PCR测定临床应用和结果临床意义
PCR试验报告分析病变异趋势
PCR试验报告分析病变异趋势PCR（聚合酶链式反应）是一种重要的分子生物学技术，广泛应用于基因分型、基因表达和病毒检测等领域。
通过PCR试验报告的分析，可以揭示病变的异趋势，为病理诊断和药物治疗提供可靠的依据。
一、PCR试验报告简介PCR试验报告是基于PCR技术进行特定基因序列扩增的结果，通过检测扩增产物的数量变化，可以间接了解样本中病原体的存在与否以及相关基因的表达情况。
PCR试验报告一般包括实验目的、方法、结果和结论等内容。
二、PCR试验报告分析步骤1. 实验目的PCR试验的目的是明确样本中特定基因序列的扩增情况，根据实验目的选择适当的引物和技术参数，确保实验的可靠性和准确性。
2. 实验方法PCR试验方法包括DNA提取、引物设计、试剂配制和扩增条件设置等步骤。
在实验中，需要保证操作规范，避免污染和误操作对结果的影响。
3. 结果分析根据PCR试验的结果，分析扩增产物的带型和浓度。
通过凝胶电泳等方法，可以直观地观察到扩增产物的数量和大小，从而推测样本中相关基因的表达情况以及病变的异趋势。
4. 异趋势分析根据PCR试验报告中的结果，针对病变的特定序列进行异趋势分析。
例如，若扩增产物的带型变浓、变宽或消失，可能说明该基因序列在样本中出现异常变异，与疾病相关。
根据不同疾病的病变特点，可以进一步分析异常变异背后的机制和影响。
5. 结论根据PCR试验报告的分析结果，给出相关结论。
结论应准确客观，不能过于主观或武断，应结合临床和实验观察数据进行综合判断。
三、PCR试验报告分析的意义1. 疾病诊断PCR试验报告能够快速、高效地检测病原体的存在与否，为疾病的早期诊断提供依据。
通过研究病变的异趋势，可以进一步深入分析和了解疾病的发生机制和进展规律。
2. 药物治疗指导PCR试验报告分析可以确定特定基因序列的表达情况，从而指导药物治疗的选择和剂量的调整。
尤其是对于个体化治疗和精准医疗而言，PCR试验报告的分析具有重要的指导意义。
PCR技术在医学诊断中的应用
PCR技术在医学诊断中的应用PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学技术，已经广泛应用于医学诊断中。
它能够通过扩增、检测和分析DNA序列，从而提供对疾病的早期诊断、个体化治疗和预后判断等方面的支持。
本文将重点介绍PCR技术在医学诊断中的应用。
首先，PCR技术在传染病的早期诊断中发挥着重要作用。
在传染病的早期诊断过程中，PCR技术能够通过扩增病原体的DNA片段并进行检测，从而快速确定感染病原体是否存在。
例如，PCR可以用于检测结核分枝杆菌、流感病毒和艾滋病病毒等病原体的存在。
与传统的培养方法相比，PCR技术可以提供更快速和准确的结果，有助于早期干预和控制传染病的传播。
其次，PCR技术在遗传病的诊断中具有重要意义。
遗传病是由基因突变引起的疾病，PCR技术可以用于检测基因突变的存在和类型。
通过PCR技术，研究人员可以扩增特定基因的DNA序列，并对扩增产物进行测序和分析。
这对于确诊遗传病、筛查携带者和进行家庭遗传咨询非常有价值。
例如，PCR技术已被成功应用于囊性纤维化、遗传性乳糜泻和肌营养不良等遗传病的诊断。
此外，PCR技术在肿瘤诊断和治疗中也扮演着重要的角色。
肿瘤是由DNA序列的突变引起的疾病，PCR技术可以通过扩增和检测肿瘤相关的DNA序列来进行早期检测、分型和预后判断。
例如，PCR技术可以用于检测肿瘤相关的突变基因，如BRAF、EGFR和KRAS基因的突变。
这些基因的突变状态可以用于肿瘤的分型和预后判断，并且可以指导个体化的治疗方案的选择。
此外，PCR技术还可以用于监测肿瘤治疗的疗效和预测复发风险。
除了上述应用，PCR技术还在个体化药物治疗、遗传标记物研究和体外受精技术中发挥着重要作用。
例如，PCR技术可以用于检测药物代谢相关的基因多态性，从而指导个体化药物治疗的选择和调整。
此外，PCR技术可以用于研究遗传标记物在疾病发展和治疗过程中的作用，有助于深入理解疾病的机制和发展新的治疗方法。
此外，PCR技术在体外受精技术中可以用于检测胚胎的遗传病风险，从而保障胚胎的质量和健康。
PCR在临床检验中的应用
PCR在临床检验中的应用医学检验大致可分为形态学、生物化学、血清免疫学和分子生物学几大类，其分别代表几代实验诊断技术。
60年代DNA双螺旋结构及半保留复制模式的出现，70年代基因重组及体外基因克隆技术、分子杂交技术的应用使分子生物学在疾病诊断中得到了长足的发展。
特别是1985年Mullis发明了聚合酶链式反应（PCR）技术，使医学界真正兴起了基因诊断技术热，成为现代医学发展的又一里程碑。
用于临床检验的PCR技术与经典的PCR反应在操作上稍有区别，有其自己的特色。
一般在样品处理上，多采用非离子去污剂一次加热处理，这种方法对DNA纯化有限，但适应临床微量、快速的特点。
另外PCR反应体系中各组成成份往往都预分装到反应管中，既减少操作者的工作强度而且也减少了污染的机会，具有极高的使用价值。
本公司率先研制并推出单管单人份的PCR诊断试剂，具有开创性意义。
这些改进都不影响PCR效果，同样表现出高特异性、高敏感性、简便快捷等PCR最优秀的特征，在常见传染病、性病、肿瘤、遗传病、寄生虫病、优生优育、法医学等广泛领域中有相当高的实际应用价值。
常见的传染性疾病有细菌、病毒、衣原体、支原体等，可引起消化、呼吸、循环、泌尿生殖等不同系统相应的病变。
消化系统感染性疾病在我国具有代表性意义的有肝炎、胃炎及肠道感染性疾病。
引起肝炎的病原体主要包括乙型肝炎病毒（乙肝）、丙型肝炎病毒（丙肝），其它还有甲型肝炎病毒（甲肝）、丁型肝炎病毒（丁肝）、戊型肝炎病毒（戊肝）、庚型肝炎病毒（庚肝）等。
这几种肝炎病毒中只有乙型肝炎病毒是DNA病毒，其余均为RNA病毒。
我国是乙肝高发区，乙肝病人为世界乙肝病人总数的50％。
乙肝病毒经血液传播，病毒主要在肝细胞中增殖，也可以长期存留在骨髓细胞或外周血白细胞中。
通常用PCR法检测血清中的乙肝病毒。
有报道用PCR法可以在泪液、乳汁、精液及血白细胞中检出乙肝病毒，这些发现提示其它传染途经存在的可能。
PCR法检测乙肝的优势表现在：①早期诊断，因为PCR扩增极其敏感，理论上可检出100CID/ml乙肝病毒的患者血清，在感染潜伏期即可被PCR法检出。
pcr的临床意义及应用
pcr的临床意义及应用
PCR（聚合酶链式反应）是一种重要的分子生物学技术，其在医学
领域中有着广泛应用。
本文将从PCR的临床意义和应用两个方面展开
探讨。
首先，PCR在临床上有着极为重要的意义。
通过PCR技术，医生
们可以快速、准确地检测出一系列疾病。
例如，在感染性疾病的诊断中，PCR可以检测出病原体（如病毒、细菌等）的存在，有利于早期
发现和治疗。
此外，PCR还可以用于遗传病的基因检测，帮助人们了
解自己的基因情况，预防患病。
因此，PCR在临床诊断中具有不可替
代的地位。
其次，PCR技术在临床应用上也非常广泛。
在疾病预防和控制方面，PCR可以用于流行病学调查、疫情监测等工作。
同时，在肿瘤的诊断
和治疗中，PCR也扮演着重要的角色。
通过检测肿瘤细胞的特定基因
突变，可以帮助医生选择最佳的治疗方案，提高治疗效果。
此外，
PCR还可以用于药物敏感性检测、免疫学研究等多个领域，为医学研
究和临床实践提供强大支持。
综上所述，PCR的临床意义和应用远不止以上所述，随着科学技术
的不断进步，PCR技术在医学领域的应用前景将会更加广阔。
PCR的
发展使得疾病的诊断和治疗变得更加精准和高效，极大地提高了人们
的生活质量，为医学事业的发展贡献力量。
PCR技术的不断完善和创新，将为医学领域带来更多惊喜和突破，值得期待。
PCR项目及临床意义
PCR检验室常规项目简介1. 乙型HBV-DNA定量HBV-DNA定量检测方法的出现从根本上突破了免疫学方法间接检测的局限性,通过直接检测病毒的核酸水平真实地反映病毒的情况从而对于HBV的准确诊断、有效治疗、精确预后及新药研制等各个方面具有重大意义：1判断疾病的严重程度和传染性.HBV-DNA是直接反映HBV复制状态及传染性的最佳指标.2PCR定量结果与血清免疫学结果的综合评价.采用FQ-PCR定量检测乙肝病毒DNA,结合“二对半”检测结果,对于机体乙肝病毒感染状态尤其变异株发生和病人预后的评估更为科学.3观察抗病毒药物疗效,指导药物用量.直接检测血清中的HBV-DNA是监控HBV传染和观察抗病毒药物疗效的最可靠的方法.根据2000拉米夫定临床应用指导意见,中国慢性乙型肝炎病人治疗的目的之一就是要降低血清HBV-DNA.同时血清HBV-DNA滴度的动态变化还可在临床上对用药的剂量、用药时间是否需要联合用药以及用药的效果等提供参考.4献血员窗口期病毒核酸的筛查及早期诊断.HBsAg在血清中的检出通常在乙肝病毒感染后的2－4月出现,平均为56天左右.而HBV-DNA的检出可以将该所谓″窗口期″提前6－15天,对于早期诊断和提高输血安全有着重要的意义.5预测病情、判断预后.通常HBV-DNA持续阳性超过6个月的会转为慢性肝炎.抗－HBe阳性患者血清HBV-DNA持续阳性常提示肝损严重.6对阻断母婴传播的监测.联合应用高价免疫球蛋白和乙肝疫苗有效地阻断母婴传播,但仍有5-10%婴儿对疫苗呈低反应,荧光定量PCR可对此进行监测.7器官移植中的作用.肝脏器官移植是目前肝硬化晚期治疗的唯一方法,定量检测HBV-DNA为肝移植术后的跟踪观测具有较好的临床价值.乙肝病毒定量相关检测还有：乙肝标志物定性,乙肝标志物定量,乙型HBV-DNA定量,肝脏功能检测.2. 乙型HBV-DNA定性HBV-DNA是乙肝病毒基因,其有无、多少是乙肝病毒存在及有无复制能力的直接标志.早期诊断乙肝病毒感染的直接证据,提高乙肝病毒检测的阳性率,用于乙肝病毒治病机理的研究,作为乙肝病毒分子流行病学研究.乙肝病毒相关检测还有：乙肝标志物定性,乙肝标志物定量,乙型HBV-DNA定量,肝脏功能检测.3. 丙肝病毒RNA定量HCV RNA定量检测有助于预测、监测抗病毒治疗的效果,HCV 病毒核酸的定量检测在一定程度上能反应肝脏炎症活动程度,分析抗病毒治疗后HCV RNA血清水平有助于总结抗病毒制剂的疗效,为调整剂量、确定疗程提供依据.丙肝病毒相关检测还有：丙肝抗体检测,肝脏功能检测.4. 结核杆菌DNA定性根据临床表现,常规痰涂片或分离培养对某些结核病人可能造成误诊或漏诊.荧光PCR理论上可检出一个结核杆菌,特异性好,且时间短至1-2小时即可出报告.可以对结核病人早期诊断,可以鉴别诊断肺结核和肺癌.作为抗痨治疗的疗效评价；结核病的分子流行病学研究.结核杆菌的相关检测还有：结核抗体检测,ADA,结核杆菌芯片检测,抗酸染色,OT试验,PPD试验,放免分析,结核培养.5. HPV基因分型宫颈癌是人类所有癌症中唯一病因明确的癌症,即人乳头瘤病毒的感染是宫颈癌发生的必要条件和主要病因,%的宫颈癌患者都能发现高危型HPV感染,从HPV感染到宫颈癌的发生需要经过多年甚至数十年的时间,这为宫颈癌筛查指明了方向.因此早期定期进行HPV感染的筛查,对预警癌变倾向,及时发现、预防和早期诊断及临床治疗具有非常重要的意义.相关检查项目：组织原位杂交,基因芯片技术,液基细胞学试验6. 乳头瘤病毒DNA定性HPV16,18病毒DNA通常整合到人基因中,可能是宫颈癌的启动癌基因,对于妇产科的防癌普查有指导意义,而常可诱发良性湿疣或宫颈糜烂.因此,HPV的检查非常重要.相关检查项目：组织原位杂交,基因芯片技术,液基细胞学试验.7. 梅毒螺旋体DNA定性FQ-PCR检测人体不同来源标本中TP-DNA的结果,实际上是反映了梅毒螺旋体在这些部位的载量及其消长规律.梅毒血清学检查比如RPR、TPPA,是诊断各期梅毒最常用的实验室检查手段,但其阳性结果不代表体内有活的TP存在.相关检查项目：RPR、TPPA、TPHA8. 淋球菌DNA定性传统的涂片、培养等方法,灵敏度不高,女性病人检出率仅50%淋球菌感染,男性可发生尿道炎.女性可引起尿道炎及子宫颈炎.不经治疗或治疗不彻底,可致慢性感染.胎儿经产道时,可感染淋病性急性结膜炎.因此,在淋病的早期诊断,对该病有重大意义.淋球菌相关检查项目：淋球菌培养,涂片革兰氏染色,基因探针技术.9. 沙眼衣原体DNA定性非淋球菌感染的尿道炎、宫颈炎、子宫内膜炎、急性输卵管炎及盆腔炎,有超过50%是由沙眼衣原体感染所致,同时可引起不孕不育.因此,在妇产科和男性生殖泌尿科,同时检测UU 和CT很有必要.可致沙眼、成人和新生儿包涵体结膜炎.沙眼衣原体相关检查项目：细胞培养,免疫荧光法,沙眼衣原体抗体检测.10. 解脲支原体DNA定性解脲支原体在非淋球菌性尿道炎中,有50%是由本病引起的.如果孕妇生殖道带有解脲支原体,可通过胎盘感染胎儿引起早产、死胎,分娩时可引起新生儿呼吸道感染.另外还可导致不孕不育.因此,妇产科普查解脲支原体有很重要的意义.相关检查项目：解脲支原体培养,解脲支原体抗体,生长抑制试验,代谢抑制试验.11. EB病毒DNA定性EB病毒属于疱疹病毒,可引起增殖性感染和非增殖性感染.特别是非增殖性感染,可导致细胞癌变.被认为与传染性单核细胞增多症.淋巴癌、胃咽癌、何杰金氏癌、慢性疲劳综合症有关.相关检查项目：EB病毒特异性抗体或异嗜性抗体凝集试验.12. 单纯疱疹病毒DNA定性HSV-1型：主要侵犯口、唇的皮肤黏膜,可引起脑炎,偶尔可见于外生殖系统.HSV-2型：一般与外生殖系感染和新生儿感染有关.可引起脏器的病变包括脑炎偶见于口腔病变.相关检查项目：单纯疱疹病毒抗体检测.13. 肺炎支原体DNA定性肺炎支原体是原发性非典型肺炎和急性呼吸道感染的病原体,尤其是儿童和青少年中常见.常在军营和中小学生中流行.每隔3-5年流行一次.许多患者症状较轻,只有头疼、发热、咳嗽等呼吸道症状,也有个别引起死亡的报道.有时合并中耳炎、心血管、神经症状和皮疹.肺炎支原体感染是在治疗上与其它微生物感染是治疗不尽相同,为避免滥用抗生素,应早期、快速、准确的检测肺炎支原体.相关检查项目：肺炎支原体抗体检测；补体结合试验；肺炎支原体培养.14. 幽门螺旋杆菌DNA定性幽门螺杆菌感染是慢性活动性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关淋巴组织MALT 淋巴瘤和胃癌的主要致病因素.1994年世界卫生组织/国际癌症研究机构WHO/IARC 将幽门螺杆菌定为Ⅰ类致癌原.现在PCR可通过鼻胃管收集5ml胃液作PCR 检测.采用胶囊包裹的尼龙线取胃液标本的方法,使这一诊断性试验的侵入性更小.相关检查项目：C13/C14呼吸法；血清学检验.15. 肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型RNA定性这两个病原体是引起手足口病的主要病原体.而手足口病多发生于5岁以下儿童,可引起手、足、口腔等部位的疱疹,少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症.个别重症患儿如果病情发展快,导致死亡.。
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的 临床意义分析
实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义分析实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，qPCR）是一种高灵敏度、高特异性的核酸检测技术，可以用于检测病毒感染。
人巨细胞病毒（HCMV）是一种广泛存在于人群中的病毒，它可以引起免疫功能低下人群的严重感染。
本文将通过对实时荧光定量PCR检测人巨细胞病毒感染的临床意义进行分析，以期探讨该技术在临床诊断和治疗中的应用前景。
一、HCMV感染与临床疾病HCMV感染是一种全球性分布的病毒性感染，通常对健康人群并不产生严重影响，但对于免疫功能低下的人群，特别是器官移植受者、艾滋病患者和先天免疫缺陷患者等，HCMV感染可能导致严重并发症，如肺炎、肝炎、胃肠道炎症等。
HCMV还是新生儿感染的主要致病因子之一，导致新生儿先天性HCMV感染，可能引发先天性畸形和神经系统损伤。
二、实时荧光定量PCR检测HCMV感染1. 技术原理实时荧光定量PCR是一种核酸扩增技术，它结合了PCR扩增和荧光探针技术，能够实现对靶基因数量的准确计数。
在进行PCR扩增的荧光探针与靶基因结合，产生特定的荧光信号，通过荧光信号的强度可以定量检测靶基因的数量。
实时荧光定量PCR具有高灵敏度、高准确性和高特异性的特点，能够快速准确地检测HCMV感染。
2. 临床应用实时荧光定量PCR检测HCMV感染已被广泛应用于临床诊断和监测。
在器官移植术后感染HCMV的患者中，通过定期对血液或组织样本进行实时荧光定量PCR检测，可以及时发现HCMV感染的情况，以便早期干预治疗。
对于新生儿先天性HCMV感染的诊断，实时荧光定量PCR也具有高度的准确性和可靠性，有助于早期发现感染，进行及时治疗。
1. 提高诊断准确性传统的HCMV感染诊断方法包括病毒培养、免疫组化检测和血清学检测等，这些方法存在着时间长、操作复杂、准确性低等缺点。
而实时荧光定量PCR检测HCMV感染具有高灵敏度、高特异性和高准确性的特点，能够在短时间内对HCMV感染进行快速、准确的诊断，有助于提高诊断准确性。
实时荧光定量PCR检测临床上的运用与意义
实时荧光定量PCR检测临床上的运用与意义叶明奇（厦门安普利生物工程有限公司，福建厦门 343，技术工程部）【摘要】目的分析临床使用实时荧光定量PCR法在临床检测的各个项目情况，并探讨实时荧光定量PCR法的临床意义。
主要介绍核酸DNA或RNA的提取、实时荧光定量 PCR技术以及实时荧光定量PCR方法临床运用的意义：乙型肝炎病毒核酸实时荧光定量ＰＣＲ检测在临床诊断中的应用、实时荧光PCR检测丙型肝炎病毒核酸及其临床应用、实时荧光定量PCR 法在检测血浆结核杆菌DNA 的临床应用、实时荧光定量PCR检测HPV病毒的临床运用、泌尿生殖道感染沙眼衣原体的临床应用、传染性疾病检测临床应用、测胰腺癌中HIF1α、VEGF 和bFGF 的表达及其临床意义、绵羊肺腺瘤病毒检测、胃癌淋巴结微转移敏感且特异的方法，实时荧光定量PCR法在临床检测的运用在临床分期、判断预后以及治疗方案选择具有重要意义。
【关键词】实时荧光定量PCR；乙型肝炎；丙型肝炎；传染性疾病；HPV；MTB；[Abstract]Objective using real-time fluorescence quantitative PCR method in clinical detection of each project, and to explore the clinical significance of real-time fluorescent quantitative PCR method.Mainly introduces the nucleic acid extraction of DNA or RNA, real-time fluorescent quantitative PCR and real-time fluorescence quantitative PCR method for clinical application significance: hepatitis B virus DNA by real-time fluorescent quantitative PCR assay application in clinical diagnosis, real-time fluorescent PCR detection of hepatitis C virus nucleic acid and its clinical application, the real-time fluorescence quantitative PCR assay in the detection of Mycobacterium tuberculosis DNA in plasma clinical application, real-time fluorescence quantitative PCR detection of HPV virus, the clinical application of urogenital Chlamydia trachomatis infection in the clinical application of infectious diseases, clinical application, measured in pancreatic cancer HIF1 α, VEGF and bFGF expression and its clinical significance, sheep pulmonary adenomatosis virus detection of lymph node micrometastasis, sensitive and specific method, real-time fluorescence quantitative PCR method applied in clinical detection in clinical staging, prognosis and treatment options have important significance.[keyword]real-time fluorescence quantitative PCR; hepatitis B; hepatitis C virus; infectious diseases; HPV; MTB;PCR法最初由Khorana(1971)等提出在体外经DNA变性,与适当引物杂交,再用DNA聚合酶延伸,克隆DNA的设想。
PCR检测技术及临床应用
RNA的抽提 匀浆化作用 分离阶段 操 作 步 骤 RNA的沉淀
RNA的洗脱 RNA的再溶解
测RNA的纯度
制备cDNA
PCR扩增
cDNA电泳
防止RNA酶污染的措施
1、 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的 高温下干烤6hr或更长时间。 2、 塑料器皿可用0.1% DEPC(二乙基焦磷酰 胺)水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃 器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。 3、 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗 涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% 双氧水室温10min，然后用0.1% DEPC水冲 洗，晾干。
RT-PCR的应用
分析基因的转录产物 获取目的基因 合成cDNA探针 构建RNA高效转录系统
四、荧光定量PCR
实时荧光定量PCR
实时荧光定量PCR技术于1996年由美 国Applied Biosystems公司推出，由于该技 术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而 且与常规PCR相比，它具有特异性更强、有 效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点， 目前已得到广泛应用。
荧光探针和荧光染料
TaqMan荧光探针：PCR扩增时，Taq酶 的5‘-3’外切酶活性将探针酶切降解，使报告 荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监 测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条 DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧 光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
PCR的基本原理
PCR反应中，当引物-模板与DNA聚合 酶达到一定比值时，DNA聚合酶催化的反应 趋于饱和，出现“平台效应”，即PCR反应 产物不再增加。
这主要取决于起始模板的拷贝数、所 用的DNA聚合酶的性能及底物dNTP的浓度 等。
标准的PCR反应体系
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临床评价
•细胞培养 McCoy. Hela-229金标准
• ELA法 • PCR法.专家希望此法为新金标
• HBV-DNA
.
实验设计特点
• S及C混合引物
• 定量用治疗监测
104 , 106
临床评价
一 般临床靠免疫标志 但无法明确时可测
拉米呋定及干扰素治疗监测
新问题研究
• HCV-RNA
实验室设计特点
阳性率与“金标准”
不能单向强调PCR的优势和检出率应 与传统方法比对,合理判断
临床实践是判断PCR结果最重要的依据
临床实践是检验实验室工作的标准 重视从临床实践找出问题和评价
b. TB特异性核酸片段克隆
c. 插入序列
举例 65KD,165bp;MPB64,240BP;IS6110,123b
p;IS986,245bp; 16sDNA,584bp.
注意事项 • 标本处理 ：痰液化，抑制物去除
• 试剂质控及灵敏度
临床评价 •结核的PCR临床主要应用
a.结核与其他分枝杆菌区分
PCR测定临床应用及结果临床意义
北京大学人民医院 张正 100044
概述
临床PCR检测三条件
• SDA批准使用的试剂盒 •国家批准符合要求的实验室
•经行政部门同意并培训后持证上岗
关于结核杆菌等5项检测的
具体应用
• 结核分枝杆菌(TB)
实验设计特点
靶序列来源: a. 单抗检出的TB抗原旦白编码基因
b.结核耐药基因
c.对含菌量低的标本的分离
d.为临床可疑者捕捉信息
临床评价 • PCR方法与痰涂片及TB培养的比较
应做比对研究
• 沙眼衣原体(Ct)
实验设计特点
靶及引物选择
•外膜蛋白基因(MOMP-OMPI) • 7.5kb质粒 隐蔽性基因项
标本取材是关键
• 需扩增二次
• 低温启动UDG系统--RNA不稳定性
注意事项
防止RNase污染
杜绝溶血
临床评估
• 定性用于诊断(只有抗HCV无法
决定病毒存在状况） • 定量用于治疗监测
• HLA
方法:免疫学
分子生物学 ： PCR SSCP RFLP 基因芯片
I 类(A,B,C) 与疾病发生频率有关 II 类(DR,DQ,DP) 等 移植配型
DR为例
设计10条特异性引物:DR1-DR10
设计2条组特异性引物:3568,DRB1
选择其中某些组合成上,下游引物
据bp数推算等位基因
局限性:
DR6用排它法
有6种表型(DR3/DR3, DR8/DR6等)不能区分
临床评价中共同问题
假阳性与假阴性
•假阳:残余模板的污染 其它
•假阴:标本处理不当 其它