链球菌属检验
链球菌属检验
1．概述链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。
该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G等18个群），或根据溶血现象（β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。
化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌，属A群、β溶血的链球菌。
2. 标本类型血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3. 鉴定3.1 形态与染色革兰阳性球菌，固体培养基上呈单个或成双排列，较少呈链状排列，肉汤培养基中呈长链状排列，肺炎链球菌呈矛头状，成双或链状排列。
3.2 培养特性在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：α溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；β溶血周围有明显较大的完全透明环；γ溶血（不溶血性）无异常变化。
肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色α溶血环。
3.3 生化反应触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。
肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性，Optochin试验敏感（抑菌环＞14mm）。
3.4 鉴别要点3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小，可出现β溶血、α溶血或不溶血，触酶试验阴性。
3.4.2 根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群。
A群链球菌（化脓性链球菌）：β溶血，杆菌肽敏感。
B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。
C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性，血清学分型、杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。
D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等）：胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验均为阳性，45℃生长。
现归属于肠球菌属。
C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。
非β溶血链球菌的鉴别见表1。
表1 非β溶血链球菌的鉴别菌名Optochin试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验肺炎链球菌+ + -牛链球菌- - +其他草绿色链球菌群- - -3.5 操作步骤3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。
临床微生物学检验：链球菌属
肺炎链球菌脐窝状菌落（培养48h后）
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肺炎链球菌粘液样菌落 28
3.生化反应
• 分解葡萄糖，产酸不产气。 • 一般不分解菊糖，不被胆汁溶解（鉴别
甲型溶血性链球菌与肺炎链球菌）。 • 触酶（-），与葡萄球菌不同。
•肺炎链球菌： 分解葡萄糖、乳糖和菊糖，胆汁可溶菌， Optochin敏感，触酶（-）
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小结
• 链球菌属细菌种类多，其中某些菌种为毒力强的 致病菌。分类较为复杂，临床分离株仍以传统的 血平板上溶血现象、菌落特点和Lancefield抗原 血清分型，结合生化反应进行鉴定。
• 肺炎链球菌：革兰阳性双球菌，有荚膜，脐窝样 菌落、OP（+）、胆汁溶菌（+）
• A群链球菌：镜下特点、菌落特点、杆菌肽、血清 试验
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链球菌微生物检验程序
涂片染色 G+球菌，触酶（-）
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五、药敏试验药物选择
β溶血链球菌 肺炎链球菌 草绿色链球菌
药敏时药物选择不同
首选青霉素和氨苄西林
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预防分娩妇女B群链球菌感染：
①推荐使用青霉素和氨苄西林。 ②低危险性青霉素过敏者，推荐头孢唑林。 ③高危险性青霉素过敏者推荐克林霉素或红霉素
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血清学检查
抗O试验（ASO test）： 链球菌侵入体内产生SLO，刺激机体产生
相应抗体ASO(血清），加入SLO乳胶试剂，SLO 抗体(ASO)与乳胶试剂(吸附有SLO)反应，产生 凝集，为阳性；无凝集，为阴性。
–原理：中和试验，用SLO检测血清中的ASO –方法：间接凝集 –结果：效价大于400单位 –意义：活动性风湿热及肾小球肾炎辅助诊断
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急性肾小球肾炎的临床表现：水肿、 血尿、蛋白尿等。
(完整版)猪链球菌的检测和鉴定技术
ATCC43765
+ + + + + + + + + + 4641427 （92%）
HA9801
+ + + + + + + + + + + 4651427 (80%)
ATCC35246
+ + + + + + + + + 0461607 (99.9%)
32210 化脓链球菌
0161415 (99.9%)
读数仪
比浊仪 电子加样枪
计算机 打印机
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试条组成
试条种类：
24h常规鉴定试条
Ref.32400，ID32 E Ref.32100，ID32 GN Ref.32500，ID32 Staph Ref.32200，ID32 C
4h快速鉴定试条
Ref.32700，rapid ID32 E Ref.32300，rapid ID32 A Ref.32600，rapid ID32 Strep
粪肠球菌
7143711 （98.7%）
猪链球菌的API鉴定结果
TRE（海藻糖）、RAF（棉子糖）等几个的试验与API 菌种库有些不符，但 都属于SS2型或1型，数值分类
相对于双歧分类的优点
ATCC43765
HA9801
ATCC35246
32210 化脓链球菌
粪肠球菌
编码 4641427（92%） 4651427(80%) 0461607(99.9%)0161415(99.9%)7143711（98.7%）
需氧和兼性厌氧性球菌鉴定—链球菌属的鉴定(微生物检验课件)
二、致病性和免疫性
（一）致病物质 1、链球菌溶血素 （1）链球菌溶血素O(SLO):SLO抗体 抗链球菌溶血素O试验：协助诊断风湿热
（>1:400) （2）链球菌溶血素S (SLS)：无抗原性。
2、致热外毒素（猩红热毒素/红疹毒素） 3、M蛋白 4、透明质酸酶 5、链激酶 6、链道酶
（二）所致疾病 主要由A群链球菌引起。 1、化脓性感染：由皮肤伤口侵入，经呼吸道
第二节 链球菌属
(Streptococcus)
一、生 物 学 特 性
（一）形态与染色 G+，球形或椭圆 形，呈链状排列， 无鞭毛、无芽胞， 有荚膜。
一、生 物 学 特 性
（二）培养特性
条件：营养要求较高，多数为兼性厌氧 菌，少数专性厌氧,5%CO2。
液体：沉淀生长（絮状或颗粒状）。 血液琼脂平板：
3 、按对氧的需求分型：需氧菌、厌氧菌、 兼性厌氧菌。
Байду номын сангаас
（六）抵抗力 不强，60℃30min杀死，对多种消毒剂敏感。 乙链：对青霉素、四环素、红霉素等敏感。 肺炎链球菌：PRSP和多重耐药。 其他群的细菌：对青霉素耐药频度增加。 （七）变异性 肺炎链球菌荚膜变异：有荚膜的光滑（S）型菌 有毒力，失去荚膜的粗糙（R）型毒力减低或消 失。
链球菌在血平板上菌落特征
丙链
甲链
乙链
（三）生化反应
活泼 分解多种糖类、蛋白质、氨基酸。
菊糖（-）
胆汁溶菌试验（-）
（区别甲链与肺链）
optochin敏感试验（-）
触酶（-）（区别于葡萄球菌属）
（四）抗原构造 １、多糖抗原（C抗原）：群特异性。 ２、蛋白抗原（M、T、R、S）
型特异性，M蛋白抗原是与致病有关的主 要物质，引起超敏反应。
链球菌属微生物临床检验
链球菌属微生物临床检验链球菌属(Streptococcus)原包括40个种别，但有的种后来被排除，按16S rRNA分类，现有6个群30个种和两个单独的种。
链球菌DNA中G+C含量为34m01％～46m01％。
链球菌的检验主要包括两方面，卫生微生物学和临床微生物学。
卫生微生物学重点检测食品微生物、环境微生物、水质微生物及流行病学检测；临床微生物学重点检测脓汁、咽拭、炎性分泌物、脑脊液、血液等标本。
现将检验方法汇总如下。
一标本的采集和处理1.疫情标本患者咽拭子涂抹标本，采取后放入无菌中试管或运送培养基中送检。
同时涂抹可能污染的环境和衣物，同上方法送检。
2.食物标本①大包装乳制品：以灭菌刀、勺取样，从不同部位采取代表性样品，放入灭菌器内送检。
②小包装乳制品：采取原包装样品送检。
3.临床样品采取脓汁、咽拭子、炎性分泌物、脑脊液、血液等标本送检。
二增菌与分离培养1.疫情标本和临床标本将采取的标本直接分离于血琼脂平板上，37℃培养24h。
同时增菌于肉浸液葡萄糖肉汤中，或匹克增菌液中，放10％二氧化碳环境，37℃培养24 h 或放入厌氧环境中进行增菌培养。
同上分离培养和观察结果。
血液标本，直接放入50ml肉浸液葡萄糖增菌液或匹克增菌液中，同上培养和分离。
2.乳制品①炼乳将罐外洗净，罐盖用75％酒精消毒，再用火焰消毒，然后用灭菌开罐器打开，样品混匀取出10g，放入装有玻璃珠的广口瓶中，加入肉浸液肉汤90ml或匹克增菌液肉汤，37℃培养24h。
②奶油将奶油样品置水浴中加热，溶化后以灭菌吸管吸出10ml加入灭菌水中，混匀，同上培养和分离。
③奶粉以无菌手续取样10g，放入上述培养基中，培养和分离。
④奶酪以灭菌刀削去蜡皮，然后切开，切取表层和深处共10g，放入上述培养基中。
培养和分离。
三鉴定技术1.挑选可疑菌落溶血性链球菌：从血琼脂平板上挑选灰白、圆形、突起、小米粒大小、周围有透明溶血环的菌落，分纯于血琼脂平板上，37℃培养，观察结果。
链球菌属的特性及其检验
链球菌属的特性及其检验目的：总结链球菌属的特性及其检验技术，结合临床经验，进一步提高细菌分离及鉴定水平。
方法：采用显微镜检查、分离培养、细菌生化反应、血清学试验等进行分离和鉴定。
结果：根据菌体形态、菌落形态、溶血特征将链球菌分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌、丙型链球菌；按链球菌细胞壁中多糖抗原不同，可分成A、B、C、D等20个群。
结论：链球菌是临床常见的致病菌，正确掌握检验方法，科学地分离和鉴定，有助于临床做出合理的诊治决策。
标签：链球菌属；特性；分离培养；生化反应；血清学试验链球菌属细菌广泛分布于自然界、人及动物肠道和鼻咽部，大多数不致病。
其中A、B群及肺炎链球菌是本属的3种重要致病菌，可引起各种化脓性炎症、医源性伤口感染、新生儿败血症、细菌性心内膜炎以及风湿热、肾小球肾炎等超敏反应性疾病[1]。
另外草绿色链球菌为条件致病菌。
因此，本属细菌的鉴定、药敏试验是微生物检验工作的重要内容之一，临床上常见的标本包括咽拭子、痰液、分泌物、穿刺液、尿液、脑脊液和血液。
现将本属的特性及其检验总结如下：1 资料与方法1.1一般资料本院微生物实验室2009年共接收咽拭子样本299例、痰液样本1 319例、分泌物817例、穿刺液239例、尿液704例、脑脊液54例和血液培养815例，合计4 247例。
其中门诊患者样本239例，住院患者样本4 008例。
细菌培养阳性结果1 475例，阳性率为34.73%。
其中链球菌属阳性83例，占5.63%。
1.2 检验方法根据不同疾病采集不同标本。
1.2.1 显微镜检查咽拭子、痰液、脓液、穿刺液、脑脊液等标本可直接涂片革兰染色，镜检见链状排列革兰阳性球菌可初步报告，及时供临床参考。
1.2.2 分离培养血液标本需要先增菌培养，脓液、咽拭可直接接种血琼脂平板。
链球菌属初代分离需5％CO2，35℃24 h观察菌落性状。
菌落太小可延长观察时间。
1.2.3 鉴定根据菌体形态、菌落形态、溶血特征以及下列鉴定试验进行。
链球菌属实验报告
一、实验目的1. 掌握链球菌属的分离与纯化方法。
2. 了解链球菌属的形态特征和生化特性。
3. 学会运用生化试验对链球菌属进行鉴定。
二、实验原理链球菌属是一类革兰氏阳性球菌，呈链状排列，无芽胞，无鞭毛。
根据溶血能力，链球菌属可分为甲型、乙型和丙型。
甲型链球菌为条件致病菌，乙型链球菌致病性最强，丙型链球菌一般不致病。
链球菌属的分离与鉴定主要通过以下步骤进行：1. 分离与纯化：将待检标本接种于血琼脂平板，进行分离培养，挑取单个菌落进行纯化。
2. 形态观察：观察菌落的形态、颜色、大小等特征。
3. 生化试验：进行触酶试验、PYR试验、杆菌肽敏感试验、V-P试验、CAMP试验等，以鉴定链球菌属。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠2. 实验试剂：血琼脂平板、肉汤、无菌生理盐水、无菌接种环、无菌试管、无菌棉签、显微镜、酒精灯、触酶试剂、PYR试剂、杆菌肽试剂、V-P试剂、CAMP试剂等。
四、实验方法1. 分离与纯化（1）将待检标本接种于血琼脂平板，37℃培养24小时。
（2）挑取单个菌落，接种于新的血琼脂平板，37℃培养24小时，观察菌落特征。
（3）重复上述步骤，直至获得纯化菌落。
2. 形态观察（1）将纯化菌落涂片，革兰氏染色。
（2）在显微镜下观察菌体的形态、大小、排列等特征。
3. 生化试验（1）触酶试验：将纯化菌落接种于触酶试剂中，观察是否产生气泡。
（2）PYR试验：将纯化菌落接种于PYR试剂中，观察是否产生红色沉淀。
（3）杆菌肽敏感试验：将纯化菌落接种于杆菌肽试剂中，观察是否产生抑菌圈。
（4）V-P试验：将纯化菌落接种于V-P试剂中，观察是否产生红色沉淀。
（5）CAMP试验：将纯化菌落接种于CAMP试剂中，观察是否出现协同溶血现象。
五、实验结果1. 分离与纯化：成功分离出纯化菌落，菌落特征为灰白色、光滑、圆形、边缘整齐。
2. 形态观察：菌体呈球形或椭圆形，直径0.5～1.0μm，革兰氏染色阳性，呈链状排列。
3. 生化试验（1）触酶试验：产生气泡。
乳酸链球菌素检测标准
乳酸链球菌素检测标准
乳酸链球菌素检测标准是一种用于评估产品中乳酸链球菌素含量的标准方法。
乳酸链球菌素是一种由乳酸链球菌（Streptococcus lactis）产生的一种蛋白质，具有抗菌和抗病毒作用，被广泛用于食品、保健品和医疗领域。
乳酸链球菌素的检测标准通常包括以下几个方面：
首先是检测方法的选择。
目前常用的检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、高效液相色谱法（HPLC）和质谱法（MS）。
不同的方法具有不同的
灵敏度、准确度和操作难度，因此在选择检测方法时需要根据具体的需要进行选择。
其次是样品的制备和处理。
样品的制备和处理对检测结果的准确性和可靠性有
重要影响。
通常情况下，样品需要经过提取、稀释和净化等步骤，以保证样品中乳酸链球菌素的含量可以被准确检测。
再者是标准品的选择和制备。
标准品是用于建立检测标准曲线和确定样品中乳
酸链球菌素含量的参照物。
选择合适的标准品和准确制备标准曲线是保证检测结果准确性的关键。
最后是数据的处理和结果的解读。
在完成检测后，需要对检测数据进行处理和
分析，得出样品中乳酸链球菌素的含量。
此外，还需要根据相关的标准和法规对结果进行解读，判断样品的质量和安全性。
总的来说，乳酸链球菌素检测标准是确保产品质量和安全的重要手段。
通过严
格遵守检测标准和方法，可以有效评估产品中乳酸链球菌素的含量，保证产品的质量和安全性，促进行业的健康发展。
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编写：常晓林2011-09-0
9 审核：文佳琼2011-11-01 批准：牛华2011-11-01
1．概述
链球菌属是一群触酶试验阴性、呈链状排列的革兰阳性球菌。
该菌属种类繁多，目前临床上仍沿用Lancefield血清学方法进行分群（A、B、C、D、F、G等18个群），或根据溶血现象（β溶血、α溶血或草绿色溶血、γ溶血或不溶血）进行分类。
化脓性链球菌是临床上最重要的链球菌，属A群、β溶血的链球菌。
2. 标本类型
血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。
3. 鉴定
3.1 形态与染色革兰阳性球菌，固体培养基上呈单个或成双排列，较少呈链状排列，肉汤培养基中呈长链状排列，肺炎链球菌呈矛头状，成双或链状排列。
3.2 培养特性在血琼脂平板上菌落可出现三种溶血反应：α溶血周围有灰绿色的狭窄溶血环；β溶血周围有明显较大的完全透明环；γ溶血（不溶血性）无异常变化。
肺炎链球菌菌落中央呈脐窝状、表面光滑、灰色、扁平，周围有草绿色α溶血环。
3.3 生化反应触酶试验阴性，对各种碳水化合物的分解因菌种而异，链球菌不被胆汁溶解。
肺炎链球菌胆盐溶菌试验阳性，Optochin试验敏感（抑菌环＞14mm）。
3.4 鉴别要点
3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，单个、成双或链状排列，菌落较小，可出现β溶血、α溶血或不溶血，触酶试验阴性。
3.4.2 根据溶血及关键性试验，对链球菌进行推测性鉴定分群。
A群链球菌（化脓性链球菌）：β溶血，杆菌肽敏感。
B群链球菌（无乳链球菌）：β溶血，CAMP试验阳性，马尿酸钠试验阳性。
C群链球菌（似马链球菌、兽疫链球菌和马链球菌等）：马尿酸钠、6.5%氯化钠耐盐试验均为阴性，血清学分型、杆菌肽耐药（抑菌试验阴性）。
D群肠球菌（粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌等）：胆汁七叶苷、6.5%氯化钠耐盐试验均为阳性，45℃生长。
现归属于肠球菌属。
C、F及G群链球菌的鉴定常需用血清学方法。
非β溶血链球菌的鉴别见表1。
表1 非β溶血链球菌的鉴别
菌名Optochin试验胆汁溶菌试验胆汁七叶苷试验
肺炎链球菌+ + -
牛链球菌- - +
其他草绿色链球菌群- - -
3.5 操作步骤
3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，挑取可疑菌落，涂片染色镜检。
3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。
3.5.3 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。
4. 药敏
参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。
5. 质量控制
参见《质量管理程序》。
6. 检验结果解释与分析
6.1 草绿色链球菌是人体正常菌群的一部分，通常是不致病的，只有当草绿色链球菌出现在血液等无菌体液中时，鉴定才有意义。
6.2如果检测出链球菌对青霉素敏感，同时该菌被认为对氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、阿莫西林、头孢克洛、头孢唑林、头孢地尼、头孢布坦、头孢曲松、头孢吡肟、头孢唑肟、头孢噻肟等头孢类敏感，则不必进行上述抗生素的药敏试验。
如果检测出肺炎链球菌苯唑西林抑菌圈≤19mm，应当检测青霉素、头孢噻肟和头孢曲松的MIC，因为可能发生青霉素耐药或中介现象。
如果检测出链球菌对红霉素敏感或耐药，则提示该菌对克拉霉素、阿奇霉素、地红霉素敏感或耐药。
近年来青霉素耐药肺炎链球菌（PRSP）及多重耐药（MDRSP）菌株的增加，给临床治疗带来一定的困难。
7. 临床意义
化脓性链球菌（A群链球菌）是引起化脓性感染的主要病原菌，致病力最强，可引起痈、蜂窝织炎、急性咽炎、丹毒、脓疱疮、猩红热、医源性伤口感染和产后感染等。
此外其感染后也可发生急、慢性风湿热和急性肾小球肾炎等严重变态反应性并发症。
无乳链球菌（B群）正常寄居于妇女阴道和人体肠道，带菌率可达30%左右，此菌可引起新生儿感染。
肺炎链球菌存在于正常人群的口腔、鼻咽部，属正常菌群，可引起大叶性肺炎或支气管炎。
草绿色链球菌是人体上呼吸道正常菌群，通常不致病。
如果在血液内或无菌体液中检出草绿色链球菌，有临床意义。
8. 鉴定流程
编写：常晓林2011-09-0
9 审核：文佳琼2011-11-01 批准：牛华2011-11-01
参考文献
[1] 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-GL23:2008医学实验室质量和能力认可准则在临床微生物学检验领域的指南.2008
[2] 周庭银编著.临床微生物学诊断与图解.第二版.上海：上海科学技术出版社，2007
[3] 叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.第3版.南京：东南大学出版社，2006
[4] Murray PR. Manual of Cinical Microbilogy. 9th ed.Washington:ASM Press,2007
[5] ISO 15189：2007医学实验室-质量和能力认可准则. 2007。