微生物限度检查仪操作规程
微生物限度检查法操作规程
1.目的建立微生物限度检查法操作规程。
2.适用范围本规程适用于原辅料、包装材料、制剂（非规定灭菌）、药妆、空气洁净℃等各类微生物限度检查。
3.编制依据《中国药品检验标准操作规范》2010年版《中华人民共和药典》2010年版二部药品微生物学检验手册4.责任4.1 QC质检员对本规程的实施负责。
4.2 QC主管对本规程的有效执行承担监督检查责任。
5.正文5.1微生物限度检查系指非规定灭菌制微生物污染限度的一种检查方法，包括活菌数及控制菌的检查。
5.2药品生产洁净室（区）的空气洁净℃划分为四个级别，不同级别间微生物最大允许数、尘粒最大允许数不同。
5.3微生物限度检查室和操作人员的一般原则5.3.1检查的全部过程均应严格遵循无菌操作，防止再污染。
5.3.2进入微生物限度检查室的操作人员，面部暴露部位不得化妆；患传染病及体表有伤口人员禁止入内。
5.3.3操作人员进微生物限度检查室前应在缓冲间用规定的消毒液进行手部消毒，更衣，戴帽，戴口罩及换鞋，进入微生物限度检查室后，再用75%酒精消毒手部。
5.3.4使用净化工作台前，应先用规定的消毒液（3月轮换一次）擦工作台与各操作开关，然后开紫外灯及空气过滤器30分钟后，方可使用。
物品通过传递窗进入。
5.4培养基及供试液的制备5.4.1培养基的制备方法5.4.1.1细菌培养基：称取营养琼脂培养基34g，加1L纯化水溶解，115℃灭菌，40分钟后，备用。
5.4.1.2霉菌培养基：称取虎红琼脂培养基30g，加1L纯化水溶解，115℃灭菌，40分钟后，备用。
5.4.1.3控制菌的培养（详见中华人民共和国药典2010版二部）。
5.4.2器皿的准备：直径90ml的平皿，10ml、1ml的刻℃吸管，200ml的三角烧瓶及胶塞等，均应包扎好后，再经121℃高压蒸气灭菌30分钟。
5.4.3供试液的制备方法：5.4.3.1液体供试品：取供试品10ml，加入90ml的稀释剂中，混匀，作为供试液；5.4.3.2固体、半固体或粘稠液供试品：称取供试品10g，置pH7.0蛋白胨-氯化钠无菌缓冲溶液100ml中，混匀后，作为供试液。
001.纯化水微生物限度检查法操作规程
SOP/QC(09)001－01纯化水微生物限度检查法操作规程文件类别：标准操作规程审批表江西中兴汉方药业有限公司1.目的规范纯化水微生物检查的操作方法，确保药品检验的准确性。
2.适用范围适用于纯化水的微生物检查。
3.责任人QC：负责按此规程执行。
4.程序4.1 概述本规程是以营养琼脂培养基作为细菌培养基，采用平板表面涂布法测定纯化水菌落总数。
其操作环境和全部过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
4.2 仪器与用具电热恒温培养箱（30～35℃）霉菌培养箱（23～28℃）超净工作台无菌双碟移液管0.45μm微孔滤膜过滤器抽滤泵4.3 试药与试剂营养琼脂培养基玫瑰红钠培养基pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液4.4 纯化水的取样4.4.1取样时，须先开启取样阀门，用工艺用水本身冲冼取样口，约冲水1升以上，而后以无菌具塞10ml试管取水，取水量约为试管高度的1/2～2/3。
4.4.2检测周期：见“工艺用水监测规程（SMP-ZL-016-）”规定。
4.4.3取样后的水样应立即检验。
4.5 检查方法量取9ml纯化水置盛有90ml pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液的锥形瓶中混匀，作为供试液；量取供试液10 ml供试液置安装好的无菌抽滤装置，进行过滤。
用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于营养琼脂培养基平板及玫瑰红钠培养基平板上，盖好，倒置培养皿，分别将营养琼脂培养基平板及玫瑰红钠培养基平板置电热恒温培养箱（30～35℃）及霉菌培养箱（23～28℃）中培养。
细菌培养3天后进行菌落计数，霉菌培养5天后进行菌落计数。
计数结果即为每ml水中含细菌及霉菌的菌落数。
4.6 结果判定每1ml纯化水中的细菌数及霉菌数之和应不得过100个。
5 相关记录6变更履历表。
微生物限度检测操作步骤
微生物限度检测是对产品中微生物数量进行定量或定性检测的过程。
以下是一般的微生物限度检测操作步骤：
1. 准备工作：
-清洁和消毒实验室设备、试剂瓶和工作台等。
-准备所需的培养基、培养基平板和培养基管等。
2. 样品处理：
-取得待检样品，确保样品的采集和保存符合规范和要求。
-如果需要，将样品稀释到适当的浓度，以便在培养基上形成可数的菌落。
3. 培养基制备和接种：
-准备所需的培养基，并按照说明书的要求进行制备。
-将适量的培养基倒入无菌平板或管中，并在适当温度下固化。
-在培养基表面均匀涂布待检样品，或将待检样品滴于培养基管中。
4. 培养和孵育：
-将培养基平板放置在恒温培养箱中，按照规定的时间和温度进行培养。
-监控培养过程中的温度和湿度，确保适宜的条件。
5. 菌落计数和鉴定：
-培养结束后，观察培养基上的菌落情况。
-使用显微镜进行菌落计数和鉴定，根据形态、颜色、大小等特征确定菌落类型。
6. 结果分析和报告：
-根据菌落计数和鉴定结果，判断样品的微生物限度是否符合规定的标准。
-撰写检测报告，将结果详细记录并汇总，包括样品信息、检测方法、结果和结论等。
以上是一般微生物限度检测的操作步骤。
具体的操作可能会因实验室和产品类型而有所不同，需要根据相关标准和方法进行调整和执行。
在进行微生物限度检测时，应严格遵守实验室的操作规程和安全要求，确保检测结果的准确性和可靠性。
微生物限度检查操作规程
1 目的规范微生物限度检查操作。
2 适用范围适用于微生物限度的检查。
3 职责质量检定部人员严格按本SOP操作。
4 工作程序4.1 仪器4.1.1 超净工作台4.1.2 微生物检测系统4.2 试剂所用培养基及缓冲液均按《中华人民共和国药典》2005版三部要求进行配制。
玫瑰红钠培养基、营养琼脂培养基4.3 试验方法采用薄膜过滤法4.4试验前准备试验过程中所有用的器材都应进行灭菌后方可使用；超净工作台使用前需进行紫外灭菌30min。
4.5 试验步骤4.5.1 将样品加入薄膜过滤器的滤杯中4.3.1.3 供试品检查时，如果使用了表面活性剂、中和剂或灭活剂，应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响4.3.1.4 除另有规定外，本检查法中细菌培养温度为30～35℃；霉菌、酵母菌培养温度为23～28℃；控制菌培养温度为35～37℃。
4.3.1.5 检验结果以1g、1ml、10g、10ml或10cm2为单位报告。
4.3.2 检验量4.3.2.1 检验量即一次试验所用的供试品量（g、ml或cm2）。
4.3.2.2 除另有规定外，一般供试品的检查量为10g或10ml；化学膜剂为100cm2；贵重药品、微量包装药品的检验量可以酌减。
4.3.3 供试液的制备供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。
供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。
4.3.3.1液体供试品取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠－蛋白胨缓冲液至100ml，混匀，作为1：10的供试液。
油剂可加入适量的无菌聚山梨脂80使供试品分散均匀。
水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。
4.3.4 细菌、霉菌及酵母菌计数4.3.4.1 检查法薄膜过滤法采用薄膜过滤法，滤膜孔径应不大于0.45um，直径约为50mm。
选择滤膜材质时应保证供试品及其溶剂不影响微生物的充分被截留。
滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。
使用时，应保证滤膜再过滤前后的完整性。
微生物限度检查标准操作规程
微生物限度检查标准操作规程一、引言。
微生物限度检查是指在制药生产过程中，对原料药、辅料、中间体、制剂等药品进行微生物检查的一项重要工作。
微生物限度检查的目的是为了保证药品的质量和安全，防止因微生物污染而引起的药品变质和危害患者健康的风险。
本操作规程的目的是规范微生物限度检查的操作流程，确保检查结果准确可靠。
二、适用范围。
本操作规程适用于制药企业进行微生物限度检查的操作人员，包括检验员、操作人员等。
三、术语和定义。
1. 微生物限度，指药品中允许存在的微生物的最大数量，通常以菌落形成单位（CFU）或细菌总数来表示。
2. 微生物限度试验，是指对药品中的微生物进行检查的一种实验方法，包括细菌总数、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、霉菌和酵母菌等指标。
3. 标准菌株，指已经鉴定并保存在实验室中的具有代表性的微生物菌株。
四、操作流程。
1. 样品准备。
（1）取样品，按照规定的取样方法，从所检查的药品中取得代表性样品。
（2）样品处理，根据检测要求，对样品进行必要的处理，如稀释、均质等。
2. 培养基制备。
（1）准备培养基，根据检测要求，准备所需的培养基，包括琼脂培养基、液体培养基等。
（2）灭菌处理，对培养基进行高压蒸汽灭菌处理，确保培养基的无菌状态。
3. 菌种接种。
（1）接种方法，根据检测要求，选择适当的接种方法，包括平板法、涂布法等。
（2）接种数量，根据微生物限度试验的要求，按照规定的接种数量接种标准菌株。
4. 培养条件。
（1）温度控制，根据不同的微生物菌种，控制培养的温度，通常为30-35摄氏度。
（2）培养时间，根据微生物限度试验的要求，培养一定的时间，通常为24-48小时。
5. 菌落计数。
（1）观察菌落，根据培养基上的菌落形成情况，进行菌落计数。
（2）结果判定，根据菌落计数的结果，判定样品中微生物的数量是否符合规定的限度要求。
五、质量控制。
1. 内部质量控制，每批次微生物限度试验前，进行内部质量控制，确保实验条件的稳定性和可靠性。
微生物限度检查法标准操作规程
建立微生物限度检查法标准操作规程，规范操作，保证结果的准确性。
成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。
微生物限度检验人员本检验操作规程依据中国药典 2022 年版四部《通则 1105 非无菌产品微生物 限度检查：微生物计数法》和《通则 1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查 法》进行检查。
1、微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
2、计数方法 本法包括平皿法、薄膜过滤法。
3、计数培养基合用性检查和供试品计数方法合用性检查 供试品微生物计数中所 使用的培养基应进行合用性检查。
供试品的微生物计数方法应进行方法合用性试验， 以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。
4、菌种及菌液的制备4.1 试验用菌株的传代次数不得超过 5 代(从菌种保藏中心获得的干燥菌种为第 0 袋)，并采用适宜的菌种保藏技术进行保藏。
计数培养基合用性检查和计数方法合用 性试验。
4.2 菌液制备 按规定培养各试验菌株。
取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽 孢杆菌、 白色念珠菌的新鲜培养物， 用 PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或者 0.9%无菌 氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物加入 3-5ml 含 0.05% (ml/ml )聚山梨酯 80 的 PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或者 0.9%无菌氯化钠溶液， 将孢子洗脱。
采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管中，用含 0.05% (ml/ml )聚xxxxxxx 中药饮片厂ZL ·SOP ·05 ·062-01 页 数 制定日期 年 月 日 修订日期 审核日期 年 月 日 颁发部门 批准日期 年 月 日 生效日期 质量管理部、质量控制科 编号制定人审核人批准人分发部门 共 9 页 年 月 日 年 月 日质量管理部山梨酯80 的PH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或者0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。
微生物限度检查-控制菌检查法标准操作规程
微生物限度检查-控制菌检查法标准操作规程1 目的明确微生物限度检查-控制菌检查法的过程，保证产品质量。
2 适用范围检查非无菌制剂及其原、辅料等是否存在特定的微生物（如：铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌）, 从而判断是否符合相应的微生物限度标准。
3 定义无。
4 职责与权限检验员：按本标准判定产品质量并出具报告。
负责人：监督执行情况，审批最终结果。
5 内容及流程5.1 实验说明5.1.1 TSB为“胰酪大豆胨液体培养基”。
5.1.2 所用材料及用具（待检品、菌株除外）应经过灭菌处理；检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。
5.1.3 供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。
5.2 检验量从一批中随机抽取不少于2个最小包装的供试品，混合后，从中抽取10g或10mL。
5.3 实验材料与用具5.3.1 混合后的待检品（供试品）、TSB培养基（9mL/管）、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液；5.3.2 铜绿假单胞菌实验用材料：铜绿假单胞菌菌悬液（≤100cfu/mL）、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基、1%二盐酸N,N-二甲基对苯二胺试液（即用即配）；5.3.3 金黄色葡萄球菌实验用材料：金黄色葡萄球菌菌悬液（≤100cfu/mL）、甘露醇氯化钠琼脂培养基；5.3.4 用具：培养皿、接种环、洁净滤纸片、无菌玻棒。
5.4 供试液制备5.4.1 取供试品和pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液以1:10稀释成供试液。
5.4.2 必要时，用统一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释；也可用混合的供试品原液作为供试液。
5.5 增菌培养5.5.1 供试品组：取1mL供试液，接种至9mL的TSB中，混匀，共接种2管。
5.5.2 阳性对照：取1mL菌液，与供试液同法操作，接种至9mL的TSB中，混匀，接种1管。
5.5.3 阴性对照：取1mL pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，与供试液同法操作，接种至9mL 的TSB中，混匀，接种1管。
微生物限度检查操作规程(含表格)
微生物限度检查操作规程（ISO13485-2016/YYT0287-2017）1.0目的规范微生物限度检查方法及操作，使纯化水、内包材、环境监测、清洁验证及其他要素的微限检查符合ChP2015规定。
2.0适用范围适用于纯化水、内包材、环境监测及其他要素的微限检查。
3.0引用/参考文件ChP2015实用药品微生物检验检测技术指南《取样及留样管理规程》4.0职责质量控制实验室负责执行对相关要素的微限检查，QA负责执行监督并参与OOS 调查。
5.0程序5.1仪器用具高压蒸汽灭菌锅、洁净工作台、生化培养箱、霉菌培养箱、三角瓶、培养皿、胶塞、移液枪、微型台秤或电子天平、微限检查虑架、酒精灯、镊子、0.22μm 滤膜等。
5.2培养基、稀释液及试剂（均已经121℃，15min灭菌处理）胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）、沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA）、pH7.0NaCl-蛋白胨缓冲液、无菌生理盐水、R2A琼脂培养基、胰酪大豆胨液体培养基（TSB）、麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基等。
5.3检查5.3.1纯化水微生物限度检查5.3.1.1样品准备微生物QC手用75%酒精消毒后，将采样口周围进行消毒，打开采样口阀门使水自流至少5秒后用灭菌三角瓶或者无菌取样袋快速取样至少10ml。
打开阀门后在需要时仍可以使用消毒剂进行再次消毒后取样。
取样结束后，迅速用胶塞将三角瓶封口，装于取样箱内转移至微生物实验室进行检验，样品转移过程中特别注意污染防护。
样品如不能立即检测，可以在2-8℃条件下最长保存8h。
5.3.1.2实验室准备实验前将相关试剂、仪器、设备、耗材等转移进超净工作台或者传递窗内，开启实验室与超净台送风，调节超净台风速达到0.36-0.54m/s后开启超净台、微限室、更衣间、缓冲间、传递窗紫外灯，保持30min。
5.3.1.3微限检查操作微生物QC按照《人员进出洁净区管理规程》进行更衣、消毒后进入实验室关闭紫外灯后准备开始试验。
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1、目的
为规范微生物限度检查仪的使用操作，确保仪器的正常使用、维护、保养，特制定本程序。
2、适应范围
本程序适用于微生物限度检查仪的使用操作。
3、责任
QC室仪器分析人员实施本操作程序，并对仪器的使用、养护负责；QC主任监督本程序执行。
4、术语与定义
无
5、相关文件
微生物限度检查仪使用操作说明。
6、内容
6.1 打开电源。
6.2 过滤操作
6.2.1微孔滤膜及一次性微生物限度过滤器与滤头连接，确保微孔滤膜完好。
6.2.2 将事先准备好的供试液注入滤杯内，不要操过滤杯最大刻度。
6.2.3 按下“power”键，再打开相应的阀门，再按下“power”键，完成集菌过滤。
6.2.4 待供试液全部过滤完成后，关闭相应的阀门，再按下“power”键，完成集菌过滤。
文件类型：操作规程第1 页/共3 页文件状态：受控文件
6.2.5 将过滤器取下，按住取膜装置，用无菌镊子取下微孔滤膜。
6.2.6 微孔滤膜菌面朝上，平贴在事先准备好的培养基上，微孔滤膜上不得有气泡（气泡处会影响微生物的生长）。
6.2.7 将培养皿转移至规定温度条件下的恒温培养箱中进行培养。
6.2.8 操作结束后，切断电源。
6.2.8 主机表面用酒精擦拭干净。
6.3维护及保养
6.3.1 仪器必须有效接地。
6.3.2 根据供试品性状来选择滤膜材质，过滤前后应保证滤膜的完整性。
6.3.3 仪器不工作时，断开电源。
仪器待机时，将电磁阀关闭，设置为“off”状态。
6.3.4 不能抽滤强酸､强碱､强氧化剂､强腐蚀等液体。
6.3.5 当供试品中含有不溶性的颗粒，悬浮物时，可能导致滤膜堵塞影响过滤，应将供试液进行预处理，出去颗粒或悬浮物。
6.3.6 抽滤前，应确保管道密封性良好。
6.3.7 使用一次性微生物限度过滤器，打开无菌包装前，先检查包装是否破损。
6.3.8 添加供试液时的液体高度不能超过滤杯最大刻度。
6.3.9 随时注意抽滤瓶情况，液体不能淹没进气口。
可以根据实际情况选择抽滤瓶的容积。
6.3.10 若无菌室采用化学剂消毒时，将仪器置密封罩内，或搬出无菌室，以免损坏电子部件腐蚀金属部件。
6.3.11 环境温度控制在10℃～30℃。
相对湿度≤80%RH无水珠凝结现象。
6.3.12 每次使用结束后，仪器表面用酒精擦拭。
7、本规程涉及的记录
文件类型：操作规程第2 页/共3 页文件状态：受控文件
文件类型：操作规程第3 页/共3 页文件状态：受控文件。