洛伐他汀克服非小细胞肺癌PC9细胞株吉非替尼耐药的体外研究
吉非替尼治疗Ⅳ期耐药非小细胞肺癌33例
有 效 地 降低 血 粘 度 ．加 快 血流 速 度 ．改善 脑 缺 血 所 弓ｆ
作 者单位 ：５１００１０ 广 州军区广州总 医院肿瘤科
１．２ 用 药 方法 要 求 首 次 服药 患 者住 院观 察 ，吉非 替 尼 ２５０ ｍｇ，口服 ，空 腹 或 与食 物 同 服 ，１次／ｄ，１粒／ 次 ．服 药 后 不再 服用 其 他药 物 ，尽 量 不再 进 食 。如果有 吞 咽 困难 ，可 将 片 剂分 散 于半 杯 饮 用 水 中 （非 碳 酸 饮 料 ），无 需 压 碎 ，搅 拌 至 完 全 分 散 （约 需 １０ ｒａｉｎ），即刻 饮 下药 液 ，再 以半 杯 水 冲洗 杯 子 ．饮下 。在 使用 吉 非替 尼 过 程 中 ．不 使 用 制 酸药 物 ．以保 证 吉 非 替 尼 的正 常 吸 收 。 当患 者 出现 不 能 耐 受 的腹 泻 或 皮 肤 不 良反 应 时 ．可通 过 短 期 暂 停 治 疗 （最 多 ｌ４ ｄ）解 决 ，随后 恢 复 每 天 ２５０ ｍｇ的 剂量 。 以治疗 前 ２周 的各项 检 查 为 基 线评 价 ．治 疗 １ ３个 月 及 以后 每 隔 ２个 月 进 行肿 瘤 评 价 ． 同时 复查 肿 瘤 标 志 物 ＣＥＡ、Ｃｙｆｒａ２１１、ＳＣＣ、ＮＳＥ、 ＣＡＩ２５和 ＣＡＩ１５３。 １．３ 疗 效 观 察 及评 价 根 据 ＷＨＯ标 准评 价 近 期 疗 效 ［引，分 为完 全缓 解 （ｃＲ）、部 分缓 解 （ＰＲ）、稳 定 （ＳＤ）、 无 变 化 （ＮＣ）和进 展 （ＰＤ），ＣＲ＋ＰＲ为 有效 ，总 的疾 病 控 制 （临 床 获益 ）为 ＣＲ＋ＰＲ＋ＳＤ。症状 评 定包 括 治疗 前肿瘤相关症状 ，如 咳嗽 、咯血 、胸 闷气促 、疼痛 、食欲 等为基线 ．根据每次随诊主诉及相应对症治疗变化情 况 （如 有 止痛 药 和 吸氧 等 ）评 价 ．症 状 减 轻或 消失 定 义 为 症状 缓 解 ［引。毒 副 反应 根据 ＮＣＩ．ＣＴＣ毒性 分级 标 准 （第 ２版 ）Ｅ５］。分 ０～１Ｖ级 。
防己中逆转非小细胞肺癌化疗耐药性有效成分的筛选及分子
防己中逆转非小细胞肺癌化疗耐药性有效成分的筛选及分子一、背景介绍肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，其中非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC）占据肺癌病例的85%，但NSCLC 的治疗仍然具有挑战性。
化疗是NSCLC的主要治疗方法之一，但随着化疗的持续进行，肿瘤细胞常常会逐渐发展出化疗耐药性，从而导致疗效下降和治疗失败。
防己（Radix Isatidis）是一种常用的中草药，广泛应用于感冒、咽喉痛等疾病的治疗中。
最近的研究表明，防己中的一些天然化合物可能对NSCLC的化疗耐药性具有潜在的逆转作用。
本文旨在通过筛选防己中的有效成分，探索其对NSCLC化疗耐药性的逆转作用及其分子机制，并为开发新型NSCLC治疗药物提供理论和实验数据支持。
二、防己有效成分筛选及药理作用鉴定2.1 防己提取物制备从市场上购买防己干燥根，粉碎成细粉后，采用超声波辅助提取法将其浸泡于70%乙醇中，振荡提取60min，提取液过滤，滤液浓缩后得到防己提取物。
2.2 化学成分分析采用LC-MS/MS技术对防己提取物进行分析。
结果表明，防己提取物中含有多种化合物，其中包括异感光化合物、异向橙素、丁香酸、咖啡酸、伊索酮类化合物等。
2.3 细胞毒性测定人肺癌细胞株A549和PC9被用于检测防己提取物的细胞毒性。
采用MTT法分别测定A549和PC9细胞在不同浓度的防己提取物处理后的存活率。
结果发现，防己提取物处理组与对照组差异不显著，表明防己提取物在一定浓度范围内不会对肺癌细胞产生明显的毒性作用。
2.4 化疗敏感性测试通过比较化疗耐药细胞株A549/DDP和对应的敏感细胞株A549对氟尿嘧啶和顺铂化疗的敏感度，以验证防己提取物在肺癌细胞化疗耐药性逆转方面的效应。
结果显示，与A549敏感细胞相比，A549/DDP细胞振荡曲线的EC50值明显升高，表明其对顺铂具有明显的耐药性。
然而，在加入防己提取物后，A549/DDP细胞对顺铂的敏感性明显增强，IC50值下降，逆转率高达42.1%。
洛伐他汀对3种肺癌细胞株增殖的抑制作用
洛伐他汀对３种肺癌细胞株增殖的抑制作用作者：张建和符伟玉李思来源：《中国医药导报》2008年第15期[摘要] 目的：观察洛伐他汀对肺癌细胞体外增殖的抑制作用。
方法：采用MTT法，观察不同浓度的洛伐他汀分别作用24、48、72 h 对3 种人肺癌细胞（A549，NCL-H460，PGCL3）生长增殖的影响。
结果：洛伐他汀用药24、48、72 h对3种肺癌细胞的生长增殖均有不同程度的抑制作用。
洛伐他汀作用72 h对3种肺癌细胞株（A549，NCL-H460，PGCL3）的IC50分别是39.6、28.3、35.6 μmol/L。
结论：洛伐他汀能有效抑制肺癌细胞的体外增殖，并且呈时间依赖性和浓度依赖性。
[关键词] 洛伐他汀；MTT；肺癌[中图分类号] R979.1 [文献标识码]B [文章编号]1673-7210（2008）05（c）-033-02Inhibition of proliferation by lovastatin in three kinds of lung cancer cell linesZHANG Jian-he,FU Wei-yu,LI Si(Guangdong Medical College,Zhanjiang524023,China)[Abstract] Objective:To observe the inhibition effect of lovastatin on proliferation of three kinds of lung cancer cell lines in vitro.Methods: After treatment of lung cancer cell lines (A549, NCL-H460 and PGCL3) with various concentration lovastatin for 24, 48, and 72 hours, the proliferation capacity of cells was observed by MTT.Results: After treated with lovastatin, the proliferation of these lung cancer cell lines were inhibited differently.The IC50 treated after 72 h of A549, NCL-H460, PGCL3 was 39.6、28.3、35.6 μmol/L.Conclusion: Lovastatin could inhibit the proliferation of lung cancer cells effectively in a time-and dose-dependent manner.[Key words]Lovastatin;MTT; Lung cancer他汀类药物是一种临床常用的调血脂药，近年来的研究发现，他汀类药物不仅能抑制多种肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化，而且具有诱导肿瘤细胞凋亡、降低肿瘤细胞侵袭转移能力的作用，是一种很有潜力的抗肿瘤辅助药物[1]。
洛伐他汀通过TAZ抑制人肺癌细胞增殖
洛伐他汀通过TAZ抑制人肺癌细胞增殖胡秡"，郑艺"，赵于飞，吴爱林1>2,毛云飞1>2,常娜(中国科学技术大学附属第一医院西区肿瘤放射治疗科，合肥239001；安徽省肿瘤医院肿瘤放射治疗科；■■通讯作者,E-mail：67282749l@)摘要：目的考察洛伐他汀抗A549肺癌细胞增殖的作用，并对其作用机制进行初步的探讨。
方法复苏并培养A544肺癌细胞株,给于洛伐他汀(0,20,40,80pnol/L)进行24h干预或者给于洛伐他汀(44pnol/L)作用12,24,48h o采用MTT法检测洛伐他汀对A544细胞的增殖抑制作用;用流式细胞术检测洛伐他汀对A549细胞凋亡的影响;用Western blot检测A549细胞增殖相关蛋白p-mTOR、p-p74S6k、凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9、PARP以及TAZ表达的影响。
设置阴性对照组、TAZ过表达组、洛伐他汀(40pmol/L)组、TAZ过表达+洛伐他汀(44pmol/L)组,预先采用质粒过表达TAZ蛋白，转染48h 加入洛伐他汀(40pmol/L)继续干预24h,考察TAZ在洛伐他汀抗A549细胞增殖中的作用。
结果MTT法检测结果显示,洛伐他汀(0,20,40,80pmol/L)作用于A549细胞后，A549的细胞生存率随浓度和时间依赖性地降低(P<0.05)。
Western blot结果显示，洛伐他汀(0,20,40,80pmol/L)浓度依赖性地抑制了p-AKT、p-mTOR和p-p70SSk的表达(P<0.05)。
流式结果显示，洛伐他汀(0,20,40,80pmol/L)浓度依赖性地诱导A549细胞发生凋亡(P<0.05)。
Western blot结果显示，洛伐他汀(0,20,40,，0pmol/L)作用24h后，clrvee Capae-3、clrvee Caspase-9cleaver PARP的表达浓度依赖性地升高(P<0.05)，TAZ的表达浓度依赖性地降低(P<0.05)。
吉非替尼治疗非小细胞肺癌的疗效及对血清 VEGF、MMP-9和 TIMP1的影响
吉非替尼治疗非小细胞肺癌的疗效及对血清 VEGF、MMP-9和 TIMP1的影响钱海红【期刊名称】《河北医药》【年(卷),期】2014(000)016【摘要】目的：检测吉非替尼治疗非小细胞肺癌（ NSCLC）前后血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）与金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP-1）的血清水平，探讨其变化规律与吉非替尼治疗疗效之间的关系。
方法采用ELISA双抗体夹心法检测48例NSCLC患者采用吉非替尼治疗前后血清VEGF、MMP-9和TIMP-1的水平，并参照RECIST评价标准进行疗效评价。
结果吉非替尼治疗前后血清VEGF水平无明显变化（ P ＞0．05），但治疗后血清MMP-9与TIMP-1水平与治疗前相比明显下降（ P ＜0．05）。
有效组治疗前后血清VEGF水平无显著变化（ P ＞0．05），但有效组治疗后MMP-9和TIMP-1的血清水平与治疗前相比显著降低（ P ＜0．05）。
而无效组血清VEGF、MMP-9与TIMP-1的水平均无明显变化（ P ＞0．05）。
结论血清MMP-9与TIMP-1的表达水平很可能与吉非替尼治疗非小细胞肺癌的疗效相关，提示MMP-9和TIMP-1可以反映患者病情的变化，为病情的进展和预后提供依据。
%Objective To observe the changes of expression levels of serum vascular endothelial growth factor (VEGF),matrix metalloproteinase-9(MMP-9) and tissue inhibitors of metalloproteinase (TIMP)-1 before and after treatment of non small cell lung carcinoma ( NSCLC) by gefitinib in order to explore the correlation between the changes and therapeutic effect.Methods The serum levels ofVEGF ,MMP-9 and TIMP-1were detected by ELISA in 48 patients with NSCLC before and after treatment by gefitinib ,and the therapeutic effects were evaluated according to RECIST evaluation criterion.Results There were no significant differences in the serum levels of VEGF before and after treatment by gefitinib (P >0.05).However after treatment the serum levels of MMP-9 and TIMP-1 were obviously decreased ,as compared with those before treatment ( P<0.05).There were no obvious changes in serum levels of VEGF in valid group before and after treatment by gefitinib( P >0.05),but after treatment the serum levels of MMP-9 and TIMP-1 were significantly decreased in valid group ,as compared with those before treatment( P <0.05).Furthermore there were no obvious changes in serum levels of VEGF ,MMP-9 and TIMP-1 before and after treatment in invalid group ( P >0.05).Conclusion The expression levels of serum MMP-9 and TIMP-1 may be correlated to the therapeutic effect of gefitinib on NSCLC ,whch suggests that MMP-9 and TIMP-1 may reflect the changes of patient ’ s condition and may be helpful for predicting the progress of NSCLC and prognosis of patients .【总页数】3页(P2416-2418)【作者】钱海红【作者单位】075000 河北省张家口市，河北北方学院附属第一医院呼吸内科【正文语种】中文【中图分类】R734.2【相关文献】1.扶正益气抗癌汤联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌对患者血清MMP-9、VEGF、T 细胞亚群水平影响分析 [J], 赵艳莉;吴召利;千维娜;李仁廷2.吉非替尼治疗进展期非小细胞肺癌疗效分析及对血清MMP-9的影响 [J], 夏发明;文石兵;黄立功;何林锋3.吉非替尼治疗放化疗失败非小细胞肺癌对CEA、CYFRA21-1、MMP-9水平及远期疗效的影响分析 [J], 田素萍; 孙文杰; 史曙霞4.中药联合吉非替尼治疗非小细胞肺癌的临床疗效及其对VEGF、CEA、CYFRA21-1的影响 [J], 郭春辉;董建春;尹彦海;张继宝;崔静;刘彬5.安罗替尼联合化疗治疗驱动基因阴性晚期非小细胞肺癌的疗效及对血清VEGF、bFGF、MMP-9水平的影响 [J], 王玲;杜倩宇;王西勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
洛伐他汀对3种肺癌细胞株增殖的抑制作用
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２８ ５ 第 卷 １ ０年 月 ５第５ ０ 期
・基础 研 究 ・ Fra bibliotek洛 伐 他 汀 对 ３种 肺 癌 细胞 株 增 殖 的抑 制 作 用
张 建和 ， 符伟 玉 ， 思 李
（ 广东 医学 院 ， 东湛 江 广
５４ ２ ２０ ３）
［ 摘要１ 目的 ： 观察洛伐他汀对肺癌细胞体外增殖的抑制作用。方法： 采用 ＭＴ＇ ， Ｉ 观察不同浓度 的洛伐他汀分别作 法
和浓 度依 赖 性 。 【 关键 词】 伐他 汀 ； Ｔ； 癌 洛 ＭＴ 肺
【 中图分 类 号１ ７ ． Ｒ９ ｇ１
【 献标 识 码１ 文 Ｂ
【 文章 编 号１ ６ ３ ７ １ ２ ０ ０ ｃ）０ ３ ０ １ ７ — ２ ０（ ０ ８）５（ － ３ － ２
Ｉ ｈｉ ｔｏ ｏ ｏｉｅ ａ ｉ ｎ ｙ ｌ ｖ ｓａｔｎ ｎ ｔ ｅ ｎｄ ｏ ｕ ａ ｅ ｅｌ ｎ ｂｉｉ ｎ ｆ ｐｒ ｌｆ ｒ ｔｏ ｂ ｏ ａ ｔ ｉ ｉ ｈｒ ｅ ｋｉ ｓ ｆ ｌ ｎｇ ｃ ｎｃ ｒ ｃ ｌ
多维度分析扶正抗癌方联合吉非替尼抑制耐药非小细胞肺癌增殖机制研究
多维度分析扶正抗癌方联合吉非替尼抑制耐药非小细胞肺癌增殖机制研究多维度分析扶正抗癌方联合吉非替尼抑制耐药非小细胞肺癌增殖机制研究引言：非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC）是一种高度恶性的肿瘤，具有快速生长和高度侵袭性的特点，严重威胁人类健康和生命。
当前，不少患者存在药物耐药的问题，导致治疗效果不佳。
因此，探索新的治疗策略和机制研究显得尤为重要。
方法：本研究采用多维度分析实验方法，以扶正抗癌方和吉非替尼为研究对象，从分子水平、细胞水平和动物模型三个维度进行分析。
结果：实验结果显示，扶正抗癌方与吉非替尼联合应用对耐药NSCLC 细胞系A549-Taxol具有显著的增殖抑制效果，并且表现出协同作用。
分子水平分析发现，扶正抗癌方与吉非替尼联合应用能够降低耐药细胞系中 ABCG2 蛋白的表达水平，提高药物的积累量；同时也能够降低耐药细胞系中 Akt 和 ERK 信号通路的活化水平，减少细胞凋亡的抵抗能力。
细胞水平实验发现，该联合应用方案能够诱导细胞周期G1期阻滞，并促进细胞凋亡的发生。
动物模型研究结果显示，扶正抗癌方和吉非替尼联合治疗能够显著抑制肿瘤生长，减小肿瘤体积，并且能够延长小鼠的生存期。
讨论：本研究结果表明，扶正抗癌方与吉非替尼联合应用能够对耐药NSCLC具有良好的治疗效果。
该联合应用方案通过降低 ABCG2 蛋白表达水平，减少药物外排、提高药物积累量；同时通过抑制 Akt 和 ERK 信号通路的活动，增加细胞凋亡的发生，从而抑制肿瘤生长和扩散。
此外，该联合应用方案还能够调整细胞周期和诱导凋亡，从而加强治疗效果。
然而，本研究存在一些局限性，比如没有深入研究联合应用方案的毒副作用和长期治疗效果。
因此，需要进一步的研究和临床验证。
结论：本研究通过多维度分析发现，扶正抗癌方与吉非替尼联合应用对耐药非小细胞肺癌具有显著的增殖抑制作用，并且能够通过调节细胞周期、促进细胞凋亡等机制来实现治疗效果。
2024年洛伐他汀对3种肺癌细胞株增殖的抑制作用
2024年洛伐他汀对3种肺癌细胞株增殖的抑制作用一、洛伐他汀的作用机制洛伐他汀是一种他汀类药物，主要用于降低血清胆固醇水平，治疗高胆固醇血症和冠心病。
近年来，随着对其机制的深入研究，人们发现洛伐他汀除了降脂作用外，还具有抗肿瘤效应。
其主要机制在于，洛伐他汀能够抑制HMG-CoA还原酶的活性，进而阻断甲羟戊酸代谢途径，导致细胞内胆固醇合成减少。
在肿瘤细胞中，胆固醇的合成与细胞增殖密切相关，因此洛伐他汀通过影响胆固醇合成，可以达到抑制肿瘤细胞增殖的目的。
二、肺癌细胞株的选择与特点在本次研究中，选择了三种具有代表性的肺癌细胞株：A549、H460和H1299。
A549细胞株来源于人肺泡基底上皮细胞，常用于肺癌的基础研究；H460细胞株为大细胞肺癌细胞，生长速度快，倍增时间短；H1299细胞株为肺腺癌细胞，对多种化疗药物敏感。
这三种细胞株分别代表了不同类型的肺癌，能够较为全面地反映洛伐他汀对肺癌细胞的抑制作用。
三、增殖抑制作用的评估方法为了评估洛伐他汀对肺癌细胞株增殖的抑制作用，采用了细胞计数法、MTT法和流式细胞仪检测等方法。
细胞计数法通过直接计数细胞数量来反映细胞增殖情况；MTT法通过检测活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶活性来间接反映细胞增殖；流式细胞仪检测则可以分析细胞周期分布和凋亡情况，进一步揭示洛伐他汀对细胞增殖的影响机制。
四、实验结果与讨论实验结果显示，洛伐他汀对三种肺癌细胞株均表现出明显的增殖抑制作用，且随着药物浓度的增加，抑制作用逐渐增强。
在A549细胞中，洛伐他汀处理后的细胞数量明显减少，MTT值降低，S期细胞比例下降，凋亡细胞比例增加。
在H460和H1299细胞中，也观察到了类似的现象。
这些结果表明，洛伐他汀能够通过干扰胆固醇合成途径，抑制肺癌细胞的增殖，并诱导细胞凋亡。
与已有研究相比，本实验的结果进一步证实了洛伐他汀对肺癌细胞的抑制作用，并提供了更为详细的实验数据。
然而，由于实验条件和时间限制，本研究尚存在一些局限性，如未能深入探讨洛伐他汀抑制肺癌细胞增殖的具体分子机制，以及不同肺癌细胞株之间对洛伐他汀敏感性的差异等。
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洛伐他汀克服非小细胞肺癌PC9细胞株吉非替尼耐药的体外研究吉 泽1，范理宏2，季现秀2，宋 丽2 ，祁慧薇21. 苏州大学医学院临床医学系，苏州 215006；2. 上海交通大学附属第六人民医院肺内科，上海 200233[摘要] 目的：研究联合洛伐他汀（lovastatin ）和吉非替尼（gefi tinib ）对体外诱导吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株PC9细胞凋亡以及相关蛋白表达的影响，并探讨其可能的机制。
方法：应用洛伐他汀联合吉非替尼处理耐吉非替尼的非小细胞肺癌PC9细胞株后，采用WST-1法检测不同药物处理对PC9细胞增殖的影响，Hoechst33342荧光染色法观察细胞凋亡形态，FCM 法观察细胞凋亡状况，蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白的表达水平。
结果：洛伐他汀联合吉非替尼可在体外诱导耐吉非替尼的PC9细胞凋亡，抑制其细胞增殖；洛伐他汀联合吉非替尼可诱导耐吉非替尼的PC9细胞中磷酸化表皮生长因子受体（phosphorylated epidermal growth factor receptor ，p-EGFR ）、磷酸化蛋白激酶B （phosphorylated protein kinase B ，p-AKT ）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2，p-ERK1/2）蛋白表达水平明显下调。
结论：在体外诱导吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株PC9中，洛伐他汀可以克服吉非替尼耐药，两者具有良好的协同作用，提示两药联合对于出现吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的临床治疗可能具有很大的应用潜力。
[关键词] 癌，非小细胞肺；药物耐受性；细胞凋亡；洛伐他汀；吉非替尼；信号通路蛋白[中图分类号] 734.2[文献标志码] A[文章编号] 1000-7431 (2011) 08-0682-06Lovastatin overcomes ge fi tinib resistance in human non-small cell lung cancer cell line PC9 in vitroJI Ze 1, FAN Li-hong 2, JI Xian-xiu 2, SONG Li 2, QI Hui-wei 21. Department of Clinical Medicine, Medical College, Soochow University, Suzhou 215006, China;2. Department of Respiratory Medicine, Sixth People ’s Hospital Af fi liated to Shanghai Jiaotong University, Shanghai 200233, China[ABSTRACT] Objective: To investigate the effects of lovastatin combined with ge fi tinib on the apoptosis and the expressions of apoptosis-related proteins of non-small cell lung cancer cell line PC9, which was induced by gefitinib in vitro to acquire drug resistance, as well as to explore the possible mechanism. Methods:Lovastatin combined with ge fi tinib was applied to treat the PC9 cells with acquired ge fi tinib-resistance. Then the proliferation of PC9 cells treated with different drugs was detected by WST-1 method. The morphology of apoptosis was observed under an inverted phase contrast microscope after Hoechst33342 staining. Apoptosis rates in different treatment groups were detected by fl ow cytometry (FCM). The expressions of apoptosis-related proteins were detected by Western blotting. Results : Lovastatin combined with gefitinib could induce apoptosis of PC9 cells with acquired ge fi tinib-resistance in vitro . The expressions of phosphorylated epidermal growth factor receptor (p-EGFR), phosphorylated protein kinase B (p-AKT) and phosphorylated extracellular signal-regulated kinase (p-ERK) were signi fi cantly decreased by combination of lovastain and gefitinib. Conclusion : For non-small cell lung cancer cell line PC9 with acquired drug-resistance which is induced by ge fi tinib in vitro , lovastatin can overcome ge fi tinib-resistance. The combination of both drugs shows a great synergistic effect, suggesting that the combination treatment of lovastatin and ge fi tinib may have great considerable clinical potential in non-small cell lung cancer with ge fi tinib-resistance.[KEY WORDS] Carcinoma, non-small cell lung; Drug tolerance; Apoptosis; Lavastatin; Gefitinib; Signaling pathway proteins[Tumor, 2011, 31 (8): 682-687][基金项目] 上海市卫生局科研课题计划项目（编号：054014）Correspondence to: FAN Li-hong （范理宏） E-mail: fanlih@Received 2011-02-22 Accepted 2011-03-28吉非替尼（gefitinib ）是表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（epidermal growth factor receptor tyrosine kinase inhibitor ，EGFR-TKI ）类靶向药物，目前主要用于治疗已接受过铂类为基础化疗的非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer ，002DOI: 10.3781/j.issn.1000-7431.2011.08.Copyright© 2011 by TUMOR 肿瘤2011年8月第31卷第8期 Tumor Vol.31, August, 2011682基础研究·Basic ResearchNSCLC）进展期患者[1]。
对于具有吉非替尼敏感性EGFR突变的患者，应用吉非替尼治疗效果较好，生存期明显延长；然而，靶向药物同样存在着原发耐药和继发耐药的问题。
目前，对于出现吉非替尼耐药的NSCLC，应选择何种方案治疗仍无定论。
国外有研究证实，在体外实验中，洛伐他汀（lavastatin）可诱导伴有K-ras突变的肺癌细胞株发生细胞凋亡[2] 。
而目前国内关于洛伐他汀是否可以克服吉非替尼耐药，尚无相关文献报道。
本实验旨在研究洛伐他汀与吉非替尼的联合应用是否可以克服NSCLC获得性吉非替尼耐药的问题，并探讨其可能的作用机制。
1 材料与方法1.1 细胞株及其培养 吉非替尼获得性耐药的人NSCLC细胞株PC9[3]由同济大学附属上海市肺科医院周彩存教授惠赠。
上海市肺科医院中心实验室通过实验证实，耐吉非替尼细胞株PC9诱导成功，而且验证其耐药性在无药培养液中可维持1年以上。
PC9细胞株置于含10%新生胎牛血清、100 U/mL的青霉素以及100 μg/mL链霉素的RPMI 1640培养液中传代培养。
1.2 主要试剂和仪器 吉非替尼为英国AstraZennca 公司产品；洛伐他汀为美国Sigma公司产品；RPMI 1640培养液和胎牛血清为美国Gibco公司产品；WST-1细胞毒检测试剂盒和Hoechst33342染色液为碧云天生物技术研究所产品；AnnexinⅤ-异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）细胞凋亡检测试剂盒为美国BD公司产品；兔抗人磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B，p-AKT）多克隆抗体和β-actin（作为内对照）为美国Santa Cruz公司产品；兔抗人磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2，p-ERK1/2）多克隆抗体和兔抗人磷酸化表皮生长因子受体（phosphorylated epidermal growth factor receptor，p-EGFR）多克隆抗体为美国Cell Signal公司产品；流式细胞仪为美国Beckman Coulter公司产品；酶标仪为美国Wellscan公司产品。
1.3 实验分组 洛伐他汀和吉非替尼分别用无水乙醇和DMSO溶解，二者的药物浓度和药物处理时间参照Park等[2]研究方法，且进行浓度梯度预实验。