蛋白质分析解决方案蛋白质分析解决方案
蛋白质组学研究的完整解决方案
蛋白质组学研究的完整解决方案人体内真正发挥作用的是蛋白质，蛋白质扮演着构筑生命大厦的“砖块”角色，随着破译生命密码的人类基因组计划进入尾声，一个以蛋白质和药物基因学为研究重点的后基因组时代已经拉开序幕，蛋白质将是今后的重点研究方向之一。
然而，蛋白质的分离和鉴定非常费时，目前测定蛋白质的技术远远落后于破译基因组的工具，最好的实验室每天只能分离和识别出100种蛋白质。
据估计，人体内可能有几十万种蛋白质，这大概需要10年时间进行识别。
为了加快蛋白质组学研究进程，以专业生产蛋白质组学研究设备而著称的美国Genomic Solution Inc.公司开发了完整的蛋白质组学解决方案，由一系列机械手臂与软件，并结合了二维电泳实验设备与质谱仪，可以进行高效、自动化且具重复性的试验分析。
在Genomic solution值得信赖的技术平台上，你的研究工作将更富成效，重复性更好。
在这一整套Investigator平台上，各仪器之间配合无隙，由于它的整合性及标准性，使得研究进程大大加快，原来需要9—12个月才能获得数据结果发表的时间减少到9—12周。
这套完整的系统具备蛋白质组研究所需的众多功能：2-D电泳、图像获取、2-D胶分析、蛋白样品切割、蛋白消化、MALDI样品准备、消化及点样、数据分析整合，再加上制备好的胶、试剂及附件，使研究工作可以立即展开。
此套设备为进行蛋白质组学研究的利器,大大加速了蛋白质分离和鉴定的速度。
该系统主要由以下几部分组成：一、2-D电泳系统（Investigator? 2-D Electophoresis System）该系统主要进行2D PAGE第一向等电聚焦凝胶电泳和第二向SDS-PAGE电泳，设备包括2-D电泳系统所需的各种设备，如pHaser?（IPG胶条电泳）、管状制胶设备、二维电泳装置、电源设备、半导体冷却器及各种相关的蛋白纯化试剂盒。
产品特征：* 提供2D PAGE电泳所需的各种设备，使电泳更加简便，大大节约研究时间* 高分辨率：有效的第一向等电聚焦凝胶电泳和23cm X 23cm第二向SDS-PAGE大面积板胶提供清晰的电泳图像，有效提高单体、磷酸化和糖基化蛋白的分离* 大容量：可同时容纳15块1mm一维管状胶，或8块2-3mm管状胶；10块IPG胶条和10块二维电泳板胶* 灵活性：该系统用于管状胶、IPG 胶条、预制胶、自制胶和SDS PAGE胶使用* 恒温：高效的半导体制冷装置保证电泳体系温度恒定，温度变化< 0.5℃* 专门为高分辨率2D PAGE而设计的电源系统* 提供超纯的相关化学试剂和药品二、蛋白凝胶成像系统（Investigator? ProImage）ProImage专业的蛋白凝胶成像系统提供高灵敏度、高分辨率的大面积蛋白凝胶成像和分析。
蛋白质分离纯化设计
蛋白质分离纯化设计1. 简介蛋白质分离纯化是一项重要的实验技术，在生物医药、食品科学、农业等领域有着广泛的应用。
通过对蛋白质进行分离纯化，可以获得单一纯度的蛋白质用于后续研究及应用。
本文将详细介绍蛋白质分离纯化的设计方法和常用技术，包括样品准备、分离方法选择、纯化步骤设计等。
同时，我们还将讨论常见的挑战和解决方案，以及如何评估分离纯化效果。
2. 样品准备在进行蛋白质分离纯化前，首先需要准备好样品。
样品的选择和准备对于后续分离纯化过程非常重要。
2.1 选择合适的样品样品可以来自细胞、组织、体液、培养基等。
在选择样品时，需要考虑到蛋白质的种类、表达水平、目标纯化程度以及后续实验需要。
2.2 样品预处理样品在分离纯化前需要进行预处理，以去除可能干扰纯化过程的杂质。
常用的预处理方法包括细胞破碎、离心、除去非蛋白质成分等。
预处理方法的选择应根据样品类型和后续纯化方法进行优化。
3. 分离方法选择根据蛋白质分离的原理和样品特性，我们可以选择合适的分离方法。
常见的分离方法包括离子交换层析、凝胶过滤、透析、亲和层析等。
3.1 离子交换层析离子交换层析是一种基于蛋白质带电性质的分离方法。
可以根据蛋白质的以阴离子或阳离子带电来选择合适的离子交换树脂，实现不同蛋白质的分离纯化。
3.2 凝胶过滤凝胶过滤是一种基于蛋白质大小的分离方法。
通过选择适当的孔径大小的凝胶，可以分离不同分子大小的蛋白质。
3.3 透析透析是一种基于蛋白质分子量和溶液成分的分离方法。
通过选择适当的膜材料和透析缓冲溶液，可以实现蛋白质与小分子化合物的分离。
3.4 亲和层析亲和层析是一种基于蛋白质与配体之间的特异性结合来分离纯化的方法。
选择合适的亲和配体，可以选择性地结合目标蛋白质，从而实现其分离纯化。
4. 纯化步骤设计在选择合适的分离方法后，需要设计纯化步骤来实现目标蛋白质的分离和纯化。
纯化步骤的设计应根据分离方法的特点和目标蛋白质的性质进行优化。
4.1 样品加载将预处理的样品通过适当的装载方式加载到分离纯化柱中，如使用注射器将样品缓慢注入。
蛋白质沉淀原因
蛋白质沉淀原因1. 引言蛋白质是生物体内最重要的分子之一，它们在细胞结构和功能方面起着关键作用。
然而，当处理蛋白质样品时，我们常常会遇到蛋白质沉淀的问题。
蛋白质沉淀是指蛋白质从溶液中析出形成沉淀物的现象。
在本文中，我们将探讨蛋白质沉淀的原因，并提出相应的解决方案。
2. 蛋白质沉淀的原因蛋白质沉淀的原因可以归结为以下几个方面：2.1 温度温度是影响蛋白质沉淀的重要因素之一。
在较高的温度下，蛋白质的热运动增加，分子之间的相互作用减弱，导致蛋白质的溶解度下降，容易发生沉淀。
此外，高温还可能引起蛋白质的变性，进一步促使其沉淀。
解决方案：控制合适的温度，避免过高的温度对蛋白质的影响。
根据不同的蛋白质特性，选择合适的温度范围进行实验。
2.2 pH值pH值是指溶液的酸碱程度，也是影响蛋白质沉淀的重要因素之一。
不同的蛋白质在不同的pH条件下具有不同的溶解度。
当溶液的pH值偏离蛋白质的等电点时，蛋白质会发生电荷变化，导致其溶解度下降，容易发生沉淀。
解决方案：根据蛋白质的等电点，调整溶液的pH值，使其接近蛋白质的等电点，以提高蛋白质的溶解度。
2.3 盐浓度盐浓度是影响蛋白质沉淀的另一个重要因素。
高盐浓度会增加溶液的离子强度，减弱蛋白质与水分子之间的相互作用力，导致蛋白质的溶解度下降，容易发生沉淀。
解决方案：控制合适的盐浓度，避免过高的盐浓度对蛋白质的影响。
根据不同的蛋白质特性，选择合适的盐浓度范围进行实验。
2.4 溶剂选择溶剂选择是影响蛋白质沉淀的另一个重要因素。
不同的溶剂对蛋白质的溶解度有不同的影响。
一些有机溶剂如醇类和酸类溶剂可以降低蛋白质的溶解度，促使其沉淀。
解决方案：选择合适的溶剂，根据蛋白质的特性和实验要求进行选择，避免使用对特定蛋白质有沉淀促进作用的溶剂。
2.5 溶液浓度溶液浓度是影响蛋白质沉淀的因素之一。
当溶液中蛋白质的浓度超过其饱和浓度时，蛋白质容易发生沉淀。
解决方案：控制合适的溶液浓度，避免过高的溶液浓度对蛋白质的影响。
第五章蛋白质分析及预测方法
第五章蛋白质分析及预测方法蛋白质是生物体内最基本的功能分子之一，其功能与结构密切相关。
蛋白质分析及预测方法是研究蛋白质结构和功能的重要手段之一、随着生物信息学和计算机技术的发展，越来越多的蛋白质分析及预测方法被提出和应用。
一、蛋白质分析方法1.序列分析蛋白质序列是理解和预测蛋白质功能和结构的重要基础。
序列分析可以通过比对已知蛋白质序列数据库，找出与待研究蛋白质相似的序列，从而预测其功能和结构。
常用的序列分析方法包括同源序列比对、Motif和Domain分析等。
2.结构分析蛋白质结构是蛋白质功能的基础，因此结构分析对于研究蛋白质功能至关重要。
通常通过实验方法如X射线晶体学、核磁共振等获得蛋白质结构。
此外，还可以利用计算方法预测蛋白质的二级结构和三级结构。
常用的结构分析方法包括蛋白质结构比对、分子模拟等。
3.功能分析蛋白质功能是指蛋白质所具有的生物学功能，如催化反应、运输物质、信息传递等。
功能分析通过研究蛋白质的序列和结构，以及模拟蛋白质与其他生物分子的相互作用，来理解和预测蛋白质的功能。
常用的功能分析方法包括结构-功能关系预测、生物分子对接等。
二、蛋白质预测方法1.序列预测蛋白质序列预测是指通过分析蛋白质的氨基酸序列，预测其结构和功能。
常见的序列预测方法包括序列比对、Motif和Domain预测、蛋白质家族预测等。
这些预测方法可以通过比对已知蛋白质序列数据库，找出与待研究蛋白质相似的序列，从而推测其结构和功能。
2.结构预测蛋白质的三级结构是指蛋白质的原子级结构，包括蛋白质中氨基酸残基的空间排列。
结构预测是通过计算方法来预测蛋白质的三级结构。
常用的结构预测方法包括亚氨基酸残基建模、蛋白质折叠模拟等。
这些方法通过计算蛋白质中氨基酸之间的相互作用力和空间约束，来预测蛋白质的三级结构。
3.功能预测蛋白质功能预测是通过研究蛋白质的结构和序列，来预测蛋白质所具有的生物学功能。
常用的功能预测方法包括结构-功能关系预测、蛋白质分子对接等。
蛋白质组学技术在各领域的解决方案
蛋白质组学技术在农业生物科研领域、疾病机理机制研究、药物研究、海洋环境、植物胁迫机制研究等方面具有广泛应用。
蛋白组学的研究通常遵循以下思路：蛋白质组学研究思路图 1 蛋白质组学研究思路一、蛋白质组学在农业生物科研领域的应用蛋白质组学技术在农业生物科研领域的应用为作物生长发育、病虫害防治、遗传育种、畜牧兽医学疾病诊断和治疗等方面发挥重要的作用，为现代农业发展开辟新途径。
1 .蛋白质组学在农作物研究中的应用农业是我国人口赖以生存的基础，而提高粮食产量和品质则是农业发展的关键。
蛋白质组学关键技术在作物遗传育种、品系鉴定、品质改良、逆境胁迫应答等关键环节的应用，为农业作物的进一步开发利用提供巨大的参考价值。
蛋白质组学可系统研究农作物在特定环境或某个发育阶段的组织和器官中蛋白质的表达变化，有助于作物发育过程机制的理解。
Jia等人利用SWATH等技术对四种玉米组织中的蛋白质进行定量分析：包括未成熟雌穗，未成熟雄穗，授粉后20天的幼胚和14日龄幼苗的根。
在玉米的4种组织中总共鉴定到4551个蛋白质，其中在雌穗，雄穗，幼胚和幼根中分别鉴定到3916、3707、3702和2871种蛋白质。
利用生物信息学技术将蛋白质组和转录组进行关联分析，并且进一步分析组织特异性高表达的基因和蛋白，以了解玉米组织结构和器官发生的调节机制，为研究玉米发育生物学研究提供了新的线索。
相关成果2017年发表在Journal of Proteome Research上。
图 2 实验流程图文献来源：Jia HT, Sun W, Li MF, et al. An integrated analysis of protein abundance, transcript level and tissue diversity to reveal developmental regulation of maize [J]. J. Proteome Res, December 18, 2017.2.蛋白质组学在食品科学中的应用在食品安全研究中，蛋白组学的出现为食品科学的研究指明了方向，同时也为食品科学的研究奠定了良好的发展平台。
蛋白质序列分析及其应用
蛋白质序列分析及其应用蛋白质序列分析是生物信息学领域的一个重要研究方向，它通过计算和比较蛋白质的氨基酸序列，揭示蛋白质的结构、功能和进化的信息。
蛋白质序列分析的应用广泛，包括预测蛋白质结构、功能注释、蛋白质家族分类、药物设计等。
本文将简要介绍蛋白质序列分析的方法和应用。
一、蛋白质序列分析的方法1.氨基酸组成分析：通过计算蛋白质序列中各种氨基酸的相对数量，可以了解蛋白质的氨基酸组成，比较不同蛋白质之间的差异和相似性。
2.序列比对分析：序列比对是蛋白质序列分析的基础工具，可以找到序列之间的相似区域，并推测彼此之间的进化关系。
常用的序列比对方法有全局比对、局部比对和多序列比对等。
3.蛋白质结构预测：蛋白质结构预测是蛋白质序列分析的核心任务之一、常见的方法包括二级结构预测、三级结构预测和蛋白质折叠模拟等。
4.功能注释：根据蛋白质序列的特征和结构，可以预测蛋白质的功能。
常用的方法包括保守区域分析、功能域识别和模式等。
5.蛋白质家族分类：通过比较蛋白质序列的相似性，可以将蛋白质分为不同的家族或超家族，用于进一步研究蛋白质的结构和功能。
二、蛋白质序列分析的应用1.药物设计：蛋白质序列分析可以为药物设计提供重要的信息。
通过分析蛋白质序列的结构和功能，可以预测药物与目标蛋白质之间的相互作用，优化药物的设计。
2.疾病预测与诊断：蛋白质序列分析可以帮助预测蛋白质的功能异常和突变，从而预测患者的疾病风险和诊断结果。
3.进化研究：通过比较不同物种的蛋白质序列，可以推测它们之间的进化关系。
这有助于了解物种的进化历史和基因家族的起源。
4.蛋白质工程：通过分析蛋白质序列和结构，可以对蛋白质进行工程改造，使其具有更好的特性和功能，用于生物工艺和生物医药等领域。
5.新蛋白质发现：通过对未知蛋白质序列的分析，可以发现新的蛋白质，并探索其结构和功能，为新药物和生物材料的开发提供新思路。
三、现阶段的挑战和发展方向尽管蛋白质序列分析已经取得了很大的进展，但仍面临一些挑战。
蛋白质的透析
而实现物质分离。
蛋白质透析的应用
生物制品分离纯化
在生物制品的分离纯化过程中， 蛋白质透析常用于去除盐、糖等 小分子杂质，提高产品的纯度。
实验室研究
在实验室研究中，蛋白质透析可 用于制备高纯度的蛋白质样品， 供后续实验使用。
临床应用
在某些临床应用中，如血浆置换 疗法，蛋白质透析可用于去除血 浆中的毒素或过量的药物。
透析效率问题
透析效率问题
透析效率低下可能导致体内毒素和多余水分不能被充分清除 。
解决方案
采用高效透析器，提高血流速度，缩短透析时间，增加透析 液流量等措施，以提高透析效率。同时，根据个体情况调整 透析方案，以达到最佳的透析效果。
蛋白质变性问题
蛋白质变性问题
在透析过程中，蛋白质可能会发生构象变化，导致其功能受损。
浓缩蛋白质溶液
通过去除部分溶剂，使蛋白质溶液得 到浓缩。
蛋白质透析的原理
半透膜原理
01
透析利用半透膜原理，允许小分子物质透过膜而大分子物质被截留，从而实现物质分离。分子量大小差异02
蛋白质分子量较大，无法透过半透膜，而小分子物质如盐、糖
等可以自由透过半透膜。
浓度差驱动
03
透析过程中，小分子物质从高浓度一侧扩散至低浓度一侧，从
疾病机制研究
蛋白质的透析可以帮助研究疾病的发病机制 和治疗机制，为疾病的预防和治疗提供新的 思路和方法。未来随着人类对疾病认识的深 入和技术的进步，蛋白质的透析在疾病机制 研究中的应用将更加广泛和深入。
THANKS
感谢观看
临床应用展望
个性化透析
随着基因组学和蛋白质组学的发展，未来蛋白质的透析将更加个性化，根据患者的具体情况制定个性化的透析方案， 提高治疗效果和患者的生存质量。
蛋白质多肽液相色谱纯化方法简介 液相色谱解决方案
蛋白质多肽液相色谱纯化方法简介液相色谱解决方案蛋白质、多肽液相色谱纯化方法简介！1、纯化的一般目标和方法首先，自然来源或者重组表达的蛋白质经过一些粗提的步骤（例如：匀浆、离心、硫酸铵沉淀等）成为稳定的可以用于色谱分别的样品。
然后进行捕获色谱（capture chromatography），重要目标是浓缩和去除大量的简单去除的杂质，此步挂念的是流速和载量，常采纳高载量、快流速凝胶。
经过浓缩的部分纯化的样品进行中级色谱（intermediate chromatography），目的是去除较难去除的杂质，此步挂念的是辨别率，常采纳高辨别率的细颗粒凝胶。
后为了得到符合要求的终产品，去除残存的杂质以及目的蛋白的多聚物或者降解片断，进行精制色谱（polishing chromatography），常采纳具有高辨别率的凝胶过滤凝胶进行凝胶过滤色谱。
2、纯化前的准备工作（1）样品稳定性试验a、测定样品在pH 2—9的稳定性；b、测定样品在0—4 mol/L NaCl及0—2 mol/L 硫酸铵中的稳定性；c、测定样品在0—50%乙醇、甲醇中的稳定性；d、测定样品在4—40℃的稳定性；e、室温下静置过夜，测定对蛋白水解酶的稳定性。
（2）样品预处理a、去除样品中颗粒物（0.45—0.22微米膜过滤或者10000 g离心15分钟）b、去除样品中脂类（ 10000 g离心15分钟或有机溶剂抽提）c、去除样品中核酸（加入核酸酶消化或者使核酸沉淀）d、抑制样品中蛋白水解酶（加入蛋白酶抑制剂、低温下快速第1步分别或在蛋白酶缺陷宿主中表达重组蛋白）（3）样品的保存条件：短期储存（小于24小时）a、避开接近或超过样品的稳定极限防止蛋白质变性或沉淀b、在密闭容器中冰箱冷藏较长期储存（数天）a、b、同上c、加入适当的抑菌剂长期储存a、同上b、冰冻或者hao冻干（真空冷冻干燥）保存。
3、对每一纯化步骤的评价相关方法的建立a、目的蛋白含量测定酶活性测定、生物活性测定、放射免疫、酶联免疫、免疫电泳、荧光。
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规格 5 mL 25 mL
3
VisioTM
实时蛋白质电泳染色液
Visio既是蛋白质染料，又是上样缓冲液。可快速与 蛋白质结合，这样即可实时监控电泳的进程，使得 SDS-PAGE变得可视化。省去了电泳后的染色与脱色 步骤，且与下游应用兼容。
特点 • 高灵敏度：低至10 ng的蛋白质条带 • 简便：无需考马斯亮蓝染色与脱色 • 灵活：还原性电泳与非还原性电泳皆可 • 兼容性：兼容下游的质谱实验
10 rxns
K-02101-025 Afyon SDS-PAGE Sample Preparation kit
25 rxns
2
电
AdvanStain ScarletTM
泳
凝胶与印迹膜的荧光染色液
与 染 色
AdvanStain Scarlet可染色凝胶和印迹膜上的蛋白质，适用 于高灵敏度的定量分析。染色后的凝胶和膜可以在任何第 三方的CCD或激光成像设备上进行检测，灵敏度可至1 ng
一边电泳，一边观察结果。
Recombinant protein (103 kDa)
Transferrin (77 kDa)
Carbonic anhydrase (30 kDa)
Recombinant protein (14 kDa)
Visio
500 125 31.3 7.8 ng
Coomassie
500 125 31.3 7.8 ng
4
FLASHBlotTM
转
快速转印缓冲液
膜
FLASHBlot可以在20分钟内完成蛋白质的转印，且专为低丰度和翻 译后修饰蛋白所优化。不仅高效转膜，且可以增加蛋白质在膜上的 滞留，以此提高Western Blot检测的灵敏度。
二抗进行检测。可见，a和b中的泳道3均无信号，泳道2和4均可以检测
到靶蛋白的信号，信号强度用数字标出。
样
品
订购信息
制
备
货号
描述
规格
R-03018-B10 Non-reducing protein sample loading buffer (2X)
1 mL
K-02101-010 Afyon SDS-PAGE Sample Preparation Kit
10
其它
10
WesternBright ChemiPen
10
关于Advansta
美国Advansta公司成立于2005年，总部位于加利福尼亚州，是专业的生 命科学试剂制造商，致力于研发高效易用的蛋白质分析试剂。
Advansta的公司使命是：成为全球领先的蛋白质分析试剂的研发者与制 造商。
其研发团队具有相当扎实的化学分析与蛋白质分析的应用背景，公司 的旗舰产品之一为Western Blotting实验配套的相关试剂，其中 WesternBright化学发光底物产品线仅2014年一年就有超过200篇的文献引 用量，并获得越来越多的全球使用者的青睐，被评为市 Transfer Buffer
5
AdvanStain Ponceau
6
检测
7
WesternBright ECL & Spray
7
WesternBright Quantum
8
WesternBright Sirius
9
WesternBright MCF & MCF-IR 9
ELISABright
蛋白质分析解决方案
info@
蛋白质分析解决方案
目录
关于Advansta
1
样品制备
2
Afyon
2
电泳与染色
3
AdvanStain Scarlet
3
Visio
4
蛋白质转印
（条带或斑点）。该试剂兼容下游的Western Blotting实验
和质谱实验，无毒性，已处理。
特点 • 灵敏：低纳克级 • 便捷：简易的操作手册 • 灵活：适用于凝胶和膜 • 可逆：可以脱色后用于Western Blotting和质谱实验 • 无斑点：背景干净 • 安全：生物降解，不含重金属元素 • 兼容：可被多种波长激发，包括green (543, 532 nm)，blue (488 nm)，violet (405 nm) 和UV (302, 365 nm)。最大发射波长为610 nm。
Visio的灵敏度与考马斯亮蓝相当，且不改变蛋白质的电泳行为，结果
完全是可比的。
电
泳
订购信息
与
货号
描述
染
规格
色
K-11053-300 Visio real-time stain for 100 lanes or 10 ten-well gels
300 μl
K-11053-B30 Visio real-time stain for 1,000 lanes or 100 ten-well gels 3 ml
1
AfyonTM
高效样本制备试剂盒
Afyon SDS-PAGE样品制备试剂盒能够快速高效地浓 缩蛋白质样品，去除缓冲液中可能干扰电泳的成分。只 需不到10 min，样品即可用于SDS-PAGE或免疫印迹。 Afyon的操作手册非常简单，可以作为最常用的蛋白质 电泳样品制备的工具。 特点 • 快速去除干扰电泳的缓冲液成分 (GuHCl, urea, Ammonium sulfate, etc) • 不到10 min，蛋白质样品即可上样 • 安全，无毒性，无需DMSO • 比超滤或透析等方法更加快捷 • 兼容下游的SDS-PAGE和Western Blot
AdvanStain Scarlet的信号具有良好的线性度。将梯度稀释的转铁 蛋白进行SDS-PAGE，凝胶用AdvanStain Scarlet染色。
订购信息
货号 K-11072-B50 K-11072-C25
描述 AdvanStain Scarlet Protein Stain Kit AdvanStain Scarlet Protein Stain Kit
Afyon 与Western Blotting能够很好地兼容。上图所示为两组Western
Blotting实验，样本为A431细胞的抽提物。图a检测GAPDH，图b检测
SRC，泳道2为A431细胞的抽提物，泳道3为稀释的细胞抽提物，泳道4
为将稀释抽提物用Afyon浓缩后的样品。Western Blot采用荧光标记的