日本岛津UV2550分光光度计 操作培训
岛津紫外可见近红外分光光度计新人培训资料
光栅是利用光的衍射与干涉作用制成的，它可用于紫 外、可见及红外光域，而且在整个波长区具有良好的、 几乎均匀一致的分辨能力。它具有色散波长范围宽、分 辨本领高、成本低、便于保存和易于制备等优点。缺点 是各级光谱会重叠而产生干扰。
入射、出射狭缝，透镜及准光镜等光学元件中狭缝在 决定单色器性能上起重要作用。狭缝的大小直接影响单 色光纯度，但过小的狭缝又会减弱光强。
• 普及型： UV mini 1240, UV-1650, UV-1700
• 高档： UV-2450／2550
(日本和苏州均生产）
• 物理测试用途：UV-3600/SolidSpec-3700
• 特殊用途：MPS-2400、MULTI-1500、 Biospec-1600 BioSpec-mini
最新产品：UV-3600
双光束分光光度计一般都能自动记录吸收光谱曲线。 由于两束光同时分别通过参比池和样品池，还能自动消 除光源强度变化所引起的误差。
3，比例双光束分光光度计
由同一单色器发出的光被分成两束，一束直接到达 检测器，另一束通过样品后到达另一个检测器。这种仪 器的优点是可以监测光源变化带来的误差，但是并不能 消除参比造成的影响
5.0 % 1.0
0
2.5
5.0
7.5
10.0
Concentration, M * 103
Diagram was taken from : Douglas A. Skoog and James J. Leary, Principles of Instrumental Analysis, 4th ed., Saunders College Publishing, 1992, page 131.
经单色器分光后的一束平行光，轮流通过参比溶液 和样品溶液，以进行吸光度的测定。这种简易型分光光 度计结构简单，操作方便，维修容易，适用于常规分析。 2，双光束分光光度计
岛津紫外-可见分光光度计uv-2550
岛津UV-2550 仪器说明书一、仪器简介岛津UV-2550是一款博得了用户高度评价的紫外可见分光光度计，性能卓越且操作简单方便，与功能强大的操作软件UVProbe结合，可以具备强大的功能。
小光斑的光学系统使得微量的测定更为方便。
1）高水平的超低杂散光UV-2550采用优异的DDM（双闪耀衍射光栅、双单色器）技术实现了超低杂散光（％以下）和高光通量。
低的杂散光可以对高浓度的样品不进行稀释而直接测定。
2）通用型的软件UVProbeUV-2550通过新一代的中英文双语操作软件UVProbe控制，包含光谱测定、光度测定、动力学测定和报告处理四大模块，从基本的测定到研究解析都可以通过它实现。
UVProbe实现了真正的QA/QC功能，完全支持GLP、GMP。
另外还可以加载膜厚测定、色彩分析等软件。
3）丰富的附件选择和广泛的应用领域生命科学领域：可对从生命体内得到的微量样品进行测试。
积分球测试：可以对浑浊样品和粉末状的样品进行测试。
反射附件：可以对光学材料进行相对反射和绝对反射的测定。
二、主要技术指标三、操作流程1、开机预热1.1先打开电脑显示器和主机，再打开仪器的电源（仪器左侧），双击桌面上的图标UVProbe ,出现“运行身份”对话框，选中“当前用户”，把“保护我的计算机”前的“√”去掉，否则进不去程序，点“确定”，进入软件；1.2点击屏幕下方的“连接”，出现“UV-2550PC 系列– (FD 00)”对话框，仪器开始初始化，所有项目前显示绿灯，则初始化通过，点击“确定”，仪器连接成功；1.3初始化结束后，仪器需预热15min。
预热结束，即可往下操作。
2、基线校正2.1点击菜单栏中的“窗口”，在下拉菜单中，点击“光度测定”，打开光度模块；2.2点击屏幕下方光度计按键栏的“基线”，弹出“基线参数”对话框，输入波长范围（实验所需的波长范围），点击“确定”，启动基线校准操作，在基线扫描过程中，注意波长的变化范围，读数变化≤3nm可接受。
UV-2550紫外分光光度计操作规程
UV-2550紫外可见分光光度计操作和维护作业指导书1•仪器的工作环境仪器应在温度为5C〜35 C,相对湿度不大于85%的环境中工作，放置仪器的桌子不应受到影响使用的振动，室内无强烈电磁场干扰，避免直接暴露在阳光下，避开有硫化氢、二氧化硫、氟气、氨气等腐蚀气体的地方。
仪器供电电压变化不超过220V± 22V，频率变化不超过50Hz±1Hz，仪器地线端应良好接地。
2 •仪器的主要技术指标及规格2.1光学系统：单光束、衍射光栅2.2波长范围：190 nm〜900nm2.3波长设定：190 nm〜850nm,按0.1 nm间隔任意设定2.4波长显示：四位LED,精确至0.1 nm2.5波长准确度：± 1nm2.6波长重复性：< 0.5nm2.7光源：12V30W卤钨灯、氘灯2.8光源切换：自动2.9检测器：光电倍增管R9282.10带宽：2nm2.11杂光：0.5%T（在200nm,碘化钾溶液）2.12测光量程：透射比0%二〜100%T2.13透射比准确度：± 0.5% T2.14透射比重复性：< 0.3% T3. 操作步骤3.1装置的连接：首先从下拉式菜单的仪器项上追加需要的仪器。
操作完毕如下图①所示，加装了UV-1650、UV- 2550、UV- 2450以及UV- 3150;使用时点击实际连接的仪器，例如下图的UV- 2550，然后点击上图的连接键②，这样装置与PC机连接（当然，中间的通讯电缆的连接、通讯口的指定等都是必须的，此处不再赘述）并开始下示的初始化面。
初始化大约需要5分钟左右，进行一系列的检查和初置，如一切顺利通过就可以开始测定。
广W I最大包置搜索ROM檢测广光原点1慢菠RAM检测厂WI灯能量检测遮光器电动机初始化厂M最大位苴挨焉获绻电动机初始化厂E亲1能呈检测I'J电动机初贻化r光原点Z股素扫描电动机初姑化r持命L测试r過过♦或失败3.2测定…首先选择测定的方式，在主菜单上能发现右图亘土丄所示的各键，自左至右分别为：3.2.1报告生成器：用于制作各种格式的报告。
UV2550操作规程
UV-2550操作规程1、先开电脑，再打开仪器开关。
2、双击桌面图标UVprobe，打开之后点击“Connect”进行连接。
仪器开始检查，检查完毕后点击“OK”。
3、基线校正：点击光度计键条中的“Auto Zero”,进行基线的初始化操作。
仪器开机按下“连接”按钮，仪器进行自检，自检完成后，在样品室什么都没放东西的情况下按下“基线校对”按钮，进行基线校对，每次开机都要进行一次基线校对，此后就不用进行了。
4、建立数据采集方法1）选择“File”>>”New”2）选择“Edit”>>“Methods”,启动光度测定方法向导。
3)波长设定：波长类型Point,填测定所需波长，点击“Add”，点击“Next”.(注：当取几个波长的平均值时，分别填写波长后加入到条目中)。
一、光谱测定1、点击“光谱测定”2、点击“方法”设定你将要扫描的波长范围和扫描频率等，设定好后按“确定”，再按“完成”；3、点击“自动调零”，接着按“到波长”查看是否到你所要扫描的最大波长（这一步很重要，如没有这一步，仪器会自动执行上一次设定的值）；4、按“开始”按钮，开始扫描(如果光谱图出现有直线，说明所配的浓度太大，需要稀释)。
二、光度的测定1、点击“光度测定”2、点击“方法”波长设定为通过光谱检测到所测样品的最大吸收波长，然后加入波长，类型多选为“多点”WL1=最大波长。
点击“下一步”，“方法”设定完成后，点击“关闭”；3、将两个空白参比放入光束吸收池架；4、点击“自动调零”；5、双击标准表中的任意位置激活标准表，在表头位置将显示激活；6、点击下拉菜单中的I-扣空白；7、在标准表中依次输入标准系列ID；8、在读取标准样品；蒋两个空白参比放入光束吸收池架，点击“自动调零”，然后放入样品，输入样品浓度，依次进行“读取”。
样品的浓度读取完后，在“标准曲线”表中点击“右键”---“属性”中选择“方程式”、“相关系数”，查看标准曲线。
UV-2550紫外分光光度计标准操作及维护保养规程
UV-2550紫外分光光度计标准操作及维护保养规程1.目的建立UV-2550型紫外可见分光光度计标准操作及维护保养规程，确保分光光度计正常使用。
2.范围适用于UV-2550型紫外可见分光光度计的操作使用。
3.术语或定义N/A4.职责：仪器管理员及仪器操作人员对本规程的实施负责。
5.程序5.1 工作环境仪器应在温度为5℃～35℃，相对湿度不大于85%的环境中工作，放置仪器的桌子不应受到影响使用的振动，室内无强烈电磁场干扰，避免直接暴露在阳光下，避开有硫化氢、二氧化硫、氟气、氮气、氨气等腐蚀气体的地方。
5.2 供电要求仪器供电电压变化不超过220V±22V，频率变化不超过50±2HZ，仪器地线端应良好接地。
5.3 联机5.3.1开启计算机，进入Windows9X操作系统。
5.3.2用鼠标点击“开始”→“程序”→“紫外可见分光光度计”→紫外可见分光光度计”。
5.3.3计算机屏幕显示“是否联机？”提示，选择“是”。
如未初始化，系统直接进入初始化窗口。
如已初始化过，系统提示“是否初始化？”，可选择“是”或“否”。
选择“是”，则系统进入初始化窗口如选择“否”，则系统进行系统设置后进入工作窗口。
5.4.定量分析5.4.1在工作窗口下选择定量分析进入，设定波长（输入指定波长，并使仪器波长马达驱动至该指定波长。
如果波长输入值大于850nm或小于190nm，将会有提示表明该输入出错，并且等待下一次输入。
如取消设定，则所输入波长值无效。
否则产针会等待输入，直至输入的波长值正确为止）。
5.4.2取比色皿一只倒入空白溶液，放入样品室第一格；另取配对比色皿一只倒入待测液，放入样品室第二格，盖好样品室。
5.4.3调满度。
使显示的数值在透过率时为99.0%～101.0%；在吸光度时为-0.001～0.001第二格，读数窗上显示的数值即为该样品的吸光度（A）。
5.5 定性分析5.5.1在工作窗品下选择波长扫描。
岛津UV2550操作说明
岛津UV2550紫外-可见分光光度计的使用2011-09-27 10:29:40| 分类：药物化学| 标签：|字号大中小订阅岛津UV2550中文操作手册/view/ecf2d74569eae009591bec04.html岛津UV2550紫外-可见分光光度计的使用前段时间采用铬酸钡分光光度法（HJ/T 342-2007）测定硫酸根的含量，实验过程中需要用到分光光度计，可是面对一台超大的紫外-可见分光光度计，我却是摸不着头脑，请教同学也没有完全会用的。
于是痛下决心，一定要弄明白这个仪器的基本应用。
功夫不负有心人呀，经过一段时间的研究和实践操作，我终于大概弄明白了最基本的操作。
现对岛津UV 2550紫外-可见分光光度计的基本使用进行简要说明（参考《岛津UV 2550紫外可见分光光度计教程》，教程为中文，我使用的仪器操作界面为英文）。
1.开电脑主机，开显示器，打开仪器开关。
2.双击桌面图标UVprobe，打开之后点击“Connect”进行连接。
3.出现以下窗口，仪器开始进行检查，检查完毕后点击“OK”。
4.基线校正：点击光度计键条中的“Auto Zero”，进行基线的初始化操作。
5.建立数据采集方法1）选择“File”>>“New”。
2）选择“Edit”>>“Methods”，启动光度测定方法向导，出现以下窗口。
3）波长设定：波长类型：Point；波长：填测定所需波长；点击“Add”。
点击“Next”。
注：当取几个波长的平均值时，分别填写波长后加入到条目中。
4）校准：类型：Multi Piont；公式：Fixed Vovelength；WL：WL所需波长；曲线次数（Order of）：1st/2nd/3rd。
点击“Next”。
注：1st：直线；2nd：二次曲线，接近数据点；3rd：最接近数据点。
5）测定参数标准标签页：标准曲线数据直接输入时选“User Entry”，采用仪器测定时选“Instrument”。
uv2550使用说明
u v2550使用说明(总3页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可----内页可以根据需求调整合适字体及大小--岛津UV 2550紫外-可见分光光度计操作规程一、开机1.开电脑主机，开显示器，打开仪器开关。
2.双击桌面图标UVprobe，打开之后点击左下角“连接”进行连接。
3.出现以下窗口，仪器开始进行检查，检查完毕后点击“OK”。
注：仪器自检过程不能打开样品仓，否则会影响自检正常进行。
二、模式1.基线校正：将样品池及参比池同时放入参比溶液，点进行基线校正。
2.建立数据采集方法选择“编辑”→“方法”，进入光谱方法对话框。
在“测定”选项下，输入波长范围，其余选其缺省值即可。
在“仪器参数”选项下，测定方式通常选吸收值，其余缺省。
在“附件”选项下，选六联池。
在上述确定后，点确定，进入测试界面3.样品测定：参比池参比液不动，将外侧样品池的换成待测样品，点进行样品图谱扫描。
4.测试完成后，图谱将自动将峰值及峰谷的位置标出。
5.报告生成：点，调出报告模板，点击“打印预览”形成UVProbe报告，在该页面点“打印”，在打印对话框中选，点击确定后，出现保存对话框，输入文件名后，保存。
6.打印数据点，调出数据打印对话框，在该对话框右击选“属性”，输入间隔，全部选定数据复制，点开Excel,粘贴即可。
注:全部测试完成后，一定要点“文件”→“全部保存”，否则测试数据将丢失三、模式1.选择“编辑”→“方法”，启动光度测定方法向导。
波长类型：点；波长：填测定所需波长；点击“加入”。
点击“下一步”。
标准曲线选项选“多点”“固定波长”，WL1处输入所选波长，一直点“下一步”到“完成”。
保存设定的方法。
2.基线校正：将样品池及参比池同时放入参比溶液，点击，扣除参比溶液对样品的影响。
3.标准曲线：在激活的“标准表”输入浓度，保持参比池参比液不动，将外侧样品池的换成已配置好的标准样品，为防止交叉污染，建议浓度由低到高点逐个进行样品吸光度测试，所有的标准样品测试后，自动生成标准曲线。
UV-2550分光光度计的使用
UV-2550分光光度计的使用紫外光谱法的原理: 紫外可见吸收光谱的基本原理是利用在光的照射下待测样品内部的电子跃迁，电子跃迁类型有：（1）σ→σ* 跃迁指处于成键轨道上的σ电子吸收光子后被激发跃迁到σ*反键轨道（2）n→σ* 跃迁指分子中处于非键轨道上的n电子吸收能量后向σ*反键轨道的跃迁（3）π→π* 跃迁指不饱和键中的π电子吸收光波能量后跃迁到π*反键轨道。
（4）n→π* 跃迁指分子中处于非键轨道上的n电子吸收能量后向π*反键轨道的跃迁。
电子跃迁类型不同，实际跃迁需要的能量不同：σ→σ* ～150nmn→σ* ～200nmπ→π* ～200nmn→π* ～300nm吸收能量的次序为：σ→σ*＞n→σ*≥π→π*＞n→π*特殊的结构就会有特殊的电子跃迁，对应着不同的能量（波长），反反映在紫外可见吸收光谱图上就有一定位置一定强度的吸收峰，根据吸收峰的位置和强度就可以推知待测样品的结构信息。
3、紫外可见吸收光谱常用于共轭体系的定量分析，灵敏度高，检出限低。
物质的紫外吸收光谱基本上是其分子中生色团及助色团的特征，而不是整个分子的特征。
如果物质组成的变化不影响生色团和助色团，就不会显著地影响其吸收光谱，如甲苯和乙苯具有相同的紫外吸收光谱。
另外，外界因素如溶剂的改变也会影响吸收光谱，在极性溶剂中某些化合物吸收光谱的精细结构会消失，成为一个宽带。
所以，只根据紫外光谱是不能完全确定物质的分子结构，还必须与红外吸收光谱、核磁共振波谱、质谱以及其他化学、物理方法共同配合才能得出可靠的结论。
化合物的鉴定利用紫外光谱可以推导有机化合物的分子骨架中是否含有共轭结构体系，如C＝C －C＝C、C＝C－C＝O、苯环等。
利用紫外光谱鉴定有机化合物远不如利用红外光谱有效，因为很多化合物在紫外没有吸收或者只有微弱的吸收，并且紫外光谱一般比较简单，特征性不强。
利用紫外光谱可以用来检验一些具有大的共轭体系或发色官能团的化合物，可以作为其他鉴定方法的补充。
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4. 显色时间、温度、放置时间等。
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三、参比液选择 1.溶剂参比：试样组成简单、共存组份少（基体干扰少）、显色剂不吸 收时，直接采用溶剂（多为蒸馏水）为参比； 2.试剂参比：当显色剂或其它试剂在测定波长处有吸收时，采用试剂作 参比（不加待测物）； 3.试样参比：如试样基体在测定波长处有吸收，但不与显色剂反应时， 可以试样作参比（不能加显色剂）。
紫外-可见光度计仪器由光源、单色器、吸收池和检测器四部分组成。 一、光源 对光源基本要求：足够光强、稳定、连续辐射且强度随波长变化小。
1. 钨及碘钨灯：340~1500 nm，多用在可见光区；
2. 氢灯和氘灯：160~375nm，多用在紫外区。 二、单色器(Monochromator)
与原子吸收光度仪不同，在UV-Vis光度计中，单色器通常置于吸收
UV-Vis方法是分子光谱方法，它利用分子对外来辐射的吸收特性。 UV-Vis涉及分子外层电子的能级跃迁；光谱区在160~780nm. UV-Vis 主要用于分子的定量分析，但紫外光谱 (UV) 为四大波谱之一，是
鉴定许多化合物，尤其是有机化合物的重要定性工具之一。
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紫外-可见吸收光谱
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2. 选择掩蔽剂
3. 合适测量波长 4. 干扰物分离 5. 导数光谱及双波长技术
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紫外-可见分光光度法 的应用
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电磁波谱
波长 200 400 800 3200(nm)
g -X-射线
紫外
可见
红外
微波
无线电
真空紫外
近红外
核磁共振
波长越短，能量越高
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a）待测物高浓度--吸收质点间隔变小—质点间相互作用—对特定辐射
的吸收能力发生变化--- 变化； b）试液中各组份的相互作用，如缔合、离解、光化反应、异构化、配
体数目改变等，会引起待测组份吸收曲线的变化；
c）溶剂的影响：对待测物生色团吸收峰强度及位置产生影响； d）胶体、乳状液或悬浮液对光的散射损失。
ΔΕ ΔΕe ΔΕv ΔΕr
其中DEe最大：1-10 eV; DEv次之：0.05-1 eV; DEr最小：0.05 eV
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能级跃迁示意图
电磁波与分子相互作用时产生能级跃迁：
UV2550光路图
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分光光度计的校正 当光度计使用一段时间后其波长和吸光度将出现漂移，因此需要对
其进行校正。
波长标度校正：
使用镨-钕玻璃（可见光区）和钬玻璃（紫外光区）进行校正。因为 二者均有其各自的特征吸收峰。
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四、干扰消除
1. 控制酸度：
配合物稳定性与pH有关，可以通过控制酸度提高反应选择性，副反应减少， 而主反应进行完全。如在0.5MH2SO4 介质中，双硫腙与Hg2+ 生成稳定有色配合物 ，而与Pb2+、Cu2+、Ni3+、Cd2+等离子生成的有色物不稳定。
一、定性分析
不同物质结构不同或者说其分子能
级的能量(各种能级能量总和)或能量间
隔各异，因此不同物质将选择性地吸收 不同波长或能量的外来辐射，这是UVVis定性分析的基础。
定性分析具体做法是让不同波长的
光通过待测物，经待测物吸收后，测量 其对不同波长光的吸收程度(吸光度A)， 以吸光度A为纵坐标，辐射波长为横坐 标作图，得到该物质的吸收光谱或吸收 曲线，据吸收曲线的特性(峰强度、位置 及数目等)研究分子结构。
池的前面！（可防止强光照射引起吸收池中一些物质的分解） 三、吸收池(Cell，Container)： 用于盛放样品。可用石英或玻璃两种材料制作，前者适于紫外区和 可见光区；后者只适于可见光区。有些透明有机玻璃亦可用作吸收池。 四、检测器： 硅光电池、PMT、PDA
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吸光度标度校正：
采用 K2CrO4 标准液校正（在15oC时，于不同波长处测定0.04000g/L
的 KOH 溶液（0.05mol/L）的吸光度 A，调整光度计使其A 达到指定的吸 光度。
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2. 能级组成：除了电子能级(Electron energy level)外，分子吸收能量 将伴随着分子的振动和转动，即同时将发生振动(Vibration)能级和转 动(Rotation)能级的跃迁！据量子力学理论，分子的振-转跃迁也是量 子化的或者说将产生非连续谱。因此，分子的能量变化DE为各种形式 能量变化的总和：
一、分子吸收光谱的形成 1. 过程：运动的分子外层电子--------吸收外来外来辐射------产生电子能 级跃迁-----分子吸收谱。
M h I0 M * It h
能量
激发态 E1
能量差 DE
e
DE = E1 - E0 = h 激发 基态 E0
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2. 仪器因素
仪器因素包括光源稳定性以及入射光的单色性等。
a）入射光的非单色性：不同光对所产生的吸收不同，可导致测定偏差。
b）谱带宽度与狭缝宽度：“单色光”仅是理想情况，经分光元件色
散所得的“单色光”实际上是有一定波长范围的光谱带(即谱带宽度) 。单色光的“纯度”与狭缝宽度有关，狭缝越窄，它所包含的波长范 围越小，单色性越好。
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三、偏离 L-B 定律的因素
样品吸光度 A 与光程 b 总是成正比。但当 b 一定时，A 与 c 并不总 是成正比，即偏离 L-B 定律！这种偏离由样品性质和仪器决定。 1. 样品性质影响
*），跃迁能量较高，这些跃迁所产生的吸收谱多位于真空紫外区，因
而在此不加讨论。
只有-*和n-*两种跃迁的能量小，相应波长出现在近紫外区甚至可
见光区，且对光的吸收强烈，是我们研究的重点。
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v2 v1
能级
转动能级跃迁 5 4 3 2 1 0
v0 v2
E1 电子能级跃迁
v1 振动能级跃迁 v0
E0
E = h 其中 h 为普朗克常数 (6.626 × 10-34 焦耳· 秒） 为频率
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真空紫外区；
-* : 和-*跃迁：尽管所需能量比上述-*跃迁能量小，但波长仍处于
真空紫外区；
n-*：含有孤对电子的分子，如H1O(167nm)；CH3OH(184nm)；CH3Cl
(173nm);CH3I(158nm)；(CH3)1S(119nm)；(CH3)1O(184nm) CH3NH1(115nm)；(CH3)3N(117nm)，可见，大多数波长仍小于 200nm，处于近紫外区。 以上四种跃迁都与成键和反键轨道有关（ -* ， -* ， -*和n-
各轨道能级高低顺序： n**； 可能的跃迁类型：-*；-*；-*；n-*；-*；n-*
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-*：C-H共价键，如CH4（115nm）；C-C键，如C1H6(135nm)，处于
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二、反应条件选择 1. 显色剂的选择原则： 使配合物吸收系数 最大、选择性好、组成恒定、配合物稳定 、显色剂吸收波长与配合物吸收波长相差大等。 2. 显色剂用量：
配位数与显色剂用量有关；在形成逐级配合物，其用量更要严格
将上两式相比，并将 dT 和 dc 分别换为DT 和 Dc，得
Dc 0.434DT c T lg T
当相对误差 Dc/c 最小时，求得T=0.368 或 A=0.434。即当A=0.434
时，吸光度读数误差最小！
通常可通过调节溶液浓度或改变光程b来控制A的读数在0.15~1.00范 围内。