基黄芩素，７-甲氧基去甲基汉黄芩素，黄芩黄酮Ⅰ，黄芩黄酮Ⅱ等。
主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。
产于河北、辽宁、陕西、山西、山东、内蒙古、黑龙江等。
一、实验目的1掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理、方法及操作要点。
2掌握黄芩苷的结构鉴定原理及方法。
二、实验原理黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物，具有一定的脂溶性和弱酸性，提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液，同时其可在碱性溶液中溶解，形成钠盐，在提取液中加酸酸化，使黄芩苷游离析出。
利用黄芩苷能溶于碱，不溶于酸的性质使之与酸性杂质分离。
三、实验材料与仪器材料：黄芩干燥根仪器：旋转蒸发仪离心沉淀机 200g摇摆式高速中药粉碎机电子天平真空泵抽滤装置圆底烧瓶水浴锅索氏提取器量筒玻璃棒PH试纸试剂：浓盐酸 60%乙醇 40%氢氧化钠 95%乙醇 50%乙醇2mol/l盐酸镁粉二氧化锆枸橼酸三氧化铝四、实验步骤1、黄芩苷的提取、分离黄芩粗粉100g加10倍量水煎煮2次，每次1h过滤4h，抽滤(粗制黄芩苷)2、黄芩苷的鉴定（1）盐酸-镁粉反应：取黄芩苷少许置于试管中，以乙醇1ml水浴微温振摇溶解，加镁粉适量，滴加浓盐酸数滴，观察颜色变化。
（2）锆-枸橼酸反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水2ml置水浴上温热至溶解，加数滴5%二氧化锆溶液，振荡后，观察颜色变化；再加2%枸橼酸试剂，观察颜色变化。
黄芩苷的提取和精制
讨论
• 1、本实验中产率不高，原因可能有：粗粉未浸泡 ；静置时间短；调PH时温度控制不好。 • 2、黄芩苷在一定温度和湿度下能酶水解成黄芩素 及葡萄糖醛酸。黄芩素分子中具有临三酚羟基， 性质不稳定，在空气中易氧化成醌式结构显绿色 。所以在储藏及提取过程中应注意防止黄芩苷的 酶解、氧化，以减少有效成分的破坏。 • 3、在用酸、碱进行提取纯化黄酮类化合物时，应 当注意温度和碱度都不宜过高，以免破坏黄酮类 化合物的母核。酸化时，酸度也不宜过高，否则 酸会与黄酮类化合物生成盐而溶解。
精制
1、加7倍水量，70 ℃氢氧化钠调PH至7 → 盐酸盐酸调PH至6 →加乙醇至含醇量70% →盐酸调PH至1~2 →静置，离心，弃上清 2、沉淀，60倍量甲醇，索氏回流至颜色很 浅→抽滤→浓缩→静置，抽滤，甲醇洗涤 3、沉淀，40倍量甲醇，索氏回流至颜色很 浅→抽滤→浓缩→静置，析出结晶 • 黄芩苷收率：0.132%
Байду номын сангаас
TLC
UV
• 取少量黄芩苷重结晶样品于50ml容量瓶中 加甲醇溶解至颜色微黄，用紫外分光光度 计在200-400nm进行紫外扫描。
最大吸收波长为278nm
IR
• 精确称取0.100g的溴化钾，压片测红外作 为背景，再精确称取0.100g的溴化钾，加 入极少量样品一起研成细粉，压片，测红 外图谱。
微溶于热冰醋酸难溶于甲醇乙醇和丙几乎不溶于水乙醚苯和氯仿等提取1粗粉100g60乙醇90回流提取3次加醇量依次为432倍时间1h30min30min过滤合并滤液减压浓缩至无醇味加热至80盐酸调ph至12保温30min室温静置1h离心弃上清搅拌加入等体积乙醇混匀静置离心弃沉淀3盐酸调ph至1280保温30min静置离心弃上清粗黄芩苷精制1加7倍水量70氢氧化钠调ph至7盐酸盐酸调ph至6加乙醇至含醇量70盐酸调ph至12静置离心弃上清2沉淀60倍量甲醇索氏回流至颜色很浅抽滤浓缩静置抽滤甲醇洗涤3沉淀40倍量甲醇索氏回流至颜色很浅抽滤浓缩静置析出结晶黄芩苷收率
(完整版)黄芩苷提取
项目一天然植物有效成分提取子项目一、黄芩根中黄芩苷的提取1、【项目目的】（1）掌握黄芩苷不同提取工艺和操作要点，不同工艺对产品得率和品质的影响；（2）通过黄芩苷含量检测，掌握定性、定量方法在黄酮类物质检测中的应用；（3）通过对黄芩苷的单因素和正交实验优化，掌握正交方法在植物有效成分提取中的应用；（4）通过黄芩苷的提取工艺优化实训，掌握黄酮类物质提取的一般规律。
2、【项目任务】（1）通过查阅文献，掌握水提法、醇提法在黄芩苷提取中的基本原理；（2）查阅文献设计不同的黄芩苷提取工艺，并结合正交实验进行黄芩苷的提取工艺优化，得到提取得率最大化；（3）查阅文献并结合黄芩苷国标检测方法，对提取中黄芩苷含量进行准确测定；（4）总结黄芩苷提取工艺各环节具体参数，得出最佳工艺条件，并分析存在的问题，各小组以PPT形式作出整体汇报。
3、【项目要求】（1）能够全面准确采用单因素实验对可能影响提取得率的因素进行测定分析，同时确定主要影响因素；（2）在单因素的基础上进行正交分析，确定合适的因素和水平设计正交实验；（3）通过正交分析确定最佳提取工艺条件4、【项目背景】（1）黄芩及黄芩苷简介黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi ）具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎等功效。
其主要成分黄芩苷（Baicalin）是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用，且具有较强的抗癌反应等生理效能。
黄芩苷还能吸收紫外线，清除氧自由基，同时，又能抑制黑色素的生成，是一种很好的功能性美容化妆品原料，具有较高的开发利用前景。
黄芩化学成分研究逐渐为药学和化学工作者所重视，目前，国内对黄芩苷提取工艺的研究有较多报道，其提取方法主要有温浸法、煎煮法、微波法、超滤法等，但如何提高黄芩苷收率和纯度一直是实际生产中存在的问题，缺乏对整个工艺条件进行全面研究，因此，有必要对影响黄芩苷提取工艺及其影响因素作一全面探讨。
黄芩提取物黄芩苷高效液相法
黄芩提取物黄芩苷高效液相法概述黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）是一种传统的中药材，广泛用于治疗炎症、感染和肿瘤等疾病。
黄芩提取物中的黄芩苷（baicalin）是其主要活性成分之一，具有抗氧化、抗菌、抗炎和抗肿瘤等多种药理作用。
因此，开发一种高效的液相色谱法用于测定黄芩提取物中的黄芩苷含量具有重要意义。
实验方法仪器设备•高效液相色谱仪(HPLC)•色谱柱：C18色谱柱•注射器：10μL固定体积注射器•色谱检测器：紫外检测器(UV)•称量仪：电子天平色谱条件•流动相：甲醇 - 水（含0.1%三氟乙酸）•流速：1.0 mL/min•柱温：30°C•紫外检测波长：280 nm样品制备将黄芩提取物粉末取约1 g，加入20 mL甲醇中，用超声波溶解10分钟，然后离心10分钟，取上清液并过滤。
取适量上清液进一步稀释。
校准曲线制备准备一系列浓度不同的黄芩苷标准溶液，分别为0.1 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL、2.5 mg/mL、5 mg/mL。
以10 μL为一次注射量进行色谱分析。
色谱分析将样品和标准溶液以10 μL固定体积注射器注入HPLC系统中进行色谱分析。
记录峰面积，并根据标准曲线计算黄芩苷的含量。
结果与讨论校准曲线根据不同浓度的黄芩苷标准溶液进行HPLC分析，并绘制出峰面积与浓度的关系曲线。
通过回归分析得到拟合方程，并计算相关系数（R^2）来评估拟合效果。
方法验证对黄芩提取物样品进行重复性实验和稳定性实验，评估该方法的重复性和稳定性。
另外，还可以比较该方法与传统方法的结果，评估其准确性和精确度。
样品分析将不同来源的黄芩提取物样品进行HPLC分析，测定其中黄芩苷的含量。
对不同样品的结果进行比较和统计分析，评估不同来源黄芩提取物中黄芩苷的差异性。
结论通过该高效液相色谱法，可以准确、快速地测定黄芩提取物中的黄芩苷含量。
该方法具有较好的重复性、稳定性和准确度，适用于黄芩提取物质量控制和药理研究中的应用。
黄芩苷提取工艺研究
黄芩苷提取工艺研究目的：对现有黄芩苷提取工艺中的水提、酸沉、水洗、醇洗各参数进行优化，为今后黄芩苷的提取和纯化提供参考。
方法：以黄芩苷含量为指标，通过正交设计实验，对影响水提、酸沉、水洗、醇洗工艺的因素进行考察，并进行方差分析。
结果：确定了提取黄芩苷的最佳工艺条件。
结论：该提取工艺合理，黄芩苷收率高，质量易于控制。
[Abstract] Objective: To define the optimal parameters of extracting with water, depositing with acid, washing with water and ethanol in the extracting of baicalin from scutellaria. And to supply a reference for the extraction and purification of baicalin in future. Methods: Using the content of baicalin as an assessing index，the optimum extracting conditions which were about extracting with water, depositing with acid，washing with water and ethanol were selected by orthogonal design andthe analysis of variance. Results: The optimum extracting conditions of baicalin were selected. Conclusion: The extraction technology is reasonable ,the yield of baicalin is high, and the quality is easily controlled.[Key words] Baicalin;Decoctionpieces;Coarse powder; Glacial acetic acid; Ethanol; Ultraviolet spectrophotometry; Analysis of variance黄芩中含多种黄酮类化合物，主要为黄芩苷（baicalin）[1-3]、黄芩苷元（baicalein）、汉黄芩苷（wogonoside），汉黄芩素（wogonin）、黄芩新素（skullcapflavone）I和II[4,5]等, 具有抗菌、抗病毒、抗变态反应、抗炎、抗氧化，增强机体免疫力，镇静与降压，利胆与解痉等作用[6,7]。
黄芩苷的提取与鉴定
天然药物化学实验开题报告黄芩苷的提取及结构鉴定制药112陈菲菲201104040203黄芩苷的提取及结构鉴定一、实验目的1、优选黄芩苷的提取工艺2、掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理、方法及操作要点。
3、掌握黄芩苷的结构鉴定原理及方法二、研究意义黄芩苷的药理活性是多方面的 ,它在清除氧自由基、减轻组织的缺血再灌注损伤、调节免疫、促进细胞凋亡等多方面均有作用 ,随着生物技术的发展以及中药化学成分分离水平的进步 ,黄芩苷在抗氧化、抗肿瘤、抗HIV以及治疗心血管疾病等方面均具有潜在的开发应用价值三、基本原理1、用回流法提取黄芩苷，用酸沉淀法纯化黄芩苷。
2、黄芩苷具有一定脂溶性，具有酸性，可以在盐酸中沉淀出来，黄芩苷为淡黄色针晶，几乎不溶于水，四、实验所用试剂、仪器的型号材料：黄芩干燥根，硅胶G薄层层析板仪器：UV2550紫外可见分光光度计，，旋转蒸发仪，LXJ-Ⅱ离心沉淀机，200g摇摆式高速中药粉碎机，电子天平，循环水式真空泵，抽滤装置，圆底烧瓶（500ml），水浴锅，冷凝管，索氏提取器，层析缸试剂：2mol/L盐酸，60%乙醇，10%氢氧化钠，乙酸乙酯，甲醇，甲酸五、分离方法创新之处中等浓度(50%～70%)的乙醇水溶液其极性与黄芩苷的极性相似便于其溶出，而低浓度（40%及以下的乙醇极性大，杂质的溶出量大大增加，高溶度（90%级以上）的乙醇溶液极性较小，主要用于药材中的挥发油、叶绿素、树脂等的溶出。
因此, 本实验采用了60%的乙醇溶液作为提取溶剂。
六、实验流程及操作方法1、黄芩苷的提取将黄芩干燥根粉碎，称取粗粉100g，装入1L的圆底烧瓶加入4倍量即400ml的60%乙醇，搅拌均匀，90℃回流提取1h。
提取完进行抽滤，将滤渣倒入圆底烧瓶中，加300ml 60%乙醇继续回流30min，重复上一步再回流30min。
合并3次滤液，65℃减压浓缩至无醇味将水液水浴加热到80℃，用2mol/L的盐酸调PH至1~2，保温30min，室温静置12h，沉淀。
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黄芩苷提取条件的实验设计
【摘要】目的：优选黄芩苷的提取工艺。
方法：通过正交设计试验，以黄芩苷的得率为指标，考察粒度、温度、超声时间对提取效果的影响。
结果：黄芩苷的最佳提取工艺为0.6~0.9mm的中档片加50%乙醇50倍量，温度60℃，超声振荡15min。
结论：该提取工艺提净率高、简单方便。
【关键
词】黄芩；黄芩苷；正交试验黄芩（Radix Scutellariae）为唇形科植物黄芩（Scutellariae baicalensiS Georgi）的干燥根，具有清热燥湿，泻火解毒、止血、安胎的作用［1］。
其主要成分有黄芩苷元（Baicalein）、黄芩苷（Baicalin）、汉黄芩素（Wogonin）,此外尚含β-谷固醇（β-Sitosterol）等,其中黄芩苷是主要有效成分，具有抗菌、消炎之作用［2］。
传统的提取方法有温浸法、煎煮法、加热回流法、索氏法等。
超声波提取法是利用超声波的空化作用加速有效成分浸出的一种新发展起来的技术。
超声方法与传统方法相比较，具有设备简单，提取时间短，提取率高等特点。
本实验利用超声波提取法，设置L9(34)正交试验，以黄芩的含量为指标，紫外法检测，寻求超声提取的最佳提取工艺条件［3］。
1 仪器与试
药 V-530型紫外分光光度计；AS 5150A型超声波清洗器；普利赛斯
92SM-202A型电子分析天平。
黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所生产，批号：0715-200111）。
黄芩为市售药村，经周口市药检所鉴定。
乙醇为分析纯，水为蒸馏水。
2 方法与结果 2.1 原料的预处理将黄芩净洗切制分为3档，厚度1~2mm为厚档片，0.6~0.9mm为中档片，0.5mm以下的为薄档片。
干燥后分装样品袋中，备用。
2.2 黄芩苷的含量测定方法2.2.1 测定波长的选择精密称取黄芩苷对照品适量，用50%的乙醇溶液配制成为15μg/ml的溶液，以50%乙醇为空白，用V-530型紫外分光光度计，在200~350nm的波长范围内扫描，在278nm波长处有最大吸收。
2.2.2 标准曲线的绘制精密称取60℃减压干燥至恒重的黄芩苷对照品18.0mg于50ml量瓶中，加50%乙醇溶液溶解到刻度。
精密量取上述标准液
1.0、
2.0、
3.0、
4.0、
5.0ml分别置50ml量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，在278nm波长处测吸光度，由吸光度（A）对溶液浓度（C）作线性回
归。
回归方程（n=5）为：A=0.0294+0.0591C r=0.9999 表明黄芩在7.2μg~36μg范围内线性关系良好。
2.2.3 黄芩样品溶液的制备精密称取黄芩样品1.0g，加50倍量的50%乙醇溶剂浸泡30min后，放入振荡器中（频率20KHZ）。
根据正交试验表选择一定的提取时间和温度进行超声处理后，过滤、补足滤液至50ml。
精密量取上述滤液1ml至100ml量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度。
百事通 2.2.4 黄芩样品含量的测
定取2.2.3项下的溶液在278nm波长处测吸光度（A），由回归方程计算出黄芩苷的对应波度（C）。
按下式计算黄芩苷的含量X%。
X%=C对
×0.5 2.3 L9（34）正交试验取黄芩样品1.0g 精密称定，采用正交试验法以黄芩苷含量为参考指标，考察黄芩饮片厚度、提取时间和提取温度3个因素。
提取因素水平见表1，正交试验结果及方差分析见表2和表3。
表1 正交试验因素水平表（略）表2 L9（34）正交试验结果表（略）表3 方差分析表（略）注： F0.05(2,2)=19.00。
2.4 方差分析由表2、3可知，采用超声波直接提取法，以黄芩苷为提取率考察指标时，各因素对黄芩提取工艺影响的大小为C>A>B,其中提取温度对黄芩苷
的提取影响最大，而提取时间对黄芩的提取影响最小。
在试验范围内，最佳提
取条件为A2 B2 C3，即用中厚度饮片1.0g 在60℃振荡
15min。
3.2重复试验按优选项A2 B2 C3进行重复试验。
精密称定
黄芩1.0g，中档片按分析方法中进行定量分析，结果表明本优选项下的重复试
验的重现性好。
3 讨论由本实验可以看出，黄芩饮片的厚度对黄芩的提取有一定影响，按一般常规片越薄，提取量应该越高，可能是中药成分
复杂，各有效成分相互影响及变化，同样条件下中档片提取率高，随超声时间
的延长，黄芩的提取量呈上升又下降的趋势，所以用中档片，在60℃超声处理
15min提取工艺较为客观合理。
【参考文献】 1 国家药典委员会.中华
人民共和国药典（一部）.北京：化学工业出版社，2005，211~212. 2 《中华药海》上卷.第一册.哈尔滨出版社,1998, 435~438. 3 刘玉萍，曹晖，等. 黄芩清除自由基活性与黄芩含量的相关性研究.中国中药杂志，2002，27(8)：575.百事通。