细胞培养技术实用篇
负染色操作步骤-概述说明以及解释
负染色操作步骤-概述说明以及解释1. 引言概述部分的内容可以按如下方式编写：1.1 概述负染色是一种常用的细胞和组织样品处理技术，它常被应用于生物学和医学研究中，用于观察细胞和组织内部的结构和特征。
相比于传统的正染色方法，负染色操作具有一些独特的优势和特点。
在负染色过程中，样本被浸泡在一种特定的染料溶液中，这种染料溶液往往是一种与样品的成分不相溶的物质。
负染色的关键在于利用染料的物理和化学性质，使其与样品发生作用，从而使样品的细节和特征得以显示。
负染色的操作步骤相对简单，但需要一定的技巧和经验。
本文将详细介绍负染色的操作步骤要点，旨在帮助读者快速掌握负染色技术并正确应用于实验中。
负染色的具体步骤将在接下来的章节中进行介绍，主要包括：样品制备、染料选择、染色操作、观察和分析等环节。
通过正确的操作步骤，可以获得清晰、可靠的负染色结果，从而进一步推进相关研究领域的发展。
总之，负染色作为一种常用的细胞和组织样品处理技术，具有独特的优势和特点。
本文将深入介绍负染色的操作步骤要点，希望能够为读者提供一份实用的参考，帮助其在实验中正确应用负染色技术。
文章结构部分的内容应该是关于整篇文章的组织结构和章节安排的介绍。
可以按照以下方式编写：文章结构：本文将按照以下结构进行叙述：1. 引言1.1 概述1.2 文章结构1.3 目的2. 正文2.1 负染色操作步骤要点12.2 负染色操作步骤要点23. 结论3.1 总结3.2 展望在引言部分，我们将简要说明本文的主题和目的，以及为什么负染色操作步骤的了解对于某些特定应用领域的重要性。
接下来的正文部分将分为两个要点，分别介绍负染色操作的具体步骤，包括所需材料、实验条件等重要信息。
通过对每个步骤要点的详细描述，读者将能够理解负染色操作的基本原理和实施方法。
最后，在结论部分，我们将对整篇文章进行总结，回顾负染色操作的关键步骤和要点，并展望未来在该领域的进一步研究和应用方向。
通过以上的文章结构安排，读者将能够清晰地了解整篇文章的内容组织和章节间的逻辑关系，从而更好地理解和掌握负染色操作步骤的相关知识。
皮肤组胚实验报告(3篇)
第1篇实验名称：皮肤组胚实验实验日期：2023年X月X日实验目的：1. 学习皮肤组胚的基本原理和方法。
2. 观察皮肤组胚的生长发育过程。
3. 掌握皮肤组胚的形态学特征。
实验材料：1. 皮肤组织块（新生儿皮肤组织）2. 生理盐水3. 组织培养箱4. CO2培养箱5. 光学显微镜6. 刀片7. 记录本实验方法：1. 将皮肤组织块用生理盐水清洗，去除多余的血污和杂质。
2. 将清洗干净的皮肤组织块用刀片切成约1mm×1mm×1mm的小块。
3. 将切好的组织块放入含有生理盐水的培养皿中，用镊子轻轻漂洗，去除多余的组织块。
4. 将漂洗干净的皮肤组织块放入培养皿中，加入适量的培养基。
5. 将培养皿放入组织培养箱中，温度控制在37℃，湿度控制在95%，CO2浓度为5%。
6. 每2天更换一次培养基，观察皮肤组胚的生长发育过程。
7. 在实验结束时，取出皮肤组胚，用生理盐水清洗，去除多余的培养基。
8. 将皮肤组胚放入装有固定液的容器中，固定24小时。
9. 将固定好的皮肤组胚进行脱水、透明、浸蜡、切片、染色等步骤。
10. 使用光学显微镜观察皮肤组胚的形态学特征。
实验结果：1. 皮肤组胚在培养箱中生长，细胞逐渐增殖，形成多层细胞结构。
2. 观察到皮肤组胚的表皮层、真皮层和皮下组织层。
3. 表皮层由角质层、颗粒层、棘层和基底层组成，细胞排列紧密，层次分明。
4. 真皮层由胶原纤维、弹性纤维和血管等组成，细胞分布稀疏。
5. 皮下组织层由脂肪细胞和纤维组织组成，细胞排列疏松。
实验讨论：1. 皮肤组胚实验是一种研究皮肤生长发育的有效方法，通过观察皮肤组胚的生长发育过程，可以了解皮肤的结构和功能。
2. 在实验过程中，观察到皮肤组胚的形态学特征与正常皮肤结构基本一致，说明实验条件适宜，皮肤组胚生长良好。
3. 通过观察皮肤组胚的生长发育过程，可以发现皮肤组织在培养过程中会出现一些异常现象，如细胞排列紊乱、层次不清等，这些现象可能与培养条件、细胞遗传因素等有关。
细胞生物学第五版教材
细胞生物学第五版教材全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：《细胞生物学第五版教材》是一本权威的教材，是细胞生物学领域的经典之作。
本教材囊括了细胞生物学的各个方面，涵盖了细胞结构、功能、代谢、增殖等各个方面的内容，深入浅出地解释了细胞的基本原理和过程。
本文将就该教材的特点、内容和意义进行详细介绍。
我们来看一下《细胞生物学第五版教材》的特点。
这本教材的特点之一就是深入浅出，通俗易懂。
作者们以简洁明了的语言，生动形象的插图和案例，将复杂的细胞生物学知识系统地呈现给读者，让读者能够轻松理解和消化。
该教材内容翔实，包括了细胞的结构、功能、代谢、增殖等方方面面的知识，涵盖了细胞生物学领域的核心知识和前沿研究。
该教材注重理论与实践相结合，既有理论知识的阐述，又有实验方法和技巧的介绍，使读者能够通过理论学习和实践操作的结合，更好地理解和掌握细胞生物学的知识。
接着，我们来分析一下《细胞生物学第五版教材》的内容。
该教材分为多个章节，从细胞的基本结构开始介绍，包括了细胞膜、细胞质、细胞器等内容，然后深入探讨了细胞的代谢过程，包括了糖代谢、脂质代谢、蛋白质合成等方面的知识。
该教材还详细介绍了细胞的增殖过程，包括了有丝分裂和减数分裂等内容。
通过逐步深入的介绍，读者可以全面了解细胞的结构和功能，加深对细胞内部生物化学过程的理解。
我们来探讨一下《细胞生物学第五版教材》的意义。
这本教材对于学生而言，是一本重要的参考资料，可以帮助他们系统地学习和掌握细胞生物学的知识，为未来的学习和研究打下坚实的基础。
对于教师而言，该教材可以作为教学的参考书，帮助他们系统地组织和讲解细胞生物学的知识，提高教学效果。
对于研究人员而言，该教材是一本不可多得的研究工具，可以帮助他们深入了解细胞的内部过程，开展更深入的研究工作。
《细胞生物学第五版教材》是一本权威的细胞生物学教材，具有深入浅出、内容翔实、注重理论与实践结合的特点。
它在细胞生物学领域有着重要的意义，对于学生、教师和研究人员来说都是一本不可多得的参考书。
肿瘤细胞免疫细胞共培养步骤
肿瘤细胞免疫细胞共培养步骤（实用版）编制人：__________________审核人：__________________审批人：__________________编制单位：__________________编制时间：____年____月____日序言下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。
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动植物细胞培养的主要区别
动植物细胞培养的主要区别第一篇:《动物细胞培养与植物细胞培养的区别》动物细胞培养与植物细胞培养的区别动植物细胞培养的主要区别1.培养基不同：植物细胞（固体培养基），动物细胞（液体培养基）动植物细胞培养的主要区别2.培养基的成分不同：动物细胞培养必须利用动物血清，植物组织培养则不需要，而需要加入植物生长激素3.产物不同：植物组织培养最后一般得到新的植物个体，而动物细胞培养因为动物体细胞一般不能表达其全能性，因此得到的是只含同一种的细胞的一个细胞系（或者叫细胞群）。
4.原理不同：植物组织培养的原理为植物细胞的全能性，动物细胞培养的原理为细胞的增殖。
动植物细胞培养的主要区别5.过程不同：植物组织培养的过程为脱分化和再分化，动物细胞培养的过程为原代培养和传代培养7.培养目的不同：植物组织培养是为了快速繁殖和获得无病毒植株，动物细胞培养是获得生物制品。
根据培养方式：贴壁细胞培养，半悬浮细胞培养，悬浮细胞培养第二篇:《动物细胞培养和植物细胞培养的比较》动物细胞培养与植物组织培养的对比第三篇:《全国林业有害生物防治知识竞赛题含答案》害预测预报工作的通知》要求，一般常灾区每0.5万一1万亩，偶灾区每亩，无灾区每2万一5万亩，应设一名测报员或病虫情调查员。
在大片林区，可适当增加测报员或病虫情调查员的调查监测面积。
（答案：1万一2万）39、《关于进一步加强森林病虫害预测预报工作的通知》要求，要以或进行病虫情调查，掌握面上的病虫害发生情况。
（答案：林班；小班）40、《关于加强林业有害生物监测预报和突发疫情信息管理的通知》（造防函81号）要求，为了加强林业有害生物监测预报和突发疫情信息报告的管理，各地要严格按照有关要求，新发生（发现）的危险性和发生严重在50公顷以上的林业有害生物必须在日内上报国家林业局。
（答案：7）二、选择题１、1999年以来，我国先后建立了个国家级森林病虫鼠害中心测报点（简称国家级中心测报点）。
（答案：D）Ａ.183；Ｂ.510；Ｃ.490；Ｄ.1000２、《国家级森林病虫害中心测报点管理办法》要求：国家级中心测报点发布的主测对象和当地主要病虫鼠害的预报准确率应为。
生物制药方向人才培养方案(精选6篇)
生物制药方向人才培养方案（精选6篇）生物制药方向人才培养方案 1一、专业与专门化方向专业名称：生物制药技术(专业代码)专门化方向：生物工程制药方向、疫苗生产方向二、入学要求与基本学制入学要求：应届初中毕业生基本学制：五年一贯制办学层次：普通专科三、培养目标本专业培养与我国社会主义现代化建设要求相适应，德、智、体、美全面发展，具有良好的职业道德和职业素养，能在生物药品生产企业从事生物药品生产、管理、贮存、营销等工作，在生物技术企业从事研发辅助工作以及在疫苗生产企业从事疫苗生产工作，具有职业生涯发展基础的复合型、创新型技术技能人才。
四、职业（岗位）面向、职业资格及继续学习专业（一）职业（岗位）面向1.主要就业岗位:生物药品生产、发酵工厂、生物制品生产等企业的菌种培育岗位、微生物发酵岗位、微生物发酵灭菌岗位、发酵液提取岗位、微生物发酵药品精制岗位、生物药品制剂岗位、疫苗生产岗位等。
2.其他就业岗位:基因工程产品岗位、细胞工程产品岗位、酶工程产品岗位、药品营销企业的生物药品营销、生物药品贮藏岗位等。
（二）职业资格应取得人力资源和社会保障部颁发的发酵工程制药工（高级）、微生物发酵工（高级）、疫苗制品工（高级）、基因工程产品工（高级）中的一种职业资格证书。
（三）继续学习专业生物制药技术、生物药物制剂技术等本科专业。
五、综合素质及职业能力（一）综合素质1．思想道德素质:（1）拥护中国共产党，热爱祖国，有科学的世界观、人生观和价值观，能遵纪守法，自觉遵守公民道德规范、职业道德、社会公德和家庭美德。
（2）吃苦耐劳、乐于奉献、诚实守信，有事业心和责任感。
2.科学文化素质:（1）具有德育、法律、数学、经济、文学等人文科学基本知识。
（2）具有一定的英语水平，具有借助词典阅读和翻译本专业外文资料的初步能力及一定的听、说、写、译基本能力。
（3）具有较好的文字和语言表达能力及常用医药应用文写作的基本能力。
（4）能熟练使用计算机操作系统进行文字编辑和数据处理，会利用计算机网络收集信息、资料，具有计算机操作基本能力。
huvec细胞鉴定方法-概述说明以及解释
huvec细胞鉴定方法-概述说明以及解释1.引言1.1 概述HUVEC（人脐静脉内皮细胞）是一种常用的细胞模型，在很多生物医学研究中被广泛应用。
正确认识和鉴定HUVEC细胞的方法对于确保实验结果的准确性和可靠性至关重要。
然而，由于其细胞特性的多样性和相似性，准确地鉴定HUVEC细胞一直是一个具有挑战性的课题。
目前，主要的HUVEC细胞鉴定方法包括形态学观察、免疫细胞化学染色和遗传学分析等。
形态学观察是最直观的方法，通过观察细胞的形态、大小、颜色等特征来初步鉴定。
然而，形态学观察仅仅是最初的鉴定步骤，无法提供确凿的证据。
免疫细胞化学染色是一种常用的鉴定方法，通过使用特异性的抗体标记HUVEC细胞所表达的特定蛋白，如血管内皮细胞相关抗原（CD31）、血管内皮细胞黏附分子（VCAM-1）等。
这种方法能够在细胞水平上确定细胞的身份，并且具有较高的特异性和敏感性。
另外，遗传学分析也是一种重要的HUVEC细胞鉴定方法。
通过检测HUVEC细胞中特定基因的表达情况或突变情况，如内皮细胞特异性基因（von Willebrand因子、血管内皮生长因子等）的表达，或特定突变基因（如朊病毒受体Eynoltin-2的突变）等，可以进一步确定细胞的身份。
综上所述，准确鉴定HUVEC细胞的方法包括形态学观察、免疫细胞化学染色和遗传学分析等多种方法的综合应用。
在进行HUVEC细胞相关研究时，应充分考虑综合运用这些方法来确保实验结果的准确性和可靠性。
未来的研究可以进一步改进和发展更加精确、高效的HUVEC细胞鉴定方法，以满足不断深入的实验需求。
1.2 文章结构文章结构部分的内容如下：文章结构部分旨在向读者介绍本篇文章的整体结构，以帮助读者更好地理解和阅读文章。
本文分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分包括概述、文章结构和目的三个方面。
在概述中，将简要介绍HUVEC细胞的重要性和研究价值。
文章结构部分将向读者展示本文的整体框架，以便读者在阅读过程中能够有条不紊地理解文章内容。
临床新技术项目年度总结(3篇)
第1篇一、项目背景随着医疗科技的飞速发展，临床新技术不断涌现，为提高医疗服务质量、保障患者健康提供了有力支持。
本年度，我院在临床新技术项目方面取得了显著成果，现将年度总结如下。
一、项目实施情况1. 项目启动本年度，我院共启动了20项临床新技术项目，涉及心内科、神经外科、骨科、妇产科等多个科室。
项目涵盖微创手术、介入治疗、康复治疗等多个领域，旨在提高诊疗水平，改善患者预后。
2. 项目实施各项目在实施过程中，严格按照项目方案执行，加强团队合作，确保项目顺利进行。
同时，我院注重人才培养，为项目组成员提供学术交流、技能培训等机会，提高团队整体实力。
3. 项目成果（1）心内科：成功开展冠状动脉介入治疗术、射频消融术等新技术，使患者治疗更加精准、微创。
（2）神经外科：引进术中磁共振成像技术，提高手术精准度，降低术后并发症。
（3）骨科：开展关节镜手术、脊柱微创手术等新技术，减轻患者痛苦，缩短康复时间。
（4）妇产科：推广无痛分娩、剖宫产术后快速康复等技术，提高孕产妇舒适度。
二、项目推广与应用1. 院内推广我院积极将新技术项目在院内进行推广，通过学术讲座、手术演示等方式，提高医护人员对新技术的认识和应用能力。
2. 区域合作我院与周边医疗机构开展合作，将新技术项目推广至基层，提高基层医疗服务水平。
3. 学术交流我院积极参加国内外学术交流活动，分享新技术项目经验，提升我院在国内外的影响力。
三、项目总结与展望1. 总结本年度，我院临床新技术项目取得了显著成果，为患者提供了更加优质、高效的医疗服务。
在项目实施过程中，我们积累了宝贵经验，为今后项目开展奠定了基础。
2. 展望（1）加强新技术项目研发，紧跟国际前沿，提高我院在临床领域的竞争力。
（2）优化项目实施流程，提高项目成功率，确保患者受益。
（3）加强人才培养，提高医护人员新技术应用能力，为患者提供更优质的医疗服务。
总之，本年度临床新技术项目取得了丰硕成果，为我院医疗服务水平提升做出了积极贡献。
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3. 取材时要细心去除组织中的血液、结缔组织、脂肪及坏 死组织等。修剪和切碎过程中，为避免组织干燥，可将其浸泡于
少量培养液中；
组织块培养法
组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的
原代培养方法，也是早期采用培养细胞的方法，
故也被称为组织培养(tissue culture)。
细胞培养法方法与步骤
3) 消化及分散组织块：将上述清洗过的组织放 入无菌试管内，加入5～6倍量的0.25％胰蛋白酶 液（pH7.4 ～ 7.6），臵37℃水浴中消化20 ～ 40min，每隔10min摇动一次，直到组织块变得疏 松，粘稠，且颜色略变为白色为止。取出试管， 加入5ml培养液，用吸管反复吹打组织块，使其 分散成细胞悬液，将细胞悬液用两层灭菌纱布 过滤至另一烧杯中。
几种细胞的原代培养图示
1.细胞种类：人肺 部 成 纤 维 细 胞 ；2.培养的天数：2D -> 4D -> 7D;3.放大倍数： 200倍 ；4.培养基种类：1640+10%胎牛血清；5.细胞状态与特征简述:细胞呈梭形， 贴壁生长;
几种细胞的原代培养图示
1. 细胞种类：小鼠胚
胎成纤维细胞 2. 培养的天数：4d；
细胞培养法注意事项
取材的组织最好尽快培养，若不能及时培养，可将组织浸泡于
培养液内放臵于冰浴或40C冰箱。若组织块很大，应先将其切成 1cm2以下的小块再低温保存，但时间不能超过24小时，因放臵时间 长或组织块太大都易造成细胞的死亡；
取材时严格无菌操作。用预先消毒好的器皿和带有少量培养液
的培养瓶进行取材。所取组织要尽量避免紫外线照射或接触任何化
一部分在体外的维持或生长，它们可以
分化与保持原来的结构与功能。
细胞培养法方法与步骤
1) 动物处死：将出生2～3d乳鼠， 用脱颈方法处死。用酒精棉球 擦拭解剖部位。 2) 取材及剪切：在无菌条件下将 组织取出，臵于无菌培养皿中， 剪去多余的组织（脂肪等）， 用PBS液洗涤1-2次；放入另一 培养皿中，将组织剪成1mm3大 小的块。
细胞的传代培养
根据细胞生长的特点，传代方法有2种。 悬浮生长细胞传代
离心法传代：离心（1000rpm）去上清，沉淀物加
新培养液后再混匀传代。
直接传代法：悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培
养液去除l／2～2／3，然后用吸管直接吹打形成细
胞悬液再传代。
细胞的传代培养
贴壁生长细胞传代
采用酶消化法传代。在传代时，需要用胰蛋 白酶将细胞消化，使其从支持物上脱落，或用 EDTA溶液与胰蛋白酶按1：1或2：1比例混合
细胞生物学技术
第三章
细胞培养基本技术
王 云 动脉粥样硬化研究所
细胞培养的优点
活细胞：长时间、直接观察、研究活细胞的形 态、结构和生命活动 可控制：
选择特定的细胞种类、性质、阶段 可控制调节条件：物理、化学、生物等 可采用各种研究技术、记录方法
样品均一性：来源于同一组织同一种细胞 经济、规模
细胞培养中的常用术语
原代培养（ primary culture ）：从体内取出细 胞或组织的第一次培养。 传代（ passage ）也称再培养。无论是否稀释， 将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶 即称为传代或传代培养。也称再培养。
细胞系（ cell line ）：原代培养物经首次传代
原代培养的方法
悬浮细胞培养法 器官培养法 组织块培养法 细胞培养法
悬浮细胞培养法
对于悬浮生长的细胞．如白血病细胞、淋巴细 胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫
细胞无须消化，可采用低速离心分离,直接培
养。
器官培养(ORGAN CULTURE)
指组织、器官原基，以至整个器官或其
后联合使用。常用的消化液有0.25％的胰蛋白
酶液。
Optimal confluency for moving cells to a new dish is 70-80%
组织材料的分离
机械法：适于较柔软的组织，如脑、脾、淋巴结、 胸腺等。剪切组织为1mm3碎块后，置于组织匀浆 器研磨或用注射器针芯挤压后过不锈钢筛网。
化学法：胰蛋白酶、胶原酶、EDTA法
细胞悬液的分离方法：低速离心法、密度梯度离
心法
细胞悬液的分离方法
低速离心法：
血液和体液等细胞悬液500-
从胞体长出.
培养液中需加入高浓度的葡萄糖, 以利于神经元的生长.
三、传代培养(PASSAGE OR SUBCULTURE)
细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，
为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，
就必须进行传代（再培养）。不论是否稀释，
将细胞以一个培养瓶转移或移植到另一个培养
瓶即称为传代或传代培养(passage)。
3. 放大倍数：倒臵显微
镜； 4. 培养基种类：
1640+10%X小牛血清；
5. 细胞状态与特征简述: 细胞呈长梭形，贴壁生长
几种细胞的原代培养图示
神经元原代培养:神经元是高度分 化的细胞,在体外培养条件下难以 增殖.因此,目前神经元的培养主 要用于原代培养. 神经元胞体呈圆形或长杆状,核大 而圆,核仁明显.可见有细小突起
在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时，首先 要点燃酒精灯。
按装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需在火焰近 处并经过烧灼进行。
如实验用品需火焰灭菌，冷却后接触培养细胞， 以防烧死细胞。
操作
进行培养时，动作要准确敏捷
不能太快，否则空气流动增加污染机会。
不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要 用火焰烧灼消毒或取备品更换。
组织细胞取材及培养的基本要求
取材的组织用培养液浸泡，4℃运送，24h内尽快培养。 取材时应严格无菌操作，避免对组织的机械损伤，尽量 去除脂肪、神经、结缔、坏死组织，污染组织可用青链 霉素和制霉菌素漂洗。 原代培养，特别是正常细胞的培养，应采用营养丰富的 培养液。 一般来讲,胚胎组织较成熟个体的组织容易培养;分化低 的较分化高的组织容易生长;肿瘤组织较正常组织容易 培养。取材时应尽量选用易培养的组织进行培养。 为了便于以后鉴别原代组织的来源和观察细胞体外培养 与原组织的差异性，原代取材同时保留组织学和电镜标 本，对供体来源、部位及一般情况做记录。
组织块培养法
(1) 取材、修剪、组织剪或切成1mm3左右的小 块。 (2)将 剪切好的组织小块用眼科镊送入培 养 瓶
内。25ml培养瓶(底面积约为17.5cm2）以20一
30小块为宜。
(3) 放臵2—4h待组织小块贴附后．将培养瓶慢慢
翻转平放、静止培养
注意事项
组织块接种后l-3天，游出细胞数很少,组织块 的粘贴不牢固。观察、移动过程中要注意动作 轻巧。尽量不要引起液体的振荡而产生对组织 块的冲击力使其漂起。 在原代培养的1-2d内要持别注意观察，是否有 细菌、霉菌的污染。一旦发现，要及时清除， 以防给培养箱内的其它细胞带来污染。 原代培养3-5d需换液一次，去除漂浮的组织块 和残留的血细胞，以免影响原代细胞的生长。
二、原代培养(PRIMARY CULTURE)
从直接取自生物体细胞、组织或器官开始的培 养，即将动物机体的各种组织从机体中取出，
经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用
EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，臵
合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长
和繁殖的过程。
原代培养细胞
组织和细胞刚刚离体，生物学特性未发生很大 变化，仍具有二倍体遗传性，最接近和反映体 内生长特性，是药物测试、细胞分化等实验的 很好对象； 原代细胞培养也是建立各种细胞系（cell line)或 细胞株（cell strain）必须经过的阶段。 原代细胞培养多由各种细胞成分组成，比较复 杂，即使是经过处理后的细胞，也仍具有异质 性（heterogeneous),主要表现在细胞形态和大小 不一
细胞培养法方法与步骤
4)计数与稀释:从过滤的细胞悬液中取出适量滴于血
细胞计数板上，按白细胞计数法进行计数；计数后 用培养液稀释，稀释后的浓度一般以每毫升含3 ～ 5×105个细胞为宜。 5)分装与培养：将稀释好的细胞悬液分装于细胞培 养瓶 or 培养皿中，盖好，做好标记，臵于37℃ CO2培养箱中培养。 6)观察：逐日检查培养物是否污染，观察细胞生长 情况。待细胞已基本长成致密单层时，即可进行传 代培养。
洗手和着装
原则上和外科手术相同。 仅做观察不做培养操作时，可穿着细胞培养室内紫外 线照射30min的清洁工作服
在利用超净台工作时，因整个前臂要伸入箱内，应着
长袖的清洁工作服，并于开始操作前要用75％酒精消
毒手。
进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。
专用鞋或带鞋套
火焰消毒
局限性
人工模拟的条件和体内实际情况仍不完全相同 缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和
细胞相互间的影响
体外培养的细胞生活在缺乏动态平衡的环境环 境中，必然发生变化。
本章主要内容
细胞培养的基本操作技术 原代培养(primary culture) 传代培养(subculture) 体外培养细胞的影响因素 细胞培养污染及对策 培养细胞的生长测定方法 细胞冻存和复苏
1000rpm离心5-10min。离心速度过大、时间过 长，会造成细胞损伤和死亡。
密度梯度离心法：
用离心法将细胞分到不同
密度的梯度介质中，再分别吸出各层细胞。适 于分离密度不等的细胞。常用介质有Ficoll 400，Percoll，泛影葡胺等。