细菌培养采样方法
空气培养的采样方法
医院常规空气细菌培养（自然沉降法）采样方法一、采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。
二、采样高度与地面垂直高度80-150厘米。
三、布点方法1.面积W 30 m2设一条对角线取三点，即中间一点, 两端各距墙1米处各取一点（图1）2.室内面积＞30m2设两条对角线，xx，西，xx, xx，中取五点，其中xx，西，xx, xx距墙均1米（图2）圏2+四、采样方法用9厘米直径普通xx平皿，打开盖后面朝下斜扣到底盘，在采样点准确暴露5分钟后，送检培养。
五、结果分析I类区域：＜10 cfu/m3II类区域：＜200 cfu/m3III类区域：＜500 cfu/m3 六、附录I 类区域：层流洁净手术室、层流洁净病房（参照洁净室空气培养 方法与标准）。
H 类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔 离室、供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房。
皿类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室供 应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间。
W 类区域：传染病XX 病房。
洁净室空气细菌培养监测布点与标准一、局部百级，周围千级：共放13个培养皿，其中手术区域5点, 周边区8点。
采样布置点示意图：二、局部千级，周围万级：共放 9个培养皿，其中手术区域3点,周边区6点。
采样布置点示意图:三、局部万级，周围十万级：共放7个培养皿，其中手术区域3点, 周边区域4点。
采样布置点示意图：四、三十万级：面积＞30m2布放4点，面积w 30 m2布放2点。
五、要求：1.送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测;如送风口分散布置时，全室统一检测，测点可均布，不应布置在送风门正下方；2.采样点可布置在地面上或不高于地面0.8m的任意高度上，手术区域放置在四角的平皿应离手术区边缘0.12m,培养皿放置30分钟；3.采样后的培养皿，应立即置于37度条件下培养48小时；4.然后计数生长的菌落数，菌落数的平均值均四舍五入进位到小数点后1位。
空气培养采集操作1
室内面积＞30 ㎡，设两条对角线， 东、西、南、北、 中取五点，西、南、 北距离墙均1米。 （图2）
5.采样高度:距地面0.8-1.5m 6.采样方法：采样时，将平板盖打开，暴露 5min或者10min，盖好平板。在平皿上注明 采自的科室或者科室的房间，用胶布把平 皿和平皿盖子固定好，以免在送检途中平 皿和平皿盖子分离而造成污染。
（3）采样后的培养皿，应立即置于37度条件 下的培养48h。 （4）然后计数生长的菌落数，菌落数的平均 值均四舍五入进位到小数点后1位。
（5）放置培养皿的示意图如下： 盖面朝下斜扣到底盘A上面
盖面
底盘
6.洁净室空气细菌菌落总数标准
谢谢大家！
4.三十万级：面积≥30㎡布放4点，面积≤30 ㎡布放2点。
5.要求
（1）送风口集中布置时，应对手术区和周边 区分别检测，如送风口分散布置时，全室 统一监测，测点可均布，不应布置在送风 门正下方。 （2）采样点可布置在地面上或不高于地面 0.8m的任意高度上，手术区域放置在四角 的平皿应高手术区边缘0.12m，培养皿放置 30min。
区域分类说明： Ⅰ类区域：层流洁净手术室，层流洁净病房。 Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、早 产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌 区、烧伤病房、重症监护病房。 Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注射 室、换药室、治疗室供应室清洁区、急诊 室、化验室、各类普通病房和房间。
二、洁净室空气细菌培养监测布点 与标准
1.局部百级，周围千级： 共放13个培养皿，其中手术区域5点，周边区8 点。采样布置点示意图如下：
；
2.局部千级，周围万级： 共放9个培养皿，其中手术区域3点，周边区6 点，采样布置点示意图如下：
3.局部万级，周围十万级： 共放7个培养皿，其中手术区域3点，周边区 域4点，采样布置点示意图如下：
院感细菌培养
院感细菌培养院感细菌培养是一种常见的实验技术，用于检测医疗机构内的细菌感染情况。
本文将详细介绍院感细菌培养的标准格式，包括实验步骤、所需材料、操作注意事项以及结果分析等内容。
一、实验步骤1. 准备工作：清洗培养皿、试管和培养基，并消毒实验台面和操作工具。
2. 样本采集：从医疗机构内的患者或者环境中采集样本，如血液、尿液、呼吸道分泌物等。
3. 样本处理：将采集到的样本进行初步处理，如离心、过滤或者稀释等，以获得合适的样本浓度。
4. 培养基接种：将处理后的样本分别接种在适当的培养基上，如血琼脂培养基、巴氏培养基等。
5. 培养条件：将接种后的培养基置于适当的培养箱中，控制温度、湿度和氧气含量等条件，促进细菌的生长。
6. 培养时间：根据不同的细菌种类，培养时间普通为24-48小时，有些特殊菌种可能需要更长期。
7. 细菌分离：观察培养基上的菌落形态，选择单一的菌落进行分离，避免混杂菌的干扰。
8. 细菌鉴定：通过形态学、生理生化特性和份子生物学方法对分离得到的菌株进行鉴定，确定其种属和品系。
二、所需材料1. 培养皿：用于接种和培养细菌的平板，常见的有Petri培养皿和巴氏培养皿。
2. 试管：用于样本的采集和处理，也可用于培养基的制备。
3. 培养基：提供细菌生长所需的营养物质，常见的有血琼脂培养基、巴氏培养基等。
4. 培养箱：提供适当的温度、湿度和氧气含量等条件，促进细菌的生长。
5. 显微镜：用于观察细菌的形态特征，配合染色技术进行细菌鉴定。
三、操作注意事项1. 严格遵守无菌操作规范，避免外源菌的污染。
2. 样本采集时，使用无菌采样器具，并确保采集到的样本能够代表实际情况。
3. 培养基的制备要准确，严格按照配方和操作步骤进行。
4. 培养箱的温度、湿度和氧气含量等条件要根据细菌种类进行调整，以促进细菌的生长。
5. 在培养过程中，定期观察培养基上的菌落形态，并及时记录和分离单一菌落。
6. 细菌鉴定时，应结合形态学、生理生化特性和份子生物学方法进行，以确保鉴定结果的准确性。
手指培养细菌实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握手指皮肤细菌的采集和培养方法。
2. 了解手指皮肤细菌的种类和数量。
3. 分析洗手对手指皮肤细菌数量的影响。
二、实验原理细菌培养是微生物学的基本实验技术之一，通过培养细菌，可以观察其生长状况，分析其种类和数量。
本实验采用手指皮肤采集法，采集手指皮肤表面的细菌，并在培养基上培养，观察其生长情况。
三、实验材料与仪器1. 材料：手指、无菌棉签、肉汤琼脂培养基、酒精、生理盐水、培养皿、培养箱等。
2. 仪器：显微镜、酒精灯、接种环、镊子、剪刀等。
四、实验步骤1. 采集手指皮肤样本：用无菌棉签在手指皮肤上轻轻滚动，采集样本。
2. 制备培养基：将肉汤琼脂培养基加热融化，冷却至45℃左右，倒入培养皿中，待凝固。
3. 接种：将采集的手指皮肤样本涂抹在培养基上，用接种环轻轻涂抹，使细菌均匀分布在培养基表面。
4. 培养与观察：将接种好的培养皿放入培养箱中，在适宜的温度下培养。
观察细菌的生长情况，记录菌落特征。
5. 分析与讨论：根据菌落特征，分析手指皮肤细菌的种类和数量。
比较洗手前后的细菌数量，分析洗手对手指皮肤细菌数量的影响。
五、实验结果与分析1. 菌落特征：在培养基上观察到不同形状、大小、颜色的菌落，部分菌落呈现透明、半透明或乳白色。
2. 细菌种类：根据菌落特征，初步判断手指皮肤细菌的种类，如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌等。
3. 细菌数量：洗手前手指皮肤细菌数量较多，洗手后手指皮肤细菌数量明显减少。
4. 洗手对细菌数量的影响：洗手可以显著减少手指皮肤细菌数量，说明洗手是预防细菌感染的重要措施。
六、实验结论1. 本实验成功采集了手指皮肤细菌样本，并在培养基上进行了培养。
2. 手指皮肤细菌种类繁多，主要包括金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、表皮葡萄球菌等。
3. 洗手可以显著减少手指皮肤细菌数量，有效预防细菌感染。
七、实验讨论1. 实验过程中，应注意无菌操作，避免污染。
2. 培养基的制备和接种是实验成功的关键环节，需严格控制操作步骤。
细菌培养标本采集及注意事项
① 皮肤与皮下组织，包括手术切口、褥疮溃疡、新生儿
脐炎、婴儿脓疮病。 ②用无菌生理盐水或75%的酒精擦去病灶表面渗液；
③用无菌棉拭子抹去及较深部的脓液分泌物或组织送检；
④采集褥疮溃疡标本时应采集褥疮边缘的脓性分泌物，拭 子放在运送培养基中立即送检。注意事项：不要采集创口表面 的渗液。
2. 伤口、脓肿、窦道、坏疽组织采集方法及注意事
项 ①闭锁性脓肿用碘酒和酒精消毒皮肤后，用灭菌注射
器穿刺抽取全部脓液送检。
②伤口处若有脓及渗出物要用无菌棉签深入各种窦道 中擦拭，用小刀刮取，穿刺抽吸或手术切除获得深处伤口 标本； ③当创伤出血时，敷有药物在 2h以内及烧伤在 12h内 均不应采集标本，此时获得阳性结果机会甚少。
3.烧伤创面 ①烧伤创面需要脓性分泌物，焦痂迅速分离变棕
培养。
新生儿可疑菌血症，应同时做尿液、脑脊液培养。
3 、采血时机：尽量在使用抗菌素之
前采血、尽量在寒战和发热初起时采血、
如患者已经使用抗菌药物进行治疗，应在
下次用药之前采血。
4、血液标本的采集方法： a、75%酒精清洁局部皮肤30s以上。 b、待皮肤干后，再用1%-2.%碘酊作用30s或 10%碘伏作用90s以上，从穿刺点中心部位向外画 圈消毒，范围不应小于 5 ㎝（直径），且不能用 手指触摸消毒后的皮肤。
肛门4-5cm（幼儿2-3cm）处，轻轻旋转擦取直
肠表面黏液后取出，置运送培养基中送检。
注意事项
①标本要采集新鲜的，陈旧标本影响阳 性检出率； ②切忌粪尿混合； ③标本在病理早期或治疗前采集； ④一般认为用抗菌药三天后，标本培 养病原菌阴性。 ⑤采集标本时忌用吸水性物品采集或 送检。（如棉签、或尿不湿、卫生纸、等。）
的能力时形成菌血症。
如何做空气培养
如何做空气培养1 空气细菌培养的采样方法检测空气细菌总数的细菌培养法平板暴露法。
此法简便,目前大部分医疗单位采用。
在消毒处理后,操作前进行,室内面积≤30m2对角线内、中、外处设3点,内外点布位距墙壁1m处,室内面积＞30m2设4角及中央5点,4角的布点部位距墙壁1m 处。
基本原理就是:空气中细菌等微生物可随尘粒一起下降,在室内各采样点处放好营养琼脂平板,采样高度距地面0、8～1、5m,采样时,将平板盖打开,暴露5min或10min,盖好平板。
将平板置于37℃恒温箱培养48h计算菌落数。
2 细菌数的计算方法细菌总数(cfu/m3=4500N/A ×T)式中A=平板面积(cm2) T——平板暴露时间(min) N——平均菌落数(cfu)这个计算公式就是根据在面积100cm3的培养基表面,5min内能落下的细菌相当于10L空气中含的细菌数而推算出来的。
3 空气消毒效果与污染状况的评价空气消毒效果的比较应在消毒前后取样进行培养,如消毒后空气中细菌数明显下降,说明消毒效果好,下面规定适用GB15982——1995规定:Ⅰ类区域细菌总数≤10cfu/m3,并且未检出致病菌为消毒合格;Ⅱ类区域细菌总数≤200cfu/m3并且未检出致病菌为消毒合格;Ⅲ类区域细菌总数≤500cfu/m3并且未检出致病菌为消毒合格。
Ⅰ类环境包括层流洁净手术室与层流洁净病房只能采用层流通风才能空气中的微生物减到此标准以下。
Ⅱ类环境包括普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室洁净区、烧伤病房、重症监护病房、采用循环风紫外线空气消毒器或静电吸附式空气消毒器,这类均为有人房间,必须采用对人无毒无害且可连续消毒才能使空气中的微生物减到此标准以下。
Ⅲ类环境包括儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房室与房间,采用紫外线消毒,化学消毒剂熏蒸或喷雾消毒。
空气中细菌监测在空气消毒后、操作之前,用空气采样器或空气沉降法采样。
医院常规空气细菌培养
7、操作步骤与质量标
1)着装整洁，帽子遮住全部头发，口罩遮盖口鼻；
(2)备齐用物：治疗盘或篮、酒精灯、火柴、 直径9cm普通营养琼脂平皿（根据需要备足量，分 别标记1,2,3,4,5；或东、西、南、北、中；或东 南、西南、东北、西北、中）、灭菌棉拭子、试管、 试管架、笔、纪录单、计时表、湿度、温度计。
(6)点燃酒精灯； (7）取一支灭菌棉拭子，取标记“物体表面” 的试管，打开试管塞； (8)火焰消毒试管口、试管塞，浸取灭菌采样液； (9）火焰消毒试管口、试管塞，盖严试管； （10）用棉拭子在规格板空心处
（11)横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子； （12）连续采样4个规格板面积； （13）打开试管塞，火焰消毒试管口、试管塞； （14）用无菌剪剪去棉拭子手接触部分，将棉 拭子放人装l0ml采样液的试管中； （15)对于曲线物体、小型物体等则（门把手等） 采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样； （16）纪录采样面积、时间、物体名称、采样人。
2采样面积及方法被检人五指并拢将浸有无菌生理盐水采样液的棉试子一支在双手指曲面从指根到指端来回涂擦各两次一只手涂擦面积30cm并随之转动采样棉试子剪去手接触部位将棉试子放人装有l0ml采样液的试管内送检
医院感染管理操作规范
环境卫生学标本采集操作规范
医院感染管理操作规范
急诊 班丽萍 2014-8-15
六、附录
Ⅰ类区域：层流洁净手术室、层流洁净病 房（参照洁净室空气培养方法与标准）。 Ⅱ类区域：普通手术室、产房、婴儿室、 早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无 菌区、烧伤病房、重症监护病房。 Ⅲ类区域：儿科病房、妇产科检查室、注 射室、换药室、治疗室供应室清洁区、急 诊室、化验室、各类普通病房和房间。 Ⅳ类区域：传染病科及病房。
细菌培养标本的正确采集1
细菌培养标本的正确采集方法正确的无菌采取、处理与运送是临床细菌检验成功的关键：标本采取与处理的规范化，减少污染是准确、及时地向临床提供重要的临床感染信息的基础;反之，结果毫无意义1.血培养：细菌通常在畏寒、寒战和发热前1小时入血，此时为采集血培养标本进行病原菌培养的最佳时机。
应在使用抗菌药物之前，及早采集血培养标本若患者已行抗菌药物治疗，则在下一次抗菌药物应用前采血培养推荐同时或短时间间隔（30~60分钟）从不同部位（如双臂）采集2～3套血培养标本，即“四瓶双侧”，如难以达到，至少做到“双侧双瓶。
婴幼儿患者：应在短时间内收集2～3瓶（不同部位）血培养。
由于儿童患者厌氧菌感染少见，除特殊诊断外，推荐仅使用需氧瓶。
成年患者：推荐的采血量为20--30ml, 每套不少于10ml，每瓶不少于5ml。
婴幼儿患者推荐的采血量应少于患儿总血容量的1%，每瓶不少于2ml。
注：血培养瓶在接种前、接种后均不得冷藏或冷冻，否则会导致某些病原微生物死亡。
采血后应该立即送检。
如不能立即送检，需室温保存，切勿冷藏。
血培养延迟送检时间最长不能超过2小时。
2. 痰培养采集标本的最佳时机应在使用抗菌药物之前宜采集清晨第二口痰液。
对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2～3天。
不建议24 h内多次采样送检，除非痰液外观性状出现改变。
怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检。
无痰或痰量极少者：可用3％～5％氯化钠溶液5 ml雾化吸人约5 min后留取痰液，嘱咐患者留取前摘去牙托，清洁口腔，如刷牙后反复用生理盐水漱口；深吸气后用力自气管深部咳出痰液，置无菌容器内。
3.尿液培养：为抗菌药物使用之前的清晨第一次尿液清洁中段尿。
女性：采样前用肥皂水或0.1％的高锰酸钾溶液等冲洗外阴，用手指分开阴唇，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿10--20 ml于无菌容器内。
男性：采样前用肥皂水或0.05％--0.1％的聚维酮碘(碘伏)溶液等消毒液清洗尿道口，擦于后上翻包皮，弃其前段尿，不终止排尿，留取中段尿10--20 ml 于无菌容器内。
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供应室工作环境监测
各类环境空气、物体表面、医务人员手细菌菌落总数卫生学标准如下：
环境类别 范围 标准
空气 （cfu/m3） 物体表面（cfu/m3） 医务人员
手
（cfu/m2）
Ⅰ类 层流洁净手术室，层流洁净病房 ≤10 ≤5 ≤5
Ⅱ类 普通手术室，产房，婴儿室，早产儿室，普通保护性隔离室，供应室无菌区，烧伤病房，人流室、重症监护病房、 ≤200 ≤5 ≤5
Ⅲ类 儿科病房，妇产科检查室，注射室，换药室，治疗室，供应室清洁区，急诊抢救室，化验室，各类普通病房 ≤500 ≤10 ≤10
Ⅳ类 传染科及病房，供应室污染区 ≤2500 ≤15 ≤15
消毒液的采样及检查方法
采样方法：用无菌吸管吸取使用中的消毒液1ML，置于备好的试管内及时送检，送检
时间不超过4时，必要时试管中加中和剂。
采样前准备：洗手，手套，口罩，无菌吸管，试管，酒精灯，打火机，无菌剪刀
浸泡使用的消毒液细菌培养：用于灭菌的消毒液没有检出任何微生物为合格；用
于消毒物品的消毒液其染菌量﹤100cfu/ml.未检出致病菌或细菌生长均为合格;
空气采样及检查方法
检查原则：每个月一次，空气消毒结束后进行，一般不超过消毒后4小时，采样后必
须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过4h。未检出致病菌为合格，不
得检出乙型溶血性链球菌，金黄色葡萄球菌，沙门氏菌等其它致病菌，不得超过规定
区域所执行的标准参数；
空气采样及检查方法：
采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样；
采祥高度：与地面垂直高度80－150cm；
布点方法?：室内面积≤30M2，设一条对角线上取3点，即中心一点、两端各距墙1m
处各取一点;室内面积>30m2，设东、西、南、北、中 5点，其中东、西、南、北点均
距墙1m，注意采样时不走回头路，不得逆行；
采样方法：用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min后送检培养。
采样前准备：洗手，戴口罩，培养皿（看采样面积大小准备）；
物体表面采样及检查方法
采样时间：选择消毒处理后4小时内进行采样；
采样面积：被采表面<100cm2，取全部表面；被采表面≥100cm2,取100cm2；
采样方法：用5×5cm2的标准灭菌规格板；放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水
平样液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次；并随之转动棉拭子。连续采
样1-4个规格板面积； 剪去手接触部分，将棉拭子放入装10ml采样液的试管中送检。
不规则样物品如门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。
采样前准备：试管，酒精灯，无菌生理盐水，棉拭子，打火机，无菌剪刀，手套，口
罩，无菌规格板
医护人员手采样及检查方法
采样时间：在接触病人、从事医疗活动前进行采样。
采样面积及方法?：被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉试子一支在双手
指曲面从指根到指端来回涂擦各两次（一只手涂擦面积30cm2〕，并随之转动采样棉
试子，剪去手接触部位； 将棉试子放入装有10ml采样液的试管内这位。采样面积按
平方厘米（cm2）计算。
采样前准备：试管，酒精灯，无菌生理盐水，棉拭子，打火机，无菌剪刀，手套，口
罩
灭菌后无菌物品采样及检查方法
在无菌操作下按物体表面采样方法采样，放入肉汤试管中培养；
将嗜热脂脉杆菌片放于用专用毛巾制成的测试包中，打包成规格为23*23*15大小的标
准测试包中，放于排汽口上方，经过一个灭菌周期后，在无菌操作下取出嗜热脂肪杆
菌片放于培养皿中，经过48小时56℃培养箱培养后观察结果。
物品准备：培养皿，二把无齿镊