25病毒感染的检查方法与防治原则 PPT课件
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病毒感染的检查方法及防治原则课件
分子生物学技术 PCR
Northern blot
中和试验
血凝抑制试验
补体结合试验 免疫扩散等
病毒的血清学诊断
第二节 病毒感染的防治
免疫预防
人工主动免疫 灭活疫苗： 乙脑疫苗 狂犬疫苗 流感灭活疫苗
HAV，HBV疫苗等 减毒活疫苗： 脊髓灰质炎疫苗 麻疹疫苗
HAV疫苗 腮腺炎疫苗 风疹疫苗
亚单位疫苗：
病毒感染的检查 方法及防治原则
法方养培大三
2、常规分离与鉴定 动物接种 鸡胚接种 组织培养 器官培养 移植培养 原代细胞培养 细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞培养
1、CPE
病毒在细胞内增殖的指标
ห้องสมุดไป่ตู้
正常细胞 病变细胞
2、红细胞吸附
光镜-----包涵体 电镜 免疫荧光
病毒的快速诊断
ELISA
Southern blot 杂交
药物防治
金刚烷胺-------抑制病毒脱壳-----预防感冒
RNA或DNA类似物 ------治疗疱疹性脑炎等疱疹病毒感染
阿糖腺苷类、 无环鸟苷、 二羟丙氨甲基鸟嘌呤 迭氮酰氨胸苷
抑制人类 HIV 逆转录作用
治疗AIDS
干扰素 干扰素诱生剂
中草药
病毒感染检查方法和防治原则
标本中的细菌或真菌等生长繁殖。尽量及时接种，如不能当时接种， 标本应保存在-70℃低温冰柜或液氮中。
• 供血清学检测的标本采集原则
– 取急性期（发病初期）和恢复期（病后1个月）双份血清，动态观 察双份血清抗体效价
二、病毒的分离
三 大
动物接种-动物模型
培 鸡胚培养
养
方 法
细胞培养
原代细胞培养 二倍体细胞培养
病毒在细胞内增殖的指征：
– 病毒致细胞病变效应（cytopathogenic effect, CPE）
• 病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱 缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。
• 普通光学倒置显微镜可观察
正常细胞
CPE
– 红细胞吸附现象
• 带有血凝素的病毒（如流感病毒）感染细胞后， 细胞膜上可出现病毒血凝素，能与加入的脊椎动 物（豚鼠、鸡、猴等）红细胞结合
第25章 病毒感染的检查方法和防治原则
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检： • 供分离病毒、检出核酸及抗原的标本采集原则
– 采集时间：发病初期（急性期）采集标本 – 标本类型：在感染部位采取，不同感染取不同部位的标本 – 标本运输：尽快冷藏送检，标本在处理、接种前切忌反复冻融 – 标本的处理与储存：采集标本时注意无菌操作。使用抗生素以抑制
减毒活疫苗：
Sabin脊髓灰质炎疫苗、风疹疫苗 麻疹疫苗、水痘疫苗、腮腺炎疫苗 甲型肝炎疫苗、乙型脑炎疫苗
其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗 等
• 人工主动免疫
– 灭活疫苗和减毒活疫苗
特点
免疫持续时间 保护力（与自然感染接近程度） 免疫球蛋白产生 粘膜免疫产生 细胞介导免疫产生 毒力回复 疫苗病毒运输和使用中的扩散 受宿主其他病毒干扰 室温稳定性
• 供血清学检测的标本采集原则
– 取急性期（发病初期）和恢复期（病后1个月）双份血清，动态观 察双份血清抗体效价
二、病毒的分离
三 大
动物接种-动物模型
培 鸡胚培养
养
方 法
细胞培养
原代细胞培养 二倍体细胞培养
病毒在细胞内增殖的指征：
– 病毒致细胞病变效应（cytopathogenic effect, CPE）
• 病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱 缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。
• 普通光学倒置显微镜可观察
正常细胞
CPE
– 红细胞吸附现象
• 带有血凝素的病毒（如流感病毒）感染细胞后， 细胞膜上可出现病毒血凝素，能与加入的脊椎动 物（豚鼠、鸡、猴等）红细胞结合
第25章 病毒感染的检查方法和防治原则
第一节 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检： • 供分离病毒、检出核酸及抗原的标本采集原则
– 采集时间：发病初期（急性期）采集标本 – 标本类型：在感染部位采取，不同感染取不同部位的标本 – 标本运输：尽快冷藏送检，标本在处理、接种前切忌反复冻融 – 标本的处理与储存：采集标本时注意无菌操作。使用抗生素以抑制
减毒活疫苗：
Sabin脊髓灰质炎疫苗、风疹疫苗 麻疹疫苗、水痘疫苗、腮腺炎疫苗 甲型肝炎疫苗、乙型脑炎疫苗
其他疫苗：基因工程疫苗，核酸疫苗 等
• 人工主动免疫
– 灭活疫苗和减毒活疫苗
特点
免疫持续时间 保护力（与自然感染接近程度） 免疫球蛋白产生 粘膜免疫产生 细胞介导免疫产生 毒力回复 疫苗病毒运输和使用中的扩散 受宿主其他病毒干扰 室温稳定性
病毒感染的检查及防治原则27页PPT
病毒感染的检查及防治原则•46、寓形源自内复几时，曷不委心任去 留。•
47、采菊东篱下，悠然见南山。
•
48、啸傲东轩下，聊复得此生。
•
49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
•
50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
47、采菊东篱下，悠然见南山。
•
48、啸傲东轩下，聊复得此生。
•
49、勤学如春起之苗，不见其增，日 有所长 。
•
50、环堵萧然，不蔽风日；短褐穿结 ，箪瓢 屡空， 晏如也 。
41、学问是异常珍贵的东西，从任何源泉吸 收都不可耻。——阿卜·日·法拉兹
42、只有在人群中间，才能认识自 己。——德国
43、重复别人所说的话，只需要教育； 而要挑战别人所说的话，则需要头脑。—— 玛丽·佩蒂博恩·普尔
44、卓越的人一大优点是：在不利与艰 难的遭遇里百折不饶。——贝多芬
45、自己的饭量自己知道。——苏联
病毒感染的检查方法与防治原则课件
根据病毒感染的风险级别，可以分为低风险、中等风险和高 风险三个级别，针对不同级别的风险，应采取相应的预防措 施，如加强个人防护、限制人员流动等。
综合防治的原则
01
综合防治是指采取多种措施综合 施策，全面加强病毒感染的防治 工作。
02
综合防治措施包括加强医疗救治、 开展科学研究、加强国际合作等， 同时还应加强社会动员，形成全 社会共同参与的防控格局。
流感病毒感染的症状
发热、咳嗽、喉咙痛、流鼻涕、全身乏力等。
流感病毒感染的检查方法
采集鼻咽拭子或痰液样本，进行病毒分离和 鉴定。
流感病毒感染的治疗原则
对症治疗，如解热镇痛、止咳化痰等，同时 保持良好的生活方式和饮食习惯。
流感病毒感染的预防措施
接种流感疫苗，保持良好的个人卫生习惯， 避免前往人群密集场所等。
环境消毒与灭菌
环境消毒与灭菌可以有效减少病毒在环境中的存活时间和传播途径。
常见的消毒灭菌方法包括使用消毒剂、紫外线消毒、高温灭菌等，可根据不同环境 和病毒特性选择合适的消毒灭菌方法。
在消毒灭菌过程中应注意安全，避免对人体造成伤害，同时要遵循相关法律法规和 操作规范。
病毒感染的案例分析
06
案例一：流感病毒感染的治疗与预防
支持治 疗
01
02
03
补充水分
病毒感染患者应保持充足 的水分摄入，以防止脱水。
休息
患者应充分休息，避免过 度劳累，以促进康复。
饮食调理
患者应保持合理的饮食结 构，多吃富含营养的食物， 以提高免疫力。
抗病毒治 疗
干扰素治疗
干扰素是一种抗病毒药物， 可以抑制病毒的复制和扩散。
核苷类似物治疗
核苷类似物是一种直接抑 制病毒复制的药物，如拉 米夫定等。
综合防治的原则
01
综合防治是指采取多种措施综合 施策，全面加强病毒感染的防治 工作。
02
综合防治措施包括加强医疗救治、 开展科学研究、加强国际合作等， 同时还应加强社会动员，形成全 社会共同参与的防控格局。
流感病毒感染的症状
发热、咳嗽、喉咙痛、流鼻涕、全身乏力等。
流感病毒感染的检查方法
采集鼻咽拭子或痰液样本，进行病毒分离和 鉴定。
流感病毒感染的治疗原则
对症治疗，如解热镇痛、止咳化痰等，同时 保持良好的生活方式和饮食习惯。
流感病毒感染的预防措施
接种流感疫苗，保持良好的个人卫生习惯， 避免前往人群密集场所等。
环境消毒与灭菌
环境消毒与灭菌可以有效减少病毒在环境中的存活时间和传播途径。
常见的消毒灭菌方法包括使用消毒剂、紫外线消毒、高温灭菌等，可根据不同环境 和病毒特性选择合适的消毒灭菌方法。
在消毒灭菌过程中应注意安全，避免对人体造成伤害，同时要遵循相关法律法规和 操作规范。
病毒感染的案例分析
06
案例一：流感病毒感染的治疗与预防
支持治 疗
01
02
03
补充水分
病毒感染患者应保持充足 的水分摄入，以防止脱水。
休息
患者应充分休息，避免过 度劳累，以促进康复。
饮食调理
患者应保持合理的饮食结 构，多吃富含营养的食物， 以提高免疫力。
抗病毒治 疗
干扰素治疗
干扰素是一种抗病毒药物， 可以抑制病毒的复制和扩散。
核苷类似物治疗
核苷类似物是一种直接抑 制病毒复制的药物，如拉 米夫定等。
学病毒感染的检查方法和防治原则优秀课件
– 细胞病变效应( cytopathic effect,CPE) – 红细胞吸附 – 病毒干扰作用 – 细胞代谢的改变
病毒鉴定：
病毒在细胞中增殖的指标 病毒形态学鉴定 病毒抗原鉴定 病毒基因鉴定
二、病毒的分离培养与鉴定
◙ 病毒的分离培养 ◙ 病毒: 的鉴定 ◙ 病毒数量及感染性测定
病毒数量及感染性测定：
病毒总量(活病毒+死病毒)： 血凝试验 感染性病毒量:
50%组织细胞感染量 蚀(空)斑形成试验
第二节
病毒感染特异性预防
微生物及其代谢产物
生ห้องสมุดไป่ตู้制品
动物免疫血清
（biological products）免疫细胞
细胞因子
预防和治疗感染性疾病
一、人工主动免疫常用生物制品
突变的二倍体细胞株)
应用: ◙ 病毒分离与鉴定 ◙ 病毒学实验研究 ◙ 不能用于制备疫苗
epithelioid cells
二、病毒的分离培养与鉴定
◙ 病毒的分离培养 ◙ 病毒:的鉴定 ◙ 病毒数量及感染性测定
病毒鉴定：
病毒在细胞中增殖的指标 病毒形态学鉴定 病毒抗原鉴定 病毒基因鉴定
⑴ 细胞病变效应( cytopathic effect,CPE)
(3) 细胞培养(cell culture)
根据细胞来源、染色体特征及传代次数分: 原代培养细胞 二倍体细胞株 传代细胞系或株
①原代培养细胞（primary cultural cells)
剪碎
蛋白酶
培养基
组织
组织块
分散的单个细胞
单层细胞
(原代细胞)
传代培养 单层细胞
(次代细胞)
①原代培养细胞（primary cultural cells)
病毒鉴定：
病毒在细胞中增殖的指标 病毒形态学鉴定 病毒抗原鉴定 病毒基因鉴定
二、病毒的分离培养与鉴定
◙ 病毒的分离培养 ◙ 病毒: 的鉴定 ◙ 病毒数量及感染性测定
病毒数量及感染性测定：
病毒总量(活病毒+死病毒)： 血凝试验 感染性病毒量:
50%组织细胞感染量 蚀(空)斑形成试验
第二节
病毒感染特异性预防
微生物及其代谢产物
生ห้องสมุดไป่ตู้制品
动物免疫血清
（biological products）免疫细胞
细胞因子
预防和治疗感染性疾病
一、人工主动免疫常用生物制品
突变的二倍体细胞株)
应用: ◙ 病毒分离与鉴定 ◙ 病毒学实验研究 ◙ 不能用于制备疫苗
epithelioid cells
二、病毒的分离培养与鉴定
◙ 病毒的分离培养 ◙ 病毒:的鉴定 ◙ 病毒数量及感染性测定
病毒鉴定：
病毒在细胞中增殖的指标 病毒形态学鉴定 病毒抗原鉴定 病毒基因鉴定
⑴ 细胞病变效应( cytopathic effect,CPE)
(3) 细胞培养(cell culture)
根据细胞来源、染色体特征及传代次数分: 原代培养细胞 二倍体细胞株 传代细胞系或株
①原代培养细胞（primary cultural cells)
剪碎
蛋白酶
培养基
组织
组织块
分散的单个细胞
单层细胞
(原代细胞)
传代培养 单层细胞
(次代细胞)
①原代培养细胞（primary cultural cells)
病毒感染的检查及防治原则ppt课件
第二节 病毒感染的防治原则
（二）病毒感染的治疗 1.干扰素 （1）种类：α、β、γ （2）作用机理：干扰素作用于邻近的正常细胞，使 之合成抗病毒蛋白，抑制病毒蛋白的合成，影响病 毒的组装和释放。 抗病毒蛋白只作用于病毒，对宿主细胞蛋白质合成没 有影响，故其副作用小。 （3）生物学活性：广谱抗病毒作用（治疗病毒感染乙肝、疱疹性角膜炎、带状疱疹、水痘等）、免疫 调节作用、抗肿瘤作用
第一节 病毒感染的检查
（三）病毒的分离培养 1.动物接种： 2.鸡胚培养：是一种经济简便的方法。 一般采用孵化9-12天的鸡胚，根据病毒的特 性将病毒标本接种于鸡胚的不同部位。 如疱疹病毒接种于绒毛尿囊上，流感病毒初 次分离接种于羊膜腔，传代培养接种于尿 囊内。 3、组织细胞培养
第一节 病毒感染的检查
（四）其他检查方法 1.病毒感染的血清学检查 2.病毒核酸杂交技术 3.聚合酶链反应（PCR） 是一种快速体外扩增特异性DNA片段的技术， 能在一至数小时内通过简单的酶促反应使 待测的DNA扩增至数百万倍，然后取反应 产物进行琼脂糖凝胶电泳，即可观察到核 酸条带，不需放射性核素标记。 该技术可用于病毒、细菌等微生物疾病的诊 断。
第二节 病毒感染的防治原则
（一）病毒感染的预防 （二）病毒感染的治疗 1.干扰素 是机体受到病毒或其他干扰素诱生剂刺激，由巨噬 细胞、淋巴细胞以及体细胞等多种细胞所产生的 一种糖蛋白。 （1）种类：α、β、γ α、β又称I型干扰素， γ又称Ⅱ型干扰素。 Ⅱ型干扰素对免疫细胞的调节作用强于I型干扰素， 而抗病毒作用I型干扰素强于Ⅱ型干扰素。
（三）病毒的分离培养 1.动物接种： 2.鸡胚培养： 3、组织细胞培养 将离体活组织块或分散的活细胞加以培养，统称为组织 培养。后者双称为单层细胞培养。是目前分离培养病 毒的主要方法。 通常用人胚肾细胞、人胎盘羊膜细胞、人胚二培体细胞、 鸡胚等原代细胞以及传代细胞等制备单层细胞培养。 病毒感染细胞后，大多数能引起细胞病变，无需染色即 可直接在普通光学显微镜下观察。 有的细胞不产生病变，但能改变培养液的PH，或出现 红细胞吸附及血凝现象（流感病毒），有时还可用免 疫荧光技术检查细胞中的病毒和细胞变化。 组织培养多用于病毒分离培养和检测中和抗体，制备疫 苗等。
病毒感染的检查方法与防治原则课件
埃可病毒
CPE(-)——埃可病毒(-) 风疹病毒(+)
CPE(+)——埃可病毒(+) 风疹病毒(-)
•病毒感染的检查方法与防治原则
•37
4. 病毒的分离培养与鉴定
◙ 病毒的分离培养 ◙ 病毒: 的鉴定 ◙ 病毒数量及感染性测定
•病毒感染的检查方法与防治原则
•38
病毒数量及感染性测定：
病毒总量(活病毒+死病毒)：血凝试验 感染性病毒量:
•22
(3) 细胞培养(cell culture)
根据细胞生长的方式分: 单层细胞培养（monolayer cell culture） 悬浮细胞培养（suspended cell culture）
•病毒感染的检查方法与防治原则
•23
(3) 细胞培养(cell culture)
根据细胞来源、染色体特征及传代次数分: 原代培养细胞 二倍体细胞株 传代细胞系或株
WHO将其命名为SARS冠状病毒
•病毒感染的检查方法与防治原则
•49
光镜（包涵体）
电镜
免疫荧光 免疫印迹
ELISA
核酸电泳 核酸杂交
分子生物学技术
PCR
基因测序 基因芯片
病毒感染的快速诊断
•病毒感染的检查方法与防治原则
•50
•病毒感染的检查方法与防治原则
•40
PLAQUE ASSAY
•病毒感染的检查方法与防治原则
•41
PLAQUE ASSAY
•病毒感染的检查方法与防治原则
•42
PLAQUE ASSAY
•病毒感染的检查方法与防治原则
•43
蚀(空)斑形成试验（plaque assay）
分别为10-1、10-2、10-3倍稀释度的HCMV病毒液感染的HEL细胞
CPE(-)——埃可病毒(-) 风疹病毒(+)
CPE(+)——埃可病毒(+) 风疹病毒(-)
•病毒感染的检查方法与防治原则
•37
4. 病毒的分离培养与鉴定
◙ 病毒的分离培养 ◙ 病毒: 的鉴定 ◙ 病毒数量及感染性测定
•病毒感染的检查方法与防治原则
•38
病毒数量及感染性测定：
病毒总量(活病毒+死病毒)：血凝试验 感染性病毒量:
•22
(3) 细胞培养(cell culture)
根据细胞生长的方式分: 单层细胞培养（monolayer cell culture） 悬浮细胞培养（suspended cell culture）
•病毒感染的检查方法与防治原则
•23
(3) 细胞培养(cell culture)
根据细胞来源、染色体特征及传代次数分: 原代培养细胞 二倍体细胞株 传代细胞系或株
WHO将其命名为SARS冠状病毒
•病毒感染的检查方法与防治原则
•49
光镜（包涵体）
电镜
免疫荧光 免疫印迹
ELISA
核酸电泳 核酸杂交
分子生物学技术
PCR
基因测序 基因芯片
病毒感染的快速诊断
•病毒感染的检查方法与防治原则
•50
•病毒感染的检查方法与防治原则
•40
PLAQUE ASSAY
•病毒感染的检查方法与防治原则
•41
PLAQUE ASSAY
•病毒感染的检查方法与防治原则
•42
PLAQUE ASSAY
•病毒感染的检查方法与防治原则
•43
蚀(空)斑形成试验（plaque assay）
分别为10-1、10-2、10-3倍稀释度的HCMV病毒液感染的HEL细胞
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◙ 按疾病种类与病程采取不同标本 ◙ 在发病早期与用药之前采取标本 ◙ 无菌操作，有菌标本用“双抗”（青、链霉素） 或
“三抗”（青、链霉素+两性霉素B）处理 ◙ 冷藏速送，病变组织用50％甘油保存 ◙ 血清学检测：IgM —单份血清, IgG —双份血清
二、检查方法
◙ 病毒的形态学检查 ◙ 病毒的血清学检查 ◙ 病毒的分子生物学检查 ◙ 病毒的分离培养与鉴定
应用: ◙ 病毒分离与鉴定 ◙ 病毒学实验研究 ◙ 制备疫苗
fibroblastic cells
③传代细胞系(continuous cell line )
能在体外无限传代的细胞系。如 HeLa, Hep-2
特点: ◙ 对多种病毒敏感性高 ◙ 繁殖能力强,传代时间长 ◙ 有致癌危险(来源于癌细胞
或突变的二倍体细胞株)
病毒在敏感细胞内增殖引起的光镜下可 见的细胞病理改变。
①CPE：病毒感染细胞发生形态改变
②CPE：病毒感染细 胞与邻近细胞融合
Syncytium formation in cell culture caused by RSV (top), and measles virus (bottom).
◙ 病毒的分离培养 ◙ 病毒: 的鉴定 ◙ 病毒数量及感染性测定
病毒的分离培养方法：
动物接种
:
鸡胚培养 细胞培养
⑴ 动物接种(animal inoculation)
动物：鼠、兔、猴、黑猩猩等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高、动物
体内常带有潜伏病毒。 目前已很少应用。
2. 病毒血清学检查
◙ 已知抗原—测抗体（诊断） ◙ 已知抗体—测抗原（鉴定病毒属、种、
型、亚型）
2. 病毒血清学检查
方法：
(1) 中和试验(Neutralization test) (2) 血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition test) (3) 免疫标记法(FIA、EIA、RIA) ⑷ 蛋白印迹(Western blot)
Immunofluorescense test
Immunofluorescense test
Positive immunofluorescence test for rabies virus antigen. (Source: CDC)
Enzyme immunoassay (EIA)
HEL细胞中CMV IE1蛋白的表达
3. 病毒分子生物学检查
方法：
核酸电泳(nucleic acid electrophoresis) 核酸杂交(nucleic acid hybridization) 核酸扩增(PCR） 基因芯片(gene chip) 基因测序(gene sequence)
4. 病毒的分离培养与鉴定
ELISA
Coloured wells indicate reactivity
Western blot
AIDS的确诊试验
3. 病毒分子生物学检查
优点：
可用于检测常规培养系统不能培养的病毒 可用于检测少量标本或含少量病毒的标本 可用于抗体产生前或不能产生抗体的免疫缺陷患者检测 可对病毒进行定量检测，有助于疗效监测 可对病毒进行基因分型 灵敏度高、特异性好、快速、简捷
第25章 病毒感染的检查 方法与防治原则
讲授 陈利玉
内容
第一节 病毒感染的诊断(检查方法） 第二节 病毒感染的特异性预防(自学） 第三节 病毒感染的治疗（自学）
第一节 病毒感染的诊断
（Diagnosis of viral infection）
◙ 标本采集与送检原则 ◙ 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检原则
(3) 细胞培养(cell culture)
根据细胞生长的方式分: 单层细胞培养（monolayer cell culture） 悬浮细胞培养（suspended cell culture）
(3) 细胞培养(cell culture)
根据细胞来源、染色体特征及传代次数分: 原代培养细胞 二倍体细胞株 传代细胞系或株
⑵ 鸡胚培养(embryonated egg culture)
受精卵
孵育10-12天
鸡胚
接种病毒
孵育2-7天
收获相应的材料进行鉴定
鸡胚接种部位：
尿囊腔接种
羊膜腔接种
绒毛尿囊膜接种
卵黄囊接种
⑵ 鸡胚培养(embryonated egg culture)
优点：
易管理 不带微生物 成本较低
缺点：
操作程序复杂 目前用鸡胚培养的病毒主要是流感病毒
1. 病毒形态学检查
电子显微镜：可观察各种病毒的形态 但设备贵、操作复杂，应用受限
光学显微镜：可观察大病毒（痘病毒）和包crographs
呼肠病毒感染回肠上皮细胞电镜照片
Inclusion body
Negry body
Cytomegalic cell that contains a dense, "owl's eye," acidophilic intranuclear inclusion body
①原代培养细胞（primary cultural cells)
剪碎 蛋白酶 组织 组织块 分散的单个细胞
培养基 单层细胞
(原代细胞)
传代培养 单层细胞
(次代细胞)
①原代培养细胞（primary cultural cells)
epithelial cells
①原代培养细胞（primary cultural cells)
特点:
◙ 对多种病毒敏感 ◙ 生长能力有限, 获取成本高 ◙ 可携带潜伏病毒
应用: ◙ 病毒分离与鉴定 ◙ 病毒学实验研究 ◙ 不能用于制备疫苗
②二倍体细胞株(diploid cell strain)
体外分裂50~100代仍保持二倍染色体数目的单型细胞
特点: ◙ 对多种病毒敏感 ◙ 不带异种蛋白(人源性) ◙ 不带病毒,无致瘤潜能
应用: ◙ 病毒分离与鉴定 ◙ 病毒学实验研究 ◙ 不能用于制备疫苗
epithelioid cells
4. 病毒的分离培养与鉴定
◙ 病毒的分离培养 ◙ 病毒: 的鉴定 ◙ 病毒数量及感染性测定
病毒鉴定：
病毒在细胞中增殖的指标 病毒形态学鉴定 病毒抗原鉴定 病毒基因鉴定
⑴ 细胞病变效应( cytopathic effect,CPE)
“三抗”（青、链霉素+两性霉素B）处理 ◙ 冷藏速送，病变组织用50％甘油保存 ◙ 血清学检测：IgM —单份血清, IgG —双份血清
二、检查方法
◙ 病毒的形态学检查 ◙ 病毒的血清学检查 ◙ 病毒的分子生物学检查 ◙ 病毒的分离培养与鉴定
应用: ◙ 病毒分离与鉴定 ◙ 病毒学实验研究 ◙ 制备疫苗
fibroblastic cells
③传代细胞系(continuous cell line )
能在体外无限传代的细胞系。如 HeLa, Hep-2
特点: ◙ 对多种病毒敏感性高 ◙ 繁殖能力强,传代时间长 ◙ 有致癌危险(来源于癌细胞
或突变的二倍体细胞株)
病毒在敏感细胞内增殖引起的光镜下可 见的细胞病理改变。
①CPE：病毒感染细胞发生形态改变
②CPE：病毒感染细 胞与邻近细胞融合
Syncytium formation in cell culture caused by RSV (top), and measles virus (bottom).
◙ 病毒的分离培养 ◙ 病毒: 的鉴定 ◙ 病毒数量及感染性测定
病毒的分离培养方法：
动物接种
:
鸡胚培养 细胞培养
⑴ 动物接种(animal inoculation)
动物：鼠、兔、猴、黑猩猩等 优点：结果易观察，可建立动物模型 缺点：有饲养条件要求，费用高、动物
体内常带有潜伏病毒。 目前已很少应用。
2. 病毒血清学检查
◙ 已知抗原—测抗体（诊断） ◙ 已知抗体—测抗原（鉴定病毒属、种、
型、亚型）
2. 病毒血清学检查
方法：
(1) 中和试验(Neutralization test) (2) 血凝抑制试验(Hemagglutination inhibition test) (3) 免疫标记法(FIA、EIA、RIA) ⑷ 蛋白印迹(Western blot)
Immunofluorescense test
Immunofluorescense test
Positive immunofluorescence test for rabies virus antigen. (Source: CDC)
Enzyme immunoassay (EIA)
HEL细胞中CMV IE1蛋白的表达
3. 病毒分子生物学检查
方法：
核酸电泳(nucleic acid electrophoresis) 核酸杂交(nucleic acid hybridization) 核酸扩增(PCR） 基因芯片(gene chip) 基因测序(gene sequence)
4. 病毒的分离培养与鉴定
ELISA
Coloured wells indicate reactivity
Western blot
AIDS的确诊试验
3. 病毒分子生物学检查
优点：
可用于检测常规培养系统不能培养的病毒 可用于检测少量标本或含少量病毒的标本 可用于抗体产生前或不能产生抗体的免疫缺陷患者检测 可对病毒进行定量检测，有助于疗效监测 可对病毒进行基因分型 灵敏度高、特异性好、快速、简捷
第25章 病毒感染的检查 方法与防治原则
讲授 陈利玉
内容
第一节 病毒感染的诊断(检查方法） 第二节 病毒感染的特异性预防(自学） 第三节 病毒感染的治疗（自学）
第一节 病毒感染的诊断
（Diagnosis of viral infection）
◙ 标本采集与送检原则 ◙ 病毒感染的检查方法
一、标本采集与送检原则
(3) 细胞培养(cell culture)
根据细胞生长的方式分: 单层细胞培养（monolayer cell culture） 悬浮细胞培养（suspended cell culture）
(3) 细胞培养(cell culture)
根据细胞来源、染色体特征及传代次数分: 原代培养细胞 二倍体细胞株 传代细胞系或株
⑵ 鸡胚培养(embryonated egg culture)
受精卵
孵育10-12天
鸡胚
接种病毒
孵育2-7天
收获相应的材料进行鉴定
鸡胚接种部位：
尿囊腔接种
羊膜腔接种
绒毛尿囊膜接种
卵黄囊接种
⑵ 鸡胚培养(embryonated egg culture)
优点：
易管理 不带微生物 成本较低
缺点：
操作程序复杂 目前用鸡胚培养的病毒主要是流感病毒
1. 病毒形态学检查
电子显微镜：可观察各种病毒的形态 但设备贵、操作复杂，应用受限
光学显微镜：可观察大病毒（痘病毒）和包crographs
呼肠病毒感染回肠上皮细胞电镜照片
Inclusion body
Negry body
Cytomegalic cell that contains a dense, "owl's eye," acidophilic intranuclear inclusion body
①原代培养细胞（primary cultural cells)
剪碎 蛋白酶 组织 组织块 分散的单个细胞
培养基 单层细胞
(原代细胞)
传代培养 单层细胞
(次代细胞)
①原代培养细胞（primary cultural cells)
epithelial cells
①原代培养细胞（primary cultural cells)
特点:
◙ 对多种病毒敏感 ◙ 生长能力有限, 获取成本高 ◙ 可携带潜伏病毒
应用: ◙ 病毒分离与鉴定 ◙ 病毒学实验研究 ◙ 不能用于制备疫苗
②二倍体细胞株(diploid cell strain)
体外分裂50~100代仍保持二倍染色体数目的单型细胞
特点: ◙ 对多种病毒敏感 ◙ 不带异种蛋白(人源性) ◙ 不带病毒,无致瘤潜能
应用: ◙ 病毒分离与鉴定 ◙ 病毒学实验研究 ◙ 不能用于制备疫苗
epithelioid cells
4. 病毒的分离培养与鉴定
◙ 病毒的分离培养 ◙ 病毒: 的鉴定 ◙ 病毒数量及感染性测定
病毒鉴定：
病毒在细胞中增殖的指标 病毒形态学鉴定 病毒抗原鉴定 病毒基因鉴定
⑴ 细胞病变效应( cytopathic effect,CPE)