344株结核分枝杆菌的基因分型
临床分离结核分枝杆菌可变数目串联重复序列基因多态性研究
临床分离结核分枝杆菌可变数目串联重复序列基因多态性研究【摘要】目的分析本地临床分离的结核分枝杆菌菌株的基因多态性和基因分型特征。
方法收集2019-2020年宁夏第四人民医院参比实验室经过结核分枝杆菌细菌培养后的临床分离株，提取分离株DNA，针对9+3位点可变串联重复序列（VNTR）PCR扩增，毛细管电泳，使用BioNumerics软件对菌株进行聚类分析。
结果 72株结核分枝杆菌基因多态性分析结果显示，9+3位点分辨力存在差异，但各位点等位基因的多态性（h）均在0.5以上，整体分辨率指数HGI为0.995。
72株结核分枝杆菌分为67个基因型，其中65株为独特基因型，其余7株组成3个簇（分别包含3、2、2株菌），成簇率为9.72%。
结论本地流行的结核分枝杆菌菌株存在明显的VNTR基因多态性。
[关键词]结核分枝杆菌;可变数目串联重复序列;基因多态性现阶段，分子生物学应用于流行病学研究越来越显示出其独特的优势。
其中多位点可变数目串联重复序列分析 (MIRU-VNTR）是近年来流行的分子流行病学研究方法，可实现对结核分枝杆菌的分型[1]。
本研究选取了结核分枝杆菌VNTR”9+3”位点进行研究，评价不同位点对本地区临床分离株的分型能力。
1、材料与方法1.1对象研究对象为2019-2020年就诊于宁夏第四人民医院呼吸科的结核病患者，对患者痰标本进行结核分枝杆菌分离培养，培养阳性后鉴定为结核分枝杆菌后，取72株作为MIRU-VNTR研究样本。
1.2仪器与试剂核酸扩增仪为QuantStudio 5，购自赛默飞世尔科技；全自动核酸蛋白分析系统Qsep100，购自江苏光鼎生物科技有限公司。
结核分枝杆菌定量检测试剂盒（实时荧光PCR 法），结核分枝杆菌MIRU-VNTR分型检测试剂盒（毛细管电泳法），均购自厦门致善生命科学有限公司；毛细管电泳卡夹，购自江苏光鼎生物科技有限公司。
VNTR-9包含QUB-11b、QUB-18、 QUB-26、MIRU-26、MIRU-31、MIRU-40、Mtub21、Mtub4、VNTR2372九个位点，HV-3包含VNTR3820、 VNTR3232、VNTR4120三个高变位点。
结核病
阴性反应见于
①未受过结核感染；
②已感染结核，但尚未产生变态反应（初次感染后 4~8周内）；
③机体免疫反应受到抑制可出现假阴性反应：如重 症结核（急性粟粒性肺结核，结核性脑膜炎晚期， 干酪性肺炎）；重度营养不良；急性传染病（如麻 疹）起病2~3周内；接种麻疹减毒活疫苗2~3周期 间；风疹起病1~3周内；肾上腺皮质激素及免疫制 剂治疗4~6周后；先天免疫缺陷病；严重联合免疫 缺陷病； ④结核菌素失效或技术误差。
网： 防痨网的建立 治： 治疗 管： 病人登记管理及传染病地的管理 查： 发现病人 种： 接种卡介苗
1. 普及卡介苗接种：卡介苗接种是预防小儿结核病
的有效措施。目前我国计划免疫要求在全国城乡
普及新生儿卡介苗接种。
下列情况禁止接种卡介苗：
①先天性胸腺发育不全症或严重联合免疫缺陷病
患者；②急性传染病恢复期；③注射局部有湿疹
20~30 (≤0.75g/d)
• 机体内隐伏的转移病灶或已愈 合的原发病灶复发（内源性感
染）以及由于外来的结核杆菌
的再次感染（外源性感染）所
引起的结核病，称为继发性结
核病，多见于青少年及成人。 一般认为内源性再感染的可能 性比外源性再感染的可能性大。
五、小儿结核病的特点
（一）小儿原发性肺结核的特点：
1、临床表现与成人结核病不同。一般年龄愈小， 发病愈急，病情进展愉快；全身中毒症状重，易发 生合并症，不经治疗可于短期内恶化。但如能早期 发现、及时治疗，病情恢复亦较快。 2、易出现结核高度过敏现象。小儿对结核菌及其 代谢产物有较高的敏感性，如结核菌素试验多呈阳 性反应、临床上易出现多发性浆膜炎、过敏性关节 炎、疱疹性结膜炎、结节性红斑等，以上表现常早 于肺内病变。
中国北方四省（区）结核分枝杆菌北京基因型菌株的流行特征及耐药性分析
中国北方四省（区）结核分枝杆菌北京基因型菌株的流行特征及耐药性分析摘要:目的了解中国北方甘肃、内蒙古、西藏和新疆四省（自治区）的结核分枝杆菌北京基因型菌株的流行特征及其对4种一线抗结核药物链霉素、利福平、异烟肼和乙胺丁醇的耐药状况，分析其耐药的影响因素、北京基因型与耐药性间的相关性，为我国北方地区结核病防治提供基础科学依据。
方法从北方四省（自治区）选取了662株结核分枝杆菌，采用比例法药敏试验进行药物敏感性检测，运用Spoligotyping进行基因分型，BioNumerics 5.1软件聚类分析。
采用IBM SPSS Statistics 21.0软件进行χ2检验和非条件二分类Logistic回归分析，P<0.05为差异有统计学意义。
结果Spoligotyping基因分型发现662株结核分枝杆菌呈87种基因型，基因多态性为13.14%，北京基因型占82.18%；西藏、内蒙古、甘肃和新疆的北京基因型所占比例分别为91.41%、84.77%、79.55%和63.30%，新疆和西藏存在CAS家族。
662株结核分枝杆菌的总耐药率为41.84%，复治耐药率（68.56%）高于初始耐药率（27.77%）；西藏、甘肃、新疆和内蒙古的耐药率分别为64.42%、50.00%、40.37%和27.81% ；单耐药率为12.24%，耐多药率为20.69%，复治耐多药率（42.79%）高于初始耐多药率（9.01%）；对链霉素、异烟肼、利福平和乙胺丁醇的耐药率分别为29.00%、28.55%、28.10%和8.46%；初治患者对链霉素的耐药率（18.94%）最高，而复治患者对利福平的耐药率（53.28%）最高。
多因素Logistic回归分析结果显示，患者类型对耐药和耐多药结核病的产生有正效应（P<0.05），复治患者发生耐药和耐多药的危险性分别是是初治患者的 4.876倍（95%CI 3.387~7.020）和7.398倍（95%CI 4.703~11.637），西藏耐药和耐多药发生的危险性在四个地区中最高。
结核分枝杆菌基因分型及耐药性研究
结核分枝杆菌基因分型及耐药性研究作者：肉孜·买买提艾斯卡尔·阿布拉来源：《中外医学研究》2013年第25期【摘要】目的：探讨新疆喀什地区结核病患者的结核分枝杆菌基因分型及耐药性。
方法：采用比例法对笔者所在医院确诊的100例结核患者的结核分枝杆菌进行药物敏感检测，分析其基因分型及耐药性关系。
结果：本组研究的100株结核分枝杆菌通过检测，18例（18.00%）为牛结核分枝杆菌，其总耐药率11.11%（2/18）；82例（82.00%）为人结核分枝杆菌，其总耐药率达29.27%（24/82）；人结核分枝杆菌总耐药率远高于牛结核分析杆菌，两组比较差异有统计学意义（P【关键词】结核分枝杆菌；基因分型；耐药性中图分类号 R52 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2013）25-0116-01随着全球经济和卫生事业的飞速发展，结核疾病得到有效控制。
但结核病依然是严峻的全球性公共健康问题，结核病是中国最主要的传染病之一，结核分枝杆菌耐多药率偏高，严重威胁着患者的生命健康，并不断对医疗专家提出新的挑战[1]。
新疆喀什地区由于经济发展水平和医疗卫生条件因素，结核病耐药性较高，尤其是耐多药结核疫情较严重，应该引起本地区医务工作者的高度关注，应该加强相关检测和防控措施[2]。
笔者针对喀什地区结核病患者的结核分枝杆菌基因分型、耐药性进行药物敏感检测分析，确定主要流行菌株为人结核分枝杆，其耐药性较高，为今后结核病防治工作的开展提供宝贵参考依据，现将结果报道如下。
1 资料与方法1.1 一般资料本次研究采用喀什地区结核病防治所提供的结核患者结核分枝杆菌临床菌株100例，其中男43例，女57例，年龄37～78岁，平均51.4岁。
1.2 方法（1）采用鉴别培养基PNB和TCH将临床分离菌株100例进行菌株鉴定，观察100例菌株在培养基上生长情况鉴别结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非结核性分枝杆菌。
（2）采用比例法在罗氏（L-J）培养基中对8种抗结核药物进行药物敏感试验，所采用的8种药物有异烟肼、链霉素、阿米卡星、乙胺丁醇、氧氟沙星、卷曲霉素、利福平、卡那霉素；耐药标准含药培养基菌落数对照培养基菌落数≥1%为耐药。
基因分型方法在结核分枝杆菌分型中的应用进展
基因分型方法在结核分枝杆菌分型中的应用进展
方梓昊;赵文丽;徐雁南;郑佳雄;纪丽微;刘苏洋;林健雄;常巧呈
【期刊名称】《山东医药》
【年(卷),期】2024(64)15
【摘要】结核分枝杆菌(Mtb)基因分型在结核病流行病学研究中应用广泛,对结核病疫情的监测、溯源和防控具有重要意义。
Mtb基因分型方法中,IS6110限制性片段长度多态性分型曾经是国际公认的Mtb分型的“金标准”,但其缺陷明显,包括分型能力不足、对样本质量要求高和实验操作繁琐等;间隔区寡核苷酸分型技术操作简便且成本较低,稳定性较高,但其分型能力同样不足,结果可能趋向同型化;长序列多态性分型可以简便、快速鉴别牛型、人型和北京基因型菌株,并且在遗传进化研究中发挥重要作用;可变数目串联重复序列分型的分辨率高、可重复性好,可以根据不同情况优化位点组合,已经成为结核分子流行病学研究的重要方法;单核苷酸多态性分型具有高通量、高分辨率和结果准确性高等优点,在结核分子流行病学上的应用非常广泛,有望成为Mtb分型的下一个金标准。
【总页数】5页(P103-107)
【作者】方梓昊;赵文丽;徐雁南;郑佳雄;纪丽微;刘苏洋;林健雄;常巧呈
【作者单位】汕头大学公共卫生学院;汕头市结核病防治所
【正文语种】中文
【中图分类】R52;R181.2
【相关文献】
1.结核分枝杆菌流行病学研究中基因分型的方法
2.结核分枝杆菌基因分型方法及其应用
3.RD105缺失基因检测法在结核分枝杆菌分型中的应用
4.三种基因检测分型方法在耐碳青霉烯抗生素肺炎克雷伯菌基因分型中的应用对比观察
5.用全基因组测序评价VNTR分型在泛耐药结核分枝杆菌传播中的应用
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结核分枝杆菌
二、结核菌L型的形态结构
1、多形性：结核菌失去坚硬的细胞壁变为L型后有
高度的可塑性。在临床标本中经常可以看到的结核 菌形态很不典型，有的粗短、有的细长成丝状、有 的成大小不等的颗粒，分散或成串排列，与典型结 核菌形态相差甚远。
2、染色性改变：大多为抗酸阳性，有的甚至能变
为抗酸阴性。如在结核冷脓疡中见有微小的革兰阳 性抗酸阴性的人即称之为Much颗粒。有人对23份结 核痰标本涂片检查发现单有典型抗酸菌者仅21.7%， 而单有L型者占34.8%，二者均有者占52.2%。说明在 结核患者中，L型常比细菌型还多见。这是结核菌L 型的特点，在临床诊断中应于重视。
形态与染色
细长略带弯曲，细胞壁脂质含量较高 抗酸染色阳性，又称抗酸杆菌(acid-fast
bacilli) 有荚膜 L型----莫赫(Much)颗粒，抗酸阴性，G+
结核杆菌抗酸染色
培养特性
专性需氧 偏酸 最适PH6.5~6.8 营养要求高 罗氏培养基(Lowenstein) 生长缓慢 18~24小时/代
在分枝菌酸层上尚连接着大量糖脂，有的有 决定结核菌抗原特性的作用，随上层的缺损， 脂多糖的减少，抗原性减弱。有的结核菌脂 质为海藻糖-66-二分枝菌酸，又称束状因子， 使结核菌呈平行排成长束。结核菌L型常见有 的抗酸颗粒呈串珠状或长丝纠缠成团，可能 与之有关。
结核菌变为L型后，随细胞壁的缺失， 细胞膜能代偿性增厚，在透射电镜照片中 可见结核菌L型细胞壁消失，而有厚厚的一 层细胞膜围绕在细胞周围。用计算机处理， 50个L型的细胞膜平均厚度为34.84nm。L型 细胞膜的厚度可比细菌型细胞壁和细胞膜 的厚度还大(P<0.001)[9]。这可能与结核 菌L型抵抗力较大、耐药性增强的原因之一。 在作PCR检测时一般裂解方法不易提取DNA， 可造成假阴性。