非小细胞肺癌耐药细胞株A549_DDP中microRNA表达的初步研究
MicroRNA与肺癌顺铂耐药相关性研究进展
MicroRNA与肺癌顺铂耐药相关性研究进展张芳(综述);李洋(审校);周清华(审校)【摘要】MicroRNAs (miRNAs) are a class of small, about 22 nucleotides endogenous noncoding RNAs that negatively regulate their target genes’ expression through post-transcriptional suppression. MicroRNA has a broad effect on tumorigenesis and tumor biological processes, including tumor development, differentiation, metastasis and chemoresistance. Chemoresistance represents a major obstacle in effective clinical treatment of tumors, how to conquer the chemoresistance in tumor arouses people’s interst. A growing number of studies have proved that microRNAs play a crucial role in tumor che-moresistance. hTis view will discuss the the progress research between microRNA and tumor therapy, especially the cisplatin chemotherapy in tumor.%微小RNA（microRNA, miRNA）是一类长约22 nt的非编码小分子RNA，在转录后水平上负性调节靶基因的活性。
《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》范文
《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》篇一一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是全球最常见的肺癌类型，具有较高的致死率。
随着对肺癌发病机制的不断深入，越来越多的研究关注于微小RNA（miRNA）在肿瘤发生、发展及治疗中的作用。
其中，miR-342-5p作为一种具有广泛生物活性的miRNA，其在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及其调节机制尚不明确。
本文旨在探讨miR-342-5p在非小细胞肺癌中的功能及其潜在的治疗价值。
二、材料与方法1. 材料本实验所使用的非小细胞肺癌细胞系A549和H460均购自ATCC细胞库。
实验所涉及的试剂、仪器等均经过严格筛选和校准，以确保实验的准确性。
2. 方法（1）细胞培养与转染：将A549和H460细胞在特定条件下培养，并利用脂质体转染法将miR-342-5p模拟物或抑制剂转染至细胞中。
（2）实时荧光定量PCR（RT-qPCR）：检测转染前后miR-342-5p的表达水平。
（3）Western Blot：检测相关蛋白的表达情况。
（4）细胞功能实验：包括细胞增殖、凋亡、迁移等实验，以评估miR-342-5p对细胞功能的影响。
三、实验结果1. miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系中的表达情况通过RT-qPCR实验发现，miR-342-5p在A549和H460细胞中的表达水平较正常肺组织明显升高。
2. miR-342-5p对非小细胞肺癌细胞功能的影响（1）细胞增殖实验显示，过表达miR-342-5p可促进A549和H460细胞的增殖，而抑制miR-342-5p则可抑制细胞的增殖。
（2）细胞凋亡实验表明，过表达miR-342-5p可降低A549和H460细胞的凋亡率，而抑制miR-342-5p则可增加细胞的凋亡率。
（3）迁移实验显示，miR-342-5p可促进非小细胞肺癌细胞的迁移能力。
3. miR-342-5p的调节机制研究通过Western Blot实验发现，miR-342-5p可能通过调控相关信号通路中的关键蛋白，如XXX、YYY等，来影响细胞的增殖、凋亡和迁移。
《miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节研究》范文
《miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节研究》篇一一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是一种常见的恶性肺癌类型，严重影响人们的生命健康。
miRNA是一类小分子RNA，可以参与多种生物过程的调控。
其中，miR-424-5p作为其中的一种成员，近期引起了广泛的关注。
在众多研究报道中，其与非小细胞肺癌之间的关系也受到了广泛的关注。
本文旨在研究miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节机制。
二、研究背景miR-424-5p的异常表达与多种癌症的发生、发展密切相关。
在非小细胞肺癌中，miR-424-5p的表达水平与肿瘤的恶性程度、转移能力等密切相关。
然而，其具体作用机制尚不明确。
因此，研究miR-424-5p在非小细胞肺癌中的作用及调节机制，对于揭示肺癌发病机制、诊断及治疗具有重要意义。
三、研究方法1. 实验材料：非小细胞肺癌细胞A549、miR-424-5p模拟物及抑制剂、相关试剂等。
2. 实验方法：（1）利用生物信息学方法预测miR-424-5p的靶基因；（2）通过细胞实验验证miR-424-5p的靶基因；（3）研究miR-424-5p在A549细胞中的表达情况；（4）利用过表达和敲低技术，研究miR-424-5p对A549细胞增殖、迁移及侵袭等生物学行为的影响；（5）通过荧光素酶报告实验等手段，研究miR-424-5p的调节机制。
四、实验结果1. 预测及验证：通过生物信息学方法预测，我们发现多个基因可能是miR-424-5p的靶基因。
通过细胞实验验证，我们确定了其中几个关键靶基因。
2. miR-424-5p在A549细胞中的表达情况：我们发现miR-424-5p在A549细胞中表达水平较高。
3. miR-424-5p对A549细胞的影响：过表达miR-424-5p可以显著促进A549细胞的增殖、迁移及侵袭能力，而敲低miR-424-5p则具有相反的效果。
4. 调节机制：通过荧光素酶报告实验等手段，我们发现miR-424-5p通过调控其靶基因的表达，进而影响A549细胞的生物学行为。
《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》范文
《miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节研究》篇一一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要类型之一，具有高发病率和高死亡率的特点。
近年来，随着分子生物学和基因组学研究的深入，microRNA（miRNA）在肿瘤发生、发展及转移过程中的作用逐渐受到关注。
miR-342-5p作为一种重要的miRNA，在多种肿瘤细胞中表现出调控作用。
本研究旨在探讨miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的作用及调节机制，为非小细胞肺癌的治疗提供新的思路和方法。
二、研究方法1. 实验材料本研究选用非小细胞肺癌细胞系A549和H460作为研究对象，同时使用miR-342-5p的模拟物和抑制剂进行实验。
2. 实验方法（1）通过生物信息学方法预测miR-342-5p的靶基因；（2）利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测A549和H460细胞中miR-342-5p的表达水平；（3）通过过表达和敲低miR-342-5p，观察其对A549和H460细胞增殖、迁移和侵袭的影响；（4）利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-342-5p与预测靶基因的结合情况；（5）通过Western blot检测靶基因在蛋白水平的表达变化。
三、实验结果1. miR-342-5p在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的表达情况通过RT-qPCR实验发现，与非癌肺组织相比，miR-342-5p 在非小细胞肺癌细胞系A549和H460中的表达水平显著降低。
2. miR-342-5p对非小细胞肺癌细胞系A549和H460的影响（1）过表达miR-342-5p可抑制A549和H460细胞的增殖、迁移和侵袭；（2）敲低miR-342-5p可促进A549和H460细胞的增殖、迁移和侵袭。
3. miR-342-5p的靶基因验证通过生物信息学方法预测及实验验证，发现miR-342-5p可与某靶基因的3'UTR区域结合，且过表达miR-342-5p可显著降低该靶基因在A549和H460细胞中的表达水平。
Qualityard A549 DDP 人非小细胞肺癌细胞说明书及注意事项
A549/DDP人非小细胞肺癌细胞说明书及注意事项1.简介：A549人非小细胞肺癌细胞，来源于58岁的白人男性肺癌组织，由D.J. Giard等人建立于1972年。
M. Lieber发现A549可以通过胞苷二磷酸胆碱途径合成高比例的不饱和脂肪酸卵磷脂。
本细胞株是A549细胞经DDP筛选的耐DDP株。
不宜在细胞刚复苏或消化后呈悬浮状态下加药，一般在细胞达50%后，贴壁良好后比较好，顺铂加药浓度为2μg/ml。
在本库通过支原体检测。
所有肿瘤细胞和病毒转染的细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，操作者需注意自身防护。
基本培养条件:培养基：89％F-12K +10％胎牛血清+1％PS温度：37℃气相：95％空气，5%二氧化碳2.细胞运输：本细胞为贴壁细胞，常规运输方式是将细胞在培养瓶中培养至状态良好后灌满新鲜的完全培养液并封好瓶口进行运输。
根据气温的高低及运输距离的远近，我们可能采取以下两种方式运输。
活细胞胰酶消化离心后血清发货；冻存管发货。
3.客户收到细胞后请严格按照以下要求进行操作。
3.1培养前的注意事项：A. 细胞出库前都是生长良好,我们会对出库细胞进行拍照留档(建议用户在收到细胞时拍照片,细胞拍照时请用100X 、200X倍数各拍上2~3张照片留存,可用作细胞状态的对比,拍摄的照片应当清晰)。
B. 用户在收到细胞后,先观察培养瓶是否完好,培养液是否外渗,培养液是否浑浊。
3.2新购细胞的初步培养：客户收到细胞后在未开封前,先用75％酒精将培养瓶外表擦拭干净,镜检细胞贴壁情况。
将细胞置于培养箱中进行1-2小时的缓冲，待细胞恢复基本生长状态后，进行后续细胞实验。
细胞恢复基本生长状态后，倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：A. 细胞密度未达85％时，用75％酒精喷洒培养瓶后放在生物操作台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸取剩余培养液，只留6~8ml培养液继续培养。
B.细胞长满（达85-95％），即可进行传代。
《miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节研究》范文
《miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节研究》篇一摘要：本文通过深入研究miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的表达情况及其作用机制，揭示了miR-424-5p在肺癌细胞增殖、凋亡及转移等生物学行为中的关键作用，并探讨了其潜在的调节机制。
研究结果表明，miR-424-5p的表达水平与非小细胞肺癌的发生、发展密切相关，有望成为肺癌治疗的新靶点。
一、引言非小细胞肺癌（NSCLC）是肺癌的主要类型之一，其发病机制复杂，涉及多种基因的异常表达和调控。
MicroRNAs（miRNAs）是一类内源性的非编码小RNA，通过调控靶基因的表达参与多种生物学过程。
其中，miR-424-5p在多种癌症中表现出不同的表达模式和功能。
因此，研究miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的作用及调节机制，对于深入了解肺癌的发病机制及开发新的治疗方法具有重要意义。
二、研究方法本研究采用实时荧光定量PCR技术检测非小细胞肺癌细胞A549中miR-424-5p的表达水平，通过细胞增殖、凋亡及迁移实验探究miR-424-5p对A549细胞生物学行为的影响。
同时，利用生物信息学方法预测miR-424-5p的靶基因，并通过双荧光素酶报告实验验证预测结果的准确性。
三、实验结果1. miR-424-5p在非小细胞肺癌细胞A549中的表达情况通过实时荧光定量PCR检测发现，与非癌肺组织相比，非小细胞肺癌组织中miR-424-5p的表达水平显著升高。
在A549细胞中，miR-424-5p的表达也呈现高表达趋势。
2. miR-424-5p对A549细胞生物学行为的影响细胞增殖实验显示，过表达miR-424-5p的A549细胞增殖速度明显加快；而抑制miR-424-5p表达的A549细胞增殖受到抑制。
凋亡实验结果表明，过表达miR-424-5p的A549细胞凋亡率降低，而抑制miR-424-5p表达的A549细胞凋亡率增加。
非小细胞肺癌中肺耐药蛋白mRNA的表达及临床意义
非小细胞肺癌中肺耐药蛋白mRNA的表达及临床意义背景和意义非小细胞肺癌（Non-Small Cell Lung Cancer，NSCLC）是一种相对常见的恶性肿瘤，目前治疗药物主要是以靶向药物为主。
然而，肺耐药蛋白（P-glycoprotein，P-gp）是一个输送膜蛋白，它可以出现在某些肺癌细胞的细胞膜中，从而导致多药耐药的现象，使治疗变得困难。
近年来，人们逐渐意识到 P-gp 基因表达的水平与多药耐药之间有着密切的关系，因此研究肺癌细胞中这一蛋白的 mRNA 表达对于治疗 NSCLC 至关重要。
研究方法本文的研究采用了大规模回顾性队列研究的方式，对 156 例 NSCLC 患者进行了 P-gp mRNA 的检测，并对这些患者的临床相关数据进行分析。
使用实时荧光定量 PCR 技术检测肺耐药蛋白 mRNA 的水平，以确定其表达水平。
同时收集相关病史、化疗和放疗等治疗方式、治疗效果及生存状况的数据进行分析，以评估 P-gp mRNA 表达和多药耐药之间的联系。
结果研究数据显示：在 NSCLC 患者中，有 66.7% 的人检测为 P-gp mRNA 高表达，这意味着他们更容易出现多药耐药的情况。
与低表达组相比，高表达组的患者在化疗后生存时间更短，长期生存率也更低。
此外，高表达组的化疗和放疗效果也更差。
这表明 P-gp mRNA 高表达是 NSCLC 多药耐药的主要原因。
结论和展望本研究结果表明 P-gp mRNA 高表达是 NSCLC 患者多药耐药的重要标志，其表达水平与化疗和放疗效果以及生存期密切相关。
此外，对 P-gp mRNA 表达进行监测可以更好地指导治疗方案和评估患者的预后。
未来，我们仍需进一步研究多种因素对 P-gp mRNA 表达的影响，并探索更为有效且有针对性的治疗方案，谋求更好地治疗 NSCLC 患者的效果。
In conclusion, P-gp mRNA expression is an important indicator of multidrug resistance in NSCLC patients. Its expression level is closely related to the efficacy of chemoradiotherapy and the overall survival rate of patients. The monitoring of P-gp mRNA expression can guide treatment plans and evaluate patient prognosis. Future studies need to explore various factors affecting P-gp mRNA expression and explore more effective and targeted treatment options to better treat NSCLC patients.。
microRNA-149在顺铂耐药非小细胞肺癌细胞中的表达变化及相关机制研究
microRNA-149在顺铂耐药非小细胞肺癌细胞中的表达变化及相关机制研究施凯;冯月娟;王建峰;王灿灿;郁东伟;陈学远【期刊名称】《中国现代医生》【年(卷),期】2018(056)030【摘要】目的探讨microRNA-149(miR-149)在顺铂耐药A549细胞(A549/DDP)中的表达规律及作用机制.方法生物信息学方法分析顺铂耐药A549细胞中的microRNA表达变化.体外培养A549细胞并诱导对顺铂耐药的A549/DDP细胞系,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-149在两种细胞系中的表达差异.CCK-8试验及流式细胞术检测单纯miR-149过表达以及miR-149和ABCC1同时过表达对细胞顺铂敏感性的影响.qRT-PCR及Western blot检测A549及A549/DDP细胞中ABCC1的表达差异,双荧光素酶报告试验检测miR-149以ABCC1之间的靶向关系,并利用qRT-PCR及Western blot加以证实.结果 A549/DDP细胞中的miR-149表达较低,与A549细胞相比,差异具有统计学意义(t=-4.65,P＜0.05).miR-149过表达可以降低顺铂处理后A549/DDP细胞的活力但增加其凋亡率,与阴性转染对照细胞相比,差异具有统计学意义(P均＜0.05).与A549细胞相比ABCC1在A549/DDP细胞中存在mRNA及蛋白水平的高表达,差异具有统计学意义(t=8.44、5.14,P均＜0.05).过表达miR-149可以降低A549/DDP细胞中ABCC1的mRNA及蛋白水平,与阴性转染对照细胞相比,差异具有统计学意义(t=-3.14、-4.54,P＜0.05).双荧光报告酶分析显示miR-149可直接与ABCC1 mRNA 的3'UTR结合.miR-149与ABCC1同时过表达的A549/DDP细胞与单纯miR-149过表达的细胞相比,顺铂处理后细胞活力增加,凋亡减少,差异具有统计学意义(P均＜0.05).结论 miR-149表达不足可能引起A549细胞对顺铂的耐药,该机制与miR-149对ABCC1的抑制作用有关.【总页数】6页(P1-5,9)【作者】施凯;冯月娟;王建峰;王灿灿;郁东伟;陈学远【作者单位】杭州师范大学附属医院呼吸内科,浙江杭州310011;杭州师范大学附属医院呼吸内科,浙江杭州310011;杭州师范大学附属医院呼吸内科,浙江杭州310011;杭州师范大学附属医院呼吸内科,浙江杭州310011;杭州师范大学附属医院呼吸内科,浙江杭州310011;杭州师范大学附属医院呼吸内科,浙江杭州310011【正文语种】中文【中图分类】R734.2【相关文献】1.卵巢癌顺铂耐药细胞中DNA转录与修复相关基因的表达 [J], 曹漫明;张积仁;汪森明;胡喜钢;胡利娟2.Slug和E-cadherin在非小细胞肺癌恶性胸水细胞中的表达变化 [J], 李长思;徐爱华;杨杨;李斌;李建华;孙永新3.let7a在非小细胞肺癌顺铂耐药中的作用及相关机制研究 [J], 彭微; 刘求梅; 刘洁; 袁桂4.miR-21在非小细胞肺癌组织细胞中的表达变化及其在细胞增殖、凋亡中的作用[J], 金文静; 顾文超; 袁亚平; 冯慧丽; 王冬冬5.EZH2蛋白在非小细胞肺癌顺铂耐药中的作用及其机制研究 [J], 齐慧;呼群;苏乌云;贾永峰;陈连香;曹冉华;乌日罕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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实验研究¬非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP中microRNA表达的初步研究陆晓, 孙婧, 高雯, 徐小涛, 束永前南京医科大学第一附属医院肿瘤科,江苏南京210029Analysis of microRNAs in drug2resistant NSC LC cell line A549/DDPL U X iao,S U N J ing,GA O Wen,X U X iao2tao,S HU Yong2qianDepartment of Oncolog y,Fi rst A f f liated Hos pital of N anj ing Medical Universit y,N anj ing210029,P.R.China【摘要】 目的:应用miRNA芯片技术检测非小细胞肺癌(NSCL C)细胞株A549及顺铂(DDP)耐药株A549/DDP miRNAs表达的差异。
方法:M T T法检测A549/DDP相对于其亲本细胞A549的耐药性和耐药倍数;分别提取2种细胞的总RNA进行质检;microRNA 芯片检测NSCL C细胞株A549及对应的DDP耐药株A549/DDP中miRNA表达差异;采用real2time PCR验证结果。
结果:DDP 对A549和A549/DDP细胞的IC50值分别为7147和137.32μmol/L,两者差异有统计学意义(P<0.01),耐药倍数为18.38倍。
microR2 NA芯片结果显示,耐药株A549/DDP与亲本细胞系A549比较有34条有差异表达的miR2 NA(19条上调,15条下调)差异比值>115倍或<0167倍,P<0105;real2time PCR的结果进一步证实miR221、miR231和miR2374在A549/DDP中显著上调,而miR2378、miR28862 5p、miR288623p和miR2520c23p在A549/DDP 中显著下调。
结论:A549/DDP与A549的miRNA的表达谱存在差异,miRNA可能参与NSCLC DDP耐药,为进一步研究miRNA在NSCLC DDP耐药机制中的作用奠定基础。
中华肿瘤防治杂志,2010,17(9):659-663[ABSTRACT] OB JECTIVE:To analyze the difference in miR2 NAs expression between A549and A549/DDP cells and explore the association between miRNA and cisplatin resistanc of non2 small cell lung cancer(NSCL C).METH ODS:The drug resistance of A549/DDP cells was evaluated by using M T T assay.The total RNA of the two cell lines was isolated and examined.The miR2 NA expressions of A549/DDP and A549were analyzed by using microarray and the results were confirmed by real2time PCR.RE2 SU LTS:The values of IC50of cisplatin to A549cells and A549/ DDP cells were7.47and137.32μmol/L respectively(P< 0101).The drug resistance index of A549/DDP cells relative to the parental A549cells was18.38.The microarray analysis showed that34human miRNAs were differentially expressed be2 tween two cell lines(Fold change>1.5or<0.67,and P< 0105).Compared to A549cells,there were19miRNAs up2regu2 lated and15miRNAs down2regulated in A549/DDP,Among the differentially expressed miRNAs,miR221,miR231and miR2374 were upregulated and miR2378,miR288625P,miR288623P were downregulated,whose expression was f urther validated by red time PCR.CONC L USIONS:NSCL C resistant to cisplatin is asso2 ciated with a group of miRNAs.This finding provides an experi2 mental basis for f urther study of mechanism underlying the cispl2 atin resistance of NSCL C.Chin J Cancer Prev T reat,2010,17(9):659-663【关键词】 癌,非小细胞肺;顺铂;抗药性,肿瘤;芯片;microRNA[KE YWOR DS] carcinoma,non2small2cell lung;cisplatin;drug resistance,neoplasm;microarray;microRNA 【中图分类号】 R734.2 【文献标识码】 A 【文章编号】 1673-5269(2010)09-0659-05【基金项目】 江苏省医学重点学科项目(XK200718)【第一作者简介】 陆晓,女,江苏常熟人,硕士,主要从事肺癌化疗耐药的基础研究工作。
Tel:86-25-68136043 E2mail:luxiao1228@【通讯作者简介】 束永前,男,江苏苏州人,教授,博士生导师,主要从事肺癌的早期诊断、个体化治疗、靶向治疗及预后因素分析的基础及临床研究工作。
T el:86-25-83718836-6428 E2mail:shuyongqian@ micro RNA(miRNA)是在真核生物中发现的一类小分子非编码RNA,在转录后水平调节基因表达[1]。
研究表明,miRNA的表达与多种癌症相关,在肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的生物学作用,且可能与肿瘤的耐药性密切相关[224]。
顺铂(cisplatin, DDP)是非小细胞肺癌(non2small cell lung cancer, NSCL C)化疗的一线药物,但其获得性耐药制约了其疗效的发挥[5]。
本研究通过miRNA表达谱芯片技术,检测DDP耐药的NSCL C细胞株与敏感株中miRNA表达的差异,筛选出与NSCL C DDP耐药相关的miRNAs,初步探讨miRNA与NSCL C DDP耐药的关系。
1 材料与方法1.1 主要材料和试剂CO2培养箱(德国Kendro Heracell公司),Ta Ka2 Ra PCR Thermal Cycler(宝生物工程有限公司),ABI PRISM7900system(Applied Bio systems),酶标自动分析仪(澳大利亚AS YS公司Clinibio128c型),台式离心机(德国Eppendorf公司),NSCL C细胞株A549及DDP耐药细胞株A549/DDP购自上海麦莎生物科技有限公司,RPM I1640完全培养基和胎牛血清购自Hyclone公司,胰酶购自GIBCO公司,DDP购自南京制药厂,四甲基偶氮唑盐(M T T)和DMSO购自Sigma 公司,TRIZOL购自invitrogen公司,PCR引物由上海英骏公司合成,miRNA芯片购自Exiqon公司的L NA TM miRNA,miRCU R Y TM Array Power标记试剂盒为Exiqon公司,Real2time PCR试剂盒购自Invit rogen公司。
1.2 细胞培养人肺腺癌细胞株A549和A549/DDP用含10%胎牛血清、100U/mL青霉素、100U/mL链霉素的RPMI1640培养液为完全培养,在37℃、5%CO2饱和湿度的细胞培养箱中培养。
为保持A549/DDP的耐药性,该细胞需培养在含DDP0.5μg/mL的上述培养液中,于实验的前2d更换为无DDP的上述RP2 M I1640培养液。
细胞呈贴壁生长,2～3d传代1次,选择对数生长期的细胞实验。
1.3 MTT法测定A549/DDP对A549的耐药倍数取对数生长期细胞消化,制备单细胞悬液,以浓度4×104mL-1,接种96孔培养板中(100μL/孔)。
实验分为A549/DDP组和A549组,每组分实验组和对照组。
培养12h,分别加入终浓度为10、20、40、80、160和320μmol/L的DDP,终体积为200μL,每组浓度设4个复孔。
在37℃、5%CO2培养箱中培养48h,每孔加入5mg/mL M T T20μL,继续培养4h,去上清,每孔加DMSO原液150μL,培养板置于震荡器上震荡10min,用酶标仪测定各孔OD492值。
抑制率(%)=(1-实验组A值-空白对照组A值实验对照组A值-空白对照组A值)×100% 采用直线回归法计算DDP的半数抑制浓度IC50值。
实验重复3次。
耐药倍数=耐药株IC50值敏感株IC50值1.4 总RNA的提取及质量检测用Trizol分别提取A549和A549/DDP中的总RNA,细胞样品裂解后室温放置5min,以便核酸蛋白复合体完全解离。
每1mL的Trizol试剂匀浆的样品中加入0.2mL的氯仿,涡旋15s,室温放置3min, 4℃12000r/min离心15min(r=5.5cm)。
离心后收集上清,加入0.5mL的异丙醇,混匀后室温放置10min,再于4℃12000r/min,离心10min(r= 5.5cm)。
移去上清液,加入1mL含有D EPC水的75%乙醇,清洗RNA沉淀。
振荡后,4℃5000r/min 离心5min(r=5.5cm)。
倒尽液体,空气中干燥RNA 沉淀5～10min,沉淀溶于50μL D EPC水。