微生物分子生物学技术
分子生物技术在环境工程微生物领域中的应用
分子生物技术在环境工程微生物领域中的应用摘要：随着农业和工业技术的发展以及生产力的提高，开发和使用了许多具有新的物理、化学和生物特性的新物质，这既有益于人类，又对人类环境产生了不利影响。
此外，一些污染物在环境中生物转化，某些有毒物质(如甲醛)的诱变、致畸和致癌性质已经对人类健康和生命构成严重威胁。
将不再满足现代环境工程发展需要的现有环境管理技术相结合，使分子生物技术得以引入环境工程，并找到了解决这些环境问题的新方法。
以DNA技术为指导的分子生物技术在解决这些环境问题方面具有独特的优势，正在逐步取代旧的环境污染管理方法。
二者的结合已成为环境工程领域研究和实践的主要焦点。
关键词：分子生物技术；环境工程；应用措施引言微生物学是一门与其他学科密切相关的重要学科，具有跨领域特点，可以为这些学科的发展提供不同的支持。
通过分析和研究，分子生物技术在微生物领域的应用与环境工程相结合，可以在环境工程领域提供巨大的价值和实际指导。
目前分子生物技术的应用不够广泛，相关的技术能力需要进一步提高，这就需要进一步分析和研究其具体应用。
1城市环境保护污水治理的意义目前社会发展与城市建设中，一个直观的问题便是环境污染、资源浪费，因为我国人口基数比较大，所以实际上人均水资源占有量比较少。
工业与城市化的飞速发展，致使水资源短缺成为城市环境保护中需要重点解决的问题，而且会对现代化进程形成制约，由此也可以肯定水资源治理工作的必要性。
城市生态环境监测期间，发现城市污水排放直接威胁到群众日常生活，也会对生态环境保护带来非常恶劣的影响[1]。
生产与生活污水排放缺乏合理性，城市附近区域的水域水质较差，而且水中生物越来越少，污水的不合理排放还会产生部分恶臭气味，污染大气环境，污水中的有害物质在食物链、水循环作用下回归，从而危害到人们的人身安全。
所以，基于生态环境监测的城市环境保护工作、污水治理十分必要。
2城市环境工程污水治理的现状现阶段国内缺乏完整的污水治理管理制度，缺乏完整的污水管理系统，在参与污水治理管理时，并未形成良好的监督管理体系。
分子生物学技术在病原微生物检验的应用——医疗小常识科普
分子生物学技术在病原微生物检验的应用——医疗小常识科普最近几年，由于科学技术的迅猛发展，在病原微生物检测过程中，利用分子生物学技术在某种程度上，大大推动了向新型微生物经验方法的转变。
其在检测微生物上面应用很广泛，而且优势也日益突出，分子生物学技术能够通过对生物大分子功能、机理和生物合成的研究，达到检测的目的，从而提高检测的准确性。
今天，将为大家带来一些有关分子生物技术的相关应用介绍，让我们来一起了解一下。
一、什么是分子生物学技术？在生物研究领域中，由于生物技术的进步，人们对生物的认识正逐步向微观层面推进。
对生物体的研究早已由生物体深入到了器官组织上，再到更微小细胞，从微小的细胞结构又深入到了核酸和蛋白的分子水平上来，人们发现可以通过检测分子水平的线性结构将同物种进行横向对比，从而发现同一物种不同个体和不同生理状态的区别。
这就为生物学和医学的各个领域提供了一个强有力的技术平台。
分子生物学是一种基本的技术科学。
主要从事RNA、 DNA、蛋白质的结构、功能调节以及对它们之间的联系和作用等进行研究，是一种新的微生物检测手段，通过这种手段，可以使检测对象更加广泛，检测结果更加准确。
二、分子生物学技术的优点是什么？近几年，分子生物学已被广泛地用于微生物检测，并取得了很好的成效，并受到有关科研单位和有关部门的一致好评，对农业、医药、食品工业的迅速发展起到了巨大的推动作用。
在微生物检验领域属于一种全新的技术，该技术的应用扩大了微生物的检验范围，在对病原菌进行检测的时候，一般会使用到PCR（聚合酶链式反应）技术、基因芯片技术、蛋白质指纹图谱技术和核酸探针技术等等，为微生物的检验提供了新的途径，使诊断更加快速、简便和准确。
从而推动生物研究的可持续发展。
三、在病原微生物检验中生物分子学技术的具体应用1、PCR（聚合酶链式反应）技术PCR是一种在生命科学中被广泛应用的分子生物学技术，该技术是由延伸、退火、变性等几个反应构成，利用体外酶促进 DNA片段的生成，经过这些反应的持续循环最终达到对 DNA扩增的目的。
分子生物学技术
分子生物学技术第一篇：分子生物学技术简介在现代生物学领域中，分子生物学一直在成为一个重要的分支。
分子生物学技术是指通过利用生物大分子（如核酸和蛋白质）的结构、功能和相互作用，并且应用各种技术手段来研究生物学各个领域的过程和现象。
分子生物学技术包括PCR（聚合酶链式反应）、基因组学技术、蛋白质质谱分析、基因编辑技术、CRISPR等。
此外，还有一些深入研究细胞活性和生物分子间相互作用的技术，例如免疫共沉淀、GST pull down等。
PCR技术是现代分子生物学技术的里程碑，被视为分子生物学的“基石”。
PCR技术可以扩增植物、微生物、动物、人类细胞和组织等物种的DNA，并且可以在非常短的时间内扩增一个非常小的DNA片段。
基因组学技术可以检测质粒、细胞、生物样本和组织的基因及其表达的情况。
现代基因组技术已经可以读取大量的基因及其表达信息，可以用于检测一个物种内所有的基因序列，在了解生物基因前提下解析该基因在生物的功能和表达规律。
蛋白质质谱分析可以检测蛋白质组之间的差异，并且可以帮助研究蛋白质结构、功能和相互作用。
基因编辑技术与CRISPR技术相连接，使科学家们能够快速高效地进行基因操纵。
基因编辑技术可以通过人工改变基因，使得特定的序列发生变化，可以用于研究基因的功能和基因治疗等领域。
总的来说，分子生物学技术的发展促进了现代生物学的发展。
无论是学术研究，还是未来医疗、工业和农业领域的应用，都需要分子生物学技术作为基础技术。
第二篇：PCR技术详解PCR是（聚合酶链式反应）的缩写，这是一种灵活、快速、高效、精准的分子生物学技术，用于扩增DNA的特定序列。
PCR技术不仅广泛用于分子生物学研究，还应用于医学、环境监测、食品安全等领域。
PCR技术采用酶促反应而不需要细胞培养或动物宿主，因此可以作为一项独立、快速和低成本的实验技术来进行DNA扩增。
PCR技术的关键在于利用一组半保留的引物（一小段DNA 序列）来选择性扩增在引物之间的目标段。
分子生物学方法在食品微生物检测中的应用
一、概述食品安全一直是人们关注的重点问题，而微生物污染是导致食品安全问题的重要原因之一。
食品微生物检测技术的发展对于保障食品安全具有重要意义。
分子生物学方法由于其高度特异性和灵敏度，在食品微生物检测中得到了广泛的应用。
本文将就分子生物学方法在食品微生物检测中的应用进行探讨，旨在为食品安全领域的研究和实践提供参考。
二、分子生物学方法在食品微生物检测中的应用1. PCR技术2. 实时荧光PCR技术3. 微阵列芯片技术4. 基因测序技术5. 其他新兴分子生物学方法三、分子生物学方法在食品微生物检测中的优势与挑战1. 优势1.1 高度特异性1.2 高度灵敏度1.3 快速性1.4 可定量性2. 挑战2.1 样品前处理的标准化2.2 数据分析的标准化2.3 成本控制四、分子生物学方法在特定食品微生物检测中的应用案例1. 肉制品中致病菌的检测2. 奶制品中乳酸菌的检测3. 水产品中霉菌的检测4. 蔬果制品中寄生虫的检测5. 其他食品中常见微生物污染的检测五、分子生物学方法在食品微生物检测中的未来发展1. 新技术的不断涌现2. 多重技术的融合应用3. 检测标准的国际统一4. 自动化、智能化的检测设备的发展六、结论分子生物学方法在食品微生物检测中的应用已经取得了显著的成果，为食品安全领域的进步作出了重要贡献。
随着技术的不断进步和发展，相信分子生物学方法在食品微生物检测中将会发挥越来越重要的作用，为保障人们的饮食安全提供更为可靠的技术支持。
希望该领域的科研人员和实践者能够不断探索创新，共同致力于食品安全事业的发展。
七、分子生物学方法在食品微生物检测中的优势与挑战分子生物学方法在食品微生物检测中具有诸多优势，首先是高度的特异性。
传统的微生物检测方法可能对多种微生物都具有一定的反应，而分子生物学方法可以设计特异性的引物或探针，只对目标微生物进行检测，避免了其他微生物的干扰，提高了检测的准确性。
其次是高度的灵敏度，分子生物学方法可以检测到微生物的极低浓度，可以在微生物含量较低的食品样品中提高检测的准确性和可靠性。
分子生物学技术在临床微生物检验中的应用
分子生物学技术在临床微生物检验中的应用一个人如果出现感染之后，医生都会为病人先做微生物学感染诊断。
以明确疾病感染物。
以往的检验方式通常都是比较单一的，一般都是采用类似于酶活性等相关特征来进行检验。
这种检验手段很难满足现代微生物检验的需要，同时也很难达到预期检验要求。
可以说存在着一些弊端。
采用分子生物学技术来检验便能突破传统检验中的一些难题。
今天就为大家做一番介绍。
一、质粒指纹图分析法质粒指纹分析技术是目前临床微生物检验中最常用的一种技术，这种技术最大的优点就是能通过技术分析来病菌纹图来进行分析，然后再结合不同的病菌图纹来找出相对应的感染源。
因而，这一种检验方法，才能够被越来越多的人们所熟悉。
在进行检验检疫的过程中，医学人士首先对病人做抽提纯化质粒DNA工作，然后在对纯化质粒DNA做检验，经琼脂糖凝胶电泳之后的DNA分析，根据分子量大小来作分析，以质粒指纹图来做判断，这也是一个重要的一个标志。
这也帮助医学人士更好来做分析。
如：医学人士可以利用紫外灯来进行光照检测，而在等下可看见菌群下呈现一条条，或者是多条质粒带构成突破。
这即是质粒指纹图形。
质粒指纹技术可用于检测多种不同的病菌，同时还能够用于分析类似于革兰阴性菌在不同的属的、种间之间的传播，目前也主要用到革兰阳性菌之中，如：金黄色葡萄球菌等。
主要还是因为凝固酶阴性葡萄球菌常含有数个不同的质例等。
质粒指纹图分析主要原理是根据质粒大小与数理相同的菌株，这其中还是有很多相似的图形，即质粒指纹图。
当细菌有多个质粒，特别就是在分子量还较小的时候，质粒指纹图就成为一个相对的稳定的标志。
二、染色体DNA指纹图分析染色体DNA指纹图分析是一种现代生物检验技术，这种技术最早被著名遗传学家Jefferys及其合作者所发明出来，当时，Jefferys与众多学者在前人的研究基础上，将离析的提取出来的人源小卫星DNA使用到检验当中，即采用基因探针检验，然后，与人体里面所提取出来的的核DNA的酶切片段作杂交处理，最终获取了几个位点上的等位基因组成的长度不相等的杂交带图纹，这一种图纹一般来说都是很少出现完全相同的图谱，因而也就能够帮助医学人士开展医学研究工作，因此在当时也被称之为"DNA指纹"。
分子生物学在微生物检验中的应用(精)
分子生物学在微生物检验中的应用南京军区福州总医院全军临床检验研究所兰小鹏21 世纪是以分子生物学为代表的生命科学的时代，近年来,随着现代生物技术的快速发展,人类基因组计划的完成,尤其是生物化学、免疫学、生物仪器及计算机理论与技术的进步，分子生物学技术在医学、遗传学、法医学、生物学等各个领域广泛应用, 新的诊断技术和方法不断涌现并被广泛应用于微生物检测，为传染病的流行病学调查、基因的多样性、微生物的生物学特性、微生物的致病性和药物的耐受性、微生物的生物降解能力等各个方面提供了重要的信息。
一．核酸杂交法最初应用于微生物检测的分子生物学技术是基因探针方法,它是用带有同位素标记或非同位素标记的DNA 或RNA 片段来检测样本中某一特定微生物核苷酸的方法。
核酸杂交有原位杂交、打点杂交、斑点杂交、Sorthern杂交、Northern杂交等,核酸分子探针又可根据它们的来源和性质分为DNA探针、cDNA探针、RNA探针及人工合成的寡聚核苷酸探针等。
其原理是通过标记根据病原体核酸片段制备的探针与病原体核酸片段杂交,观察是否产生特异的杂交信号。
核酸探针技术具有特异性好、敏感性高、诊断速度快、操作较为简便等特点。
目前,已建立了多种病原体的核酸杂交检测方法,尤其是近年来发展起来的荧光原位杂交技术(FISH) 更为常用。
二．质粒DNA图谱分型技术细菌质粒分析是较早被使用的对病原微生物流行病学进行调查的分子分型技术。
这种技术包括萃取质粒DNA ,通过琼脂糖凝胶电泳分离DNA。
由于不同菌株质粒DNA序列和大小不同,通过琼脂糖凝胶电泳分离得到的DNA质粒图谱也将不同,因此,与流行病相关的分离株能够被分类分型。
质粒图谱分析的再现性和分辨力可通过限制性内切酶消化质粒而提高。
虽然2个不相关质粒有相同的分子量, 但性内切酶位点的位置和频率是不同的。
但质粒是可移动的非染色体遗传物质,细菌能自发的失去或很容易的获得,结果流行病相关的菌株可以展示不同质粒指纹图谱。
分子生物学技术在微生物鉴定和分类中的应用
分子生物学技术在微生物鉴定和分类中的应用【摘要】随着分子生物学的发展和应用，微生物的鉴定和分类逐渐提高到了一个新的水平。
本文简要介绍了分子生物学技术在微生物鉴定和分类中的应用，包括DNA（G+C）mol%值、核酸杂交技术、核酸序列分析以及DNA 分子标记技术等，以期为相关研究提供一定的理论参考。
【关键词】分子生物学技术；微生物鉴定；核酸传统微生物鉴定和分类技术主要是依据微生物细胞形态与生活习性等进行比较从而确定其分类地位的，这些方法存在一定误差，因为即使是同一种微生物，其形态及生理生化性状等都可能存在一定的差异，很难准确鉴定。
目前分子生物学技术发展迅速，通过对微生物基于核酸水平的研究，从而对其进行鉴定和分类，其简便、快速、高效、可靠的特点，是传统微生物鉴定和分类方法所达不到的，其鉴定结果更具有说服力。
目前利用分子生物学技术进行微生物鉴定和分类的常用方法主要有：DNA（G+C）mol%值、核酸杂交、核酸序列分析以及DNA分子标记等。
1 DNA（G+C）mol%值每一种微生物的DNA均有特定的（G+C）mol%值，不同微生物的（G+C）mol%值各不相同。
若微生物种间亲缘关系较远，则（G+C）mol%值差别较小，反之差别较大。
微生物的（G+C）mol%值一般是恒定的，不受菌龄、突变因素以及生长条件等因素的影响，所以DNA的（G+C）mol%值测定在微生物鉴定和分类中具有一定的应用价值。
虽然DNA （G+C）mol%值可以作为鉴定微生物的一个重要依据，但也不是绝对的。
有研究表明，具有相同或相近的DNA（G+C）mol%值的微生物并非一定就是相同或相近的种属，甚至完全不同种属的微生物也可能有相同或相近的DNA（G+C）mol%值。
2 核酸杂交技术核酸杂交技术广泛应用于基因工程方面的研究，同时也广泛应用于微生物的鉴定和分类。
目前，采用DNA-DNA核酸杂交技术在系统发生关系上进行鉴定和分类的菌株有70%以上，应用较多的技术包括DNA印迹技术、RNA印迹技术、斑点杂交技术、原位杂交技术等。
现代分子生物学技术在食品和药品微生物检测中的应用
现代分子生物学技术在食品和药品微生物检测中的应用随着现代生物技术的不断发展，分子生物学技术在食品和药品微生物检测中的应用越来越广泛。
分子生物学技术以其高效、灵敏、特异和可靠的特点，已成为食品和药品微生物检测领域的重要手段。
本文将重点介绍现代分子生物学技术在食品和药品微生物检测中的应用现状以及未来发展趋势。
现代分子生物学技术在食品微生物检测中的应用已经取得了显著成就。
以PCR技术为代表的分子生物学技术，可以对食品中常见的微生物污染源进行快速检测，包括大肠杆菌、沙门氏菌、霉菌和酵母菌等。
PCR技术具有高度的特异性和灵敏度，可以在短时间内检测出极低浓度的微生物污染，从而保证了食品的安全性。
PCR技术还可以用来鉴定食品中的潜在病原微生物，如变形虫、弓形虫等，为食品安全提供了有力的保障。
除了PCR技术，分子生物学技术在食品微生物检测中的应用还包括了基因芯片技术、实时荧光定量PCR技术、微生物基因组测序技术等。
这些技术的应用不仅提高了食品微生物检测的效率，还为食品生产企业提供了更多的选择和保障。
通过这些先进的分子生物学技术，食品企业可以更及时地发现并清除食品中的微生物污染，保障了公众的健康和安全。
现代分子生物学技术在药品微生物检测中也发挥着重要作用。
药品微生物检测是药品生产过程中的重要环节，其结果直接关系到药品的质量和安全。
传统的药品微生物检测方法主要依靠培养技术，其检测过程缓慢、复杂，且存在着假阳性和假阴性的问题。
而现代分子生物学技术的应用，有效地解决了这些问题。
利用PCR技术、基因芯片技术和实时荧光定量PCR技术等技术，可以快速、准确地检测药品中的细菌和真菌等微生物污染。
这些技术不仅大大提高了药品微生物检测的效率和准确性，还为药品生产企业提供了更好的质量控制手段。
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一、质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳（一）碱变性法提取质粒DNA质粒(Plasmid) 是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。
带有遗传信息，可赋予细菌某些新的表型。
将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。
质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。
分离和纯化质粒DNA的方法很多,但这些方法基本包括三个步骤：即细菌的培养和质粒DNA的扩增，细菌菌体的裂解; 质粒DNA的提取与纯化。
本实验学习用碱变性方法提取质粒DNA。
【原理】细菌培养物加入SDS和NaOH 碱性溶液处理后，菌体裂解，可使细菌的质粒DNA、染色体DNA和RNA 一起从细胞内释放出来，经琼脂糖凝胶电泳，因各种核酸分子的迁移率不同将上述核酸分成不同的带。
用溴化乙锭（EB）染色后，在紫外线灯下可看到各种核酸带发出的荧光。
根据荧光的位置，可区分不同的核酸带。
【材料】1．菌株E.coli JM109（pUC19），E.coli RRI（pBR322）2．试剂溶液Ⅰ( 50 mM葡萄糖, 25 mM Tris.Hcl PH 8.0, 10 mM EDTA)溶液II ( 0.2 N NaOH，1%SDS) 用前新配制溶液III ( 5 mM KAc溶液PH4.8)TE缓冲液(10mMTris.Hcl ,1mMEDTA PH8.0)LB液体培养基( 胰蛋白胨10g,，酵母粉5g, Nacl 10g. 加蒸馏水溶解，用NaOH调PH 至7.5，加水至1000 ml,15磅高压灭菌15分钟)。
【方法】1．接种细菌于5ml LB液体培养基中，370C培养过夜。
2．3000 rpm/min,离心15min，弃上清。
加入100ul 溶液1悬起细菌沉淀。
3．加入200ul前新配制的溶液II ，颠倒EP管5次混合均匀，置冰浴2min。
4．加入150ul溶液III温和地混匀，12000 rpm/min,离心5min。
5．吸取上清清亮裂解液放入另一新EP 管中，加等体积酚-氯仿-异戊醇抽提2次，12000 rpm/min,离心2min。
（若不做酶切，此步可省略）吸取上清放入另一新EP 管中，加入二倍体积的冷乙醇，12000 rpm/min,离心10min。
6．弃乙醇，干燥后用30ul TE缓冲液洗下核酸，待电泳检测。
（二）琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳技术（Agarose gel electroghoresis）是分离、鉴定和提纯DNA片断的有效方法。
凝胶分辨率决定于使用材料的浓度，并由此决定凝胶的孔径。
琼脂糖凝胶可分辩0.1~6.0kb的双链DNA片段。
琼脂糖凝胶电泳是一个电场作用。
它首先利用琼脂糖的分子筛效应，此外，在弱碱性条件下，DNA分子带负电荷，从负极向正极移动。
根据DNA分子大小、结构及所带电荷的不同，它们以不同的速率通过介质运动而相互分离。
借助溴化乙锭（EB）能与双链DNA结合的作用，利用EB染色，并通过紫外线激发即可观察被分离DNA片段的位置。
【材料】1．琼脂糖、10×TAE电泳缓冲液（40m MTris ,20 mM NaAc,1mM EDTA PH8.0）2．载体缓冲液（0.25%溴酚蓝，30%甘油）、溴化乙锭水溶液（10mg/ml ）3．凝胶槽、电泳仪【方法】1．取琼脂糖0.9g，加入100ml 1x TAE电泳缓冲液于250ml烧瓶中，1000C加热溶解。
2．平衡凝胶槽，放好两侧挡板，调节好梳子与底板的距离（一般高出底板0.5~1mm）。
3．铺板：在溶解好的凝胶中加入终浓度为0.5ug/ml 的溴化乙锭水溶液，轻轻混匀，待冷至500C左右倒入凝胶槽，胶厚一般为5~8mm。
4．待胶彻底凝固后，去掉两侧挡板，将凝胶放入盛有电泳液的槽中（加样孔朝向负极端，DNA由负极向正极移动），使液面高出凝胶2~3mm，小心拔出梳子。
5．DNA 样品与载体缓冲液5：1混合并加入凹孔中（样品不可溢出）。
6．打开电源，调节所需电压，电压与凝胶的长度有关，一般使用电压不超过5v/cm。
7．据指示染料移动的位置，确定电泳是否终止（溴酚蓝的涌动距离在5s RNA和0.3 kb DNA 带之间）。
8．电泳完毕关闭电源。
将凝胶放紫外灯下观察并拍照。
二、DNA的限制性核酸内切酶酶切实验和连接实验（一）酶切实验本实验学习用限制性核酸内切酶（Restriction endonuclease）EcoRI 切割λDNA及质粒pBR322DNA，琼脂糖凝胶电泳后观察酶切结果。
【原理】λDNA 是大肠杆菌的一种温和噬菌体DNA，双股线状，分子大小为48.5 kb。
EcoRI酶可识别DNA中G↓AATTC核苷酸序列，并在箭头处将其切开。
λDNA含有5个EcoRI酶识别位点，可将λDNA切成6个大小不同的片断。
pBR322 DNA为人工构建的质粒DNA, 分子大小为4.3 kb，含有1个EcoR I酶切点，切割后由环状DNA变为线形DNA。
【材料】1．λDNA(0.1ug/ul)，pBR322 DNA（0.25 ug/ul）2．限制性内切酶EcoRI3．EcoRI 酶切缓冲液（Buffer solution 10×）4．去离子水5．电泳及染色用材料【方法】1．取洁净EP管2只，按表10－1加入各成分。
2．混匀，放370C水浴1-2h。
65℃水浴10min，再放4℃冰箱8min终止反应。
部分酶切DNA片段用于DNA 连接实验，另一部分放4℃冰箱，待琼脂糖凝胶电泳检测。
（二）DNA连接实验T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。
λDNA用EcoRI酶切割后形成的6个片断均具有粘性末端（Cohesive ends），在T4 DNA 连接酶作用下，可连接成原来的线状DNA【材料】1．λDNAEcoRI酶切片段2．T4 DNA连接酶3．T4 DNA连接酶缓冲液（10×）4．去离子水【方法】1．取洁净EP管1只，分别加入：①去离子水7ul,②T4 DNA连接酶缓冲液（10×）2 ul，③λDNA酶切片段（已65℃10分钟灭活）10ul④T4 DNA连接酶1ul2．混匀后，放13℃水浴过夜，待电泳检测。
三、耐药质粒DNA转化实验本实验学习将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆，即转化子。
【原理】受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca++ 处理，可改变细胞膜的通透性，利于受体菌对DNA的摄取，这种经Ca++ 处理的细菌称感受态菌。
pBR322 质粒带有氨基苄青霉素（Ap）和四环素（Tc）基因，如将pBR322质粒转入到对上述抗生素敏感的Ecoli RRI菌体内，则可使该细菌获得Apr和Tcr，表现出对Ap和Tc的抗药性。
（一）感受态菌的制备【材料】1．菌株E.coli RRI2．LB 液体培养基3．75mM Cacl24．其它：灭菌小试管、刻度吸管、微量加样器、离心机【方法】1．将细菌接种于5ml LB液体培养基中，37℃振荡培养16~20h。
2．取新鲜菌液，按1/100的接种量接种于LB培养基中，37℃振荡培养2~3h。
3．取1.5ml菌液，4℃ 3000rpm/min,离心5min，弃上清。
4．菌体沉淀加入750μl预冷的（4℃）75mmol/L CaCL2 溶液，轻轻吹打菌悬液，放冰浴30min。
5．4℃3000rpm/min,离心5min，弃上清。
6．菌体沉淀加入200微升预冷的75mmol/LCaCL2溶液，冰浴4min以上。
4℃保存备用。
（二）质粒转化【材料】1．pBR322 质粒DNA,2．感受态菌75mmol CaCl23．LB肉汤培养基，无药LB琼脂平板，氨苄青霉素琼脂平板（50ug/ml）4．其它：灭菌小试管，L形玻璃棒【方法】1. 取2个洁净，灭菌的EP管，按表10－2加入各成分：2. 上述2个试管充分混均匀后，置冰浴30min。
3. 42℃2min或37℃5min，立即置冰浴2min。
4. 加入1ml LB肉汤培养基，37℃静止培养1h。
（三）转化子筛选：1．取实验组培养菌液涂布在氨苄青霉素琼脂平板（50ug/ml）上，对照组菌液分别涂布在无药LB琼脂平板和氨苄青霉素琼脂平板上，每块板涂0.1ml，用灭菌L形玻璃棒涂匀。
将涂好的平板置370C培养过夜，观察转化结果。
2．E.coli 受体菌不含有质粒DNA，也不含Apr和Tcr 。
在含Ap和Tc的培养基中不能生长,若实验组在含Ap和Tc的平板上出现菌落，可初步确定受体菌获得了耐药性质粒，然后再通过提取质粒DNA进一步鉴定转化子。
四、PCR方法检测病原微生物多聚酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)是一种模拟天然DNA复制过程，在体外扩增特异性DNA（或RNA）片段的新技术。
本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板，然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物，引物分别与待扩增DNA片段的两端互补，经55℃低温退火，引物与模板互补结合。
在72℃条件下，结合于模板上的引物在DNA聚合酶的催化下，利用反应体系中的4种dNTP为原料，按碱基互补配对的方式延伸合成两条新的DNA链。
经过20-30个周期后，特异的目的DNA可扩增百万倍以上。
PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后即可观察到特异的扩增条带。
PCR方法操作简便，灵敏度高，可检测出少至0.1pg的目的DNA。
目前已广泛应用于多种病原微生物及寄生虫的检测。
【材料】1．无菌双蒸水、石蜡油、溴化乙锭2．10×PCR反应缓冲液3．25mmol dNTP混合液4．引物1，引物2各50pmol／u15．模板DNA6．5U／ul Taq DNA聚合酶【仪器】1．PCR扩增仪2．电泳仪3．紫外线分析仪【方法】1．在0.5m1EP管中，加入以下成分：10×PCR反应缓冲液5u1引物1 2ul引物1 2ul模板DNA 10u1dNTP混合液4ulTaq DNA聚合酶1ul无菌双蒸水加至50ul混匀, 加50 ul石蜡油，防止样品水分蒸发。
2．将反应管置于PCR仪中，94℃变性4min。
然后按94℃变性30s→55℃退火30s→72℃延伸1min，循环35次后，72℃延伸10 min。
3．反应完成后，取l0ul PCR扩增液，加至2％琼脂糖凝胶中进行电泳，电压100V，电泳30~60min后，置紫外线分析仪下观查扩增结果。
五、核酸杂交法检测病原微生物核酸杂交技术是根据两条互补的核苷酸单链可以杂交结合成双链的原理所建立，用一段已知序列的放射性或非放射性标记的核苷酸单链做探针，与待检标本中的DNA杂交来探查待检标本中有无与之相互补的核酸。