分子生物学遗传病基因诊断和治疗
分子生物学技术在基因诊断中的应用
分子生物学技术在基因诊断中的应用随着科学技术的飞速发展和基因研究的深入推进，基因诊断技术愈发成熟和完善，分子生物学技术也逐渐成为了基因诊断的重要方法之一。
分子生物学技术所具有的高效、高灵敏度和高特异性等特点，使其成为了基因诊断的重要手段，被广泛应用于基因相关疾病的诊断、筛查和治疗等方面，为人类健康事业做出了重要贡献。
一、分子生物学技术在基因诊断中的概念分子生物学技术主要是应用于研究物种遗传机制、基因表达调控、蛋白质结构和功能以及细胞分子机制等方面的技术手段。
而在基因诊断中，主要应用的是PCR技术、DNA测序技术、基因芯片技术和核酸杂交技术等。
1、PCR技术PCR技术，即聚合酶链式反应技术，是通过特定引物和热稳定的DNA聚合酶，对DNA片段进行大量扩增，并在扩增过程中进行定量、分型和序列检测等操作的一种技术手段。
PCR技术在基因诊断中主要应用于单基因遗传性疾病的检测、突变分析、基因多态性检测和分型等方面。
2、DNA测序技术DNA测序技术，即基因组测序技术，是通过对DNA片段进行全基因组或部分基因组的高通量测序技术，获取基因组DNA的全面信息，筛查潜在基因变异、诊断稀有疾病和进行基因组学研究等方面。
DNA测序技术在基因诊断中主要应用于遗传性疾病的突变分析和基因检测等方面。
3、基因芯片技术基因芯片技术，即基因芯片微阵列技术，通过将已知基因序列或变异数据存储在芯片上，将物种的基因信息快速获取和分析。
基因芯片技术在基因诊断中主要应用于基因突变和多态性检测、癌症基因的筛查和诊断以及基因表达谱的分析等方面。
4、核酸杂交技术核酸杂交技术，即Southern blotting技术，是通过DNA片段的特异性杂交，检测特定序列的存在和变异情况的一种技术。
核酸杂交技术在基因诊断中主要应用于基因探针的制备、分析和检测，特别是在遗传性疾病和癌症基因的诊断和研究方面发挥了重要的作用。
二、分子生物学技术在基因诊断中的实际应用分子生物学技术在基因诊断中的实际应用极为广泛，主要表现在以下几个方面：1、单基因遗传性疾病的检测和分型单基因遗传性疾病是由单个基因突变所导致的遗传性疾病，如先天性耳聋、肌萎缩性脊髓侧索硬化症和先天性遗传异常等。
重大疾病的基因诊断和治疗
重大疾病的基因诊断和治疗近年来，重大疾病已成为全球人类面临的严峻挑战之一。
在没有有效治疗手段的情况下，基因诊断和个体化治疗成为治疗疾病的一种重要方式。
下面就重大疾病的基因诊断和治疗展开论述。
一、基因诊断随着科学技术的不断发展，基因诊断已经飞速发展。
由于人每个品种生物体的基因不同，基因诊断可以非常准确的制定个体化的治疗方案。
基因诊断是利用分子生物学技术，从基因和其产物中获得人或动物患病的信息来诊断疾病。
目前常用的基因诊断技术包括PCR，基因芯片，二代测序等技术。
二、基因治疗基因治疗是通过插入、替换或靶向基因修复等方法来治疗疾病的一种新型治疗方法。
常用的基因治疗方法包括基因替换和基因修复。
（一）基因替换基因替换是将正常的基因导入到患者体内取代异常基因，使正常基因发挥作用。
这种治疗方法适用于单基因遗传性疾病，如血友病、组胺产生过度、囊性纤维化等。
（二）基因修复基因修复是通过将异位序列与患者的发生变异基因进行杂交，使基因变异修复或修正。
这种治疗方法适用于可逆性基因修复，不适用于基因缺失、基因丢失、基因活性水平下降等无法的基因修复。
三、基因诊断与治疗的意义目前各种高危人群及疾病的预警方法正在渐渐地形成。
而随着对基因和其产物的认识深入，各种疾病的治疗方式也逐步探索。
通过基因诊断和治疗，可以帮助患者及时发现疾病隐患，采取有效治疗措施，避免疾病的产生。
比如说，基因诊断能够帮助家族中有遗传病史的患者进行基因检测，了解自己患病的可能性，从而及早采取预防措施。
基因治疗目前仍处于实验阶段，但短期内它的应用前景不容乐观。
即便基因治疗可以解决问题，但尚有许多不确定性，如长期安全性、制定治疗方案的可行性等。
因此,必须进行更深入的研究,以确保基因治疗的可靠性、有效性和安全性。
另外，需要提高医务人员和公众对基因诊断和治疗的深入了解和认识，以便更好地推广和应用这种治疗方式。
总之，对于掌握新型基因诊断和治疗技术的医生，他们的发现和经验是非常宝贵的。
分子生物学与医学的关系
分子生物学与医学的关系随着时间的不断推移和技术的不断进步，分子生物学已经成为了现代医学中的一个不可或缺的组成部分。
分子生物学研究的是分子层面上生命活动的基本机制和规律，而医学则是应用这些机制和规律来治疗疾病和促进人类健康。
分子生物学研究的内容非常广泛，包括DNA、RNA、蛋白质等生物分子的结构、功能和相互作用等方面。
这些研究成果不仅为基础科学研究提供了重要的支持，在医学领域的应用也愈发广泛。
下面我们就来逐一探讨一下分子生物学与医学之间的关系。
1. 基因诊断和治疗随着基因诊断技术的不断发展，许多医学疾病的发病机理得以深入研究，基因诊断也逐渐成为了临床医学检查和诊断的重要手段之一。
例如，利用PCR技术对患者的DNA进行检测，可以确定该患者是否携带某种致病基因。
而借助基因编辑技术，还可以针对这些致病基因进行精准修正，从而达到治疗的目的。
2. 蛋白质药物的研发蛋白质是组成生物体的重要结构和功能性分子。
然而，由于其复杂多样的结构，长期以来一直被视为药物研发的难点。
但是，随着分子生物学和生物工程技术的发展，人类已经成功地开发出了多种蛋白质药物，例如利用重组DNA技术生产的人类胰岛素和肿瘤坏死因子等。
这些药物的上市，不仅扩大了药物的种类和治疗范围，而且也极大地提高了治疗效果。
3. 免疫治疗技术的发展免疫治疗是一种新型的治疗方法，通过调节人体免疫系统的功能来达到治疗疾病的目的。
而这种方法的本质就是通过研究免疫细胞的分子机制，实现对免疫系统的调控。
例如，通过研究T细胞的激活机制，科学家们成功地开发出了一种被称为“CAR-T细胞治疗”的新型免疫治疗技术，这种技术可以治疗某些特定的癌症和免疫疾病。
4. 个性化医学的实现个性化医学是一种新型的医疗模式，它通过分析人体基因组和蛋白质组等数据，实现对每个患者的个性化治疗。
而这种个性化诊疗的实现，离不开分子生物学的技术支持。
例如，现在就有一项被称为“基因组医学”的技术，它可以通过分析人体基因组，提供针对某些疾病的特异性治疗方案。
分子生物学 Ch12-tan 基因诊断与基因治疗
5、基因扩增的诊断
常采用Southern印迹杂 交定量法
关于多态性分析
基因组的核酸分子碱基排列顺序 在同种生物的不同个体之间或等位基 因之间存在差异的现象称为基因多态 性。
DNA多态性可分为位点多态性 和重复序列多态性两种。
1、限制性片段长度多态性 （restriction fragment
（1） DNA序列测定 （2）核酸分子印迹杂交 （3）聚合酶链反应（PCR）
单链构象多态性检测PCR-SSCP 限切酶酶谱分析PCR-RFLP 随机引物分析 PCR-RAPD （4） DNA芯片技术
针对不同突变类型的基因诊断 技术
1、点突变的诊断 PCR结合点杂交 DNA芯片技术 限制性片断长度多态性分析法RFLP
正常男性 先证者
142bp 99bp
女性携带者 胎儿绒毛样品
2、DNA重复序列多态性分析
（三）基因表达异常的诊断 1、mRNA的定量分析 （1）相对定量
斑点杂交
RT-PCR （2）绝对定量
2、mRNA长度分析 Northern印迹杂交
RT-PCR
三、遗传病的基因诊断
1、直接诊断策略 2、间接诊断策略
（2）可使靶细胞变成稳定表达 目的基因的转化细胞；
（3）感染靶细胞后不扩散； （4）假病毒感染靶细胞的效率 非常高；
（5）不感染非增殖细胞。
4、安全性问题 （1）感染的可能性 （2）污染的可能性 （3）在靶细胞基因组中的整合
（二）腺病毒载体 1、结构
E1A E1B L1~L5 E2B
E3
E2A
E4
（四）转染靶细胞的筛选和导 入基因的鉴定
1、选择靶细胞应考虑因素 （1）组织特异性细胞； （2）易获得、寿命长 （3）离体细胞易受外源遗传物 质转化；
生物化学及分子生物学(人卫第九版)-26基因诊断与基因治疗
基因诊断与基因治疗
作者 : 李存保 单位 : 内蒙古医科大学
目录
第一节 基因诊断
第二节 基因治疗
重点难点
掌握
基因诊断与基因治疗的概念
熟悉
基因诊断技术、基因治疗的基本策略和基本程序
了解
基因诊断和基因治疗在医学中的应用
第1节
基因诊断
一、基因诊断的概念与特点
（1） 基因诊断的概念：
是指利用分子生物学技术和方法直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而 对疾病作出诊断的方法。
（2）直接体内疗法
临床上可用于基因诊断的样品有血液、组织块、羊水和绒毛、精液、毛发、唾液 和尿液等。
三、基因诊断的基本技术
（一）核酸分子杂交技术
1. Southern 印迹法 其可以区分正常和突变样品的基因型，并可获得基因缺失或插入片段大小等信息。 DNA印迹一般可以显示50 bp～20 kbp的DNA片段，片段大小的信息是该技术诊断基因缺 陷的重要依据。 2. Northern 印迹法 Northern印迹法（Northern blot）能够对组织或细胞的总RNA或mRNA进行定性 或定量分析，及基因表达分析。Northern印迹杂交对样品RNA纯度要求非常高，限制了 该技术在临床诊断中的应用。
是以改变人遗传物质为基础的生物医学治疗，即通过一定方式将人 正常基因或有治疗作用的DNA片段导入人体靶细胞以矫正或置换致病基因 的治疗方法。它针对的是疾病的根源，即异常的基因本身。
一、基因治疗的基本策略
（一）缺陷基因精确的原位修复
1.基因矫正 gene correction 致病基因的突变碱基进行纠正 2.基因置换 gene replacement 用正常基因通过重组原位替换致病基因 这两种方法属于对缺陷基因精确的原位修复，既不破坏整个基因组的结构，又可达到治 疗疾病的目的，是最为理想的治疗方法。
基因诊断名词解释
基因诊断名词解释基因诊断是通过对个体的基因进行检测和分析，以确定其在某些遗传病、肿瘤等方面的发病风险、病因等相关信息的方法。
基因诊断是利用分子生物学技术和遗传学原理，根据个体基因组中的变异和突变来判断某些疾病的遗传风险和病因，为医学诊断、预防、治疗提供科学依据。
1. 单基因病：由单一基因突变引起的遗传病，如囊泡性纤维化、血友病等。
单基因病的基因诊断主要通过对特定基因进行测序和变异分析，寻找突变位点来确定患病风险和病因。
2. 多基因病：由多个基因共同作用引起的遗传病，如某些遗传性肿瘤、心血管病等。
多基因病的诊断需要对多个与疾病相关的基因进行检测和分析，综合考虑各基因的变异情况来判断患病风险。
3. 遗传突变：指基因组中发生的与正常序列相比有明显差异的变异，包括基因缺失、插入、缺失、替换等。
遗传突变是基因诊断的重要依据，通过分析基因组中的突变情况可以判断某些疾病的遗传风险和病因。
4. 突变检测：对个体基因组中的突变进行检测和分析的方法，包括测序、杂交等多种技术手段。
突变检测是基因诊断的核心内容，通过检测个体基因组中的突变，可以确定某些疾病的遗传风险和病因。
5. 家系分析：通过对家族成员的基因检测和分析，了解某些疾病在家族中的遗传规律和风险。
家系分析是基因诊断的重要方法之一，通过分析家族中的基因变异情况，可以预测家族成员的患病风险和病因。
6. 预测分析：依据已知的遗传变异和突变信息，利用统计学方法预测个体在某些疾病方面的遗传风险和患病可能性。
预测分析是基因诊断的一种重要手段，可以根据个体基因组中的变异情况，预测其在某些疾病方面的遗传风险。
基因诊断在预防、诊断和治疗疾病方面具有重要意义。
通过对个体基因组的分析，可以准确判断个体在某些疾病方面的遗传风险和患病可能性，为个体提供个体化的医学干预措施，从而有效预防和治疗疾病，提高生活质量和健康水平。
分子生物学在疾病诊断中的应用
分子生物学在疾病诊断中的应用近年来随着科技的飞速发展，分子生物学在医学领域的应用越来越广泛。
通过研究分子水平上的生物信息，我们可以更好地理解疾病的发生机制并且开发出更准确、更有效的诊断方法。
本文将探讨分子生物学在疾病诊断中的应用，并介绍一些重要的技术和方法。
一、基因变异与遗传性疾病基因是生物体内负责遗传信息传递的重要分子，而基因的突变和变异与一些遗传性疾病的发生密切相关。
通过分子遗传学研究，我们可以了解不同基因的突变与具体疾病之间的关系，并且可以为患者提供相关的遗传咨询与检测。
例如，卡尔曼综合征是一种遗传疾病，往往由一种特定基因的突变引起。
通过对患者基因的检测，我们可以确定其是否携带这种突变，从而为早期诊断和治疗提供依据。
此外，一些常见疾病如糖尿病、高血压等也与多个基因的变异有关，通过分子生物学的方法，我们可以对患者基因进行筛查，预测患病风险，以指导临床诊断和个体化治疗。
二、肿瘤标志物的检测与肿瘤个体化治疗肿瘤是一个复杂的疾病，不同的肿瘤类型和亚型往往有不同的生物学特征和临床表现。
通过分子生物学的技术，可以检测和分析肿瘤细胞内的特定标志物，从而帮助医生进行肿瘤的早期诊断与分型。
例如，乳腺癌患者可以通过检测HER2基因是否表达过度来确定是否适合使用靶向HER2药物进行治疗。
此外，EGFR基因突变是非小细胞肺癌中常见的突变，通过分子生物学的方法，在临床上可以选择适合的靶向治疗方案，提高治疗效果。
除了检测标志物，分子生物学的技术也可以用于分析肿瘤细胞内的突变情况。
通过对肿瘤基因组的全面测序，可以了解肿瘤细胞中存在的突变类型和频率，进而为患者提供个体化的治疗方案。
目前，肿瘤基因组学已经成为肿瘤诊断和治疗的重要手段之一。
三、感染病的分子诊断分子生物学技术对于感染病的诊断也起到了重要作用。
传统的细菌和病毒的培养方法耗时长且有一定的局限性，而分子生物学的方法可以通过对病原体核酸的检测来快速准确地确定感染的种类和量。
分子生物学讨论课-遗传病基因诊断
生物芯片技术：
根据生物分子间特异性相互作用，
将生化分析过程集成于芯片表面，从而实
现对DNA、RNA、多肽、蛋白质等各种生物
成分的高通量快速检测分析。
常见芯片种类：
疾病诊断芯片 个性化用药芯片
景 广 阔芯 的片 基技 因术 诊是 断应 技用 术前
DNA
基因诊断策略
在分子发病机制水平上对 不同疾病的区分 诊断策略各不相同
基因诊断常用的分子生物学技术
核酸分子杂交 聚合酶链反应（PCR） DNA序列测定 生物芯片/DNA芯片 单链构象多态性（SSCP） 限制性片段长度多态性（RFLP
） 单核苷酸多态性（SNP）
进应
行用
核酸分子杂交基本原理：
基核
——核酸变性和复性理论 和因酸
分的分
核酸分子杂交 基本过程
5. (- 3.7 / --SEA ) 2.0kb; 1.3kb
6. (/--SEA )
1.8kb; 1.3kb
-珠蛋白基因型 PCR产物片段长度
•- 3.7 •
2.0kb 1.8kb
临床报告单－－样式
α-地中海贫血点突变基因检测
临床意义：
作为 -地中海 贫血三种缺失型的 补充，对怀疑 地中海贫血有漏诊 的患者进行 CS、 QS、 WS点突变 的诊断（课同时检 测），确定具体的 基因突变类型
临床β-地中海贫血基因诊断结果判读
654M/71-72M 17M/N βEM/βEM 41-42M/N
临床报告单－－样式
α-地中海贫血
α地中海贫血的 基因缺陷主要为缺失 型，α基因共有四个 (父源和母源各两个)， 缺失一个为静止型， 缺失两个为标准型， 缺失三个为HbH(β4) 病，缺失四个为 HbBarts(γ4)胎儿水肿 (死胎)。
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遗传病的诊断与肿瘤基因治疗
遗传病的基因诊断
一、什么是遗传病
• 遗传病是指完全或部分由遗传因素决 定的疾病，常为先天性的，也可后天 发病。
遗传病的类型
• 1、染色体病或染色体综合征：遗传物质的改变在 染色体水平上可见，表现为数目或结构上的改变。 • 2、单基因病：指一对等位基因的突变导致的疾病， 分别由显性基因和隐性基因突变所致。 • 3、多基因病：涉及多个基因起作用，与单基因病 不同的是这些基因没有显性和隐性的关系，每个 基因只有微效累加的作用，因此同样的病不同的 人由于可能涉及的致病基因数目上的不同，其病 情严重程度、复发风险均可有明显的不同，且表 现出家族聚集现象，环境的影响较为显著。
镰刀状红细胞贫血（Hbs）
• 异常血红蛋白β链的第6位谷氨酸被缬氨酸 所代替。这个疏水氨基酸正好适合另一血 红蛋白分子β链EF角上的“口袋”，这使两 条血红蛋白链互相“锁”在一起，最终与 其他血红蛋白链共同形成一个不溶的长柱 形螺旋纤维束，使红细胞扭旋成镰刀形。
诊断方法
• 镰刀形细胞性贫血症的基因诊断可采用 PCR-限制性内切酶谱分析法。 • 先用PCR从患者基因组DNA扩增含突变位 点的珠蛋白基因片段。 • 再选择适当的限制性内切酶水解PCR产物, 根据酶切产物在电泳图谱上的片段数量和 大小做出判断.也可与特意的寡核苷酸探针 进行Southern印记杂交分析,根据杂交图谱 做出判断.
脆性X染色体综合征基因诊断
•常用的方法： （1）PCR—ASO （2）DNA连锁链分析 （3）Southern印迹杂交法 （4）PCR扩增
成年型多囊肾病
• 成年型多囊肾病是一种常染色体显性遗传病，发病率高， 约1000人中有1名致病基因的携带者，起病较晚，多在30 岁以后，主要为肾和肝中出现多发性囊肿，临床表现为腰 疼、蛋白尿、血尿、高血压、肾盂肾炎、肾结石等，最终 可导致肾功能衰竭和尿毒症。 • 诊断：本病基因定位在16p13，与α珠蛋白基因3’端相 邻，但致病基因尚未克隆，基因产物的生化性质和疾病发 病机理也尚未阐明。因此，只能用连锁分析来进行基因的 发病前诊断和产前诊断。由于通过家系分析，已证实 APKD的致病基因与α珠蛋白基因3’端附近的一段小卫星 DNA序列即3’HVR(3’ hypervariable region)紧密连锁，而 后者在人群中具有高度多态性，因此可以通过RFLP连锁 分析进行诊断。
4.限制性片段长度多态性
• 该技术是利用限制性内切酶能识别DNA分子的 特异序列，并在特定序列处切开DNA分子，即产 生限制性片段的特性。 • 如果重排、缺失或者核苷酸置换使内切酶识别 序列变成了不能识别序列或是这种差别使本来不 是内切酶识别位点的DNA序列变成了内切酶识别 位点。这样就导致了用限制性内切酶酶切该DNA 序列时，就会少一个或多一个酶切位点，结果产 生少一个或多一个的酶切片段。这样就形成了用 同一种限制性内切酶切割不同物种DNA序列时， 产生不同长度大小、不同数量的限制性酶切片段 这种变化即可作为诊断指标。
发展过程
• 1、利用连锁分析和关联分析定位遗传病致病 基因； • 2、利用分子杂交技术进行遗传病的基因诊断； • 3、利用PCR技术进行遗传病的基因诊断； • 4、基因芯片用于基因诊断； • 5、利用外显子组捕获技术诊断单基因遗传病； • 6、利用全基因组（GWAS）关联分析定位及 诊断多基因遗传病易感基因
7.生物芯片
• • 又称为基因芯片(gene chip)、DNA微阵列
(DNA microarray)
DNA芯片技术基础是核酸分子杂交
应用微电子加工工艺，在玻璃、塑料、硅片等材 料上制备用于生物样品分离、反应或分析的微细结构 目前主要有两大类：
1. 生物活性微阵列 (bioactive microarray) 2. 基因芯片 (gene chip), DNA微阵列 (DNA microarray)
甲型血友病的基因诊断
•1. 1.F Ⅷ基因到位的DNA印记分析： 1）将基因组用限制性内切核酸酶消化 2）用特异探针杂交，放射自显影分析 •2. F Ⅷ基因突变直接检测： 1）依赖于F Ⅷ基因内或旁侧的多态性的连锁分析 2）RFLP连锁分析 3）VNTR分析 4）STR连锁分析 对于甲型血友病进行基因诊断首先寻找有无基因到位，其 次利用基因内的遗传标志进行连锁分析，最后采用PCR— SSCP或PCR—DGGE分析。
二、基因诊断
• • • • • • 1.基因诊断概念 2.基因诊断特点 3. 基因诊断应用范围 4、基因诊断的发展过程 5、基因诊断遇到的问题 6、遗传病基因诊断的注意事项
基因诊断定义
• 某些受精卵或母体受到环境或遗传等的影 响，引起的下一代基因组发生了有害改变， 产生了疾病，为了有针对性的解决和预防， 故需要通过实验室的基因诊断、基因分析 才能得到确认。又称DNA诊断或分子诊断。
3.单链构象多态性
• 单链DNA呈现一种由内部分子相互作用 形成的三维构象，这种构象由碱基顺序决 定。碱基变异则构象改变。而构象影响了 DNA在非变性凝胶中的迁移率。相同长度 但不同核苷酸序列的DNA由于在凝胶中的 不同迁移率而被分离。迁移率不同的条带 可被银染或者荧光标记引物检测，然后用 DNA自动测序进行分析。
包括多肽、蛋白质、病毒、 细胞等。 蛋白质芯片可直接从体液中检测生物分子（免疫芯 片只需少量样品可一次完成对成千上万种抗原或抗 为最重要的生物芯片，广泛用于基因表达谱分析、 体等致病因素或生物样品的检测分析 )。 新基因发现、基因突变及多态性分析、疾病诊断、 药物筛选、基因测序等。
9.环介导等温核酸扩增技术
脊髓小脑性共济失调
• 脊髓小脑性共济失调是以小脑性共济失调为主要症状的 常染色体显性遗传性疾病，病理改变以小脑、脊髓、脑干 变性为主，临床主要特征为小脑性共济失调，可伴有构音 障碍、震颤、锥体束征以及痴呆等。 • 诊断：依据神经系统临床检查的程序来判断患者是否存 在小脑及脊髓神经失调的临床体征，然后会查问他的家族 史（包括已故的亲人），最后结合磁共振（MRI）及基因 测试，排除其他累及小脑和脑干的变性病，才能判断患者 是否患上脊髓小脑性共济失调。
• 其特点是针对靶基因的6 个区域设计4 种特异引物,利用一种链置换DNA 聚合酶 (Bst DNA polymerase) 在等温条件(65 ℃左 右) 保温几十分钟,即可完成核酸扩增反应
10.免疫组织化学诊断
• 对于某些基因表达水平发生改变的疾病 可以采取免疫组织化学方法进行诊断，优 点是在不改变细胞结构的情况下，对基因 表达终产物——蛋白质水平及细胞中的部 位进行分析
6.单核苷酸多态性和全基因组关联分析
•单核苷酸多态性： 主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的 变异所引起的DNA序列多态性。
全基因组关联分析——英 文名字叫Genome-wide association study简称 ——GWAS 全基因组关联分析— —是指在人类全基因组范 围内找出存在的序列变异， 即单核苷酸多态性 （SNP），从中筛选出与 疾病/性状相关的SNPs。
三、基因诊断方法
• • • • • • • • • • • 1.核酸分子杂交 2.聚合酶链反应 3.单链构象多态性分析 4.限制性片段长度多态性连锁分析 5.DNA序列测定 6.单核苷酸多态性和全基因组关联分析 7.生物芯片 8.WESTERN免疫印迹 9.环介导等温核酸扩增技术 10.免疫组织化学诊断 11..外显子组捕获技术
遗传病的基因诊断
以血红globinopathy）是由于 血红蛋白分子结构异常（异常血红蛋白 病），或珠蛋白肽链合成速率异常（珠蛋 白生成障碍性贫血，又称海洋性贫血）所 引起的一组遗传性血液病。 • 临床可表现溶血性贫血、高铁血红蛋白血 症或因血红蛋白氧亲和力增高或减低而引 起组织缺氧或代偿性红细胞增多所致紫绀。
• 外显子捕获(exon trapping) 是构建一种载体， 从其插入片段中识别和回收外显子序列， 从而克隆目的基因。
遗传病的基因诊断
————典型案例
主要内容
• 甲型血友病
• 脆性X染色体综合征 • 成年型多囊肾病 • DMD/BMD的缺失型 • 脊髓小脑性共济失调
甲型血友病
•血友病为一组遗传性凝血功能障碍的出血 性疾病。其共同的特征是活性凝血活酶生成 障碍，凝血时间延长，终身具有轻微创伤后 出血倾向，重症患者没有明显外伤也可发生 “自发性”出血。 •血友病可分为甲型、乙型、丙型和血管性 假血友病 4 种。其中甲型发病率占人类先天 性血液系统疾病的 85% 。甲型血友病，即因 子Ⅷ促凝成分（Ⅷ：C）缺乏症，也称 AGH 缺乏症，是一种性联隐性遗传疾病，女性传 递，男性发病。 •甲型血友病的基因诊断主要鉴定患者家系 中的携带者或对未出生的胎儿进行产前诊断。
异常血红蛋白病
• 镰刀状红细胞贫血（Hbs） • 不稳定血红蛋白病（unstable hemoglobinpathies） • 血红蛋白M病（HbM） • 氧亲和力改变的血红蛋白病
地中海贫血
• α地中海贫血（α-thalassemia,简称α地贫） • β地中海贫血（β梩halassemia,简称β地贫）
基因诊断的特点
• • • • 高特异性 高灵敏度 早期诊断性 应用广泛性
基因诊断应用范围
• 1.检测病原生物的侵入，如肝炎、艾滋病等 • 2.诊断先天遗传性疾患，产前诊断——优生 学 • 3.检测后天基因突变引起的疾病，如肿瘤 • 4.其他比如亲子鉴定，法医物证
基因诊断的发展过程
1976年美籍华裔科学家简悦威应用液相DNA 分子杂交技术成功地进行了镰形细胞贫血症 的基因诊断 ——标志着人类遗传性疾病诊断开始进入 基因诊断的新时代
限制性内切酶
• • • • • • 采集制备血液DNA 内切酶MstⅡ消化 电泳 转膜 P32标记的β珠蛋白cDNA杂交 放射自显影
PCR/限制性内切酶
• • • • • • 设计引物 PCR扩增 产物进行限制性内切酶酶切 电泳 EB染色 直接观察