蛋白质定量检测方法
简述几种测定蛋白质方法及原理
简述几种测定蛋白质方法及原理蛋白质是生物体内最重要的分子之一，其功能多种多样，涉及到生命的方方面面。
了解蛋白质的性质、结构和功能非常重要。
为了实现这一目标，科学家们开发了多种方法来测定蛋白质的存在和浓度，以及研究其结构和功能。
在本文中，我们将简要介绍几种常见的测定蛋白质方法及其原理。
一、低丰度蛋白质检测方法在复杂样品中，许多蛋白质的浓度很低，因此需要采用高灵敏度的方法进行检测。
以下是两种常见的低丰度蛋白质检测方法。
1. Western blotting方法Western blotting方法是一种常用的蛋白质检测方法，通过将蛋白质转移到固体支持体上，然后使用特异性抗体来探测目标蛋白质的存在。
这个方法的原理是在电泳分离后，将蛋白质转移到聚丙烯腈膜或硝酸纤维素膜上。
样品经过特异性抗体结合，最后通过酶标记二抗或荧光二抗来使目标蛋白质可见。
2. 质谱法质谱法是一种利用质谱仪测定蛋白质质量的方法。
这种方法的原理是将蛋白质分解成肽段，然后通过质谱仪测定这些肽段的物质质量。
质谱法可以提供非常准确和高灵敏度的蛋白质测定结果，适用于分析复杂样本中的低丰度蛋白质。
二、蛋白质浓度测定方法蛋白质的浓度是研究蛋白质的基础，因此准确测定蛋白质浓度非常重要。
以下是两种常见的蛋白质浓度测定方法。
1. 比色法比色法是一种通过测量某种化学试剂与蛋白质之间的化学反应来测定蛋白质浓度的方法。
布拉德福德比色法使用染料染色蛋白质产生吸光度，再根据标准曲线定量测定蛋白质浓度。
这种方法简单、快速且灵敏度较高，适用于大多数蛋白质样品。
2. BCA法BCA法是一种利用受体配合反应来测定蛋白质浓度的方法。
在这种方法中，受体配体（biotin-avidin 或biotin-streptavidin）与蛋白质中的特定残基（如组氨酸等）结合生成复合物，然后通过比色反应测定复合物的吸光度。
BCA法具有高灵敏度和较低的非特异性反应。
三、蛋白质结构分析方法蛋白质的结构直接影响其功能和性质，因此了解蛋白质的结构是非常重要的。
蛋白质定量测定的方法
蛋白质定量测定的方法蛋白质是生物体内一类重要的生物大分子，它们参与了生物体内的各种生命活动，对于维持生命活动的正常进行起着至关重要的作用。
因此，蛋白质的定量测定对于生物学研究具有重要意义。
本文将介绍几种常用的蛋白质定量测定方法。
首先，比色法是一种常用的蛋白质定量测定方法。
比色法利用蛋白质与某些特定试剂反应产生颜色，然后通过比色计测定颜色的深浅来确定蛋白质的含量。
常用的试剂有布拉德福试剂、伯杰试剂等。
比色法操作简便，准确度较高，是实验室中常用的蛋白质定量方法之一。
其次，BCA法也是一种常用的蛋白质定量测定方法。
BCA法利用蛋白质与BCA试剂在碱性条件下发生还原反应生成蓝色产物，然后通过比色计测定产物的吸光度来确定蛋白质的含量。
BCA法对于含有还原剂或脂肪的样品有较好的适用性，操作简便，灵敏度高，是蛋白质定量的常用方法之一。
另外，Lowry法也是一种常用的蛋白质定量测定方法。
Lowry法利用蛋白质与铜离子和碱性试剂在碱性条件下发生还原反应，生成蓝色络合物，然后通过比色计测定络合物的吸光度来确定蛋白质的含量。
Lowry法对于蛋白质浓度较低的样品有较好的适用性，操作简便，灵敏度高，是蛋白质定量的常用方法之一。
最后，荧光法也是一种常用的蛋白质定量测定方法。
荧光法利用蛋白质与荧光素染料结合后发生荧光，然后通过荧光光度计测定荧光强度来确定蛋白质的含量。
荧光法对于蛋白质浓度较低的样品有较好的适用性，操作简便，灵敏度高，是蛋白质定量的常用方法之一。
综上所述，蛋白质定量测定是生物学研究中的重要内容，而比色法、BCA法、Lowry法和荧光法则是常用的蛋白质定量测定方法。
在实际操作中，可以根据样品的特点和实验的要求选择合适的方法进行蛋白质定量测定，以确保实验结果的准确性和可靠性。
三种常见蛋白质含量测定方法
三种常见蛋白质含量测定方法
蛋白质含量是决定植物质量的重要因素，在植物栽培及种子货架上，精确掌握植物蛋白质含量，进而为植物中品质和效用性提供重要的评价依据。
目前，研究常用的植物蛋白质含量测定方法有Kjeldahl法，Bradford法和Lowry法等三种。
Kjeldahl法是一种多功能性的蛋白质定量方法，它可以测定含氮量甚至微量有机氮，此法在测定蛋白质含量方面易于操作，测试效率高， get精度也较高。
该法简单地以氨作为氮源，以硫酸释放氨，用硫酸钠将氨碱中的氨携带，然后进行缓冲及蒸发水解，最后通过酚酞形成深蓝色络合物对氮进行定量，从而间接的得到蛋白质的含量。
Bradford法同样是一种多用途的法子，它能够直接测定蛋白质中的色氨酸及胆羧酸含量，该方法的操作简便，使用成本低，测试效率高，可在一个小时内达到较高精度的测定结果。
Bradford法原理是将蛋白质及它的沉淀由蛋白质合酶结合至二价铬J络合物，从而形成一种光电的特异性比色反应。
Lowry法也是一种多功能性的定量方法，该方法能测定有机物中蛋白质、氨基酸等氮含量，以及各种物质中的亲合体，操作过程简单，精度也较高，比Kjeldahl法快7倍以上，Lowry法原理是蛋白质分解成其中的氨基酸，通过对色比色反应，底物络合过程自络合金属，再经冷酰膦处理，酰膦中色素降解，形成比色荧光，定量检测氮含量，从而间接得到蛋白质含量。
以上就是蛋白质含量测定常见三种方法。
从Kjeldahl法，Bradford法和Lowry法等三种方法，人们可以很好地掌握植物蛋白质含量，进而为植物中品质和效用性提供重要的评价依据。
蛋白定量的方法
蛋白定量的方法
蛋白定量是指检测样本中蛋白质含量的一种方法，也可以称为“蛋白测定”或“蛋白质测定”。
蛋白定量方法主要分为生物化学法、免疫分析法、流式细胞仪分析法和电泳分析法四大类。
1、生物化学法：生物化学法是目前最常用的蛋白定量方法，主要通过测定蛋白质的酶促反应来实现，如可用葡萄糖氧化酶、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶等蛋白质的特异酶作为指标，测量不同样本中的酶活性差异来实现蛋白定量。
2、免疫分析法：免疫分析法主要分为免疫印迹法（Western blotting）、免疫沉淀法（Immunoprecipitation）和ELISA三种，它们均利用特异的抗体对特定的蛋白质进行测定，以此来实现蛋白的定量。
3、流式细胞仪分析法：流式细胞仪分析法是一种基于细胞的分析方法，主要利用特定的抗体标记特定蛋白质，通过细胞分析仪分析细胞中标记蛋白质的数量，从而实现蛋白定量。
4、电泳分析法：电泳分析法是一种快速、灵敏的蛋白定量方法，其原理是利用电泳将多种不同种类的蛋白质分
子按大小和性质电泳分离出来，然后通过试剂盒进行叠加反应，使相应的蛋白分子变得可见，从而可以实现蛋白的定量。
蛋白质定量测定的方法
蛋白质定量测定的方法蛋白质定量测定是生物学研究中十分重要的方法。
常用的蛋白质定量测定的方法主要有以下几种：一、比浊法比浊法是一种最常用的定量法，它是通过适当改变溶液的浓度，以产生一种特定的“荧光效应”强度来实现的，其原理是以产生的特定的荧光强度和溶液中已知的蛋白质含量来反映所测溶液中蛋白质定量。
比浊法步骤：1.将样本放置在一定量光源下，调节所需的条件，获得荧光发光比较；2.使用比浊仪计算不同浓度样本的荧光强度；3.按照事先确定的标准线，实现折线法法中的拟合，获得最终定量结果。
二、放射免疫分析法放射免疫分析法应用于蛋白质定量测定，即根据反映物质的放射吸收，通过放射免疫分析试验确定溶液中蛋白质的含量。
它是借助化学反应获得放射吸收信息，再结合生物学实验，显示溶液中简单分子及复杂分子的放射衰减，最后计算蛋白质的定量结果。
放射免疫分析法步骤：1.将样本放置在放射量计中，记录和统计其放射吸收情况；2.生成受体蛋白，和未知物质特定结合，生成结合能力；3.检测特异性信号，计算放射吸收率；4.根据已知信号和放射吸收率，计算蛋白质的定量结果。
三、衍生免疫定量衍生免疫定量是一种新的蛋白质定量测定方法，它采取基因表达系统来合成蛋白质的介质，从而获取定量结果。
基于衍生免疫定量，使用适当的催化剂可以产生出特定的化学衍生物，以测量活体细胞内的蛋白质含量。
衍生免疫定量步骤：1.研究者首先调查待测样本，以确定具体的衍生物；2.通过基因工程，合成衍生物和特定的反应媒介；3.添加衍生物到待测样本中，形成一种特定的反应媒介，并用特定的定量仪器测量；4.通过收集的数据，计算蛋白质的定量结果。
总结：1.比浊法：利用产生的特定荧光强度和溶液中已知的蛋白质含量来定量蛋白质；2.放射免疫分析法：借助化学反应获得放射吸收信息，检测特异性信号，计算放射吸收率；3.衍生免疫定量：借助基因表达系统合成蛋白质介质，调查待测样本，添加衍生物，通过定量仪器测量，实现衍生免疫定量。
蛋白质的定性定量分析
第一章 蛋白质的含量测定
蛋白质的含量测定
基于蛋白质的 基于蛋白质的 基于蛋白质的 元素组成特点 化学显色反应 光吸收特性
Ø 蛋白质元素组成的特点
各种蛋白质的含氮量很接近，平均为16％ 由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此 只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据 以下公式推算出蛋白质的大致含量： 100克样品中蛋白质的含量 ( g % )
• 用这种测定方法对蛋白质引起不
只要测定生物样品中的含氮量，就可以根据
洗脱体积与相应分子量的关系
可逆的变性 SDS与蛋白质之间的结合程度
由于体内的含氮物质以蛋白质为主，因此
不是严格的定量，适用于测定蛋
灵 敏 度 SDS与蛋白质之间的结合程度 • 25 ug/ml～200 ug/ml
计算方法 • 标准曲线法
芳香族氨基酸的紫外吸收
所需时间 • 几分钟
优 点 • 快速 • 对蛋白质无破坏性
缺 点 • 不是严格的定量，适用于测定蛋 白质粗提液
• 核酸可引起强干扰作用 灵 敏 度 • 0.2 mg/ml～2 mg/ml
计算方法 • 标准曲线法
• 蛋白质浓度 (mg/ml) =1.45×A280×A260
注意事项 • 石英比色杯 • 调零所用溶液 • 配制标准蛋白所用溶液 • 光密度范围
二、Bradford检测法
这是一种迅速、可靠的通过染色法测定 溶液中蛋白质含量的方法
原理
该法是基于考马斯亮蓝G-250有红、蓝两种 不同颜色的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条 件下，可配成淡红色溶液，当与蛋白质结合后， 产生蓝色化合物，反应迅速而稳。蓝色复合物 在595 mn波长处具有最大光吸收值，并与溶液 中蛋白质浓度成正比，因此可检测595 mn的光 吸收值大小计算蛋白的含量
蛋白定量方法
蛋白定量方法蛋白定量是生物学实验中常见的一项重要技术，准确的蛋白定量对于许多实验都至关重要。
在科研实验中，我们常常需要知道样品中蛋白的浓度，以便进行后续的实验操作。
因此，选择合适的蛋白定量方法对于实验结果的准确性和可靠性有着重要的影响。
目前常用的蛋白定量方法包括比色法、BCA法、Lowry法和荧光法等。
每种方法都有其特点和适用范围，下面将对这些方法进行简要介绍。
比色法是一种常用的蛋白定量方法，其原理是利用蛋白质与某些化学试剂作用后产生颜色反应，通过测量反应产生的颜色强度来确定蛋白质的浓度。
比色法操作简单，灵敏度高，适用于常规的蛋白质浓度测定。
BCA法是另一种常用的蛋白定量方法，其原理是利用蛋白质与BCA试剂在碱性条件下发生蓝色化合物的形成，通过测量产生的蓝色溶液的吸光度来确定蛋白质的浓度。
BCA法对于含有干扰物质的样品有较好的耐受性，适用于复杂样品的蛋白定量。
Lowry法是一种经典的蛋白定量方法，其原理是利用蛋白质与碱性铜离子和碱性蛋白质共存时产生的蓝色络合物来测定蛋白质的浓度。
Lowry法对于蛋白质浓度较高的样品有较好的灵敏度和稳定性。
荧光法是一种高灵敏度的蛋白定量方法，其原理是利用蛋白质与荧光染料结合后产生荧光信号来测定蛋白质的浓度。
荧光法对于蛋白质浓度较低的样品有较好的检测能力，适用于高灵敏度的蛋白定量。
在选择蛋白定量方法时，需要根据样品的特点以及实验的要求来进行选择。
在进行蛋白定量实验时，还需要注意操作的规范性和准确性，避免因操作不当而导致的误差。
另外，不同的蛋白定量方法在操作上也有一些细微的差别，需要根据具体的实验要求来进行选择。
总的来说，蛋白定量是生物学实验中非常重要的一项技术，选择合适的蛋白定量方法对于实验结果的准确性和可靠性至关重要。
希望本文对您在蛋白定量方法的选择和实验操作上能够提供一些帮助。
蛋白质定量的方法
蛋白质定量的方法蛋白质是构成生物体的重要组成部分，对于理解生物体的结构和功能具有重要意义。
因此，准确测定蛋白质的含量是许多生物科学领域研究的基础。
目前，人们已经发展出了多种方法来定量蛋白质的含量。
本文将介绍几种常用的蛋白质定量方法及其原理、优缺点和应用范围。
1. 高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography, HPLC）HPLC是一种常用的蛋白质分离和定量方法。
它利用样品中蛋白质与流动相在分离柱中的相互作用来实现分离和定量。
HPLC方法的优点是分离效果好、重复性好、能够同时检测多个样品。
但是，该方法需要相对较高的设备要求和操作技巧，对样品预处理也较为复杂，且比较耗时。
2. 比色法比色法是一种常用的定量蛋白质的方法。
其中，低里氏试剂法和双硫键试剂法是比较常用的比色法。
低里氏试剂法是通过蛋白质与龙氏试剂（碱性铜硫脲）之间的比色反应来定量蛋白质含量。
双硫键试剂法则是通过蛋白质与2,4,6-三硝基苯磺酸（TNBS）之间的比色反应来定量蛋白质含量。
比色法具有操作简单、设备要求低等优点，但是对于不同类型的蛋白质，比色反应的敏感度和选择性可能不同。
3. 显微波特光度法（Bradford法）Bradford法是一种常用的蛋白质定量方法，基于酒红素（Coomassie BrilliantBlue G-250）与蛋白质之间的相互作用产生的颜色变化。
蛋白质与酒红素结合后，溶液的吸收光谱发生变化，可测量溶液的吸光度来定量蛋白质含量。
该方法操作简单快捷，而且灵敏度较高，适用于常规蛋白质定量。
4. 聚丙烯酰胺凝胶电泳法（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis, SDS-PAGE）SDS-PAGE是一种常用的蛋白质定量方法，可以通过电泳分离蛋白质并定量。
该方法通过将样品中的蛋白质在电场中进行分离，然后通过比色或者近红外成像等方法来定量。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
Bradford法蛋白定量（Bradford Protein Assay ）Bradford Assay is a rapid and accurate method commonly used to determine the total protein concentration of a sample. The assay is based on the observation that the absorbance maximum for an acidic solution of Coomassie Brilliant Blue G-250 shifts from 465 nm to 595 nm when binding to protein occurs. Both hydrophobic and ionic interactions stabilize the anionic form of the dye, causing a visible color change. Within the linear range of the assay (~5-25 mcg/mL), the more protein present, the more Coomassie binds.ReferenceBradford, M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Anal. Biochem. (1976) 72, 248-254.考马斯亮蓝染色法(Bradford法)测定蛋白质含量原理1976年Bradford建立了用考马斯亮蓝G250与蛋白质结合的原理，迅速、敏感的定量测定蛋白质的方法。
染料与蛋白质结合后引起染料最大吸收的改变，从465nm变为595nm，光吸收增加。
蛋白质-染料复合物具有高的消光系数，因此大大提高了蛋白质测定的灵敏度，最低检出量为1μg蛋白。
染料与蛋白质的结合是很迅速的过程，大约需2min，结合物的颜色在1h内是稳定的。
一些阳离子，如K+，Na+，Mg2+，(NH4)2SO4，乙醇等物质不干扰测定，而大量的去污剂如TritonX100，SDS等严重干扰测定，少量的去污剂可通过用适当的对照而消除。
由于染色法简单迅速，干扰物质少，灵敏度高，现已广泛应用于蛋白质含量的测定。
操作一、标准方法取含10～100μg蛋白质溶液于小试管中，用双蒸水或缓冲液调体积到0.1mL，然后加入5mL蛋白试剂，充分振荡混合，2min后于595nm测定光吸收值。
以0.1mL 双蒸水或缓冲液及5mL蛋白试剂作为空白对照。
二、微量蛋白分析法取含1～10μg蛋白质溶液，用双蒸水调体积到0.8mL，加0.2mL蛋白试剂，充分振荡混合，2min后于595nm测定光吸收值，以0.8mL双蒸水及0.2mL蛋白试剂作为空白对照。
用不同浓度的蛋白质溶液作标准曲线，以蛋白质浓度为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线作为定量的依据。
试剂配制：1.标准蛋白质溶液：可用牛血清清蛋白预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度配制成1mg/mL的溶液。
或根据牛血清清蛋白的紫外消光系数A 1% 1cm=6.6来确定。
2.蛋白试剂的配制：称取100mg考马斯亮蓝G250溶于50mL95%乙醇，加入100mL85%(W/V)磷酸，将溶液用水稀释到1000mL。
试剂的终浓度为0.01%考马斯亮蓝G250，4.7%(W/V)乙醇，和8.5%(W/V)磷酸。
Folin-酚法Folin—酚试剂法（Lowry法）（一）实验原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。
过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。
此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。
这两种显色反应产生深蓝色的原因是：?在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。
Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深蓝色（钼兰和钨兰的混合物）。
在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。
Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。
以后在生物化学领域得到广泛的应用。
这个测定法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时间较长，要精确控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。
对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰Lowry反应。
而且对后者的影响还要大得多。
酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。
浓度较低的尿素（0.5%），硫酸纳（1%），硝酸纳（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液对显色无影响，但这些物质浓度高时，必须作校正曲线。
含硫酸铵的溶液，只须加浓碳酸钠—氢氧化钠溶液，即可显色测定。
若样品酸度较高，显色后会色浅，则必须提高碳酸钠—氢氧化钠溶液的浓度1~2倍。
进行测定时，加F olin—酚试剂时要特别小心，因为该试剂仅在酸性pH 条件下稳定，但上述还原反应只在pH=10的情况下发生，故当Folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸—磷钨酸试剂被破坏之前，还原反应即能发生。
此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。
此法可检测的最低蛋白质量达5mg。
通常测定范围是20~250mg。
（二）试剂与器材1.试剂（1）试剂甲：（A）10克Na2CO3，2克NaOH和0.25克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）。
溶解于500毫升蒸馏水中。
（B）0.5克硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶解于100毫升蒸馏水中，每次使用前，将50份（A）与1份（B）混合，即为试剂甲。
（2）试剂乙：在2升磨口回流瓶中，加入100克钨酸钠（Na2WO4·2H2O）,25克钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸，100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结束时，加入150克硫酸锂（Li2SO4），50毫升蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴。
冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。
稀释至1升，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存。
使用时用标准NaOH滴定，酚酞作指示剂，然后适当稀释，约加水1倍，使最终的酸浓度为1N左右。
（3）标准蛋白质溶液:精确称取结晶牛血清清蛋白或g—球蛋白，溶于蒸馏水，浓度为250 mg/ml左右。
牛血清清蛋白溶于水若混浊，可改用0.9 % NaCl溶液。
2. 器材（1）可见光分光光度计（2）旋涡混合器（3）秒表（4）试管16支（三）操作方法1. 标准曲线的测定：取16支大试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分成两组，分别加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升标准蛋白质溶液（浓度为250mg/ml）。
用水补足到1.0毫升，然后每支试管加入5毫升试剂甲，在旋涡混合器上迅速混合，于室温（20～25℃）放置10分钟。
再逐管加入0.5毫升试剂乙（Folin—酚试剂），同样立即混匀。
这一步混合速度要快，否则会使显色程度减弱。
然后在室温下放置30分钟，以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照，于700nm处测定各管中溶液的吸光度值。
以蛋白质的量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制出标准曲线。
注意：因Lowry反应的显色随时间不断加深，因此各项操作必须精确控制时间，即第1支试管加入5毫升试剂甲后，开始计时，1分钟后，第2支试管加入5毫升试剂甲，2分钟后加第3支试管，余此类推。
全部试管加完试剂甲后若已超过10分钟，则第1支试管可立即加入0.5毫升试剂乙，1分钟后第2支试管加入0.5毫升试剂乙，2分钟后加第3支试管，余此类推。
待最后一支试管加完试剂后，再放置30分钟，然后开始测定光吸收。
每分钟测一个样品。
进行多试管操作时，为了防止出错，每位学生都必须在实验记录本上预先画好下面的表格。
表中是每个试管要加入的量（毫升），并按由左至右，由上至下的顺序，逐管加入。
最下面两排是计算出的每管中蛋白质的量（微克）和测得的吸光度值。
2. 样品的测定：取1毫升样品溶液（其中约含蛋白质20~250微克），按上述方法进行操作，取1毫升蒸馏水代替样品作为空白对照。
通常样品的测定也可与标准曲线的测定放在一起，同时进行。
即在标准曲线测定的各试管后面，再增加3个试管。
如上表中的8、9、10试管。
根据所测样品的吸光度值，在标准曲线上查出相应的蛋白质量，从而计算出样品溶液的蛋白质浓度。
注意，由于各种蛋白质含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸，显色的深浅往往随不同的蛋白质而变化。
因而本测定法通常只适用于测定蛋白质的相对浓度（相对于标准蛋白质）。
Folin-酚法测定蛋白质含量原理：磷钼酸和磷钨酸在碱性条件下，易被酚类化合物还原而呈蓝色反应．蛋白质中含有代酚基的酪氨酸，故有此反应．Folin---酚法的灵敏度是双缩脲法的100倍．试剂：一：１，4%碳酸钠；2，0.2N氢氧化钠；3，1%硫酸铜；4,2%酒石酸钾钠。
1和2等体积混合，3和4等体积混合，然后将两液以50：1混合(甲)。
当天使用。
二：1NFolin--酚试剂(乙)。
方法：标准曲线；试管中加0、0.2、0.40、0.60、1.00毫升酪蛋白溶液（500微克/毫升），加水补足１毫升，平行做两份。
按序各加５毫升试剂（甲），摇匀，室温置放１０分钟，再依次加入１N（0.5毫升）Folin----酚试剂（乙），摇匀，30摄氏度保温３０分钟。
然后在分光光度机上比色测定（A500）。
待测样品如上反应和测定，对照标准曲线，得出含量。
注意：酚和柠檬酸对测定有干扰，低浓度尿素，胍，硫酸钠，硝酸钠，三氯乙烯，乙醇，乙醚，丙酮对显色无影响。
BCA法蛋白质定量Bicinchoninic acid (BCA )法是近来广为应用的蛋白定量方法。
其原理与Lowery 法蛋白定量相似，即在碱性环境下蛋白质与Cu2+络合并将Cu2+还原成Cu1+。
BCA与Cu1+结合形成稳定的紫蓝色复合物，在562 nM处有高的光吸收值并与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。
与Lowery法相比，BCA蛋白测定方法灵敏度高，操作简单，试剂及其形成的颜色复合物稳定性俱佳，并且受干扰物质影响小。