QIAGEN纯化新产品.
QIAGEN 中文版去内毒素大提试剂盒
纯化高转染级别的质粒DNA 【工作台流程】BENCH PROTOCOL准备工作：1.将RNase A 溶液加入P1缓冲液(Buffer P1)2.加40ml96－100％乙醇(ethanol)于试剂盒的去内毒素水中(endotoxin-fre water)3.可选：加 LyseBlue 试剂于 Buffer P14.检查 Buffer P2是否有SDS沉淀precipitation 有沉淀可在37摄氏度下暖化溶解5.Buffer P3 置于4摄氏度中预冷pre-chill6.细菌扩增培养补充：1.准备4-6个50ml新的或灭菌的离心管用于冷冻离心机下离心过夜菌液，2个用于接下来的菌块重悬和与buffer混合2.1个无内毒素的30ml聚丙烯（不推荐聚碳酸酯，因为不耐乙醇）管子（最好用圆底的离心管以利于高速离心）用于收集洗提的质粒DNA3.5个1.5ml的EP管用于收集抽提过程各步骤的产物用于实验后分析和质量控制4.准备1个冰浴盒用于步骤65.准备室温下的异丙醇10.5ml6.4摄氏度冰冻离心机和分光光度仪,琼脂糖凝胶电泳步骤：peocedureA.细菌培养、收获和裂解bacterial culture,harvest & lysis1.100ml高拷贝high-copy或250ml低拷贝low-copy过夜overnight LB培养菌液于冰冻离心机4摄氏度；6000×g；15min从新鲜的抗生素平板上挑取一个单菌落，2-5ml抗生素LB液体初始培养基30摄氏度孵化约8小时（振荡300rpm，注意孵化容器容积至少4倍于培养液）抗生素LB液体培养基稀释初始培养液到1:500-1000。
(高拷贝质粒100-200ul初始培养液加于100ml培养基；低拷贝质粒250-500ul初始培养液加于250ml培养基)37摄氏度300rpm振荡12-16小时。
(孵化容器容积至少4倍于培养液，培养至细菌密度约3-4×109/ml，即离心后菌块湿重约3g/L培养基)培养基配方：10g蛋白胨+5g酵母+10g氯化钠溶于800ml蒸馏水，用1 N NaOH 调pH值至7.0，用蒸馏水调整至1L。
琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒大比对
3. 评估方法 • 使用Nanodrop 2000测量OD值
图： 取2ul纯化的质粒DNA上样于1.0%琼脂糖凝胶电泳 分析结果。M: DL5000 DNA Marker. 结果表明，Magen的HiPure Plasmid Micro Kit与其它品 牌对应的产品效果相当，质粒条带完整，超螺旋质粒含量 高。
2. 琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒大比对
1. 选择品牌： • Qiagen, QIAquick Gel Extraction Kit , 28704 • Tiagen, 超薄琼脂糖凝胶回收试剂盒,DP208 4. 电泳结果
• Omega, E.Z.N.A. Gel Extraction Kit, D2500-02
1. 选择品牌： • Qiagen, QIAamp DNA Blood Mini Kit, D51104 • Tiagen, 血液基因组提取试剂盒(DP318) 4. 电泳结果
试剂盒回收DNA，然后电泳检测DNA回收效率。结果表明，
Magen的HiPure Gel Pure DNA Micro Kit在小片段和大片段上 有更高的回收率，其余片段则相差不大。
3. 评估方法
•
用1琼脂糖电泳分析DNA回收效率
Magen HiPure Gel Pure DNA Micro Kit(D2110)的优势：
3. 评估方法
•
用1琼脂糖电泳分析DNA回收效率
Magen HiPure PCR Pure DNA Micro Kit(D2120)的优势： 1. 高效去除引物二聚体。 2. 低洗脱体积，可低至7-10ul洗脱。 3. 长时间稳定的结合柱，无需平衡液处理 4. 更高的回收率
4.பைடு நூலகம்柱法血液DNA提取试剂盒大比对
德国QIAGEN 仪器汇总表-2011
仪器名称产地、型号用途功能参数价格(USD)破碎仪德国，型号：TisserlyserLT低通量样品破碎对种子，植物，组织等进行破碎，便于提取核酸1. 可以在2-5分钟内对1-12个样本（包括植物样本、动物样本、细菌和酵母样本）进行快速、有效的研磨2.使用封闭式的样品管，不易导致交叉污染3.操作灵活—每次可粉碎1-12个样本。
4.震荡速度和时间可调5.配套产品齐全—包括12孔适配板，可重复使用的不锈钢小球，震荡珠分配器等。
所有配件均为原装进口6．提供完整配套的试剂及整体解决方案0.9万破碎仪德国，型号：Tisserlyser II高通量样品破碎对种子，植物，组织等进行破碎，便于提取核酸1. 可以在2-5分钟内对2-192个样本（包括植物样本、动物样本、细菌和酵母样本）进行快速、有效的研磨2.使用封闭式的样品管，不易导致交叉污染3.操作灵活—每次可粉碎2-192个样本。
4.震荡速度和时间可调5.配套产品齐全—包括2x24孔,2x96孔适配板，可重复使用的不锈钢小球，震荡珠分配器等。
所有配件均为原装进口6．提供完整配套的试剂及整体解决方案1.6万多功能样品制备工作站德国，型号：QIAcube 针对多种样品进行核酸（DNA，RNA）、蛋白纯化；如总RNA、基因组DNA、病毒核酸、质粒，包括细胞、动植物组织、全血、食品、土壤、粪便、体液、痰液等1．样本量：1-12个样品，2．可直接用手工试剂盒在机器上进行纯化，无需购买自动化试剂盒。
3．采用膜纯化技术，灵敏度更高，核酸回收更完全4．全自动操作，可以由仪器完成从上样、裂解、纯化、收集产物的全过程，无需人工干预5．整合振荡、离心机、加热模块，各模块可单独运行6．触摸屏式操作，简单直观7.SFDA 认证4.2-4.5万德国，型号：QIAgility德国，型号：Rotor-Gene-Q plex+HRM焦磷酸测序-遗传分析系统德国，型号：PyroMark Q24应用：1、SNP功能的研究2、应用在甲基化研究耐药检测及病原微生物鉴定的鉴定、分焦磷酸测序的优势包括：■ 24个样本■可定量等位基因，即使是低频率等位基因■可检测未知的序列变异■快速获得直接且明确无疑的序列数据型、耐药性评估，并可对多种亚型或野生株及突变株、耐药株组成的复杂群体中的各个组分含量直接加以定量评估；本系统基于专利的Pyrosequencing技术，可应用于各种遗传多态性标记的分析检测，如SNP、突变、插入/缺失、甲基化、基因拷贝数等；等位频率分析及各种遗传疾病关联性的定量分析，以及临床检验方法的研发及实践应用；此外还可应用于病原微生物，（细菌、病毒、真菌——酵母及霉菌）PyroMark Q2410-11万焦磷酸测序-遗传分析系统德国，型号：PyroMark Q96应用：3、SNP功能的研究4、应用在甲基化研究耐药检测及病原微生物鉴定的鉴定、分焦磷酸测序的优势包括：■ 96个样本■可定量等位基因，即使是低频率等位基因■可检测未知的序列变异■快速获得直接且明确无疑的序列数据型、耐药性评估，并可对多种亚型或野生株及突变株、耐药株组成的复杂群体中的各个组分含量直接加以定量评估；本系统基于专利的Pyrosequencing技术，可应用于各种遗传多态性标记的分析检测，如SNP、突变、插入/缺失、甲基化、基因拷贝数等；等位频率分析及各种遗传疾病关联性的定量分析，以及临床检验方法的研发及实践应用；此外还可应用于病原微生物，（细菌、病毒、真菌——酵母及霉菌）PyroMark Q9616-18万注意：如果需要折算成人民币（不做免税）需要将美金乘8.2（含17%增值税和10%关税）。
QIAGEN最新试剂盒质粒大提操作步骤(翻译版)
QIAGEN EndoFree Plasmid Maxi KitCatalog numbers 12362 室温下15-25度存放2年。
在开始之前作如下准备1）按照说明把RNase A加到Buffer P1 中，混匀，放到2-8度储存。
选作：按照1:1000的比例把LyseBlue 加到Buffer P12）pre-chill Buffer P3 4°C存放。
3）检查Buffer P2 是否有SDS沉淀物，可以放到37℃短暂温热以便溶解分子沉淀物。
4）准备异丙醇。
5）用试剂盒提供的无内毒素的水中加入40ml的96-100%的酒精。
大量质粒提取过程在LB培养基中种植转化的E.coli菌。
使用100ml（高复制数的质粒）或者250ml（低复制数的质粒）过夜培养。
操作步骤如下1.收获LB培养过夜的细菌，在6000g，4℃条件下离心15min。
2.加入10ml Buffer P1（根据SBI要求加倍，用20ml）重悬细菌。
3. 加10ml Buffer P2（根据SBI要求加倍，用20ml），剧烈晃动离心管4-6次使其彻底混匀，室温放置5min。
如果使用了LyseBlue试剂，溶液应该变成均匀蓝色。
4.在孵育期间，打开针口的密封盖.并把过滤器放到合适的架子上。
5.加入10ml冰浴的Buffer P3（根据SBI要求加倍，用20ml）到此溶菌产物中，剧烈晃动离心管4-6次使其混匀。
如果加入了LyseBlue试剂，混匀试剂直到没有颜色。
6.将溶菌产物倒入针口密封的过滤器中，室温放置10min，不要插入活塞。
打开针口的密封盖，轻轻挤压活塞将溶菌产物过滤到一新的50ml离心管中。
7. 加2.5ml Buffer ER到过滤的溶菌液中，充分混匀10次后冰上孵育30min。
8.将QIAGEN-tip 500的柱子挂在另一离心管上，加入10ml Buffer QBT，让管中溶液通过重力滴下排空。
9.将第7步冰上孵育的溶菌液加入QIAGEN-tip柱子中让其透过树脂慢慢滴下。
QIAGEN中提DNA中文操作手册
质粒DNA中提方法（QIAfilter midi kit 25）适用于100 微克的高质粒或粘粒DNA，使用QIAfilter注射器样元件代替常规离心法以清除细菌裂解物。
低拷贝质粒，加入氯霉素放大后应视为高拷贝。
为质粒选择适当的培养体系。
在开始之前的注意事项■如果是低拷贝，最好增加裂解buffer的用量，以提高裂解效率，裂解缓冲卷，从而增加DNA 产量。
■可选：删除样品的步骤用符号表示☞为监测分析凝胶（见第34 页）的过程。
■加入buffer P3后，样品不再需要冰浴。
在开始之前做的东西■把提供的RNase A 添加到buffer P1 中。
一瓶RNase A (使用之前简要地离心）加入一瓶buffer P1 ，终浓度为100 ug/ml。
■检查buffer P2 是否由于低温存储产生SDS沉淀。
如有必要，37 ° C下使SDS溶解。
.■在4 °C预冷buffer P3。
■可选：使用前将提供的LyseBlue 试剂添加到buffer P1 混合。
每个buffer P1 瓶加入一小瓶LyseBlue （在使用之前简要离心），达到1: 1000 稀释。
LyseBlue 可以提供视觉识别从而防止常见处理错误，如细胞裂解导致效率低下和不完全沉淀的SDS、基因组DNA污染、细胞碎片等。
过程1.摇菌：新鲜划线的选择性平板（接种含有适当的选择性抗生素）挑一个单菌落放入2-5 ml LB 培养基中。
在37 ° C 摇菌约8 h （约300 rpm）。
使用4倍体系容积的试管或锥形瓶。
2.稀释选择性LB 培养基1/500 -1/1000。
若为高拷贝质粒，接种到25 毫升或● 100毫升的介质具有▲ 25—50 µ l 或● 100 – 200 µ l 起始培养液。
若为低拷贝质粒，接种▲ 50 — 100 毫升或● 250 毫升的介质具有▲ 100 – 200 µ l 或● 250-500 µ l 起始培养基。
QIAGEN-中文版去内毒素大提试剂盒
纯化高转染级别的质粒DNA 【工作台流程】BENCH PROTOCOL准备工作:1.将RNase A 溶液加入P1缓冲液(Buffer P1)2.加40ml96－100％乙醇(ethanol)于试剂盒的去内毒素水中(endotoxin-fre water)3.可选: 加 LyseBlue 试剂于 Buffer P14.检查 Buffer P2是否有SDS沉淀precipitation 有沉淀可在37摄氏度下暖化溶解5.Buffer P3 置于4摄氏度中预冷pre-chill6.细菌扩增培养1.补充:2.准备4-6个50ml新的或灭菌的离心管用于冷冻离心机下离心过夜菌液, 2个用于接下来的菌块重悬和与buffer混合3.1个无内毒素的30ml聚丙烯（不推荐聚碳酸酯, 因为不耐乙醇）管子（最好用圆底的离心管以利于高速离心）用于收集洗提的质粒DNA4.5个1.5ml的EP管用于收集抽提过程各步骤的产物用于实验后分析和质量控制5.准备1个冰浴盒用于步骤66.准备室温下的异丙醇10.5ml7.4摄氏度冰冻离心机和分光光度仪,琼脂糖凝胶电泳步骤: peocedureA.细菌培养、收获和裂解bacterial culture,harvest & lysis1.100ml高拷贝high-copy或250ml低拷贝low-copy过夜overnight LB培养菌液于冰冻离心机4摄氏度；6000×g；15min从新鲜的抗生素平板上挑取一个单菌落, 2-5ml抗生素LB液体初始培养基30摄氏度孵化约8小时（振荡300rpm, 注意孵化容器容积至少4倍于培养液）抗生素LB液体培养基稀释初始培养液到1:500-1000。
(高拷贝质粒100-200ul初始培养液加于100ml培养基；低拷贝质粒250-500ul初始培养液加于250ml培养基)37摄氏度300rpm振荡12-16小时。
(孵化容器容积至少4倍于培养液, 培养至细菌密度约3-4×109/ml, 即离心后菌块湿重约3g/L培养基)培养基配方：10g蛋白胨+5g酵母+10g氯化钠溶于800ml蒸馏水, 用1 N NaOH 调pH值至7.0, 用蒸馏水调整至1L。
生化进口品牌介绍
旋混合器的厂家，从设计到生产形成一套完整的流水线，其生产的Vortex-Genie 2 是所有涡旋混合器中应用最广范，用途最广，最耐用的品牌，已形成一种国际标准，成为该领域的国际知名品牌。
44 、SciGene 美国SciGene 公司主要致力于为基因芯片杂交实验提供自动化的样品前制备（标记，纯化），上样杂交和洗涤干燥仪器。
用自动化的仪器代替人工操作，减小了实验的批间批内差，极大的改善了实验的均一性。
并能减少背景干扰，为后期的芯片扫描提供良好的数据。
45 、SY-LAB 奥地利SY-LAB 公司是一家专业开发生产生物培养、冻存等产品的公司。
其旗下的ICECUBE 程式冷冻降温仪专为细胞冷冻操作设计，是一款细胞、组织、血液、骨髓、器官、胚胎等珍贵的生物样品超低温冷冻前处理的必备仪器。
46 、SYNGENE SYNGENE 是英国著名公司SYNOPTICS 公司的子公司，主要产品集中在凝胶图像的扫描成像和分析，包括凝胶成像、化学发光成像、化学发光与荧光成像以及2D 胶成像多种，设计精巧、操作简单、灵敏度高，并具备强大的功能分析软件，使其成为当今世界上最完善的成像分析系统之一47、SORENSON SORENSON 是生命科学领域塑料耗材革新的引领者，专业提供移液器和吸头等耗材。
其产品确保无RNA 酶、DNA 酶、无热源，广泛应用于分子生物学、基因测序，生塑料工艺的完美体现。
48 、SYNBIOSIS SYNBIOSIS 是SYNOPTICS 旗下的公司之一，是世界上知名的自动菌落计数仪生产商。
其全自动微生物分析仪具有自动的菌落计数和抑菌区测量功能，适合研究单位、医院、检验检疫机构和工业领域进行微生物菌落计数和含量分析、抗生素的抗菌性测试以及细菌的抗生素敏感性分析等工作。
QIAGEN操作说明
Qiagen基因组提取试剂盒中文操作说明QIAamp DNA Blood Mini Kit简介：QIAGEN公司出品的QIAamp DNA Blood Mini Kit适用于使用微型离心机或真空处理从全血、血浆、血清、血沉、淋巴细胞以及体液样品中提取总(基因、线粒体和病毒)DNA。
该试剂盒可处理带有EDTA、柠檬酸盐和肝素等常规抗凝剂的新鲜或冷冻的全血样本，样品量可达200μl。
整套基因组的操作时间约为20–40分钟，一般可从200μl健康全血中获得4–12 μg DNA，洗脱体积可在50–200μl范围。
抽提原理：样品中的DNA可以特异性结合到QIAamp的硅胶膜上，通过两次洗涤可以将PCR抑制剂，如：二价阳离子和蛋白完全去除，最后结合在离心柱上的纯核酸可用水或试剂盒中的缓冲液进行洗脱收集。
开始前的注意事项：1. 所以的离心步骤需要在室温（15-25℃）进行2. 如果样品中含有的基因组当量少于10000，请添加载体DNA（carrier DNA）3. 200μl全血样品可以得到约3-12μgDNA开始前的准备工作：1. 将样品平衡到室温（15-25℃）2. 将水浴或是金属浴加热到56℃，以备第4步使用3. 将Buffer AE或蒸馏水平衡到室温，用于第11步的洗脱4. 确保Buffer AW1、AW2以及QIAGEN蛋白酶已经按照说明配置完毕5. 如果在Buffer AL中出现沉淀物，请在56℃孵育使其溶解操作步骤：1. 吸取20μl QIAGEN蛋白酶（或者蛋白酶K）至1.5ml离心管的底部。
2. 加入200μl待提取基因组的样品至离心管中。
可以加入不超过200μl的全血、血浆、血清、血沉棕黄层，或者溶于200μl PBS中不超过5*106的淋巴细胞。
如果样品体积不足200μl，请使用PBS补足。
前两步的顺序也可以调换，即将蛋白酶加入样品中，但此时需要注意充分混匀。
3. 加入200μl Buffer AL至样品中，涡旋振荡15s混匀。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
竞 争 分 析
DyeEx 96
速度 操作
10min96 反应， 18min4×96 反应 即用型
EtOH 沉淀 60min96 反应 多个沉淀步骤
Millipore 22min4×96 反应 Sephadex 干粉及单个板 需加水浸泡分离介质 水饱和耗时 板之间没经质量控制 信号强度低一些
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
独 特 设
计
双酶切无合适的缓冲液？ 连接效率低？ 小片段回收? 样品珍稀难得？
用MinElute Kit!!!
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
RNA生物样本保存的好工具
RNeasy Protect Kits RNA Stablilization Reagent
重复性 质量
经过包括测序扫描的严格 质量控制，重复性好 高信号强度 毛细管测序尤其推荐
可变性大 毛细管测序读序较短
基 因 有 限 公 司
高浓度 DNA 片 段 纯 化
MinElute Kit(Enzyme digestion/PCR/Gel)
特点：
I 很小的洗脱体积，高浓度产物 10ul缓冲液 1.5倍以上浓度！
II 快速方便——6min/PCR;18min/Gel;6min/Enzyme。 III较大长度范围内高回收率——80% 70bp-4kb片段 IV专为酶切反应纯化设计的ERC
HisSpeed Plasmid(Midi/Maxi)Kit MinElute Kit(Enzyme digestion /PCR/Gel) RNeasy Protect Kits RNAlater RNA Stablilization Reagent
DyeEx 96 Kit
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
技 专门设计 HiSpeed柱
HS树脂
术
突
破
最 方便的 QIAfilter
新
QIAprecipitator Module
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
客
户
要提高工作效率
要方便省事
要质量保证
要一次成功
要最好的
。。。
Gene Company Limited
Select
adsorption to silica-gel membrane or particles extraction alkaline lysis capture
Gene Company Limited
Rapid
Hybrid
基 因 有 限 公 司
QIAGEN 核 酸 纯 化 产 品 分 类
基 因 有 限 公 司
规 格 品 种 齐 全
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
QIAGEN
技 术 资 料
世界知名品牌
Gene Company Lim纯 化 原 理
Solid-phase
anion-exchange
separation
基 因 有 限 公 司
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
客
户
常规方法不方便，不安全？ 液氮罐及其配件昂贵？ 操作不熟？样品易融化，RNA降解。。。
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
染 料 终 止 子 去 除
DyeEx 96 Kit
特点：
I 快速：18分钟内完成4×96测序反应的纯化 II 简便：适用于10-20ul反应体系， 无需预先水 饱和及乙醇沉淀 III 高效：纯化彻底， 保证高信号强度及长片段的读序
QIAGEN 纯 化 新 产 品
基因公司2001年技术培训
QIAGEN 公 司 简 介
*管理和生产中心——德国 分公司：美、日、英、法、瑞士、加拿大、澳大利亚
专业批发商：全球23个国家
*17 年的开拓史 多项专利和独家技术 产品质量稳定，技术资料详尽 技术支持力量强大
Gene Company Limited
硅胶结合
低盐结合 髙盐洗脱
高纯，大于一倍氯化 铯梯度离心
高效过滤
硅胶磁珠
改良的碱裂解 过滤 异丙醇沉淀 澄清裂解液 磁式分选
一般纯度
MagAttract 系列 (我们还未开始卖)
高纯度，大于一倍氯 化铯梯度离心
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
QIAGEN 核 酸 纯 化 新 产 品
I 快速有效地将RNA固定保存在生物样本中，为基因表达分析
等后续工作提供可靠的原材料
II 无需液氮或干冰，方便安全地在室温下保存样本，低温可长 期保存。
III 低温保存时即使反复冻融也不会导致RNA降解 IV 进行后续操作只需从保存液中将样本取出即可，如进行总 RNA抽提等等
Gene Company Limited
基 因 有 限 公 司
快速超纯质粒DNA抽提试剂盒
HisSpeed Plasmid(Midi/Maxi)Kit
特点：
立即节省1/2
I 从收集好的菌体到DNA 45分钟（Midi） /60分钟(Maxi) 内完成 产量多多 II DNA抽提量为QIAGEN同类试剂盒的1.5-2倍
Gene Company Limited