结核分枝杆菌rv0394c基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其粘附特性的鉴定
结核分枝杆菌

结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis),
简称结核杆菌,首次由德国科学家Robert Koch于 1882年由肺结核病人的痰液中分离得到,并被证实为结 核病的病原菌核杆菌在分类上隶属于放线菌目、分支杆 菌科、分支杆菌属,是种不能运动、不产芽孢、专性需 氧的短小杆菌。菌体-般细长、略弯曲,端极钝圆,多呈 单个或分枝状排列,大小约1-4×0.4μm。
革兰氏染色呈阳性;Ziehl -neelsen抗酸染色呈红色 ,非抗酸性细菌则呈蓝色。结核杆菌的抗酸性主要取决 于其胞壁内所含的分枝菌酸残基,亦和其胞壁固有层的 完整性有关。
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02 治疗性结核病疫苗的种类 2.1 活载体疫苗 2.2 亚单位疫苗 2.3 DNA疫苗 2.4 全菌灭活疫苗 2.5 其他疫苗 03 结核病治疗性疫苗的研究现状 04 结核病治疗性疫苗的展望
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04 展望
结核疫苗快速发展,并能对致病性结核杆菌产 生保护性免疫应答,为TB的防治带来了希望。然而, 迄今还没有一个重组疫苗能达到BCG的免疫水平。 其原因在于,重组疫苗虽可激活免疫系统,但不能 引起长期特异性的细胞免疫记忆,所以开发一种与B CG协同的、可产生长效免疫应答的疫苗十分重要。 初免-加强免疫策略的出现,有效联合了BCG与新型 结核疫苗,为预防结核、诱导机体产生长期免疫保 护作用提供了可能。
等
MTB肝素结合血凝
素
DNA疫苗
HG85 A/B
临床前 中国人民解放军军事 嵌合 DNA疫苗 A 医学科学院(吴雪琼) g85A/Ag85B 等
结核分枝杆菌

耐异烟肼及其他抗结核药物的结核菌株日益增多
二、致病性和免疫性
(一)致病物质
1. 脂质:磷脂(phosphatide) 索状因子 (cord factor) 硫酸脑苷脂 (sulfatide) 蜡质 D (wax-D脂质:
磷脂:能促进单核细胞增生,增强菌体蛋白质的 致敏作用,抑制蛋白酶对病灶组织的溶解,形成 干酪样坏死;使炎症中的巨噬细胞转变为类上 皮细胞,从而形成结核结节。
疫功能低下者;艾滋病;肿瘤;用过免疫抑制剂 者。
5. 实际应用
(1) 选择接种BCG对象,了解BCG接种是 否成功
(2) 流行病学调查 (3) 婴幼儿结核病诊断的参考 (4) 细胞免疫功能的测定
四、微生物学检查法
1.采集标本(痰液) 集菌(4g/L NaOH处理15min)
2. 涂片镜检:抗酸染色法 3. 分离培养(罗氏培养基,3-4周) 4. 动物试验(豚鼠) 5. 快速诊断
结核分枝杆菌
(M. tuberculosis)
• 分枝杆菌属的主要特点:
– 直或微弯曲,分枝状生长 – G+,但不易着色:细胞壁含有大量脂质 – 又称抗酸杆菌 (acid-fast bacilli)
常用抗酸染色鉴定,呈抗酸染色阳性
• 分枝杆菌属细菌种类繁多,可分为:
– 结核分枝杆菌 – 牛分枝杆菌 – 麻风分枝杆菌
索状因子:抑制白细胞游走引起慢性肉芽肿。 蜡质D:具有佐剂作用,可激发机体产生迟发型
超敏反应。 硫酸脑苷脂:使细菌在吞噬细胞中长期存活。
2.蛋白质
与蜡质D结合产生迟发型超敏反应,并 引起组织坏死病理过程及全身中毒症状, 促进结核结节形成。
(二)所致疾病
所致疾病
结核病 以肺结核(痨病)常见
结核分枝杆菌肝素结合血凝素与人IL12融合基因重组耻垢分枝杆菌的构建及鉴定

p a mi S T3 H BHA— i ,wh c st e r n f c e n oM sb 1c r D r to .Th M swa n lz d b ls d p M 一 h Ll 2 ih wa h n t a s e t d i t y ee to o a in er sa ay e yi mm u o l o n fu — r s e c o c n i HBH A n I1 r x r s e e c n e t o fr m a dhI 2 we ee p e s d,a d t e h t t f r wt f M swa e e t d n h n t es a e o o h o g r s d t c e .Th e o b n n s er c m i a t M , wh c o fr e x r s i g HBH A n l 2 b mmu o l o e c n e ih c n i d e p e sn m a d h I1 y i n fu r s e c ,wa o s r c e u c s f l s c n tu t d s c e su l y,a d t e g o h r t f n h r wt a e o r swa a t rt a o l s M s f s e h n n ma .Th e o i a tM se p e sn M e r c mb n n x r s i g HBHA n i wa o s r c e u c s f l ,wh c a i g a d h Ll s c n tu t d s c e s u l 2 y ih ly n
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分枝杆菌菌种鉴定1

分枝杆菌菌种鉴定1 检测范围用于定性检测来源于临床疑似结核病和非结核分枝杆菌( Non-tuberculous Mycobacteria,NTM)病患者经过分离培养的分枝杆菌分离株样本中的核酸,检测指标包括临床常见分枝杆菌的17个种或群,包括:结核分枝杆菌复合群、胞内分枝杆菌、鸟分枝杆菌、戈登分枝杆菌、堪萨斯分枝杆菌、偶然分枝杆菌、瘰疬分枝杆菌、浅黄分枝杆菌、土分枝杆菌、龟分枝杆菌和脓肿分枝杆菌、草分枝杆菌、不产色分枝杆菌、海分枝杆菌和溃疡分枝杆菌、金色分枝杆菌、苏尔加分枝杆菌和玛尔摩分枝杆菌、蟾蜍分枝杆菌、耻垢分枝杆菌。
可用于结核病和非结核分枝杆菌( Non-tuberculous Mycobacteria,NTM)病的辅助诊断,也可用于流行病学调查等领域。
2 方法原理基因芯片( genechip)也称为DNA芯片、DNA微陈列、寡核苷酸陈列,是指采用原位合成(或显微打印手段),将DNA探针固化于支持物表面上,产生二维DNA探针陈列,然后与标记的样品进行杂交,通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测。
基因芯片对分枝杆菌的菌种鉴定通过在芯片上设计种属特异性寡核苷酸探针,将标记有荧光分子的PCR扩增产物与芯片上的探针在一定的条件下进行杂交反应,根据碱基互补配对原则,序列匹配的PCR扩增产物与探针形成稳定的二级结构。
根据探针在芯片上的特定位置排布,就可以推断出相应被测细菌的相关信息,鉴定出被测细菌的种类采用基因芯片微量点样技术,将检测上述基因的特异探针与各种对照探针固定在基片上,检测探针和对照探针各重复5个点,形成12行×10列的微阵列,每张芯片上有4个同样的微阵列,每一个微阵列可以检测一份样品。
3 检测样本检测适用的标本类型为来源于临床疑似结核病和非结核分枝杆菌( Non- tuberculous Mycobacteria,NTM)病患者经过分离培养的分枝杆菌分离株。
存在于固体培养基上的待测分离株样本不可冷冻储存,因为冷冻会对后续操作造成影响;存在于液体培养基中的待测分离株样本在-70℃储存不超过5年。
高级卫生专业资格正高副高临床医学检验临床微生物专业资格(正高-无答案(64)2682

高级卫生专业资格(正高副高)临床医学检验临床微生物专业资格(正高副高)模拟题2021年(65)(总分97.XX99,考试时间120分钟)多项选择题1. 衣氏放线菌的特点是A. 抗酸染色阳性B. 在病灶组织中形成“硫磺样颗粒”C. 在感染部位常形成瘘管D. 口腔中正常菌群E. 厌氧培养2. 分枝杆菌属细菌A. 不产生内毒素B. 产生外毒素C. 致病性与菌体成分索状因子有关D. 致病性与菌体成分蜡质D有关E. 致病性与菌体成分分枝菌酸有关3. 分枝杆菌属细菌的特征是A. 形态细长或略带弯曲,呈分枝状生长的需氧杆菌B. 细胞壁含有很少量脂质C. 具有抗酸性D. 无鞭毛、无芽胞、无荚膜E. 引起急性疾病4. 关于非典型分枝杆菌,叙述正确的是A. 具有抗酸性,故也可被称为非结核抗酸菌B. 可侵犯全身脏器和组织,以肺最多见C. 感染后出现的临床表现与肺结核病完全不同D. X线检查结果与肺结核病相似E. 近年在我国的发病率极低5. 结核分枝杆菌A. 经金胺“O”染色,在荧光显微镜下菌体可发生荧光B. 为兼性胞内寄生菌C. 在一般情况下,分裂速度为18小时一代D. 在液体培养基中多为表面生长,形成菌膜,且干燥易碎而沉于管底E. 在固体培养基表面多数形成光滑菌落6. 关于结核分枝杆菌,叙述正确的是A. 少量铁质可促进结核分枝杆菌生长,铁质可使其产生结核分枝杆菌生长素B. 在结核分枝杆菌选择培养基中,一般要加入抗菌药物,抑制杂菌生长C. 结核分枝杆菌为杆菌D. 触酶试验阴性E. 耐热触酶试验阳性A1/A2题型1. 结核分枝杆菌分裂一次所需的时间约为A. 20分钟B. 1小时C. 10小时D. 18小时E. 20小时2. 不属于分枝杆菌属特点的是A. 有分枝生长趋势B. 胞壁有大量脂质C. 一般不易着色D. 革兰染色呈阴性E. 能抵抗酸性酒精脱色3. 通常用于结核分枝杆菌分离培养的痰液,预处理时常用的消化液是A. 1%KOHB. 2%KOHC. 1%NaOHD. 4%NaOHE. 0.5%NaOH4. BCG属于A. 死菌苗B. 减毒活疫苗C. 类毒素D. 抗毒素E. 荚膜多糖疫苗5. 衣氏放线菌感染的最常见部位是A. 肠道B. 中枢神经系统C. 泌尿道D. 呼吸系统E. 面颈部软组织6. 人型结核分枝杆菌强毒株与弱毒株的区别是前者有A. 分枝菌酸B. 蜡质DC. 蛋白质D. 磷脂E. 索状因子7. 痰标本涂片找到抗酸杆菌,错误的是A. 95%是结核分枝杆菌B. 5%是非结核分枝杆菌C. 5%是麻风杆菌D. 是耻垢分枝杆菌E. 病人多为开放性肺结核8. 不能引起脑膜炎的细菌是A. 麻风分枝杆菌B. 结核分枝杆菌C. 肺炎链球菌D. 大肠埃希菌E. 流感嗜血杆菌9. 罗氏培养基适用于培养下列哪种细菌()A. 霍乱弧菌B. 肠道细菌C. 白喉杆菌D. 破伤风梭菌E. 结核杆菌10. 淡黄、微混的胸腔穿刺液,渗出液,可初步考虑感染的细菌是A. 金黄色葡萄球菌B. 结核分枝杆菌C. 化脓性链球菌D. 流感嗜血杆菌E. 铜绿假单胞菌11. 结核分枝杆菌复合群不包括A. 人结核分枝杆菌B. 牛分枝杆菌C. 坎纳分枝杆菌D. 非洲分枝杆菌E. 麻风分枝杆菌12. 结核分枝杆菌常用的染色法是A. 吉姆萨染色法B. 革兰染色C. 抗酸染色D. 瑞氏染色法E. 墨汁染色法13. 对疑为结核患者标本进行分离培养,若为阴性,弃去前应观察的时间是A. 2天B. 5天C. 15天D. 4周E. 4~8周14. 关于结核快速诊断方法,叙述错误的是A. PCR技术鉴定DNAB. 标本直接涂片抗酸染色C. 标本集菌后涂片抗酸染色D. 标本涂片荧光染料金胺染色E. 动物试验15. 体外人工培养尚未获得成功的细菌是()A. 军团菌B. 流感嗜血杆菌C. 放线菌D. 麻风分枝杆菌E. 白喉棒状菌16. 人型结核分枝杆菌与牛型结核分枝杆菌的区别主要在于()A. 前者发酵糖类,后者不发酵B. 前者可合成烟酸和还原硝酸盐,后者不能C. 前者生长缓慢,后者生长迅速D. 前者对紫外线敏感,后者不敏感E. 前者耐药严重,后者未发现耐药17. 结核分枝杆菌为专性需氧,营养要求较高,生长在固体培养基上多久可出现肉眼可见的菌落A. 2~5周B. 1周C. 3天D. 10周以上E. 1天18. 分枝杆菌属细菌又称()A. 抗酸杆菌B. 梭状杆菌C. L-型细菌D. 肠球菌E. 棒状杆菌19. 细菌培养时,营养要求特殊的细菌是A. 霍乱弧菌B. 痢疾志贺菌C. 伤寒沙门菌D. 变形杆菌E. 结核分枝杆菌20. 属胞内寄生菌的是A. 大肠埃希菌B. 痢疾志贺菌C. 麻风分枝杆菌D. 破伤风梭菌E. 霍乱弧菌21. 分枝杆菌萋-尼抗酸染色阳性结果是A. 菌体呈蓝色B. 菌体呈黄色C. 菌体呈绿色D. 菌体呈红色E. 菌体呈紫色22. 关于结核分枝杆菌的培养特性,叙述正确的是A. 专性需氧B. 30~42℃时均可生长C. 营养要求不高D. 菌落表面光滑,边缘整齐E. 在液体培养基中呈浑浊生长23. 分枝杆菌的细胞壁结构中含量最多的固体成分是A. 糖类B. 脂类C. 蛋白质D. 水E. 固醇类24. 男,36岁,反复发作咳嗽、咳痰,经抗炎治疗3~4周仍无改善。
结核分枝杆菌ESAT-6基因体外扩增、克隆及在耻垢分枝杆菌中的表达

u g ai me15 中 , 诱 导 此 重 组 耻 垢 分 枝 杆 菌 , S SP GE 电 泳 观 察 E A - ms m t 5) 热 me s 用 D -A S T 6蛋 白 的 表 达 , senbot g鉴 定 Wetr ltn i 其 生 物 学 活 性 。结 果 成 功扩 增 了结 核 杆 菌 E AT 6基 因 ; 确构 建 穿梭 质 粒 p3 0 一 S T 6 用 p T 表 达 系 统 E A - S - 正 s0 0E A - , E S T 6纯 化 蛋 白免 疫 小 鼠 的 多 抗 血 清 通 过 Wetr lt 实 了该 重 组 耻 垢 杆 菌 中有 表 达 并 具 有 生 物 学 活 性 。 结 论 E A - senbo 证 S T 6重 组 耻
结 核 分 枝 杆 菌 E A 一 因体 外 扩 增 、 S T6基 克 隆 及 在 耻 垢 分 枝 杆 菌 中 的表 达
付 小强。 吴 少庭 黄 汉 菊。 甘 燕 李 晓恒。 , , , ,
摘 要: 目的 体 外 扩 增 结 核 杆 菌 E AT 6基 因 . 构 建 大 肠 杆 菌一 枝 杆 菌穿 梭 质 粒 p3 0 - S - S - 并 分 s0 0E AT 6和 重 组 耻 垢 分 枝 杆
i o M me nt s gmatsm e 5 y e e t p a i i 1 5 b l c r or ton. Ther c bia m e o e om n ntM s gmatsm c 5 s i i 1 5 wa ndu e a i g,a d he t e e . c d by he tn n t n h x p e son a c i iy o h a g t p ot i e e de e m i d b r s i nd a tv t ft e t r e r e n w r t r ne y SDS PA GE nd i m un - a m obl tng T he ESAT一 n s a p i oti 6 ge e wa m l.
结核分枝杆菌诊断技术的发展及目前临床应用的新型诊断技术产品分析

结核分枝杆菌诊断技术的发展及目前临床应用的新型诊断技术产品分析快速准确地诊断出结核分枝杆菌感染是控制和治疗结核病的前提和关键。
多年来,结核杆菌的诊断技术在不断地发展和创新,近年来,一些针对结核杆菌检测的新方法陆续被报道,一些新型的诊断技术产品也陆续上市。
本资料综述了结核杆菌的主要诊断方法,并对目前国际市场上广泛应用的商业化诊断技术产品进行了简要分析。
标签:结核分枝杆菌;诊断技术;分析Advance in diagnosis techniques of Mycobacterium tuberculosis and analysis of new diagnostic technologies and products in clinical applicationFENG?Meimei1??SU?Wenqin21.Haikou VTI Biological Institute,Haikou 570311,China;2.Department of Pharmacy,Hainan Medical College,Haikou 571199,China[Abstract] Fast and accurate diagnosis of Mycobacterium tuberculosis infection is the key and prerequisite to control and treatment tuberculosis.For many years,the diagnostic techniques of Mycobacterium tuberculosis have been developing and innovating.In recent years,some new techniques for Mycobacterium tuberculosis detection were reported and some new diagnostic products have been listed.This paper reviewed the main diagnosis techniques of Mycobacterium tuberculosis,and analysed briefly the commercialized diagnostic products which are used widely in the international market now.[Key words] Mycobacterium tuberculosis;Diagnosis;Analysis结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)是引起结核病的病原菌,可侵犯全身各器官,以肺结核最多见。
临床分离快速生长分枝杆菌的鉴定及对抗结核药物的敏感性分析

临床分离快速生长分枝杆菌的鉴定及对抗结核药物的敏感性分析陈东科;许宏涛【摘要】目的比较不同方法鉴定快速生长分枝杆菌(RGM)的准确性,检测RGM对抗结核药物的敏感性.方法 18株RGM使用DNA微阵列芯片法和基因测序法进行菌株鉴定,用比例法检测对利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇、丙硫异烟胺、对氨基水杨酸、卷曲霉素、氧氟沙星和卡那霉素9种抗结核药物的药物敏感性.结果DNA微阵列芯片法与基因测序结果对偶然分枝杆菌和脓肿分枝杆菌鉴定符合率为100%,对其他菌株的鉴定结果偏差较大.RGM对临床上常用的9种抗结核药物普遍耐药,耐药程度依次为马赛分枝杆菌(9种药物全耐药)、脓肿分枝杆菌(8~9种药物耐药)、新金色分枝杆菌(8种药物耐药)、偶发分枝杆菌(7种药物耐药)、血液分枝杆菌(7种药物耐药)、康赛医院分枝杆菌(6种药物耐药)和富西亚分枝杆菌(4种药物耐药).结论分子诊断技术在临床实验室的应用意义重大.使用抗结核药物治疗RGM感染患者的风险极大,应该按照RGM药敏折点标准进行药敏试验,以指导临床合理用药.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2015(033)010【总页数】3页(P734-736)【关键词】快速生长分枝杆菌;鉴定;抗结核药物;药物敏感性试验【作者】陈东科;许宏涛【作者单位】北京医院检验科,北京100730;北京医院检验科,北京100730【正文语种】中文【中图分类】R446.5非结核分枝杆菌(nontuberculosis mycobactericum,NTM)广泛存在于自然界中,是一种条件致病菌,毒力低于结核分枝杆菌,可以在人体某些部位定植,导致免疫力低下患者的感染。
按照《全国临床检验操作规程》[1]对分枝杆菌的要求,常规实验室不具备大部分的鉴定试剂,因此生化鉴定在常规实验室难以开展,也不能鉴定到种的水平。
NTM病具有与结核病临床表现相似的全身中毒症状和局部损害表现,主要侵犯肺,可被误诊为结核病,临床常用抗结核药物进行治疗。
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为进 一 步验 证 该试 验 结果 ,将 r v 0 3 9 4 c 基 因 克 隆至 大肠 杆 菌 . 分枝 杆 茵 穿梭 表 达 质 粒 p M V2 6 2中 ,将 重 组质 粒 电 转化 于 非致 病 性 的耻 垢 分枝 杆 菌 中进 行 表 达 。构 建 的 重 组 菌 与 A 5 4 9细 胞进 行 互作 ,结 果表 明 重组 菌 可 以粘 附于 A 5 4 9细胞表 面 ,而且 这 种 粘 附能 够被 R V 0 3 9 4 c重组 蛋 白所 阻 断 ,这 些 结果 表 明 R V 0 3 9 4 c 蛋 白具有 粘 附细 胞 的 能 力 ,属 于该 菌 的 粘 附蛋 白之 一 。R V 0 3 9 4 c 蛋 白 粘 附特 性 的鉴 定为 进 一 步研 究 该蛋 白在 致 病 性 中的作 用提 供 了 实验
I d e n t i f i c a t i o n o f a dh e s i o n c h a r a c t e r i s t i c a n d e x p r e s s i o n
o f My c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s r v 0 3 9 4 c g e n e i n My c o b a c t e r i u m s me g m at i s
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依据 。
关 键 词 :结核 分 枝 杆 菌 ; r v 0 3 9 4 c基 因 ;p MV2 6 2;耻 垢 分枝 杆 茵 ;粘 附 中 图 分 类 号 :¥ 8 5 2 . 6 1 文 献标 识 码 :A 文 章 编 号 :1 0 0 8 . 0 5 8 9 ( 2 0 1 5 ) 0 3 — 0 1 9 9 . 0 4
d o i :1 0 . 3 9 6 9  ̄. i s s n . 1 0 0 8 - 0 5 8 9 . 2 0 1 5 . 0 3 . 0 9
结核 分 枝杆 菌 r v 0 3 9 4 c 基 因在 耻垢 分枝 杆 菌 中的表 达 及 其 粘 附特 性 的 鉴 定
李华芳 ,曹 俊 ,刘 松 艳 , 陈i f , 1 苹 ,刘 思 国
LI Hua - f a n g,CAO J un,LI U S o ng — y a n,CHEN Li - pi ng,LI U Si — g uo
( D i v i s i o n o f An i ma l Ba c t e r i o s i s , S t a t e K e y L a b o r a t o r y o f V e t e r i n a r y Bi o t e c h n o l o g y , Ha r b i n V e t e i r n a r y Re s e a r c h I n s t i t u t e C h i n e s e Ac a d e my o f Ag r i c u l t u r a l S c i e n c e s , Ha rb i n 1 5 0 0 0 1 , C h i n a )
第3 7卷 第 3 期
2 0 1 5年 3月
中 国 预
防 兽
医 学 报
VO 1 . 3 7. No . 3
M a r . 2 01 5
Chi ne s e J o um a l of Pr e v e n t i ve Ve t e ina r r y Me di c i ne
h y a l u r o n i d a s e , b u t he t f u n c t i o n o f t h e p r o t e i n i s u n k n o wn . I n o r d e r t o i d e n t i f y t h e a d he s i o n c h a r a c t e i r s t i c o f t h e p r o t e i n 。为 了鉴定该蛋 白对 细胞是否具有粘 附特性 ,本研 究利用大肠杆 菌表达纯化的重
组蛋 白 R V0 3 9 4 c与人 肺 泡 上 皮 细 胞 ( A5 4 9细胞 ) 互作 。通 过 激 光 共 聚 焦显 微 镜 观 察 到 蛋 白对 细 胞 的 特 异 性 粘 附 。
( 中国农 业科 学院 哈尔 滨兽 医研 究所 兽 医生物 技术 国 家重点 实验 室 / 动物 细菌病 研 究室 ,黑龙 江 哈尔滨 1 5 0 0 0 1 )
摘
要 :本 实验 室前 期研 究鉴 定 出结核 分 枝 杆 菌的 r v 0 3 9 4 c 基 因产 物 具 有 透 明 质 酸酶 的活 性 ,但 对 于该 酶 在
Ab s t r a c t :I n o u r p r e v i o u s s t u d i e s ,t h e RV0 3 9 4 c p r o t e i n o f My c o b a c t e r i u m t u b e r c u l o s i s wa s i d e n t i i f e d t o h a v e t h e a c t i v i t y o f