链球菌属检验
临床微生物学检验：链球菌属
肺炎链球菌脐窝状菌落（培养48h后）
27
肺炎链球菌粘液样菌落 28
3.生化反应
• 分解葡萄糖，产酸不产气。 • 一般不分解菊糖，不被胆汁溶解（鉴别
甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌）。 • 触酶（-），与葡萄球菌不同。
•肺炎链球菌： 分解葡萄糖、乳糖和菊糖，胆汁可溶菌， Optochin敏感，触酶（-）
45
小结
• 链球菌属细菌种类多，其中某些菌种为毒力强的 致病菌。分类较为复杂，临床分离株仍以传统的 血平板上溶血现象、菌落特点和Lancefield抗原 血清分型，结合生化反应进行鉴定。
• 肺炎链球菌：革兰阳性双球菌，有荚膜，脐窝样 菌落、OP（+）、胆汁溶菌（+）
• A群链球菌：镜下特点、菌落特点、杆菌肽、血清 试验
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链球菌微生物检验程序
涂片染色 G+球菌，触酶（-）
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五、药敏试验药物选择
β溶血链球菌 肺炎链球菌 草绿色链球菌
药敏时药物选择不同
首选青霉素和氨苄西林
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预防分娩妇女B群链球菌感染：
①推荐使用青霉素和氨苄西林。 ②低危险性青霉素过敏者，推荐头孢唑林。 ③高危险性青霉素过敏者推荐克林霉素或红霉素
41
血清学检查
抗O试验（ASO test）： 链球菌侵入体内产生SLO，刺激机体产生
相应抗体ASO(血清），加入SLO乳胶试剂，SLO 抗体(ASO)与乳胶试剂(吸附有SLO)反应，产生 凝集，为阳性；无凝集，为阴性。
–原理：中和试验，用SLO检测血清中的ASO –方法：间接凝集 –结果：效价大于400单位 –意义：活动性风湿热及肾小球肾炎辅助诊断
16
急性肾小球肾炎的临床表现：水肿、 血尿、蛋白尿等。
(完整版)猪链球菌的检测和鉴定技术
ATCC43765
+ + + + + + + + + + 4641427 （92%）
HA9801
+ + + + + + + + + + + 4651427 (80%)
ATCC35246
+ + + + + + + + + 0461607 (99.9%)
32210 化脓链球菌
0161415 (99.9%)
读数仪
比浊仪 电子加样枪
计算机 打印机
19
试条组成
试条种类：
24h常规鉴定试条
Ref.32400，ID32 E Ref.32100，ID32 GN Ref.32500，ID32 Staph Ref.32200，ID32 C
4h快速鉴定试条
Ref.32700，rapid ID32 E Ref.32300，rapid ID32 A Ref.32600，rapid ID32 Strep
粪肠球菌
7143711 （98.7%）
猪链球菌的API鉴定结果
TRE（海藻糖）、RAF（棉子糖）等几个的试验与API 菌种库有些不符，但 都属于SS2型或1型，数值分类
相对于双歧分类的优点
ATCC43765
HA9801
ATCC35246
32210 化脓链球菌
粪肠球菌
编码 4641427（92%） 4651427(80%) 0461607(99.9%)0161415(99.9%)7143711（98.7%）
链球菌属检验
编写：常晓林2011-09-09 审核：文佳琼2011-11-01 批准：牛华2011-11-011．概述链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。
该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G等18个群），或根据溶血现象（β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。
化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌，属A群、β溶血的链球菌。
2. 标本类型血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3. 鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌，固体培养基上呈单个或成双排列，较少呈链状排列，肉汤培养基中呈长链状排列，肺炎链球菌呈矛头状，成双或链状排列。
3.2 培养特性在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：α溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；β溶血周围有明显较大的完全透明环；γ溶血（不溶血性）无异常变化。
肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色α溶血环。
3.3 生化反应触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。
肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性，Optochin试验敏感（抑菌环＞14mm）。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小，可出现β溶血、α溶血或不溶血，触酶试验阴性。
3.4.2 根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群。
A群链球菌（化脓性链球菌）：β溶血，杆菌肽敏感。
B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。
C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性，血清学分型、杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。
D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等）：胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验均为阳性，45℃生长。
现归属于肠球菌属。
C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。
非β溶血链球菌的鉴别见表1。
表1 非β溶血链球菌的鉴别菌名Optochin试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验肺炎链球菌+ + -牛链球菌- - +其他草绿色链球菌群- - -3.5 操作步骤3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。
肺炎链球菌鉴定流程
肺炎链球菌鉴定流程肺炎链球菌（肺炎链球菌属）是导致人类社区获得性肺炎（CAP）最常见的病原体之一。
准确鉴定肺炎链球菌对于指导适当的抗菌治疗和监测抗菌剂耐药性的出现至关重要。
该鉴定过程涉及多个步骤，包括：革兰氏染色：革兰氏染色是鉴定肺炎链球菌的第一步，因为它是一种革兰氏阳性球菌，通常成链状排列。
形态学检查：通过显微镜检查革兰氏阳性标本，可以观察到肺炎链球菌的典型的链球菌形态。
链条的长度和排列模式可能因菌株而异。
荚膜染色：肺炎链球菌具有多糖荚膜，可通过荚膜染色技术（例如，奎肯斯泰特染色）显现出来。
荚膜的存在是肺炎链球菌鉴定的关键特征。
血清学检测：血清学检测，如奎肯斯泰特试验，可用于确定肺炎链球菌的荚膜血清型。
肺炎链球菌的荚膜由不同的血清型组成，每种血清型与不同的抗原性决定簇（PSA）相关。
生物化学测试：多种生物化学测试可用于确认肺炎链球菌的鉴别，包括：溶血反应：肺炎链球菌通常在绵羊红细胞琼脂平板上显示β溶血反应。
胆盐耐受性：肺炎链球菌可耐受高浓度的胆汁盐，这是区分其与其他链球菌的重要特征。
尿素酶活性：肺炎链球菌通常产生尿素酶，可水解尿素。
分子诊断：分子诊断方法，如聚合酶链反应（PCR），可用于快速鉴定肺炎链球菌，尤其是在培养困难的情况下。
PCR检测靶向肺炎链球菌基因，如lytA或cpsA。
抗菌剂敏感性测试：进行抗菌剂敏感性测试对于指导针对肺炎链球菌的适当治疗至关重要。
通常使用琼脂稀释法或扩散法来确定肺炎链球菌对各种抗菌剂的敏感性。
鉴定肺炎链球菌的流程通常涉及以下步骤：1. 革兰氏染色：确定标本中是否存在革兰氏阳性球菌。
2. 形态学检查：观察革兰氏阳性球菌的链球菌形态。
3. 荚膜染色：显示肺炎链球菌荚膜的存在。
4. 血清学检测：确定肺炎链球菌的荚膜血清型。
5. 生物化学测试：进行溶血反应、胆盐耐受性和尿素酶活性测试以确认鉴别。
6. 分子诊断：如有必要，进行PCR检测以快速鉴定肺炎链球菌。
7. 抗菌剂敏感性测试：确定肺炎链球菌对各种抗菌剂的敏感性。
链球菌属微生物临床检验
链球菌属微生物临床检验链球菌属(Streptococcus)原包括40个种别，但有的种后来被排除，按16S rRNA分类，现有6个群30个种和两个单独的种。
链球菌DNA中G+C含量为34m01％～46m01％。
链球菌的检验主要包括两方面，卫生微生物学和临床微生物学。
卫生微生物学重点检测食品微生物、环境微生物、水质微生物及流行病学检测；临床微生物学重点检测脓汁、咽拭、炎性分泌物、脑脊液、血液等标本。
现将检验方法汇总如下。
一标本的采集和处理1.疫情标本患者咽拭子涂抹标本，采取后放入无菌中试管或运送培养基中送检。
同时涂抹可能污染的环境和衣物，同上方法送检。
2.食物标本①大包装乳制品：以灭菌刀、勺取样，从不同部位采取代表性样品，放入灭菌器内送检。
②小包装乳制品：采取原包装样品送检。
3.临床样品采取脓汁、咽拭子、炎性分泌物、脑脊液、血液等标本送检。
二增菌与分离培养1.疫情标本和临床标本将采取的标本直接分离于血琼脂平板上，37℃培养24h。
同时增菌于肉浸液葡萄糖肉汤中，或匹克增菌液中，放10％二氧化碳环境，37℃培养24 h 或放入厌氧环境中进行增菌培养。
同上分离培养和观察结果。
血液标本，直接放入50ml肉浸液葡萄糖增菌液或匹克增菌液中，同上培养和分离。
2.乳制品①炼乳将罐外洗净，罐盖用75％酒精消毒，再用火焰消毒，然后用灭菌开罐器打开，样品混匀取出10g，放入装有玻璃珠的广口瓶中，加入肉浸液肉汤90ml或匹克增菌液肉汤，37℃培养24h。
②奶油将奶油样品置水浴中加热，溶化后以灭菌吸管吸出10ml加入灭菌水中，混匀，同上培养和分离。
③奶粉以无菌手续取样10g，放入上述培养基中，培养和分离。
④奶酪以灭菌刀削去蜡皮，然后切开，切取表层和深处共10g，放入上述培养基中。
培养和分离。
三鉴定技术1.挑选可疑菌落溶血性链球菌：从血琼脂平板上挑选灰白、圆形、突起、小米粒大小、周围有透明溶血环的菌落，分纯于血琼脂平板上，37℃培养，观察结果。
链球菌属的特性及其检验
链球菌属的特性及其检验目的：总结链球菌属的特性及其检验技术，结合临床经验，进一步提高细菌分离及鉴定水平。
方法：采用显微镜检查、分离培养、细菌生化反应、血清学试验等进行分离和鉴定。
结果：根据菌体形态、菌落形态、溶血特征将链球菌分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌；按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D等20个群。
结论：链球菌是临床常见的致病菌，正确掌握检验方法，科学地分离和鉴定，有助于临床做出合理的诊治决策。
标签：链球菌属；特性；分离培养；生化反应；血清学试验链球菌属细菌广泛分布于自然界、人及动物肠道和鼻咽部，大多数不致病。
其中A、B群及肺炎链球菌是本属的3种重要致病菌，可引起各种化脓性炎症、医源性伤口感染、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病[1]。
另外草绿色链球菌为条件致病菌。
因此，本属细菌的鉴定、药敏试验是微生物检验工作的重要内容之一，临床上常见的标本包括咽拭子、痰液、分泌物、穿刺液、尿液、脑脊液和血液。
现将本属的特性及其检验总结如下：1 资料与方法1.1一般资料本院微生物实验室2009年共接收咽拭子样本299例、痰液样本1 319例、分泌物817例、穿刺液239例、尿液704例、脑脊液54例和血液培养815例，合计4 247例。
其中门诊患者样本239例，住院患者样本4 008例。
细菌培养阳性结果1 475例，阳性率为34.73%。
其中链球菌属阳性83例，占5.63%。
1.2 检验方法根据不同疾病采集不同标本。
1.2.1 显微镜检查咽拭子、痰液、脓液、穿刺液、脑脊液等标本可直接涂片革兰染色，镜检见链状排列革兰阳性球菌可初步报告，及时供临床参考。
1.2.2 分离培养血液标本需要先增菌培养，脓液、咽拭可直接接种血琼脂平板。
链球菌属初代分离需5％CO2，35℃24 h观察菌落性状。
菌落太小可延长观察时间。
1.2.3 鉴定根据菌体形态、菌落形态、溶血特征以及下列鉴定试验进行。
链球菌属及其检验「微生物检验」(一篇)
链球菌属及其检验「微生物检验」(一篇)链球菌属及其检验「微生物检验」 1链球菌属及其检验「微生物检验」⒈分类链球菌的分类方法尚未统一。
常用下列两种方法。
⑴根据溶血现象：分为3类。
①甲型溶血性链球菌(α-hemolytic streptococcus)：菌落周围有1～2mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或α溶血，该类菌又称草绿色链球菌，为条件致病菌。
②乙型溶血性链球菌(β-hemolytic streptococcus)：菌落周围有2～4mm宽的透明溶血环，称乙型溶血或β溶血，该类菌又称溶血性链球菌，致病性强，常引起人和动物多种疾病。
③丙型链球菌(γ-streptococcus)：菌落周围无溶血环，因而又称不溶血性链球菌，一般不致病。
⑵根据抗原结构：按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D 。
等20个群。
同群链球菌间，因表面蛋白质抗原不同又分若干型。
如A群根据其M抗原不同，可分成约100个型;B群分4个型。
对人致病的链球菌菌株，主要是A群，多数呈现乙型溶血。
⒉细菌特性⑴链球菌① 形态染色球形或椭圆形，直径0.5～1.0μm，链状排列，链的长短与细菌的种类和生长环境有关，在液体培养基中形成的链较长。
无芽胞，无鞭毛。
多数菌株在培养早期(2～4h)形成透明质酸的荚膜。
革兰染色阳性。
②分离培养营养要求较高，培养基中需加入血液或血清、葡萄糖、氨基酸、维生素等物质。
多数菌株兼性厌氧，少数为专性厌氧。
在液体培养基中呈沉淀生长，在血平板上，37℃18～24h 后可形成灰白色、圆形、凸起、光滑、直径为0.5mm～0.75mm 的细小菌落，菌落周围出现不同类型的溶血环。
③生化反应触酶阴性、一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两特性可用来鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎链球菌。
④抗原构造主要有三种：蛋白质抗原：或称表面抗原。
具型特异性有M、T、R、S 4种，位于C抗原外层。
与致病性有关的是M抗原。
多糖抗原：或称C抗原。
为群特异性抗原，位于细胞壁。
链球菌及其检验
第二节链球菌及其检验目的要求：了解链球菌属生物学特性，掌握其检验程序重点难点：致病性链球菌的检验程序课时安排：2教学过程：链球菌系指一大类呈链状排列的球菌。
本菌广泛分布于自然界，一般存在于水、乳、粪便以及人和动物的病灶内。
健康人和动物的皮肤和粘膜上，呼吸道和消化道内往往带菌。
有些可引起各种化脓性炎症，猩红热，丹毒，脑膜炎，产褥热以及链球菌变态反应性疾病等，还有马腺疫链球菌，肺炎、乳腺炎、败血症等。
本菌在血液琼脂上培养时，按其对红细胞的落解现象，将其分为三类：；（1）甲型溶血(又称为α溶血)，菌落周围呈现弱溶血，并有绿色环，放冰箱一夜后，绿色环周围呈现溶血环，（2）亚甲型溶血(又称为α溶血)在菌落周围无明显溶血境界，溶血环狭小；镜检时，可见部分残留红细胞。
（3）乙型溶血(又称β溶血)菌落周围红细胞完全溶解，并有明显的溶血境界，出现完全透明的溶直环．本型包括大部分对人畜致病的链球菌。
此外，还有的链球菌无任何溶血现象。
链球菌的检验工作不仅在临床和流行病学上具有重要意义，在食品卫生工作上也具有十分重要的意义，一方面根据食品卫生要求，对食品中(如牛乳及乳制品)的致病性链球菌进行检验；另一方面，在可疑为链球菌引起食物中毒暴发时，应通过检验证实该菌与食物中毒的关系。
链球菌在自然界分布广泛，是食物污染的重要原因。
文献报导，许多由食物引起的脓毒性咽喉痛和猩红热，是由A群链球菌引起，近年来，由链球菌引起的食物中毒已逐渐为人们所注意。
链球菌性食物中毒，经常由乳、肉类食品所引起，多为α溶血型。
β溶血型链球菌引起食物中毒较少。
一、生物学特性1、形态与染色特性本菌为圆形或卵圆形，常排列成链状，链的长短不一。
致病性链球菌一般较长，非致病性或毒力弱的菌株菌链较短，在液体培养中易呈长链，在固体培养基上常呈短链。
大多数链球菌无鞭毛，不能运动，但D群中某些菌株具有鞭毛。
不能形成芽胞。
多数链球菌在血清肉汤幼龄培养物中，易发现荚膜，当培养时间延长，荚膜即逐渐消失。
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1．概述
链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。
该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G等18个群），或根据溶血现象（β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。
化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌，属A群、β溶血的链球菌。
2. 标本类型
血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3. 鉴定
3.1 形态与染色革兰阳性球菌，固体培养基上呈单个或成双排列，较少呈链状排列，肉汤培养基中呈长链状排列，肺炎链球菌呈矛头状，成双或链状排列。
3.2 培养特性在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：α溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；β溶血周围有明显较大的完全透明环；γ溶血（不溶血性）无异常变化。
肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色α溶血环。
3.3 生化反应触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。
肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性，Optochin试验敏感（抑菌环＞14mm）。
3.4 鉴别要点
3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小，可出现β溶血、α溶血或不溶血，触酶试验阴性。
3.4.2 根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群。
A群链球菌（化脓性链球菌）：β溶血，杆菌肽敏感。
B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。
C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性，血清学分型、杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。
D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等）：胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验均为阳性，45℃生长。
现归属于肠球菌属。
C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。
非β溶血链球菌的鉴别见表1。
表1 非β溶血链球菌的鉴别
菌名Optochin试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验
肺炎链球菌+ + -
牛链球菌- - +
其他草绿色链球菌群- - -
3.5 操作步骤
3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。
3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。
3.5.3 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4. 药敏
参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。
5. 质量控制
参见《质量管理程序》。
6. 检验结果解释与分析
6.1 草绿色链球菌是人体正常菌群的一部分，通常是不致病的，只有当草绿色链球菌出
现在血液等无菌体液中时，鉴定才有意义。
6.2如果检测出链球菌对青霉素敏感，同时该菌被认为对氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、阿莫西林、头孢克洛、头孢唑林、头孢地尼、头孢布坦、头孢曲松、头孢吡肟、头孢唑肟、头孢噻肟等头孢类敏感，则不必进行上述抗生素的药敏试验。
如果检测出肺炎链球菌苯唑西林抑菌圈≤19mm，应当检测青霉素、头孢噻肟和头孢曲松的MIC，因为可能发生青霉素耐药或中介现象。
如果检测出链球菌对红霉素敏感或耐药，则提示该菌对克拉霉素、阿奇霉素、地红霉素敏感或耐药。
近年来青霉素耐药肺炎链球菌（PRSP）及多重耐药（MDRSP）菌株的增加，给临床治疗带来一定的困难。
7. 临床意义
化脓性链球菌（A群链球菌）是引起化脓性感染的主要病原菌，致病力最强，可引起痈、蜂窝织炎、急性咽炎、丹毒、脓疱疮、猩红热、医源性伤口感染和产后感染等。
此外其感染后也可发生急、慢性风湿热和急性肾小球肾炎等严重变态反应性并发症。
无乳链球菌（B群）正常寄居于妇女阴道和人体肠道，带菌率可达30%左右，此菌可引起新生儿感染。
肺炎链球菌存在于正常人群的口腔、鼻咽部，属正常菌群，可引起大叶性肺炎或支气管炎。
草绿色链球菌是人体上呼吸道正常菌群，通常不致病。
如果在血液内或无菌体液中检出草绿色链球菌，有临床意义。
8. 鉴定流程
参考文献
[1] 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南.2008
[2] 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007
[3] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006
[4] Murray PR. Manual of Cinical Microbilogy. 9th ed.Washington:ASM Press,2007
[5] ISO 15189：2007医学实验室-质量和能力认可准则. 2007。