常压室温等离子体诱变与微生物微滴培养选育几丁质脱乙酰基酶高产菌株
几丁质脱乙酰酶菌株的选育
几丁质脱乙酰酶菌株的选育几丁质脱乙酰酶菌株的选育几丁质是一种来源于甲壳动物外骨骼和真菌细胞壁的重要生物材料，具有生物可降解、生物相容性和生物活性等特点，因此在医药、农业、水产等领域有广泛的应用前景。
然而，由于几丁质的结构复杂，传统的化学方法生产几丁质的成本较高，且对环境造成了一定的污染。
因此，寻找一种高效、低成本的几丁质脱乙酰酶（chitinase）菌株成为了当前研究的热点之一。
几丁质脱乙酰酶是一种可以将几丁质分解为N-乙酰葡萄糖胺和几丁二糖的酶，广泛存在于微生物中，可通过筛选适应环境的菌株来获得高效的几丁质脱乙酰酶。
在几丁质脱乙酰酶菌株的选育过程中，主要包括菌种收集、分离、筛选和鉴定等环节。
首先，菌种收集是选育几丁质脱乙酰酶菌株的第一步。
可以从各种自然环境中收集土壤、水体、河流等样品，也可以从已知具有几丁质脱乙酰酶活性的菌株中进行分离。
采集的样品需要在恰当的温度和潮湿环境下进行保存和传递，以确保菌株的存活。
其次，菌种分离是选育几丁质脱乙酰酶菌株的关键环节。
样品收集后，应该在适宜的富含几丁质的培养基上进行菌种的分离。
分离方法主要有稀释板法、半固体划线法和滴法等。
采用不同的分离方法可以获得不同的菌落型，可以提高菌种的多样性。
接下来，菌种筛选是选育几丁质脱乙酰酶菌株的重要环节。
首先将菌落转移到含有几丁质的培养基上进行预筛选。
经过一段时间后，观察培养物上是否出现了透明圈附近的菌落，透明圈往往表示该菌株产生了几丁质脱乙酰酶。
然后通过测定菌株的酶活性和菌株的几丁质分解效果等指标，筛选出具有较高几丁质脱乙酰酶活性的菌株。
最后，通过鉴定确定几丁质脱乙酰酶菌株的分类和特性。
可以通过形态学观察、生理生化指标检测、分子生物学方法等来鉴定菌株的分类和特性。
鉴定的结果可以用于评估菌株的应用潜力和确定菌株是否适合于大规模生产。
综上所述，几丁质脱乙酰酶菌株的选育是一个复杂的过程，需要从环境样品中筛选适用的菌种，进一步分离、筛选和鉴定，最终得到高效的几丁质脱乙酰酶菌株。
常压室温等离子(ARTP)诱变选育恩拉霉素高产菌株
恩 拉 霉 素 （Ｅｎｒａｍｙｃｉｎ），又 名 恩 来 霉 素 、安 来 霉 素 、持 久 霉 素 。是 １９６６年 日本 武 田药 品工 业 株 式 会 社 的研 究 人 员 从 日本 兵 库 县 西 宫 市 的土 壤 中分 离 出 一 株 杀 真 链 霉 菌 Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｆｕｎｇｉｃｉｄｉｏｕｓ Ｎｏ． Ｂ５４７７发 酵 产 生 的 一 种 多 肽类 抗 生 素 ｎ］．主 要 组 分 有 恩拉 霉 素 Ａ和 Ｂ。１９７４年 ，恩拉 霉 素预 混 剂在 日 本 注册 ．作 为猪 、鸡 的促生 长 剂来 使 用 。 １９９３年 ，日 本 武 田药 品株 式 会 社 向 中 国农 业部 申请 登 记 注 册 。 注册 名称 为 恩拉 霉素 预混 剂 ］。
第 ５４卷 （总 第 ２０５期 ）
秦 艳 飞 等 ：常 压 室 温 等 离 子 （ＡＲＴＰ）诱 变 选 育 恩 拉 霉 素高 产 菌 株
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株 中发 酵 的 调 控 主 要 以基 因簇 或 功 能 基 团 协 调 作 用 ．单 一 改 造 基 因位 点 ，难 以在 工 业 发 酵 上 大 幅提 高发 酵水 平 。公 司技 术 中心在 借鉴 国内外先 进 育种 方 法 、手 段 及 发 酵 工 艺 优 化 研 究 的基 础 上 ，在 菌 种 筛选 上 引入 ＡＲＴＰ新 型诱 变设 备 ，结 合微 孔 板 高通 量筛 选 ，节省 人力 、缩 短 菌种筛 选周 期 ］。
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ａｓ ｔｏ ｂｅ ｏｒｉｇｉｎａｌ ｓｔｒａｉｎ， ｔｈｅ ＬＡ 一１０ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｅｎｒａｍｙｃｉｎｓ’ ｍｕｔａｇｅｎｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｂｙ ＡＲＴＰ， Ａ ｒａｐｉｄ ｉｎｉｔｉａｌ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｓｐｅｅｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｉｔ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｅｌｅｃｔ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｍｕｔａｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｃｏｎｔｅｎｔ，ｆｅｗ ｉｍｐｕｒ ｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｓｔａｂｌｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｂｙ ＨＰＬＣ， ａｎｄ ｔｈｅ ｈｉｇｈ—ｙｉｅｌｄ— ｉｎｇ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ａｎｄ ｖｅｒｉｆｉｅｄ．
一株产几丁质脱乙酰酶诱变菌株的培养基配方及发酵条件优化
一株产几丁质脱乙酰酶诱变菌株的培养基配方及发酵条件优化秦汪艳;李永成【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2017(036)009【摘要】以一株海洋来源产几丁质脱乙酰酶(CDA)的丝状真菌(Penicilium janthinellum) 1-5-2为出发菌株,经紫外线诱变后获得一高产CDA菌株UV-210S.通过单因素试验得出该诱变菌株的最佳培养基配方为麦芽糖1.3％,牛肉浸膏2.6％,NaH2PO40.3％,CaCl2 0.1％,胶体几丁质0.5％;最佳发酵工艺条件为NaCl 1.5％,初始pH值为9.0,发酵温度30℃,摇床转速180 r/min,CDA最佳收集时间为72 h.经培养基配方及发酵条件优化后该诱变菌株的最高CDA酶活为16.76 U/mL,相比优化前的酶活提高了52％.【总页数】5页(P50-54)【作者】秦汪艳;李永成【作者单位】海南大学食品学院,海南海口570228;海南大学食品学院,海南海口570228【正文语种】中文【中图分类】TS201.3【相关文献】1.一株产角蛋白酶菌株诱变筛选及发酵条件优化 [J], 刘文龙; 王兴吉; 张志来; 王克芬2.海洋细菌Microbacterium esteraromaticum MCDA02产几丁质脱乙酰酶发酵条件优化 [J], 王敏卜; 柴金龙; 武波飞; 苏永成; 陈丽; 焦豫良; 黄绪娟; 房耀维; 刘姝3.常压室温等离子诱变与微生物微滴培养选育几丁质脱乙酰基酶高产菌株 [J], 马钦元;申雁冰;丁盼盼;屠琳娜;毕心宇;王敏4.一株产几丁质脱乙酰酶海洋细菌的Rhodococcus hoagii筛选、鉴定及酶学性质[J], 王敏卜;柴金龙;武波飞;苏永成;王淑军;焦豫良;杨杰;房耀维;刘姝5.海洋Arthrobacter protophormiae CDA2-2-2产几丁质脱乙酰酶发酵条件优化 [J], 张晓彤;张晓萌;苏永成;武波飞;刘姝;卢静;杨光;房耀维因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
常压室温等离子体诱变选育木聚糖酶高产菌及其酶学性质研究
木聚糖酶是一种重要的半纤维素水解酶系，能将木聚糖降解为木寡糖和木糖[1]，已被用于生物燃料乙醇、食品、医药以及动物饲料等领域[2-3]。
PARAB P等[4]利用芽孢杆菌（sp.）产生的木聚糖酶酶解海藻，得到可发酵的还原糖；DHIMAN S S等[5]利用嗜热脂肪芽孢杆菌（）所产木聚糖酶处理柑橘果汁，通过降解其中果胶、淀粉和半纤维素等大分子多糖，获得了高度澄清的柑橘果汁；KHAMBHATY Y等[6]将木聚糖酶用于纸浆预处理，能有效提高纸浆的白度。
木聚糖酶来源广泛，有微生物、甲壳动物、植物、昆虫、种子等。
其中微生物主要包括真菌（如黑曲霉、烟曲霉、米曲霉、木霉、青霉等）、细菌（如地衣芽孢杆菌、黄热芽孢杆菌、嗜热双胞菌、枯草芽孢杆菌、双歧杆菌等）和放线菌[7-9]。
一般认为微生物是生产商品木聚糖酶的最佳来源之一[10]。
郑丽丽等[11]从土壤中筛得一株黑曲霉，其所产木聚糖酶酶活为78.34U/mL；KUMAR V等[12]从废弃木材中筛得野生菌疏棉状嗜热霉菌，其所产木聚糖酶酶活为61.09U/mL；吴仁智等[13]从土壤中筛得野生日本曲霉菌，其所产木聚糖酶酶活为26.26U/mL。
由于野生菌所产木聚糖酶酶活较低，而对工业化生产而言，木聚糖酶酶活高不仅能提高生产效率、亦能有效节约能源[14]，因此可采用一些方法提高野生菌的产酶能力，诱变育种是其中一种有效方法。
常压室温等离子体（atmospheric and room temperature plasma，ARTP）技术是近些年发展起来的一种新型微生物诱变育种方法，ARTP富含的活性粒子可以改变细胞壁和细胞膜的物理化学性质，并造成组织损伤和遗传物质损伤，微生物细胞被迫启动容错水平高的“SOS修复机制”、出现较多错误倾向修复，引起微生物的基因突变[15-16]。
ARTP诱变技术具有突变率高、成本低、环境友好等优点[17]，已成为诱变领域的研究热点。
常压室温等离子体诱变选育木聚糖酶高产菌及其酶学性质研究朱慧霞1,方桢1,鲁旭峰1,汪水玲1,马晓静1,姚日生1,2*(1.合肥工业大学食品与生物工程学院,安徽合肥230009;2.农产品生物化工教育部工程研究中心,安徽合肥230009)摘要：利用常压室温等离子体（ARTP）技术对黑曲霉（）FXY进行诱变处理，并对菌株的遗传稳定性及所产木聚糖酶的酶学性质进行了研究。
常压室温等离子诱变选育微生物的研究进展
农产品加工
No.6
2021年6月
Farm Products Processing
Jun.
文章编号：1671-9646（2021） 06a-0097-03
常压室温等离子诱变选育微生物的研究进展
徐礼生，于巧玲，张兴桃，蒋变玲，李婷婷
（宿州学院生物与食品工程学院，安徽宿州234000）
摘要：常压室温等离子体诱变技术在选育微生物领域应用广泛，与传统化学诱变和物理诱变相比，具有无污染、突
变速度快、易人工控制等优点。围绕细菌、真菌、酵母及微藻等方面研究常压室温等离子体诱变技术的应用，诱变
菌株具有遗传稳定、产量高等特点，实际工业应用中提高经济效益。通过对常压室温等离子体诱变技术进行系统分
[4] Christoph Ottenheim， Margarete Nawrath，Jinchuan Wu.
2021年第6期
徐礼生，等：常压室温等离子诱变选育微生物的研究进展
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Microbial mutagenesis by atmospheric and room -tempera ture plasma (ARTP) : The lastest development [J] . Bioresour. Bioprocess， 2018 (12): 2-14. [5] 林晓琼，孙旸，陈光，等.常压室温等离子体快速诱变 筛选高产纤维素酶生产菌株[J].吉林农业大学学报， 2016，38 (5) : 543-547. [6] 陈双喜，张二超，张乐乐，等.Y-聚谷氨酸生产菌株的 常压室温等离子体诱变选育[J].中国医药工业杂志， 2015，46 (9) : 951-963. [7] 蔡莹瀛，夏苗苗，董会娜，等常压室温等离子体(ARTP) 诱变及高通量筛选维生素B12高产菌株[J].天津科技大 学学报， 2018 (33): 21-26. [8] 袁红梅，薛正莲，杨心萍.常压室温等离子体和紫外诱 变选育腺苷高产菌[J].发酵科技通讯，2019, 48(2):
常压室温等离子体诱变选育春雷霉素高产菌株
常压室温等离子体诱变选育春雷霉素高产菌株作者：高嫚妮潘忠成杨玉旺杨宏勃陈豪翁婧李蒲民来源：《绿色科技》2019年第24期摘要：采用常压室温等离子体对春雷霉素生产菌株小金色链霉菌（ Streptomyces mlcroaureus） 203#进行诱变育种，采用不同时间等离子体照射诱变，再经过琼脂块筛选、摇瓶初筛和复筛，获得2株春雷霉素高产菌株，摇瓶效价分别为5012 μg/mL和4034 μg/mL，相比原始出发菌株203的效价提高了147%和98%。
关键词：小金色链霉菌;效价;诱变选育;春雷霉素;常压室温等离子体中图分类号：TQ455.5文献标识码：A文章编号：16 74-9944（ 2019） 24-0001-041 引言近年来，随着人们环保意识的加强，生物农药逐渐走人人们的视野。
其专一性强，活性高，安全环保，不易产生残留和抗药性，对我国农业避免药害、合理用药、减缓病害抗药性、提高防治效果、减少农药残留有着重要意义。
春雷霉素不仅能防治水稻稻瘟病[1]，对番茄叶霉病[2，3]、黄瓜细菌性角斑病[4，5]、白菜软腐病[6]等也具有抗菌作用。
春雷霉素作为高效、广谱、低毒、无公害的生物农药，被农业部列为无公害农产品生产推荐农药，展示了越来越光明的市场前景。
春雷霉素是属于氨基糖苷类抗生素，其产生菌为小金色链霉菌。
菌种的高产和发酵工艺的优化关系到一个发酵行业的灵魂，能获得一株高产、稳定、适应性好的菌株，将会大大缩短产业化的路程。
采用等离子体诱变和紫外照射诱变是目前常采用的有效诱变手段，以此来筛选抗生素高产菌株已广泛用于菌株选育程序中[7]。
多杀菌素产生菌经过紫外诱变，筛选高产菌株已有研究报道[8]。
汪晨等[9]以谷氨酸棒杆菌作为原始出发菌株，通过常压室温等离子体诱变技术，确定高产琥珀酸等离子体诱变的物理参数和最佳诱变条件，筛选得到具备良好的产琥珀酸与有机酸的能力的诱变菌。
蔡聪等[1O]为进一步提高凝结芽孢杆菌发酵木糖生产L一乳酸的产量和转化率，以实验室保存的一株能利用木糖产L一乳酸的野生型凝结芽孢杆菌菌株NLOI 为出发菌株，通过等离子体诱变育种技术和平板菌落初筛、摇瓶复筛，最终得到一株木糖耐受力强、L一乳酸产量高、遗传特性稳定的正向突变菌株NL- CC- 17。
庚基灵菌红素高产菌株的常压室温等离子体诱变(ARTP)选育
庚基灵菌红素高产菌株Notoacmeibacter sp.BGMRC2072的常压室温等离子体诱变（ARTP）选育本期为您推荐广西中医药大学海洋药物研究院高程海研究员研究团队发表在《广西科学》上的一篇文章：庚基灵菌红素高产菌株Notoacmeibacter sp.BGMRC2072的常压室温等离子体诱变（ARTP）选育。
文章摘要内容如下:灵菌红素类色素是一类由微生物次级代谢所产生的，具有3个吡咯环母核结构的天然红色素的总称，它和它的类似物具有广阔的应用前景和市场价值。
庚基灵菌红素是灵菌红素的结构类似物，目前仅有为数不多的菌株被报道可产庚基灵菌红素，且产量极低。
针对产灵菌红素菌种诱变改良的方法较多，包括物理诱变法、化学诱变法和复合诱变法，尚未有关于使用ARTP诱变筛选庚基灵菌红素高产菌株的方法报道。
本研究为了获得稳定高产庚基灵菌红素(Heptylprodigiosin，HPG)的优势突变菌株，利用常压室温等离子体(Atmospheric and Room Temperature Plasma，ARTP)诱变处理海洋细菌Notoacmeibacter sp.BGMRC2072，结合单菌落的颜色、形态及菌体生物量OD600进行初筛，再依据突变菌株的庚基灵菌红素产量、生物量及比生长速度，筛选出最佳突变菌株，并对其进行遗传稳定性测试。
最终筛选得到一株高产庚基灵菌红素的突变菌株B13，其庚基灵菌红素产量为748.91-756.27μg/mL，比出发菌株增加94.9%，且突变菌株B13具有良好的遗传稳定性。
本研究表明ARTP诱变可明显提高海洋细菌Notoacmeibacter sp.BGMRC2072的庚基灵菌红素产量,且突变菌株的遗传稳定性较好。
文章精彩内容如下：图2 不同处理时间的正负突变率图4 突变菌株的稳定期OD600、比生长速率（a）和生物量（b）图5 B5和B13的遗传稳定性。
常压室温等离子体（ARTP）诱变快速选育高产DHA的裂殖壶菌突变株
常压室温等离子体（ARTP）诱变快速选育高产DHA的裂殖壶菌突变株袁军;赵犇;孙梦玉;王武;杨海麟【摘要】This work aims to establish an expeditious method of mutation breeding strain producing high-yield docosahexaenoic acid (DHA). The original strainSchizochytrium sp. ATCC 20888 was treated by Atmospheric and Room Temperature Plasmas(ARTP), and screened with 100% lethal concentration of 2,2’-Dipyridyl. The mutants were cultured by rotation-flask fermentation, and the strains with high-yield DHA from mutants were screened and selected by phosphoric acid-vanillin reaction and gas chromatography. The results showed that the conditions of mutation breedingSchizochytrium were ARTP for 15 s at the gas flow rate of 10.0L/min and radio-frequency output of 100 W, and the concentration of2,2’-Dipyridyl w as 100μmol/L, so the strain with high-yield was obtained. The DHA-yield of mutant D32 increased significantly up to 7.31g/L, 29.8% higher than those by the original strain. Compared with the original strain, the main saturated fatty acid(C14∶ 0 and C16∶0)b y D32 decreased significantly(P< 0.005), while the unsaturated fatty acid content increased significantly(P < 0.005). The results of subculture test showed that the mutant strain had stable hereditary character after 5 generations. Therefore, this method is not only prompt and efficient, but also provides a reference for the mutation breeding strains of producing other polyunsaturated acids.%旨在建立一种能够快速便捷的诱变选育高产DHA菌株的方法。
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常压室温等离子体诱变与微生物微滴培养选育几丁质脱乙酰基酶高
产菌株
本期为您推荐天津科技大学生物工程学院工业发酵微生物教育部重点实验室王敏教授研究团队与洛阳华清天木生物科技有限公司联合发表在《中国酿造》上的一篇文章：常压室温等离子体诱变与微生物微滴培养选育几丁质脱乙酰基酶高产菌株。
文章摘要内容如下：
几丁质是自然界中仅次于纤维素的第二大生物聚合物，壳聚糖是几丁质脱掉乙酰基的产物，比几丁质具有更大的商业应用价值。
目前壳聚糖主要采用传统化学法生产，存在环境污染严重、工艺难控制、产品质量特别是脱乙酰度不稳定等问题。
采用几丁质脱乙酰基酶（CDA）酶法脱乙酰制备壳聚糖越来越受到人们的重视。
但目前该工艺还无法实现产业化应用，所以高产CDA的菌株筛选仍然是解决CDA应用的主要途径之一。
本研究将常压室温等离子（atmospheric and room temperature plasma，ARTP）诱变与微生物微滴培养（microbial microdroplet-culture，MMC）技术应用于几丁质脱乙酰基酶（CDA）高产菌株的诱变选育，构建高产CDA菌株的诱变及高通量筛选方法。
结果表明，经过4轮的ARTP诱变及MMC筛选，从200个不同的液滴中共筛选出5个发酵产酶明显提升的液滴，并通过进一步的平板筛选、24-深孔板复筛，获得了17株产酶提高300%以上的诱变菌株。
通过对比分析17株高产菌株产CDA的能力，确定了1株最佳CDA高产菌株B4，其CDA最大产量比出发菌株提高了3.15倍，发酵产酶总量达到419.11U/mL，为原始菌种的3.90倍。
常压室温等离子体（ARTP）诱变技术是一种高效的微生物育种技术，微生物微滴培养（MMC）技术是基于液滴微流控技术最新研发而成的一款微生物培养系统，是一种基于微流控技术的微型化、自动化、智能化的高通量微生物培养，具有高通量、自动传代、化学因子梯度添加、在线检测液滴光谱、微生物分选等功能。
ARTP目前已经高效应用于多种细菌、真菌以及植物种子等的诱变选育，但鲜有将ARTP应用于CDA发酵菌株的诱变选育，同时，MMC也是首次被应用于CDA高产菌株的高通量筛选。
本研究提供了一种新的CDA高通量筛选方法，为CDA高产菌株的诱变选育以及其他可通过显色反应进行菌株筛选的工作提供了借鉴。
文章精彩内容如下：
图1 常压室温等离子体+微流控对高产ReCDA菌株的诱变选育流程
图2 常压室温等离子体不同诱变时间对马红球菌CGMCC14861生长（a）及致死率（b）的
影响
图3 马红球菌CGMCC14861的微生物微滴培养结果
图5 菌株B4摇瓶培养产几丁质脱乙酰基酶曲线。