第21章 基因治疗
基因治疗PPT课件
基因治疗是治疗基因突变性疾病的一项根本 性措施，同时它为非基因突变性疾病提供了一 个新的治疗手段。
二、基因治疗的策略
两个基本策略: 原位矫正病变基因 基因取代或基因干预
(一)原位矫正病变基因(纠正异常碱基)
图11-1 镰形红细胞贫血病人的Hb为HbS(由β 珠蛋白基因点突变引起)
2.基因表达持续时间短； 3.许多问题仍需求助病毒或病毒 成分解决。
3.免疫原性低，急性毒性小，对
受试者比较安全；
4.可具有特异靶向性，并能转移 至非分裂期细胞并有效表达；
5.制备方便且重复性好，具有完 全人工合成和大规模生产可行性， 因此较简单和廉价。
（一）脂质体介导的转移方法
1.方法 用一定比例的磷脂酰胆碱和磷脂酰丝氨酸→共 溶于氯仿→制备成双层磷脂的封闭囊泡→超声波处理→ 将待转移外源基因DNA包入→制备成脂质体/质粒 DNA复合物→利用其能与细胞膜融合的特性，可将质 粒DNA转入细胞中。 2.优点 脂质体作为载体可以携带各种DNA片段，且 在转移途中保护基因不被核酸酶降解。 3.缺点 转移效率低、制备麻烦、商品较贵。
一.病毒载体——转基因的生物学方法
逆转录病毒载体
（一）逆转录病毒的生活（命）周期 （二）逆转录病毒的基因组结构 (三) 逆转录病毒载体结构功能特点 (四) 重组逆转录病毒载体结构 （五）重组逆转录病毒的制备 （六）重组逆转录病毒基因转移系统 （七）逆转录病毒载体介导基因转移的安全性问题
（一）逆转录病毒的生活（命）周期
（六）重组逆转录病毒基因转移系统
1．逆转录病毒介导基因转移的靶组织细胞
靶细胞的最基本要求: 细胞表面具有逆转录病毒相应的受体
最常用作基因治疗的靶有： 骨髓干细胞、成纤维细胞、淋巴细胞、 肝细胞、血管内皮细胞和肌细胞，还包 括所有的肿瘤细胞
补充题-辅导
第21章基因诊断与基因治疗A型题：1．内源基因变异不包括A．点突变B．缺失或插入突变C．外源基因入侵D．表达异常E．基因结构变异2．所谓基因诊断即A．临床学诊断B．血清学诊断C．免疫学诊断D．生化学诊断E．直接检测基因结构3．以下哪一个不是基因诊断技术方法A．PCR B．PCR/SSCP C．PCR/RFLP D．RNAi E．DNA芯片4．相同长度的单链DNA因其碱基序列不同，甚至单个碱基不同，都可能形成不同的空间构象，从而在电泳时泳动速率不同，这种分析方法称A．RFLP B．ASO C．SSCP D．PCR E．限制性内切酶酶谱分析法5．基因诊断的特点，错误的是A．针对性强B．特异性高C．灵敏度高D．费用较低E．适用性强，诊断范围广6．基因诊断常用的方法不包括A．核酸分子杂交B．PCR C．Western blotting D．基因测序E．基因芯片7．关于ASO杂交法的叙述，正确的是A．该方法仅用于诊断已知突变B．该方法可发现新的突变基因类型C．仅能检测纯合子D．原理是依据DNA片段长度多态性E．原理是利用限制性内切酶位点的改变8．关于基因诊断的叙述，错误的是A．细胞癌变机制的研究B．对肿瘤进行诊断分类C．肿瘤预后检测D．在不同环节上指导抗癌E．肿瘤的预防9．有关自杀基因的叙述，错误的是A．细菌产生的酶催化无毒性药物转变为细胞毒性物B．常用的有HSV-tk、EC-CD等C．可用于肿瘤的治疗D．携带该基因的受体细胞被杀死E．可用于遗传病的基因治疗10．非病毒介导的基因转移的化学方法有A．显微注射B．脂质体介导C．DNA直接注射法D．基因枪技术E．电穿孔11．做基因治疗时禁止使用A．淋巴细胞B．生殖细胞C．肝细胞D．肌细胞E．肿瘤细胞12．利用正常机体细胞中不存在的外源基因所表达的酶催化药物前体转变为细胞毒性产物而导致细胞死亡的基因治疗方法是A．基因灭活B．基因矫正C．基因置换D．基因增补E．自杀基因的应用13．基因治疗所采用的方法不包括A．基因矫正B．基因置换C．基因增补D．基因敲除E．自杀基因14．目前基因治疗中选用最多的基因载体是A．肽核酸（PNA）B．三链DNA C．HSV-tk D．逆转录病毒E．干扰RNAB型题A．基因灭活B．基因矫正C．基因置换D．基因增补E．自杀基因的应用15．将变异基因进行修正的基因治疗方法是B16．将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法是C17．利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是AX型题18．常用于基因诊断的核酸杂交方法包括A．限制性内切酶酶谱分析法B．ASO杂交法C．RFLP分析法D．基因序列测定E．PCR19．基因诊断可用于A．肿瘤B．感染性疾病C．遗传性疾病D．传染性疾病E．法医鉴定20．基因治疗可用于A．肿瘤B．心血管疾病C．神经系统疾病D．遗传性疾病E．感染性疾病21．基因诊断的检测对象是A．DNA B．mRNA C．tRNA D．rRNA E．蛋白质22．目前基因治疗中常选用的基因载体是A．质粒B．腺病毒C．反转录病毒D．腺病毒相关病毒E．黏粒第22章常用分子生物学技术的原理及其应用1．用于分析蛋白质分子相互作用的技术是A．Southern 印迹B．Northern 印迹C．Western 印迹D．斑点印迹E．原位杂交2．以标记探针检测NC膜上RNA的方法称A．原位杂交B．免疫印迹C．Western blotting D．Northern blotting E．Southern blotting3．Western 印迹是指A．DNA与探针结合B．DNA与抗体结合C．RNA与抗体结合D．蛋白质与抗体结合E．免疫分子与DNA结合4．Southern blotting指的是A．DNA印迹技术B．RNA印迹技术C．蛋白质印迹技术D．斑点杂交E．原位杂交5．免疫印迹技术指的是结合在膜上的A．蛋白质分子与抗体分子结合B．DNA分子与抗体分子结合C．RNA分子与抗体分子结合D．DNA分子与RNA分子结合E．免疫分子与DNA分子结合6．用于核酸杂交的探针应是A．双链DNA B．蛋白质C．单链DNA或RNAD．双股多肽链E．双链RNA7．关于原位杂交的叙述，正确的是A．在DNA芯片上进行杂交B．直接在组织切片或细胞涂片上杂交C．将核酸点在NC膜上直接进行杂交D．即DNA点阵法E．在凝胶中进行杂交8．Northern blotting是指A．将DNA转移到膜上，用DNA探针杂交B．将RNA转移到膜上，用DNA探针杂交C．将DNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交D．将RNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交E．将DNA转移到膜上，用RNA探针杂交9．下列哪一种分子不能用做探针A．人工合成的寡核苷酸片段B．克隆的基因组DNA C．cDNAD．蛋白质E．RNA片段10．印迹技术的操作程序是A．电泳→转移→杂交→显色B．杂交→电泳→转移→显色C．电泳→显色→转移→杂交D．转移→电泳→杂交→显色E．显色→电泳→转移→杂交11．直接针对目的DNA设计的筛选方法是A．抗药标志筛选B．-互补筛选C．分子杂交D．免疫化学E．酶联免疫12．PCR技术不能用于A．目的基因的克隆B．基因的体外突变C．DNA的微量分析D．DNA序列测定E．蛋白质含量测定13．组成PCR反应体系的基本成分不包括A．模板DNA B．连接酶C．特异性引物D．DNA聚合酶E．dNTP14．RT-PCR可以用于A．DNA序列测定B．RNA结构分析C．蛋白质表达分析D．基因表达分析E．蛋白质氨基酸序列分析15．PCR的模板是A．双链DNA或单链mRNA B．单链DNA或单链cDNAC．双链DNA或单链cDNA D．双链DNA或双链RNAE．双链DNA或双链cDNA16．关于PCR的叙述，错误的是A．是一种体外扩增DNA的方法B．一般采用的变性温度是72℃C．循环次数为25~30次D．基本原理依据DNA半保留复制E．需要耐热的DNA聚合酶17．有关DNA链末端终止法的叙述，不正确的是A．需要ddNMP B．需要ddNTP C．dNTP:ddNTP的比例要合适D．需要放射性核素或荧光染料E．需要NTP18．目前应用最广泛的DNA测序方法是A．化学裂解法B．Crick法C．Sanger法D．Allan Maxam法E．Walter Gilbert法19．基因文库A．包括细胞内所有的蛋白质的信息B．包括基因组DNA文库和cDNA文库C．是指某一基因外显子数目D．可以通过DNA末端合成终止法获得E．不需要进行DNA片段重组载体就可获得20．杜氏肌营养不良致病基因的克隆是A．功能互补试验B．侯选基因克隆C．定位克隆D．功能克隆E．利用特异性抗体筛选cDNA文库21．关于定位克隆，错误的是A．包括遗传学分析和分子生物学分析B．遗传学分析确定致病基因的染色体定位C．分子生物学分析筛选和克隆致病基因D．遗传学分析包括染色体异常分析和交换分析E．需要多种技术结合22．克隆致病相关基因的策略不包括A．定位克隆B．功能克隆C．定位侯选基因克隆D．非定位侯选基因克隆E．利用特异性抗体筛选cDNA文库23．要获得疾病相关基因的克隆，可以通过A．用特异性抗体筛选表达型cDNA文库B．对该基因编码的蛋白质进行分析来推测C．对该基因表达的mRNA进行分析来推测D．将病人的相应基因与正常人进行比较E．转基因技术24．将一个动物的体细胞胞核导入另一个体的去除胞核的卵细胞内，这种技术称A．转基因技术B．核转移技术C．基因剔除技术D．基因重组技术E．基因靶向灭活技术25．动物整体克隆技术是指A．转基因动物B．转基因C．基因剔除D．核转移技术E．基因靶向灭活26．基因剔除技术的基本原理是A．建立在核转移技术上B．定位侯选基因策略C．建立在同源重组技术上D．建立在酵母系统的功能互补实验上E．定位克隆27．基因转移和剔除技术在医学中的最重要用途是A．建立疾病的动物模型B．疾病相关基因的克隆C．疾病相关基因的鉴定D．发现信号转导药物E．建立器官发育的动物模型28．克隆羊多莉的诞生是应用了A．转基因技术B．核转移技术C．基因剔除技术D．基因同源重组技术E．基因克隆技术29．基因芯片的用途不包括A．基因表达检测B．基因突变检测C．研究蛋白质功能D．杂交测序E．基因组作图30．关于DNA芯片的叙述，错误的是A．多用于大规模检测B．手工点样C．需强大的扫描分析硬、软件支持D．由DNA点阵技术发展而来E．可在很小的硅片上固定探针31．可用于基因表达谱分析的是A．Western印迹B．原位杂交C．PCR D．DNA芯片E．Southern印迹32．关于酵母双杂交系统的应用，错误的是A．分析已知蛋白质之间的相互作用B．研究蛋白质功能域C．分析蛋白质与DNA的相互作用D．绘制蛋白质相互作用系统图谱E．药物设计B型题A．检测特异DNA B．检测特异mRNA C．检测特异蛋白质D．检测特异DNA和蛋白质E．检测特异抗体和核酸33．Southern印迹A34．Northern印迹B35．Western印迹CA．细胞水平的基因转移B．将目的基因导入胚胎干细胞C．动物体细胞核导入去核的受精卵D．将重组质粒导入细胞E．去除动物体内某种基因36．转化D37．动物整体克隆技术C38．基因靶向灭活技术EX型题39．下列哪两种物质间形成的杂化链，属于核酸分子杂交A．DNA和DNA B．DNA和RNA C．RNA和RNA D．蛋白质和蛋白质E．DNA和蛋白质40．生物大分子印迹技术包括A．DNA blotting B．RNA blotting C．蛋白质印迹D．免疫印迹E．Western blotting41．PCR的主要步骤有A．退火B．变性C．转位D．延伸E．进位42．PCR的主要用途有A．核转移B．DNA微量分析C．基因的体外突变D．目的基因的克隆E．DNA序列测定43．关于DNA序列自动化测定的叙述，正确的是A．需要DNA模板B．不再需要引物C．用4种荧光标记D．激光扫描分析读序E．基本原理与手工测序相同44．关于DNA测序的化学裂解法，正确的是A．DNA发生随机断裂B．采用某种化学试剂裂解DNA C．需对DNA进行标记D．聚丙烯酰胺凝胶电泳分离裂解片段E．以ddNTP作原料45．有关转基因技术的正确说法是A．基因转移只能在同种异体之间进行B．基因转移只能在同种个体之间进行C．将目的基因整合入受精卵细胞D．将目的基因整合入胚胎干细胞E．导入目的基因的个体不能传代46．在动物体内去除某种基因的技术称为基因A．靶向灭活B．剔除C．转移D．克隆E．修饰第23章基因组学与医学A型题1．下列哪项属于结构基因组学研究内容A．基因组DNA序列测定B．鉴定DNA序列中的基因C．分析基因功能D．描述基因表达模式E．比较不同物种的整个基因组2．基因组学的全部研究领域是指A．测定某一种生物基因组的DNA序列B．鉴定某一种生物的部分基因功能C．结构基因组学、功能基因组学和比较基因组学的总和D．不同生物之间进行的比较基因组学E．检测一种细胞或组织的全套mRNA3．结构基因组学的研究内容是A．绘制出某种生物的物理图谱B．确定和发现蛋白质的编码序列C．利用计算机“同源搜索”发现蛋白质功能域D．测定某种细胞或组织的蛋白质表达谱E．用DNA芯片技术绘制整体基因表达谱4．功能基因组学的研究内容是A．绘制出某种生物的物理图谱B．采用DNA芯片进行细胞或组织的转录组分析C．绘制出某种生物的遗传图谱D．测定出某种生物基因组的全部序列E．分析两种不同生物基因组的差异5．基因表达模式研究所属的领域是A．结构基因组学B．比较基因组学C．环境基因组学D．药理基因组学E．功能基因组学6．研究蛋白质组学的主要方法是A．琼脂糖凝胶电泳B．双向电泳法C．等电聚焦电泳D．变性聚丙烯酰胺凝胶电泳E．氨基酸序列分析7．人类基因组计划研究内容不包括A．遗传制图B．物理制图C．基因组DNA序列测定D．鉴定DNA序列中的基因E．创建计算机分析管理系统8．以下哪一项不是猎取疾病基因的策略A．定位基因克隆B．侯选基因克隆C．功能基因克隆D．定位侯选基因克隆E．染色体定位9．检测人类基因变异或突变采用最多的方法是A．DNA直接测序B．限制性片段长度多态性C．变性梯度胶电泳D．单核苷酸多态性E．Northern blotting10．某种遗传性疾病是由一个点突变（无限制性内切酶位点变化）引起，可以A．用DNA单链构象多态性分析突变B．用限制性片段长度多态性分析突变C．用Western blotting分析突变D．用电泳分析基因组DNAE．用电泳分析细胞中的所有蛋白质11．比较正常与疾病基因组差异表达分析的技术是A．Southern blotting B．Western blottingC．超离心技术D．SNPs E．DNA芯片12．白血病和淋巴瘤的常见病因是A．因基因重排导致的染色体易位B．因p21基因失活C．因p53基因失活D．H-ras基因突变E．raf基因缺失13．环境基因组学的研究目的是A．确定心血管疾病的相关基因B．了解环境对人类疾病的影响和意义C．克隆与肿瘤发生相关的基因D．寻找疾病时基因组差异表达的基因E．寻找单基因导致遗传疾病的致病基因14．应用基因组学资料进行药物分析的技术是A．SSCP B．RFLP C．正、反向cDNA文库消减技术D．染色体原位杂交E．基因敲除技术15．获得性基因病是指A．在某一基因位点上的缺失导致的疾病B．由多个基因并与环境因素相互作用导致的疾病C．在某一基因位点上的突变导致的疾病D．由病原微生物基因组感染人类基因组引发的疾病E．由重金属中毒引发的疾病16．检测人类基因变异或突变的技术有A．染色体原位杂交B．染色体连锁分析C．双向电泳分析D．飞行质谱分析E．SNPs技术X型题17．蛋白质组学A．是后基因组研究的一部分B．研究组织细胞中全部蛋白质表达的情况C．以双向电泳为一重要手段D．是以蛋白质的分类为研究目标E．研究不同条件下蛋白质表达差异18．后基因组研究内容包括A．测定全部基因组序列B．研究基因产物的功能C．测定一条染色体上DNA的序列D．研究不同组织细胞中基因表达的差异E．蛋白质空间结构的分析与预测19．功能基因组主要研究内容包括A．鉴定DNA序列中的基因B．比较不同物种的整个基因组C．实验性设计基因功能D．描述基因表达模式E．基因组序列测定20．常见的药物设计靶点分子有A．G蛋白偶联受体B．各种蛋白酶类C．各种蛋白激酶D．各种氧化还原酶类E．各种合成酶。
基因治疗的步骤和操作流程
基因治疗的步骤和操作流程基因治疗是一种通过改变患者体内基因来治疗疾病的创新疗法。
它有潜力治愈许多难以治愈的遗传性疾病，并为个体化医疗提供了新的可能性。
基因治疗涉及多个步骤和操作流程，从基因的选择和修改，到向患者体内传递修饰后的基因。
本文将详细介绍基因治疗的步骤和操作流程。
基因治疗的步骤：1. 基因选择：第一步是选择适当的基因进行治疗。
这通常涉及对疾病相关基因的研究和分析。
科学家们会寻找与疾病发展相关的特定基因，并确定是否存在缺陷或突变。
基因选择的关键是确保选择的基因能够有效治疗目标疾病。
2. 基因修饰：一旦确定了目标基因，下一步是对其进行修饰。
这可能涉及到将缺失或异常基因修复或替换为健康的基因，或者通过增强或降低基因的表达来调节其功能。
为了实现这一点，科学家们利用基因工程技术，如基因剪切和基因合成，来进行基因的修饰。
3. 载体选择：修饰后的基因需要通过载体传递到患者体内。
载体是一种能将修饰后的基因传递到目标细胞的工具。
常用的载体包括病毒、细胞质转染和基因枪等。
科学家们会根据治疗目标和基因修饰的性质选择合适的载体。
4. 载体传递：一旦选择了载体，接下来是将修饰后的基因装载到载体上，并将其传递到患者体内。
这可以通过多种途径实现，如注射、静脉输液或外科手术。
传递载体的目的是将修饰后的基因引导到目标细胞或组织，并促使其表达。
5. 基因表达和集成：一旦修饰后的基因进入目标细胞或组织，下一步是促使其表达和集成到患者的基因组中。
这可能需要一段时间，并且可能需要额外的治疗支持，如激活基因表达或提供必要的辅助基因。
基因治疗的操作流程：1. 诊断和评估：首先，医生会对患者的疾病进行全面的诊断和评估。
这包括病史收集、体格检查和相关的实验室检查。
医生还会确定是否适合接受基因治疗，并评估治疗的潜在风险和益处。
2. 咨询和知情同意：医生会与患者和家人进行详细的咨询，并提供关于基因治疗的详细信息。
他们将解释治疗的目的、风险和可能的副作用，以及治疗的可行性和预期效果。
第14、21章 基因工程与分子生物学常用技术及其应用习题
第十四、二十一章基因工程、分子生物学常用技术段里原理及其应用复习测试（一)名词解释１.DNA重组2.基因工程3.限制性核酸内切酶４．基因组ＤＮA文库5.ｃDＮA文库6.聚合酶链反应（ＰCＲ）７。
载体8。
转化9．感染10。
核酸分子杂交1１。
Ｓouthern印迹杂交１2.Nｏrthern印迹杂交13。
斑点印迹1４.原位杂交15。
DNA芯片1６。
基因诊断１7.基因治疗(二)选择题A型题:1．限制性核酸内切酶作用特点不包括：Ａ。
在对称序列处切开ＤNAB.ＤＮＡ两链得切点常不在同一位点Ｃ。
酶切后产生得DNA片段多半具有粘性互补末端D．DNA两链得切点常在同一位点E。
酶辨认得碱基一般为4~６个2。
限制性核酸内切酶：A。
可将单链ＤNA任意切断B．可将双链ＤNA序列特异切开Ｃ。
可将两个DＮA分子连接起来D．不受ＤNA甲基化影响E．由噬菌体提取而得３。
ｃDＮA文库包括该种生物得:Ａ．某些蛋白质得结构基因Ｂ。
所有基因组C。
结构基因与不表达得调控区D．内含子与调节区E。
内含子与外显子4。
下列关于建立cDＮA文库得叙述哪项就是错误得:Ａ。
从特定组织或细胞中提取mＲNAB。
将特定细胞得DNＡ用限制性核酸内切酶切割后,克隆到噬菌体或质粒中C.用逆转录酶合成mRNA得对应单股ＤＮAD。
用DＮA聚合酶,以单股DNA为模板合成双链DNAＥ。
加S－腺苷甲硫氨酸(SＡM),以使新生得DNA双链甲基化5。
限制性核酸内切酶得通常识别序列就是：A。
粘性末端B。
ＲＮＡ聚合酶附着点C.回文对称序列Ｄ。
聚腺苷酸E。
甲基化“帽＂结构6。
pUC系列就是指：A。
经人工改造得大肠杆菌质粒B.天然得大肠杆菌质粒Ｃ．天然得酵母质粒D．经人工改造得大肠杆菌噬菌体E．经人工改造得酵母质粒7。
用于转染哺乳类细胞得常用载体就是：A.质粒B。
噬菌体Ｃ。
逆转录病毒ＲＮAD。
结构基因Ｅ。
乳糖操纵子8.转化常指:A.噬菌体感染Ｂ。
基因得转位C.摄取外来DＮＡ,引起细胞生物学类型得改变D。
补充题-辅导
第21章基因诊断与基因治疗A型题：1．内源基因变异不包括A．点突变B．缺失或插入突变C．外源基因入侵D．表达异常E．基因结构变异2．所谓基因诊断即A．临床学诊断B．血清学诊断C．免疫学诊断D．生化学诊断E．直接检测基因结构3．以下哪一个不是基因诊断技术方法A．PCR B．PCR/SSCP C．PCR/RFLP D．RNAi E．DNA芯片4．相同长度的单链DNA因其碱基序列不同，甚至单个碱基不同，都可能形成不同的空间构象，从而在电泳时泳动速率不同，这种分析方法称A．RFLP B．ASO C．SSCP D．PCR E．限制性内切酶酶谱分析法5．基因诊断的特点，错误的是A．针对性强B．特异性高C．灵敏度高D．费用较低E．适用性强，诊断范围广6．基因诊断常用的方法不包括A．核酸分子杂交B．PCR C．Western blotting D．基因测序E．基因芯片7．关于ASO杂交法的叙述，正确的是A．该方法仅用于诊断已知突变B．该方法可发现新的突变基因类型C．仅能检测纯合子D．原理是依据DNA片段长度多态性E．原理是利用限制性内切酶位点的改变8．关于基因诊断的叙述，错误的是A．细胞癌变机制的研究B．对肿瘤进行诊断分类C．肿瘤预后检测D．在不同环节上指导抗癌E．肿瘤的预防9．有关自杀基因的叙述，错误的是A．细菌产生的酶催化无毒性药物转变为细胞毒性物B．常用的有HSV-tk、EC-CD等C．可用于肿瘤的治疗D．携带该基因的受体细胞被杀死E．可用于遗传病的基因治疗10．非病毒介导的基因转移的化学方法有A．显微注射B．脂质体介导C．DNA直接注射法D．基因枪技术E．电穿孔11．做基因治疗时禁止使用A．淋巴细胞B．生殖细胞C．肝细胞D．肌细胞E．肿瘤细胞12．利用正常机体细胞中不存在的外源基因所表达的酶催化药物前体转变为细胞毒性产物而导致细胞死亡的基因治疗方法是A．基因灭活B．基因矫正C．基因置换D．基因增补E．自杀基因的应用13．基因治疗所采用的方法不包括A．基因矫正B．基因置换C．基因增补D．基因敲除E．自杀基因14．目前基因治疗中选用最多的基因载体是A．肽核酸（PNA）B．三链DNA C．HSV-tk D．逆转录病毒E．干扰RNAB型题A．基因灭活B．基因矫正C．基因置换D．基因增补E．自杀基因的应用15．将变异基因进行修正的基因治疗方法是B16．将正常基因经体内基因同源重组原位替换致病基因的基因治疗方法是C17．利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是AX型题18．常用于基因诊断的核酸杂交方法包括A．限制性内切酶酶谱分析法B．ASO杂交法C．RFLP分析法D．基因序列测定E．PCR19．基因诊断可用于A．肿瘤B．感染性疾病C．遗传性疾病D．传染性疾病E．法医鉴定20．基因治疗可用于A．肿瘤B．心血管疾病C．神经系统疾病D．遗传性疾病E．感染性疾病21．基因诊断的检测对象是A．DNA B．mRNA C．tRNA D．rRNA E．蛋白质22．目前基因治疗中常选用的基因载体是A．质粒B．腺病毒C．反转录病毒D．腺病毒相关病毒E．黏粒第22章常用分子生物学技术的原理及其应用1．用于分析蛋白质分子相互作用的技术是A．Southern 印迹B．Northern 印迹C．Western 印迹D．斑点印迹E．原位杂交2．以标记探针检测NC膜上RNA的方法称A．原位杂交B．免疫印迹C．Western blotting D．Northern blotting E．Southern blotting3．Western 印迹是指A．DNA与探针结合B．DNA与抗体结合C．RNA与抗体结合D．蛋白质与抗体结合E．免疫分子与DNA结合4．Southern blotting指的是A．DNA印迹技术B．RNA印迹技术C．蛋白质印迹技术D．斑点杂交E．原位杂交5．免疫印迹技术指的是结合在膜上的A．蛋白质分子与抗体分子结合B．DNA分子与抗体分子结合C．RNA分子与抗体分子结合D．DNA分子与RNA分子结合E．免疫分子与DNA分子结合6．用于核酸杂交的探针应是A．双链DNA B．蛋白质C．单链DNA或RNAD．双股多肽链E．双链RNA7．关于原位杂交的叙述，正确的是A．在DNA芯片上进行杂交B．直接在组织切片或细胞涂片上杂交C．将核酸点在NC膜上直接进行杂交D．即DNA点阵法E．在凝胶中进行杂交8．Northern blotting是指A．将DNA转移到膜上，用DNA探针杂交B．将RNA转移到膜上，用DNA探针杂交C．将DNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交D．将RNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交E．将DNA转移到膜上，用RNA探针杂交9．下列哪一种分子不能用做探针A．人工合成的寡核苷酸片段B．克隆的基因组DNA C．cDNAD．蛋白质E．RNA片段10．印迹技术的操作程序是A．电泳→转移→杂交→显色B．杂交→电泳→转移→显色C．电泳→显色→转移→杂交D．转移→电泳→杂交→显色E．显色→电泳→转移→杂交11．直接针对目的DNA设计的筛选方法是A．抗药标志筛选B．-互补筛选C．分子杂交D．免疫化学E．酶联免疫12．PCR技术不能用于A．目的基因的克隆B．基因的体外突变C．DNA的微量分析D．DNA序列测定E．蛋白质含量测定13．组成PCR反应体系的基本成分不包括A．模板DNA B．连接酶C．特异性引物D．DNA聚合酶E．dNTP14．RT-PCR可以用于A．DNA序列测定B．RNA结构分析C．蛋白质表达分析D．基因表达分析E．蛋白质氨基酸序列分析15．PCR的模板是A．双链DNA或单链mRNA B．单链DNA或单链cDNAC．双链DNA或单链cDNA D．双链DNA或双链RNAE．双链DNA或双链cDNA16．关于PCR的叙述，错误的是A．是一种体外扩增DNA的方法B．一般采用的变性温度是72℃C．循环次数为25~30次D．基本原理依据DNA半保留复制E．需要耐热的DNA聚合酶17．有关DNA链末端终止法的叙述，不正确的是A．需要ddNMP B．需要ddNTP C．dNTP:ddNTP的比例要合适D．需要放射性核素或荧光染料E．需要NTP18．目前应用最广泛的DNA测序方法是A．化学裂解法B．Crick法C．Sanger法D．Allan Maxam法E．Walter Gilbert法19．基因文库A．包括细胞内所有的蛋白质的信息B．包括基因组DNA文库和cDNA文库C．是指某一基因外显子数目D．可以通过DNA末端合成终止法获得E．不需要进行DNA片段重组载体就可获得20．杜氏肌营养不良致病基因的克隆是A．功能互补试验B．侯选基因克隆C．定位克隆D．功能克隆E．利用特异性抗体筛选cDNA文库21．关于定位克隆，错误的是A．包括遗传学分析和分子生物学分析B．遗传学分析确定致病基因的染色体定位C．分子生物学分析筛选和克隆致病基因D．遗传学分析包括染色体异常分析和交换分析E．需要多种技术结合22．克隆致病相关基因的策略不包括A．定位克隆B．功能克隆C．定位侯选基因克隆D．非定位侯选基因克隆E．利用特异性抗体筛选cDNA文库23．要获得疾病相关基因的克隆，可以通过A．用特异性抗体筛选表达型cDNA文库B．对该基因编码的蛋白质进行分析来推测C．对该基因表达的mRNA进行分析来推测D．将病人的相应基因与正常人进行比较E．转基因技术24．将一个动物的体细胞胞核导入另一个体的去除胞核的卵细胞内，这种技术称A．转基因技术B．核转移技术C．基因剔除技术D．基因重组技术E．基因靶向灭活技术25．动物整体克隆技术是指A．转基因动物B．转基因C．基因剔除D．核转移技术E．基因靶向灭活26．基因剔除技术的基本原理是A．建立在核转移技术上B．定位侯选基因策略C．建立在同源重组技术上D．建立在酵母系统的功能互补实验上E．定位克隆27．基因转移和剔除技术在医学中的最重要用途是A．建立疾病的动物模型B．疾病相关基因的克隆C．疾病相关基因的鉴定D．发现信号转导药物E．建立器官发育的动物模型28．克隆羊多莉的诞生是应用了A．转基因技术B．核转移技术C．基因剔除技术D．基因同源重组技术E．基因克隆技术29．基因芯片的用途不包括A．基因表达检测B．基因突变检测C．研究蛋白质功能D．杂交测序E．基因组作图30．关于DNA芯片的叙述，错误的是A．多用于大规模检测B．手工点样C．需强大的扫描分析硬、软件支持D．由DNA点阵技术发展而来E．可在很小的硅片上固定探针31．可用于基因表达谱分析的是A．Western印迹B．原位杂交C．PCR D．DNA芯片E．Southern印迹32．关于酵母双杂交系统的应用，错误的是A．分析已知蛋白质之间的相互作用B．研究蛋白质功能域C．分析蛋白质与DNA的相互作用D．绘制蛋白质相互作用系统图谱E．药物设计B型题A．检测特异DNA B．检测特异mRNA C．检测特异蛋白质D．检测特异DNA和蛋白质E．检测特异抗体和核酸33．Southern印迹A34．Northern印迹B35．Western印迹CA．细胞水平的基因转移B．将目的基因导入胚胎干细胞C．动物体细胞核导入去核的受精卵D．将重组质粒导入细胞E．去除动物体内某种基因36．转化D37．动物整体克隆技术C38．基因靶向灭活技术EX型题39．下列哪两种物质间形成的杂化链，属于核酸分子杂交A．DNA和DNA B．DNA和RNA C．RNA和RNA D．蛋白质和蛋白质E．DNA和蛋白质40．生物大分子印迹技术包括A．DNA blotting B．RNA blotting C．蛋白质印迹D．免疫印迹E．Western blotting41．PCR的主要步骤有A．退火B．变性C．转位D．延伸E．进位42．PCR的主要用途有A．核转移B．DNA微量分析C．基因的体外突变D．目的基因的克隆E．DNA序列测定43．关于DNA序列自动化测定的叙述，正确的是A．需要DNA模板B．不再需要引物C．用4种荧光标记D．激光扫描分析读序E．基本原理与手工测序相同44．关于DNA测序的化学裂解法，正确的是A．DNA发生随机断裂B．采用某种化学试剂裂解DNA C．需对DNA进行标记D．聚丙烯酰胺凝胶电泳分离裂解片段E．以ddNTP作原料45．有关转基因技术的正确说法是A．基因转移只能在同种异体之间进行B．基因转移只能在同种个体之间进行C．将目的基因整合入受精卵细胞D．将目的基因整合入胚胎干细胞E．导入目的基因的个体不能传代46．在动物体内去除某种基因的技术称为基因A．靶向灭活B．剔除C．转移D．克隆E．修饰第23章基因组学与医学A型题1．下列哪项属于结构基因组学研究内容A．基因组DNA序列测定B．鉴定DNA序列中的基因C．分析基因功能D．描述基因表达模式E．比较不同物种的整个基因组2．基因组学的全部研究领域是指A．测定某一种生物基因组的DNA序列B．鉴定某一种生物的部分基因功能C．结构基因组学、功能基因组学和比较基因组学的总和D．不同生物之间进行的比较基因组学E．检测一种细胞或组织的全套mRNA3．结构基因组学的研究内容是A．绘制出某种生物的物理图谱B．确定和发现蛋白质的编码序列C．利用计算机“同源搜索”发现蛋白质功能域D．测定某种细胞或组织的蛋白质表达谱E．用DNA芯片技术绘制整体基因表达谱4．功能基因组学的研究内容是A．绘制出某种生物的物理图谱B．采用DNA芯片进行细胞或组织的转录组分析C．绘制出某种生物的遗传图谱D．测定出某种生物基因组的全部序列E．分析两种不同生物基因组的差异5．基因表达模式研究所属的领域是A．结构基因组学B．比较基因组学C．环境基因组学D．药理基因组学E．功能基因组学6．研究蛋白质组学的主要方法是A．琼脂糖凝胶电泳B．双向电泳法C．等电聚焦电泳D．变性聚丙烯酰胺凝胶电泳E．氨基酸序列分析7．人类基因组计划研究内容不包括A．遗传制图B．物理制图C．基因组DNA序列测定D．鉴定DNA序列中的基因E．创建计算机分析管理系统8．以下哪一项不是猎取疾病基因的策略A．定位基因克隆B．侯选基因克隆C．功能基因克隆D．定位侯选基因克隆E．染色体定位9．检测人类基因变异或突变采用最多的方法是A．DNA直接测序B．限制性片段长度多态性C．变性梯度胶电泳D．单核苷酸多态性E．Northern blotting10．某种遗传性疾病是由一个点突变（无限制性内切酶位点变化）引起，可以A．用DNA单链构象多态性分析突变B．用限制性片段长度多态性分析突变C．用Western blotting分析突变D．用电泳分析基因组DNAE．用电泳分析细胞中的所有蛋白质11．比较正常与疾病基因组差异表达分析的技术是A．Southern blotting B．Western blottingC．超离心技术D．SNPs E．DNA芯片12．白血病和淋巴瘤的常见病因是A．因基因重排导致的染色体易位B．因p21基因失活C．因p53基因失活D．H-ras基因突变E．raf基因缺失13．环境基因组学的研究目的是A．确定心血管疾病的相关基因B．了解环境对人类疾病的影响和意义C．克隆与肿瘤发生相关的基因D．寻找疾病时基因组差异表达的基因E．寻找单基因导致遗传疾病的致病基因14．应用基因组学资料进行药物分析的技术是A．SSCP B．RFLP C．正、反向cDNA文库消减技术D．染色体原位杂交E．基因敲除技术15．获得性基因病是指A．在某一基因位点上的缺失导致的疾病B．由多个基因并与环境因素相互作用导致的疾病C．在某一基因位点上的突变导致的疾病D．由病原微生物基因组感染人类基因组引发的疾病E．由重金属中毒引发的疾病16．检测人类基因变异或突变的技术有A．染色体原位杂交B．染色体连锁分析C．双向电泳分析D．飞行质谱分析E．SNPs技术X型题17．蛋白质组学A．是后基因组研究的一部分B．研究组织细胞中全部蛋白质表达的情况C．以双向电泳为一重要手段D．是以蛋白质的分类为研究目标E．研究不同条件下蛋白质表达差异18．后基因组研究内容包括A．测定全部基因组序列B．研究基因产物的功能C．测定一条染色体上DNA的序列D．研究不同组织细胞中基因表达的差异E．蛋白质空间结构的分析与预测19．功能基因组主要研究内容包括A．鉴定DNA序列中的基因B．比较不同物种的整个基因组C．实验性设计基因功能D．描述基因表达模式E．基因组序列测定20．常见的药物设计靶点分子有A．G蛋白偶联受体B．各种蛋白酶类C．各种蛋白激酶D．各种氧化还原酶类E．各种合成酶。
第14、21章 基因工程与分子生物学常用技术及其应用习题
第十四、二十一章基因工程、分子生物学常用技术段里原理及其应用复习测试（一)名词解释1．DNA重组2．基因工程3．限制性核酸内切酶4．基因组DNA文库5．cDNA文库6．聚合酶链反应（PCR）7．载体8．转化9．感染10．核酸分子杂交11．Southern印迹杂交12．Northern印迹杂交13．斑点印迹14．原位杂交15．DNA芯片16．基因诊断17．基因治疗（二）选择题A型题：1．限制性核酸内切酶作用特点不包括：A．在对称序列处切开DNAB．DNA两链的切点常不在同一位点C．酶切后产生的DNA片段多半具有粘性互补末端D．DNA两链的切点常在同一位点E．酶辨认的碱基一般为4～6个2．限制性核酸内切酶：A．可将单链DNA任意切断B．可将双链DNA序列特异切开C．可将两个DNA分子连接起来D．不受DNA甲基化影响E．由噬菌体提取而得3．cDNA文库包括该种生物的：A．某些蛋白质的结构基因B．所有基因组C．结构基因与不表达的调控区D．内含子和调节区E．内含子和外显子4．下列关于建立cDNA文库的叙述哪项是错误的:A．从特定组织或细胞中提取mRNAB．将特定细胞的DNA用限制性核酸内切酶切割后,克隆到噬菌体或质粒中C．用逆转录酶合成mRNA的对应单股DNAD．用DNA聚合酶，以单股DNA为模板合成双链DNAE．加S-腺苷甲硫氨酸（SAM），以使新生的DNA双链甲基化5．限制性核酸内切酶的通常识别序列是：A．粘性末端B．RNA聚合酶附着点C．回文对称序列D．聚腺苷酸E．甲基化“帽"结构6．pUC系列是指：A．经人工改造的大肠杆菌质粒B．天然的大肠杆菌质粒C．天然的酵母质粒D．经人工改造的大肠杆菌噬菌体E．经人工改造的酵母质粒7．用于转染哺乳类细胞的常用载体是：A．质粒B．噬菌体C．逆转录病毒RNAD．结构基因E．乳糖操纵子8．转化常指:A．噬菌体感染B．基因的转位C．摄取外来DNA，引起细胞生物学类型的改变D．产生点突变E．产生移码突变9．基因工程的操作程序可简单地概括为：A．载体和目的基因的分离、提纯与鉴定B．分、切、接、转、筛C．将重组体导入宿主细胞，筛选出含目的基因的菌株D．将载体和目的基因接合成重组体E．限制性核酸内切酶的应用10．用于基因治疗较为理想的载体是：A．质粒B．噬菌体C．经改造的逆转录病毒D．人类DNAE．酵母质粒11．常用质粒有以下特性：A．是线形双链DNAB．插入片段的容量比λ噬菌体DNA大C．含有抗生素抗性基因D．含有同一限制性核酸内切酶的多个切口E．不随细菌繁殖而进行自我复制12．在重组体中切出插入片段最常用的方法是：A．以重组时所用限制性核酸内切酶将其切出B．用其它限制性酶将其切出C．用S1核酸酶将其切出D．用DNA酶将切出E．用多种限制性内切酶将其切出13．利用PCR扩增特异DNA序列主要原理之一是:A．反应体系内存在特异DNA片段B．反应体系内存在特异RNA片段C．反应体系内存在特异DNA引物D．反应体系内存在特异RNA引物E．反应体系内存在的TaqDNA聚合酶具有识别特异DNA序列的作用14．表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是：A．大肠杆菌表达体系B．原核表达体系C．酵母表达体系D．昆虫表达体系E．哺乳类细胞表达体系15．限制性核酸内切酶切割DNA后产生：A．3′-磷酸基末端和5′-羟基末端B．5′-磷酸基末端和3′-羟基末端C．3′-磷酸基末端和5′-磷酸基末端D．5′-羟基末端和3′-羟基末端E．3′-羟基末端和5′-羟基末端及磷酸16．下列描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性的是：A．小型环状双链DNA分子B．携带有某些抗生素抗性基因C．在细胞分裂时恒定地传给子代细胞D．具有自我复制功能E．获得目的基因17．在分子生物学领域分子克隆主要是指：A．DNA的大量复制B．DNA的大量转录C．DNA的大量剪切D．RNA的大量剪切E．RNA的大量反转录18．在分子生物学领域重组DNA技术又称：A．酶工程B．蛋白质工程C．细胞工程D．发酵工程E．分子克隆技术19．在重组DNA技术中不涉及的酶是：A．限制性核酸内切酶B．DNA聚合酶C．DNA连接酶E．DNA解链酶20．多数限制性核酸内切酶切割后的DNA末端为：A．平端末端B．3′突出末端C．5′突出末端D．粘性末端E．缺口末端21．可识别DNA的特异序列,并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类酶为： A．限制性核酸外切酶B．限制性核酸内切酶C．非限制性核酸外切酶D．非限制性核酸内切酶E．DNA内切酶22．cDNA是指：A．在体外经反转录合成的与RNA互补的DNAB．在体外经反转录合成的与DNA互补的DNAC．在体外经转录合成的与DNA互补的RNAD．在体外经反转录合成的与RNA互补的RNAE．在体外经反转录合成的与DNA互补的RNA23．基因组代表一个细胞或生物体的：A．部分遗传信息B．整套遗传信息C．可转录基因D．非转录基因E．可表达基因24．在基因工程中通常所用的质粒存在于:A．细菌染色体B．酵母染色体C．细菌染色体外D．酵母染色体外E．病毒DNA外25．就分子结构而论质粒是：A．环状双链DNA分子B．环状单链DNA分子C．环状双链RNA分子D．线状双链DNA分子E．线状单链DNA分子26．聚合酶链式反应可表示为：A．PECB．PERC．PDRD．BCRE．PCR27．在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是：B．基因组文库法C．cDNA文库法D．PCRE．差异显示法28．重组DNA的基本构建过程是将:A．任意两段DNA接在一起B．外源DNA接入人体DNAC．外源基因插入宿主基因D．目的基因接入适当载体E．目的基因接入哺乳类DNA29．EcoRⅠ切割DNA双链产生:A．平端B．5′突出粘端C．3′突出粘端D．钝性末端E．配伍末端30．催化PCR的酶是:A．DNA连接酶B．反转录酶C．末端转移酶D．碱性磷酸酶E．TaqDNA聚合酶31．将PstⅠ内切酶切割后的目的基因与用相同内切酶切割后的载体DNA连接属： A．同聚物加尾连接B．人工接头连接C．平端连接D．粘性末端连接E．非粘性末端连接32．重组DNA技术中实现目的基因与载体DNA拼接的酶是:A．DNA聚合酶B．RNA聚合酶C．DNA连接酶D．RNA连接酶E．限制性核酸内切酶33．以质粒为载体，将外源基因导入受体菌的过程称：A．转化B．转染C．感染D．转导E．转位34．最常用的筛选转化细菌是否含重组质粒的方法是：A．营养互补筛选B．抗药性筛选C．免疫化学筛选D．PCR筛选E．分子杂交筛选35．α互补筛选法属于：A．抗药性标志筛选B．酶联免疫筛选C．标志补救筛选D．原位杂交筛选E．免疫化学筛选36．下列常用于原核表达体系的是：A．酵母细胞B．昆虫细胞C．哺乳类细胞D．真菌E．大肠杆菌37．在对目的基因和载体DNA进行同聚物加尾时，需采用:A．反转录酶B．多聚核苷酸激酶C．引物酶D．RNA聚合酶E．末端转移酶38．在分子生物学领域分子克隆专指:A．细胞克隆B．RNA克隆C．DNA克隆D．抗体克隆E．mRNA克隆39．用于重组DNA 的限制性核酸内切酶，识别核苷酸序列的：A．正超螺旋结构B．负超螺旋结构C．α螺旋结构D．回文结构E．锌指结构40．在基因工程中通常所用的质粒是：A．细菌染色体DNAB．细菌染色体以外的DNAC．病毒染色体DNAD．病毒染色体以外DNAE．噬菌体DNA41．构建基因组DNA文库时，首先需要分离细胞的：A．染色体DNAB．线粒体DNAC．总mRNAD．tRNAE．rRNA42．DNA连接酶是从T4 噬菌体感染大肠杆菌中分离的，这种连接酶：A．只能催化平末端连接，而不能催化粘性末端连接B．即能催化单链DNA连接又能催化粘性末端双链DNA连接C．双链DNA中不需一条完整的单链D．单链中的切口位点可缺少几个核苷酸E．切口存在相邻的5′-磷酸和3′—羟基末端，使其以磷酸二酯键连接43．末端转移酶是合成酶类：A．作用时不需模板B．是从小牛胸腺中分离C．能催化单链核苷酸转移到5′—磷酸上D．需要带有5′-端磷酸的末端的ssDNAE．需要有延伸5′—端磷酸的末端dsDNA44．在基因工程中可用碱性磷酸酶：A．防止DNA的自身环化B．同多核苷酸激酶一起进行DNA3′—羟基末端标记C．制备突出的3′—末端D．特异切除DNA或RNA的3′-末端羟基E．水解特异的核苷酸片段45．以下哪种酶作用时需要引物：A．限制性核酸内切酶B．末端转移酶C．反转录酶D．DNA连接酶E．碱性磷酸酶46．S1核酸酶的功能是:A．切割双链的DNAB．切割单链的RNAC．切割发夹环D．切割单链DNAE．以上有两项是正确的47．在cDNA技术中所形成的发夹环可用：A．限制性核酸内切酶切除B．用3′外切酶切除C．用S1核酸酶切除D．用5′外切酶切除E．碱性磷酸酶切除48．下面有关限制性内切酶的叙述正确的是：A．限制酶是外切酶而不是内切酶B．限制酶在特异序列（识别位点)对DNA进行切割C．同一种限制酶切割DNA时留下的末端序列总是相同的D．一些限制酶在识别位点稍有不同的点切割双链DNA，产生粘性末端E．一些限制酶在识别位点相同的位置切割双链DNA，产生平末端49．限制性核酸内切酶可以特异识别：A．双链DNA的特定碱基对B．双链DNA的特定碱基序列C．特定的三联码D．双链RNA的特定碱基序列E．双链RNA的特定碱基对50．DNA聚合酶的主要用途：A．利用它的3′→5′聚合活性,合成ds-DNA第二条链B．对DNA的5′-端进行填补或末端标记C．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ用于缺口平移,制作DNA标志探针 D．DNA聚合酶Ⅱ可用于DNA测序E．TaqDNA聚合酶用于PCR51．反转录酶：A．是依赖于DNA的RNA聚合酶B．用于真核DNA反转录生成mRNAC．用于RNA探针的制备D．用于RNA序列测定E．是依赖于RNA的DNA聚合酶52．基因工程中作为载体应具备以下特点：A．能在宿主细胞中复制繁殖B．容易进入宿主细胞C．具有多克隆位点D．容易从宿主细胞中分离出来E．以上均是53．下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大:A．质粒B．粘粒C．酵母人工染色体D．λ噬菌体E．cDNA表达载体54．pUC是一种改造型质粒，含有：A．乳糖操纵子调节基因、启动子B．多克隆位点C．lacZ′基因D．氨苄青霉素抗性基因E．以上均有55．质粒具有以下特点：A．是位于细菌染色体外的RNAB．不能自主复制C．为单链环形DNAD．大小在2~300kb之间E．以上都不对56．粘粒是一种人工建造的载体不具有以下特点:A．可借cos位点将多个粘粒串联成大环B．本身约4～6kb之间C．进入受体细胞后可进行复制D．可克隆DNA大片段E．以上都不是57．下面关于多克隆位点的描述不正确的是:A．仅位于质粒载体中B．具有多种限制性内切酶识别的位点C．不同酶的识别序列可以重叠D．一般是人工合成后添加到载体中E．可位于不同载体中58．下列筛选重组体的方法中不属于遗传学方法的是: A．限制性内切酶图谱法B．PCRC．Northern印迹法D．Southern印迹法E．抗药性标记基因59．利用基因工程可以进行:A．建立染色体基因文库B．分析基因的结构与功能C．疾病的发生、发展及治疗的分子机制D．疾病的诊断和基因治疗E．以上均可以60．Southern印迹的DNA探针杂交：A．只与序列完全相同的RNA片段B．可与任何含有相同序列的DNA片段C．可与任何含有互补序列的DNA片段D．可与用某些限制性核酸内切酶切成的DNA片段E．只与含有互补序列的RNA片段61．下列哪个不是Southern印迹法的步骤：A．用限制性核酸内切酶消化DNAB．DNA与载体连接C．用凝胶电泳分离DNA片段D．DNA片段转移至硝酸纤维素膜上E．用一个标记的探针与膜杂交62．下列哪个不是Northern印迹法的步骤:A．从细胞和组织中提取RNAB．用凝胶电泳分离RNAC．将RNA转移到支持物上D．与核酸探针进行杂交E．将RNA反转录合成DNA63．原位杂交具有以下特点：A．不需从组织或细胞中提取核酸B．对靶序列有很高的灵敏度C．可完整保护组织与细胞的形态D．准确反映出组织细胞的相互关系及功能状态E．以上均是64．下列哪项不是探针的特点：A．要加以标记B．应是双链DNAC．只与靶核酸序列杂交D．探针长度可以是十几个碱基到几千个碱基不等E．高灵敏度65．探针的种类包括:A．基因组DNA探针B．cDNA探针C．寡核苷酸探针D．RNA探针E．以上均是66．下面哪一步不是获得基因组DNA探针的步骤：A．从基因组文库筛选得到特定基因B．克隆、扩增C．纯化D．连入表达载体E．切取插入片段67．RNA探针具有以下特点，但除外:A．采用反转录方法可以得到B．单链、杂交效率高C．杂交体系稳定D．不存在高度重复序列E．特异性高68．下面哪一步不是cDNA探针的步骤：A．从相应组织细胞直接中分离特异的cDNAB．从相应组织细胞中分离特异的mRNAC．反转录合成cDNAD．与载体连接E．切割cDNA，分离纯化69．常用的标记物有，但除外：A．放射性核素B．生物素C．荧光素D．地高辛E．NTP70．用于标记核酸探针的放射性核素主要有，但除外： A．32PB．35SC．3HD．125IE．14C71．放射性核素标记物具有，但除外：A．检测时间短B．灵敏度和特异性高C．可检出样品少于1000个分子的核酸量D．半衰期短，稳定性差E．污染环境72．非放射性核素标记物包括，但除外：B．地高辛C．荧光素D．酶E．核酸73．非放射性核素标记物具有,但除外:A．灵敏度高于放射性核素B．稳定C．经济D．实验周期短E．安全、无污染74．PCR反应体系包括，但除外：A．基因组DNA（模板)B．引物C．dNTPD．TaqDNA聚合酶E．T4DNA连接酶75．PCR技术主要应用于：A．目的基因的克隆B．基因表达与调控C．DNA微量分析D．遗传病与传染性疾病的诊断E．以上均可以76．以DNA为模板的PCR反应，具备以下条件：A．反应体系一般选用50—100μlB．引物、TaqDNA聚合酶C．4种dNTP、模板DNAD．缓冲液E．以上均是77．以mRNA为模板的PCR反应，具备以下条件：A．需将mRNA反转录生成cDNAB．反应体系一般选用20μl体积、4种dNTP、引物C．需要RNA酶抑制剂、反转录酶D．TaqDNA聚合酶E．以上均是78．关于PCR停滞的原因，取决于很多因素,但除外: A．样品模板的拷贝数B．PCR扩增效率C．DNA酶种类及活性D．dNTP的大量消耗E．非特异性的竞争因素79．用于核酸分子杂交的探针可以是放射性核素标记的： A．核糖体B．RNAC．抗体E．以上都不是80．Southern印迹是用DNA探针检测DNA片段，而Northern印迹则是： A．用RNA探针检测DNA片段B．用RNA探针检测RNA片段C．用DNA探针检测RNA片段D．用RNA探针检测蛋白片段E．用DNA探针检测蛋白片段81．用免疫化学筛选重组体的原理是：A．根据外源基因的表达B．根据载体基因的表达C．根据mRNA与DNA的杂交D．根据DNA与DNA的杂交E．根据RNA与RNA的杂交82．原位杂交包括：A．转膜杂交B．斑点杂交C．菌落杂交或噬菌斑杂交D．直接对染色体或组织的杂交E．以上均有83．外源性DNA进入菌体的方式是：A．转化B．转录C．翻译D．半保留复制E．以上都不是84．要将无粘性末端的两种平端DNA片段结合在一起，可在：A．两种片段上都接上聚（dT)尾部B．一种片段接聚（dT)尾部，另一种接聚(dA）尾部C．两种片段都接上聚（dA）尾部D．反应液中加以T4DNA连接酶E．有两项是对的85．用原核生物表达真核生物的基因存在的问题是：A．大肠细菌只能表达克隆的cDNAB．细菌不能切除原始转录物中相当于内含子的核苷酸序列C．缺乏翻译后加工机制D．表达的蛋白质常形成不溶性包涵体E．以上都正确86．常用载体有：A．质粒B．噬菌体C．病毒DNAD．大肠杆菌基因组DNAE．有3项是正确的87．构建cDNA文库时，首先需分离细胞的：A．染色体DNAB．线粒体DNAC．总mRNAD．tRNAE．rRNA88．构建DNA文库时，首先需分离细胞的：A．染色体DNAB．线粒体DNAC．总mRNAD．tRNAE．rRNA89．设计PCR的引物时，应考虑引物与模板的:A．5ˊ端特定序列互补B．5ˊ端任意序列互补C．3ˊ端特定序列互补D．3ˊ端任意序列互补E．中间序列互补90．用于鉴定转化子细胞是否含重组DNA的最常用方法是: A．抗药性选择B．分子杂交选择C．RNA反转录D．免疫学方法E．体外翻译91．下列哪一步是DNA芯片技术的最关键的环节：A．样品的准备与标记B．芯片的制备C．信号的检测D．数据分析处理E．杂交92．基因诊断常用的技术方法有：A．核酸分子杂交B．单链构象多态性分析C．DNA序列测定D．DNA芯片技术E．以上均是B型题：A．基因从原来位置转到基因组的另一位置B．噬菌体或病毒DNA进入细胞中繁殖C．外来DNA引起细胞生物学特性的改变D．移码突变E．非移码突变1．感染是指：2．转化是指：3．转位是指：4．结构基因中3个核苷酸的插入或丢失是指：5．结构基因中1个核苷酸的插入或丢失是指：A．抗药性选择B．分子杂交选择C．RNA转录D．免疫学方法E．体外翻译6．用于鉴定是否有质粒转入受体菌的一般方法是:7．用于鉴定转化子细胞是否含目的基因的常用方法：8．利用目的基因表达产物的特异抗体来筛选含目的基因的转化子细胞的方法是：A．限制性核酸内切酶B．DNA连接酶C．反转录酶D．TaqDNA聚合酶E．碱性磷酸酶9．识别DNA回文结构并对其双链进行切割的是：10．用于聚合酶链式反应的是：11．将目的基因与载体DNA进行连接的酶是：12．特异切除DNA或RNA5ˊ端磷酸的酶是：13．mRNA转录合成cDNA的酶是：A．支原体B．衣原体C．噬菌体D．细菌E．酵母14．常用作原核表达体系的是：15．常用作真核表达体系的是：A．基因组文库B．cDNA文库C．mRNA文库D．tRNA文库E．rRNA文库16．分离细胞染色体可制备：17．分离细胞总mRNA可制备：A．抗药性选择B．RNA反转录C．免疫化学方法D．体外翻译E．PCR18．对重组体内基因进行直接选择的方法是：19．通过鉴定基因表达产物筛选重组体的方法是：A．RNA聚合酶B．末端转移酶C．碱性磷酸酶D．反转录酶E．核苷酸酶20．切除DNA末端磷酸基需要用：21．在DNA3′羟基末端进行同聚物加尾需要用：22．合成cDNA需要用：A．同聚物加尾连接B．人工接头C．粘性末端连接D．缺口末端连接E．平端连接23．外源基因和载体DNA经限制性酶切后的连接属于：24．在外源基因和载体DNA末端添加同聚物序列后再进行连接属于：25．在外源基因和载体DNA末端添加短核苷酸序列,人为制造粘性末端再进行连接属于：26．需用适当的酶将DNA突出末端削平或补齐的连接属于:A．将单链DNA任意切断B．将双链DNA序列特异切开C．将两个DNA分子连接起来D．将缺口末端连接E．切除DNA末端磷酸基团27．限制性内切酶的作用是：28．DNA连接酶作用是：29．碱性磷酸酶作用是：A．某些蛋白质的结构基因B．所有基因结构C．不表达的调控区D．内含子和调节区E．外显子和调节区30．cDNA文库包括：31．DNA文库包括：32．真核mRNA包括：A．DNA聚合酶B．RNA聚合酶C．DNA连接酶D．RNA连接酶E．限制性核酸内切酶33．切除特异DNA片段：34．连接两个DNA片段:35．大量扩增DNA片段:A．反转录酶B．多聚核苷酸激酶C．引物酶D．RNA聚合酶E．末端转移酶36．催化ATP的磷酸转移到DNA或RNA的5ˊ端羟基上:37．催化单核苷酸转移到DNA的3ˊ端羟基上：38．合成cDNA:（三）问答题1．简述基因工程的主要过程.2．什么是载体？可分为几类?它们各有什么特点？3．pUC质粒有何特点？4．采用哪些方法可获取目的基因？5．目的基因与载体的连接有哪几种方法？简述其各特点?6．重组体主要有哪些筛选与鉴定方法？7．分子杂交的基本原理是什么?有哪些基本的方法？8．简述标记核酸的核素和非核素有哪几种？各自有何特点？9．何为PCR？简述其基本原理。
《基因治疗》课件
神经性疾病基因治疗案例
01
总结词
神经性疾病基因治疗案例主要通过调节神经细胞内的基因表达，改善神
经系统的功能，以达到治疗神经性疾病的目的。
02
帕金森病
帕金森病是一种常见的神经系统疾病，其基因治疗策略包括利用基因工
伦理与法律问题
01
02
03
伦理问题
基因治疗涉及到人类基因 的改变，可能引发一系列 伦理问题，如人类尊严、 基因优化的道德界限等。
法律问题
基因治疗技术的监管和法 律地位不明确，可能引发 法律纠纷和社会问题。
解决途径
建立完善的伦理指南和监 管机制，加强国际合作与 交流，共同探讨制定相关 伦理和法律规范。
04 基因治疗的挑战与前景
CHAPTER
技术挑战与解决方案
技术难题
未来展望
基因治疗技术仍面临许多技术挑战， 如精确靶向、基因导入效率、安全性 等。
随着技术的不断进步，基因治疗将有 望成为更多疾病的根治手段，为人类 健康带来更多福祉。
解决方案
通过不断的研究和技术创新，开发更 高效的基因导入载体、优化基因编辑 技术等手段，逐步克服技术难题。
详细描述
感染性疾病基因治疗涉及对免疫系统的调控，如增强巨噬细胞和自然杀伤细胞的功能，提高人体对病 原体的抵抗力。此外，基因治疗还可用于预防和治疗病毒性、细菌性和真菌性感染。
神经性疾病基因治疗
总结词
神经性疾病基因治疗旨在通过基因工 程技术，调节神经细胞的活性，改善 神经性疾病的症状。
详细描述
神经性疾病基因治疗针对帕金森病、 阿尔茨海默病、亨廷顿氏病等神经性 疾病，通过调节神经递质、神经营养 因子等基因的表达，改善症状并提高 患者的生活质量。
基因治疗ppt课件
发夹(Hairpin)状核酶的结构。 核酶和底物组成螺旋1、2及 对称的环1、5。4个螺旋包 括18个碱基对，只有一个非 正规碱基对A-G。发夹核酶 分别为2个结构域，结构域I 由螺旋1、2和环1、5组成， 结构域II由螺旋3、4和环2 、 3、4组成。腺苷酸残基 A15连接两个结构域，使它 们相互靠近相互作用，形成 催化反应所必需的三级结 构。环3被认为与催化作用 无关。
ppt课件.
2
另一类为重组1型单纯疱疹病毒。即 删除了与复制相关及非必需基因， 以减少细胞毒性，可用于宿主神经 元细胞中长期表达外源治疗基因。 但如果宿主神经元已经潜伏了野生 型单纯疱疹病毒，这就很可能重新 激活病毒而进入裂解期。
ppt课件.
3
基于此哈佛大学的姚丰博士利用病毒自身的 “反式显性失活”（trans-dominant negative）而构建了一个既可抑制自身病毒 复制，又可抑制野生型病毒复制的重组病毒。
ppt课件.
12
构建腺病毒载体系统，释放和表达端粒酶RNA反义寡
核苷酸(anti-hTR) siRNA。
（a）pAdeno-X的圆形图。此pAdeno-X载体的DNA来
源于5型腺病毒(Ad5) 基因组，通过删除了E1 和E3区
而构建。siRNA表达盒来自pSIREN克隆的PI-Sce I 和
I-Ceu I酶切片段，再将该片段插入到通过PI-SceI 和
（四）单纯性疱疹病毒载体
单纯性疱疹病毒（herpes simplex virus, HSV）基因组为152kb的双链DNA，有3个 复制起始点，3个包装信号位点。 特点： 1.缺失多个基因 仍能复制； 2.只要有包装信号，外源DNA就可 被包装入
病毒颗粒。
ppt课件.
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4.增强机体免疫能力的基因治疗
将抗体或细胞因子的基因导入肿瘤细胞以激 活体内免疫细胞的活力。 活体内免疫细胞的活力。
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二、基因治疗的一般程序 1.治疗基因的选择 1.治疗基因的选择
细胞内的基因在理论上均可用于基因治疗。 细胞内的基因在理论上均可用于基因治疗。可 有针对性地进行选择。 有针对性地进行选择。
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●
所用的靶细胞 多为自体细胞 少为经过修饰的异体细胞
● 基因导入系统
●
病毒载体系统： 逆转录病毒居首位，腺病毒次之 病毒载体系统： 逆转录病毒居首位，
●
非病毒载体系统： 非病毒载体系统：脂质体居首位
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治疗靶细胞 载
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体
四、艾滋病（AIDS） 艾滋病（AIDS）
治疗策略
反义核酸与核酶（ 反义核酸与核酶（rev, gag, nef） nef） 病毒mRNA二级结构类似物（TAR、 mRNA二级结构类似物 ● 病毒mRNA二级结构类似物（TAR、RRE 竞争性 结合调节蛋白Tat、 Rev） 结合调节蛋白Tat、 Rev） 细胞内抗体（gp120抗体 抗体） ● 细胞内抗体（gp120抗体） HIV突变蛋白 ● HIV突变蛋白 清除HIV感染细胞 免疫毒素、IFN感染细胞（ ● 清除HIV感染细胞（免疫毒素、IFN-β、自杀
三、遗传性疾病
腺苷脱氨酶（ADA） 腺苷脱氨酶（ADA）缺陷病 病 因 ADA缺陷 ADA缺陷→重症联合免疫缺陷症 缺陷→ SCID） （SCID） 骨髓干细胞 逆转录病毒
治疗靶细胞 治疗载体
人类历史上第一种应用基因治疗的疾病
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β-地中海贫血
病 因
β-珠蛋白表达失衡，溶血型贫血。 珠蛋白表达失衡，溶血型贫血。 造血干细胞。 造血干细胞。 阳离子脂质体，逆转录病毒， 阳离子脂质体，逆转录病毒， 腺相关病毒。 腺相关病毒。
1.基因组
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2.特点
●来源
莫罗尼氏鼠白血病病毒（MoMuLV) 莫罗尼氏鼠白血病病毒（MoMuLV) 鼠、人和其它动物细胞 通过外膜蛋白与靶细胞表面的磷酸 转运载体结合而感染进入细胞 转运载体结合而感染进入细胞
●感染范围 ●感染方式
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靶 细 胞
造血干细胞
优
点
缺
点
自我更新能力和分化 能力。 能力。最有前途的靶 细胞之一。 细胞之一。
骨髓中含量低， 骨髓中含量低 ， 难以 获得足够的量
皮肤成纤维细 胞 肌细胞
来源广，易扩增培养， 来源广，易扩增培养， 可以稳定表达一段时 易于移植。 间 易于吸收， 易于吸收，肌细胞内 的 溶 酶 体 和 DNA 酶 含 量 很 低 。 适 合 DNA 疫 苗治疗。 苗治疗。
9 . 2 ～ 9. 7 RNA 10kb 约10kb 较高
35 DNA 7～8kb 非常高
分裂期细胞 及非分裂期 细胞
4.6
DNA 约4kb
152 DNA 可达30kb 可达30kb 30 相对低
分裂期细胞及 非分裂期细胞， 非分裂期细胞， 嗜神经性
重组病毒 滴度 靶细胞状 态
高
分裂期细胞 及非分裂期 细胞
胞内的溶酶体和DNA酶含量也很低，质粒DNA以环状形式在胞 胞内的溶酶体和DNA酶含量也很低，质粒DNA以环状形式在胞 DNA酶含量也很低 DNA 浆中存在不整合入基因组DNA DNA， 浆中存在不整合入基因组DNA，能在肌细胞内较长时间保留
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成功用于基因治疗的靶细胞
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●逆转录病毒载体介导的基因治疗的流
程
将治疗基因克隆到逆转录病毒载体中→ 将治疗基因克隆到逆转录病毒载体中→ 筛 选转化细胞→ 转化细胞培养→ 选转化细胞→ 转化细胞培养→ 从上清中 获得重组病毒颗粒和纯化→感染靶细胞。 获得重组病毒颗粒和纯化→感染靶细胞。
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5
2. 基因的异位替代
在体外将正常基因转移到患者的宿主细胞 ， 只要求治疗基因能够替代致病基因在体内表达出 功能正常的蛋白质。是目前基因治疗的主要策略。 功能正常的蛋白质。是目前基因治疗的主要策略。
3. 直接抑制有害基因的表达
已知某一疾病基因， 已知某一疾病基因 ， 可向患者体内导入某一抑 制该基因的基因或有抑制该基因作用的核酸。 制该基因的基因或有抑制该基因作用的核酸 。 或 借助生物技术（反义RNA、 siRNA、核酶等） 借助生物技术 （ 反义 RNA、 siRNA、 核酶等 ） 抑 制或封闭该疾病基因的mRNA的功能 的功能。 制或封闭该疾病基因的mRNA的功能。
第二十一章
基因治疗
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1
第一节 第二节 第三节 第四节
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基因治疗的策略和基本程序 基因治疗中的病毒载体 基因治疗的临床应用 基因治疗的现状
2
基因治疗（gene therapy） therapy） 基因治疗（
通过一定方式将人正常或野生型（wild 通过一定方式将人正常或野生型（ type）基因或有治疗作用的DNA片段导入人 type）基因或有治疗作用的DNA片段导入人 体靶细胞以矫正或置换致病基因的治疗方法
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●
特点
◈ ◈ ◈
发病率低 基因治疗的靶基因明确 效果较好
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2.多基因心血管病
● 类型
高血压 动脉粥样硬化 心肌肥厚 心功能不全
● 特点
发病率高 发病的分子机制尚不清楚 基因治疗效果差
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21
二、腺病毒载体
DNA病毒。根据其凝血特性分为A DNA病毒。根据其凝血特性分为A-F 6个 6个 病毒 亚类，其中C亚类的2型和5型腺病毒（ 2和 亚类，其中C亚类的2型和5型腺病毒（Ad 2和Ad 5）在人体内基本上不致病，故可作为基因治疗 在人体内基本上不致病， 用载体。 用载体。
●ห้องสมุดไป่ตู้
优点 基因转移效率较高 治疗基因瞬时水平表达高
（二）病毒载体导入法
●
病毒的特点
靶细胞定向感染性 宿主细胞寄生性
●
野生型病毒改造的原则
保留感染性 去除致病性
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第二节 基因治疗中的病毒载体
一、逆转录病毒载体 二、腺病毒载体 三、主要病毒载体的特点比较 四、存在的主要缺点
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一、逆转录病毒载体（retrovirus） 逆转录病毒载体（retrovirus）
脂质体与DNA形成复合物通过内吞作用进 脂质体与DNA形成复合物通过内吞作用进 入细胞
4.阳离子多聚体 4.阳离子多聚体
阳离子聚胺与阴离子DNA形成复合物， 阳离子聚胺与阴离子DNA形成复合物，与细 DNA形成复合物 胞表面带负电荷的受体结合， 胞表面带负电荷的受体结合，通过内吞作用进 入细胞
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第三节 基因治疗的临床应用
一、恶性肿瘤 二、心脑血管性疾病 三、遗传性疾病 四、艾滋病
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一、恶性肿瘤
1.恶性肿瘤发病的分子机制 ☞原癌基因和抑癌基因的相互作用失衡 ☞肿瘤细胞逃逸了免疫监视 ☞细胞信号转导异常
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2.将治疗性基因转入细胞内
●基因转移系统
基因转移的非病毒方法(物理方法和化学方法) 基因转移的非病毒方法(物理方法和化学方法)。 基因转移的病毒方法。 基因转移的病毒方法。
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3.基因治疗的靶细胞
体细胞 包括： 包括：病变组织细胞 正常的免疫功能细胞 1） 造血干细胞 （hematopoietic stem cells） cells） ） 骨髓中具有高度自我更新能力的、 骨髓中具有高度自我更新能力的、能永久重建造血的 细胞，同时它能进一步分化为其他血细胞，并能保持 细胞，同时它能进一步分化为其他血细胞， 基因组DNA DNA的稳定 基因组DNA的稳定 2）肌细胞 ）
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三、基因治疗中基因导入的方法
(一)非病毒导入法
直接注射法 脂质体转染法
● 优点
不会整合入靶细胞的基因组中 易在靶细胞中降解
● 缺点
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1.直接注射法
将含有裸DNA（质粒） 将含有裸DNA（质粒）的溶液直接注 射入肌肉组织
●
优点 可持续表达几个月至一年 缺点
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3
第一节 基因治疗的策略和基本程序
一、基因治疗的策略 二、基因治疗的一般程序 三、基因治疗中基因导入的方法
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一、基因治疗的策略
1. 致病基因的原位置换 用正常的基因置换染色体上的致病基 因。但目前基因定向同源重组的技术还不 能达到理想的效果。 能达到理想的效果。
仅限于在肌肉组织 需要注射大量的DNA 需要注射大量的DNA 转入效率低
●
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