C18柱使用手册
C18色谱柱使用指南
C18色谱柱使用指南1.样品准备在进行C18色谱柱分析之前，样品通常需要进行预处理。
对于有机溶剂溶解的样品，可以通过过滤来去除杂质颗粒。
对于水溶性样品，可以使用有机溶剂混合溶解，以提高样品在有机相中的溶解度。
此外，还可以使用离心机除去悬浮物和沉淀物。
2.工作条件选择C18色谱柱可以在不同的工作条件下使用，包括流动相组成、流速、柱温等。
在选择工作条件时，需要考虑目标化合物的极性、分离程度和保留时间等因素。
常见的流动相组成包括水和有机溶剂的混合物，比如水/甲醇和水/乙腈。
流速的选择需要权衡分离效果和分析时间，一般流速在0.5-2 mL/min之间。
柱温的控制可以改变样品的保留行为，从而影响分离效果。
3.柱平衡在进行实际分析前，C18色谱柱需要进行柱平衡。
柱平衡的目的是使色谱柱内部的填料达到稳定的状态，从而提高分离效果和重复性。
柱平衡可以通过流动相运行一段时间来实现，一般需要10-20柱体积的流动相通过柱床。
4.样品注射在C18色谱柱中，样品通常是通过进样器注入。
选择适当的进样量是保证分析准确性和可重复性的关键。
进样量过大会导致色谱峰扩展和分离效果下降，进样量过小则可能导致分析信号过低。
通常情况下，进样量在1-10μL之间。
5.分析在进行C18色谱柱分析时，需要关注色谱峰的对称性、解析度和保留时间等指标。
色谱峰的对称性可以通过调整流速、压力、温度等因素来改善。
解析度是衡量两个相邻峰之间的分离程度，可以通过调整流动相组成和流速等来增加。
保留时间是指化合物在色谱柱中停留的时间，可以通过调整流动相组成和流速来改变。
总结：C18色谱柱是常用的反相色谱柱，在样品准备、工作条件选择、柱平衡、样品注射和分析等方面有一些注意事项。
正确的样品准备、选择合适的工作条件、进行柱平衡、控制进样量和关注分析指标可以提高C18色谱柱的分析效果和重复性。
在使用C18色谱柱进行实验时，需要严格按照相关的操作规范进行操作，以确保实验结果的准确性和可靠性。
YMC-Triart C18,C8, Phenyl, PFP色谱柱用户手册说明书
YMC-Triart C18,C8, Phenyl, PFP 使用说明书( HPLC 用：5 µm, 3 µm ／UHPLC 用：1.9 µm )1. 前言非常感谢您选用YMC 公司的高效液相/超高效液相(HPLC/UPLC)用色谱柱YMC-Triart 系列。
YMC-Triart 采用新开发的混合型硅胶基质，是能在多种分析条件下都可使用的新一代反相色谱柱。
与普通的反相柱相比，具有高度的耐久性和良好的分离性能，对于大多数化合物的分离而言是最适合的首选色谱柱。
本公司在YMC-Triart 系列的制造过程中进行了严格的质量管理，保证能为客户提供最高品质的产品（具体性能指标请参照色谱柱盒内的COLUMN INSPECTION REPORT ）。
为了使提供给您的色谱柱最大限度发挥其性能并能够长时间的使用，敬请仔细阅读使用说明书后正确使用本产品。
2． 产品规格一览3． 色谱柱的连接型号及其系统设定中的注意点色谱柱连接样式：产品型号后面的【PT 】是UPLC ＊的互换连接型号，【WT 】是WATERS 连接型号。
・ 配管的连接部分如有空隙可能会造成漏液或色谱柱性能（理论塔板、峰形对称性）降低。
为了不产生多余的空隙，请注意配管的法兰先端长度和其截面。
・ UPLC(超高效LC)用1.9 µm 的填料色谱柱，与以往的5 µm 和3 µm 填料的色谱柱相比压力较高，一般情况下，可适用于耐60MPa 以上的UPLC 系统，使用时请注意分析系统和连接配管的耐压性。
我们为色谱柱连接使用准备了可移动式法兰的耐高压（耐压137Mpa ）配件，详细情况请向我司查询 ・ 在系统流路上引起的样品扩散（柱外扩散）会给色谱柱性能带来非常大的影响，特别是当色谱柱内径在2mm 以下时。
为获得最佳柱性能，请根据以下提示对分析系统的使用环境进行优化。
1）进样器与色谱柱间、色谱柱与检测器间的配管请尽可能使用长度短、内径小（0.15mm 以下）的管线，同时还请注意不要在连接部分产生空隙。
C18色谱柱通用使用方法
C18色谱柱通用使用方法1.柱的准备：a.检查柱的完整性和封闭性。
确保柱的端口和连接器没有损坏，没有杂质进入柱内。
b.检查柱的包装是否完好。
确保柱没有受到损坏或污染。
2.柱的预处理：a.将新的C18色谱柱进行预处理。
通常情况下，柱需要进行反相条件下的"洗涤"，以去除柱内的杂质和残留物。
b.使用适当的洗涤溶液，如乙腈/水或甲醇/水混合溶液，进行柱的洗涤。
通常需要使用高浓度有机溶剂，如100%乙腈或甲醇，进行洗涤。
c. 洗涤柱时，使用较高的流速，通常为1-2 mL/min，以加快杂质的去除。
3.样品的准备：a.样品前处理。
根据需要，对样品进行适当的前处理，如过滤、离心、稀释等。
b.样品溶剂的选择。
根据样品的性质选择合适的溶剂，通常为乙腈/水或甲醇/水混合溶剂。
c.样品的溶解。
将样品溶解于适当的溶剂中，并通过过滤器进行过滤，以去除悬浮物和固体杂质。
4.色谱条件的设置：a.流动相的选择。
根据需要选择合适的流动相组成，通常为乙腈/水或甲醇/水混合溶剂。
b.pH值的调节。
根据需要调节流动相的pH值，以适应目标化合物的分离。
c. 流速的设置。
根据样品的复杂性和分离的要求，设置合适的流速。
通常情况下，流速为0.5-2 mL/min。
d.分析温度的控制。
根据样品的性质和分析要求，设置合适的温度。
通常为室温或稍高温度。
5.色谱分离：a.样品注射。
将样品通过自动进样器或手动注射器注入到色谱柱中。
b.等待分离。
在流动相的作用下，样品组分将按照其亲水性和疏水性被分离。
根据需要，调节流动相的组成和温度，以实现最佳的分离效果。
c.收集分离的组分。
根据需要，收集分离出的目标组分，可以通过分级洗脱或梯度洗脱的方式进行。
6.柱的保养：a.柱的再生。
根据需要，可以使用适当的再生溶液（如有机溶剂）对柱进行再生，以去除残留的样品和杂质。
b.柱的保存。
在不使用柱时，将其存放在干燥、避光和低温的环境中，以保持柱的稳定性和使用寿命。
C18色谱柱的使用
C18色谱柱的使用一、C18色谱柱的选择C18色谱柱有多种尺寸和填充材料可供选择。
常见的C18色谱柱尺寸有2.1mm×50mm、3.0mm×100mm、4.6mm×150mm等。
填充材料也有很多种，如高纯度的C18、低碱性的C18等。
选择合适的C18色谱柱需要依据实验目的、样品类型和色谱条件等因素进行考虑。
二、C18色谱柱的预处理在使用之前，需要对C18色谱柱进行预处理，以去除可能存在的杂质和保证柱子的稳定性。
常见的预处理方法有使用高压液相系统进行洗脱、使用有机溶剂或酸碱溶液进行洗脱等。
此外，需要注意避免用过酸性或过碱性的洗脱剂，以免对C18柱填料造成损害。
三、C18色谱柱的条件优化和样品准备在进行分离实验之前，需要对色谱条件进行优化，包括流动相选择、流速调整、梯度程序、检测波长等。
此外，样品的准备也是至关重要的，在合适的溶剂中溶解样品，避免样品溶解不完全和产生沉淀等问题。
四、C18色谱柱的操作注意事项1.避免样品浓度过高：过高的样品浓度会导致柱子的负荷过重，影响柱寿命和分离效果。
2.避免使用过强的溶剂强度：过强的溶剂强度会导致溶剂胁迫效应，影响柱子分离和保护柱寿命。
3.柱温控制：C18色谱柱的使用温度一般在室温到60摄氏度之间，过高的温度会导致柱寿命降低、分离效果不理想；过低的温度则会影响分离速度。
4.关注保护柱：在使用过程中，需要使用保护柱来避免样品残留或杂质对主柱的损害。
同时注意定期更换保护柱和保证流量正常。
5.适时进行柱再生：在使用C18色谱柱一段时间后，柱子表面可能会有附着物或杂质，可以通过使用一些合适的再生剂来清洗柱面并恢复分离性能。
总之，C18色谱柱是一种常用且有效的色谱柱，具有广泛的应用前景。
正确选择和使用C18色谱柱，能够得到较好的分离效果和分析结果。
在使用过程中，需要注意柱的预处理、条件优化和操作注意事项，以保证实验的顺利进行。
C18色谱柱通用使用方法
C18/C8色谱柱使用方法
一、新柱活化：新的色谱柱活化：采用100%甲醇1ml/min冲洗60min，
再换成流动相进行平衡；如果流动相中含有缓冲盐，在换成流动相前，请使用过渡流动相过渡后再换流动相平衡；
二、色谱柱保存溶液与评价报告一致。
三、在使用过程中如果流动相没有磷酸缓冲盐的存在，新柱子在使用
之前需用100%的甲醇（色谱纯）以0.5~1.0的流速平衡30min 左右，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。
做完实验再用100%的纯甲醇（色谱纯）以0.5~1.0的流速冲洗30min左右，最后用100%的纯甲醇（色谱纯）保存。
四、在使用过程中如果流动相有磷酸缓冲盐的存在，新柱在使用之前
需用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min 左右，将新柱高浓度甲醇溶液完全置换掉，进流动相，待系统基线平稳直接进样即可。
做完实验再用10%的甲醇（色谱纯）水溶液以0.5~1.0的流速冲洗60min左右，将色谱柱中缓冲盐溶液完全置换掉，最后用100%的纯甲醇清洗色谱柱30min，最后用纯甲醇保存色谱柱。
C18柱使用指南
C18柱使用指南1、新柱在使用前需用纯有机试剂（如甲醇、乙腈）低流速冲洗，冲洗体积以20倍柱体积为宜，以便固定相能充分润湿、碳链舒展彻底，使色谱柱的性能达到巅峰状态；
2、使用时需在每日实验结束后冲洗色谱柱，尤其是流动相中含有酸或盐时，需将色谱柱中的酸或盐冲洗干净，通常建议用10%甲醇水冲洗20倍柱体积；
3、长期保存前要将色谱柱彻底冲洗，建议冲洗3-4小时以上，最后保存在纯有机试剂或高
比例的有机试剂溶液（如90%
甲醇水）中；
4、日常保存溶剂（即第二天需继续使用）尽量与3中相同；
5、由于C18柱（极性改性处理的除外）的固定相疏水性较强，在使用过程中尽量不要使用高水相条件，若水相比例过高易引起固定相疏水塌陷，引起柱效迅速下降，甚至造成不可逆的负面影响，（Diamonsil2）由于碳载量高，表现尤为明显，建议使用过程中水相比例不超过90%
6、色谱柱压力升高、柱性能下降：通常为色谱柱被污染，对色谱柱进行再生处理可恢复部分柱效；
7、色谱柱压力骤升：通常由盐析出或筛板堵塞引起，若是盐析出，用10%甲醇水低流速冲洗至压力恢复即可；若判断并非盐析出，以纯甲醇或10%
甲醇水为流动相反冲色谱柱（将色谱柱反接，不接检测器），若反冲半小时仍无效果则说明反冲无效，需寻找其他原因。
色谱柱再生程序：
按照下列次序冲洗色谱柱，冲洗体积均为20倍柱体积：
10%甲醇水→甲醇→异丙醇（或氯仿）→甲醇→10%甲醇水（步骤3选用异丙醇时，由于异丙醇粘度较大，需适当降低流速，建议流速设为0.2-0.3ml/min）
体积计算表：。
C18色谱柱的使用
C18色谱柱的使用C18色谱柱是一种常用的反相色谱柱，广泛应用于化学分析、生物分析、药物研发等领域。
它具有良好的选择性和分离效果，对于疏水性化合物的分析具有很高的灵敏度和分辨率。
本文将详细介绍C18色谱柱的使用方法及其在不同领域的应用。
一、C18色谱柱的使用方法1.样品制备：将待分析的样品溶解在适当的有机溶剂中，通常是甲醇、乙腈等。
确保样品的浓度适当，以避免过高的浓度造成柱阻塞或过低的浓度造成分离不彻底。
2.色谱柱的准备：将C18色谱柱安装在色谱仪上，并根据柱子的要求进行预处理。
通常情况下，使用乙腈/水混合溶液进行洗脱，以去除柱子中的杂质和残留的有机溶剂。
3.流动相的选择：根据待分析化合物的性质选择合适的流动相。
C18色谱柱通常使用有机溶剂和水的混合物作为流动相，其中有机溶剂的比例越高，柱子的亲水性越低，适用于疏水性化合物的分离。
常用的有机溶剂包括甲醇、乙腈、异丙醇等。
4.色谱条件的优化：根据待分析化合物的性质和目标分离效果，优化色谱条件。
可以尝试不同的流速、温度、洗脱梯度等参数，以获得最佳的分离效果。
5.注射样品：将样品注射进色谱柱中，注意控制注射量，以避免样品过多造成柱阻塞或过少造成分离不完全。
通常情况下，使用自动进样器进行样品注射，以提高分析的准确性和重复性。
6.数据分析：通过检测器检测柱出口的化合物，得到色谱图。
根据峰的形状、相对保留时间等参数，对化合物进行定性和定量分析。
二、C18色谱柱的应用领域1.化学分析：C18色谱柱广泛应用于有机化学、环境分析、食品安全等领域的化学分析中。
通过C18色谱柱的分离效果，可以对复杂的混合物进行分离和鉴定，提高分析的准确性和灵敏度。
2.生物分析：C18色谱柱在生物分析中的应用也非常广泛。
例如，可以用于蛋白质和肽段的分离和纯化，用于核酸的分离和测序，用于药物代谢产物的分离和鉴定等。
C18色谱柱的选择性和分离效果能够满足对于生物分子的高分辨率分析需求。
3.药物研发：在药物研发中，C18色谱柱常用于药物的分离和纯化。
C18色谱柱通用使用方法
C18色谱柱通用使用方法1.前处理在使用C18色谱柱之前，需要进行前处理步骤。
首先，用洗涤溶液洗涤色谱柱。
一般来说，常用的洗涤溶液有甲醇、醋酸乙酯、水等。
然后，进行平衡步骤，即用合适的溶剂或缓冲液进行平衡，确保色谱柱内部的pH和温度稳定。
2.样品处理在进行样品处理之前，需要先将样品溶解在合适的溶剂中，以获得适合色谱分离的样品溶液。
然后，通过过滤或离心等方法去除悬浮物和杂质。
3.注射样品将经过处理的样品注入色谱柱，通常使用自动进样器或手动进样器进行。
在注射之前，可以选择使用一定的进样溶液进行稀释，以避免样品浓度过高导致色谱柱阻塞。
4.流动相选择选择合适的流动相对于分离和纯化化合物至关重要。
通常，流动相是由溶剂和缓冲液组成的。
选择流动相的重要参数包括pH值、离子强度、有机溶剂浓度等。
在一些情况下，可能需要进行溶剂梯度洗脱或流动相变化来实现较好的分离效果。
5.进行色谱分离将注射的样品放入色谱仪中，设置合适的流速和检测波长。
使用C18色谱柱时，样品中的化合物会根据它们的亲水性和疏水性在色谱柱上发生分离。
不同的化合物在色谱柱上的停留时间不同，从而实现分离。
6.数据分析和解释通过检测器对柱液进行检测并记录数据。
根据分离物的峰面积、保留时间、峰形等信息，可以对样品中的化合物进行定量分析和鉴定。
同时，对于复杂的样品，可能需要使用色谱质谱联用技术（LC-MS）进行物质的进一步鉴定。
7.后处理在完成色谱分离之后，需要进行色谱柱的后处理。
首先，使用洗脱溶剂进行柱洗脱，以去除残留在柱中的样品和污染物。
然后，用合适的保存液进行保护。
保护色谱柱可以延长其使用寿命，并确保下次使用时仍然具有良好的分离效果。
这是C18色谱柱的通用使用方法。
在实际操作过程中，可能会根据具体的样品性质和实验要求进行一定的调整和优化。
熟练掌握色谱柱的使用方法，对于获得高质量、稳定的色谱分离结果至关重要。
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正相、反相和极性胶联柱使用手册
注意
此色谱柱填充的是改性硅胶材料。
向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会导致柱子损坏。
在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。
未正确地使用不能享受保修待遇。
1．简介
此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。
硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。
反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。
极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。
建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。
也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将反相柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。
2．色谱柱老化
在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。
一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。
A．在反相条件下老化
要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。
在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。
因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。
如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。
缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。
B．在正相条件下老化
柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。
柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。
使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。
干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。
C．对于极性键合柱的特殊说明
由于这些柱子可以用于反相或者正相条件，在进行老化以前，一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。
如果这些溶剂不能混溶，必须先使用一个合适的缓冲溶剂进行冲洗。
3．洗脱液
注意第1节和第2节。
一定不要使用pH低于2或者高于7的缓冲液，这是由于它们会改变固定相的性质。
极性键合柱最好使用在3到5 之间。
在使用以前，洗脱液要进行脱气，以及使用0.5微米的滤膜过滤，以免发生检测和泵送问题。
一定要在开始使用系统以前检查水溶液中有否微生物生长，否则你的柱子会堵塞，柱压会升高到无法接受的水平。
4．流量和压力
柱内径（毫米）流速（ml/min）
最佳最高
2.0 0.2 1.0
3.0 0.4 2.0
4.6 1.0 4.0
10.0 4.7 18.0
注意：最高压力：不锈钢柱：4500psi；玻璃柱：3000psi
增加流速或者降低流速要采取小的间隔变化以防止填充床的扰动。
如果你想更换柱子，要降低流量至0，等待洗脱液完全流出柱子为止（2分钟）。
拆除柱子而没有等待压力的降低会损坏柱子。
高柱压的产生一般是由于不正确地使用柱子的结果。
使用保护柱（见第6节）会防止污染物沉积在分析柱上。
5．样品准备
保持柱子长寿的关键是进样前适当的的样品处理。
你必须防止将疏水性/与流动相极性差别很大的化合物泵入色谱柱，不管是来自流动相还是样品。
特别地，要禁止导入颗粒杂质。
这些最终都会造成操作压力的增高而且非常困难或者不可能去除。
6．保护柱
一定要使用保护柱，因为样品和洗脱液污染可能会造成柱压力的增高而且影响选择性。
一般保护柱的选择以同型号为原则，这样柱子的填充材料与用于分析的色谱柱的材料相似。
当柱压增高的或者观察到柱效降低的时候就需要更换保护柱了。
7．进样量和浓度
柱子的最大载样量取决于：柱子的型号，使用的条件和样品的类型。
很难给出一个一般的指示。
对于进样体积的建议则比较容易（见表中的典型值）。
注射了太大体积或太浓的样品会使峰展宽或者峰融合。
柱尺寸（长度*内径）最大样品体积
250×2.0mm ±10μl
200×3.0mm ±15μl
250×4.6mm ±50μl
250×10.0mm ±250μl
8．温度
HPLC柱最好在柱温箱中使用。
重复性取决于温度控制。
最佳的温度与特定的应用有关。
温度影响洗脱液流动的线速度。
在使用ChromSep玻璃柱的时候，一定要调节流速使压力保持在3000psi以下。
9．贮存
一定不要在柱子内充满缓冲液或者其他含盐类的洗脱液的情况下贮存色谱柱。
贮存溶剂应当含有至少20%的有机溶剂，以防止有细菌的生长。
10．柱效损失的可能原因
1．额外的峰展宽。
当使用小直径或者长度较短的柱子时，峰展宽的情况可能比较明显。
要保证管路的长度和内径都保持最小。
检查进样体积和检测器检查池体积是否适用于柱体积。
2．洗脱的平衡时间不够。
3．不正确柱温。
4．不正确的修正浓度。
5．床压缩。
使用了过大的洗脱流速。
将柱子反向，使用低流速。
11.柱效丧失和/或高背压
1．颗粒物积聚在烧结物或者树脂床上（它们都会使背压增高）。
如果柱压增高了，将柱子与进样器断开，运行泵，以验证背压的来源确实是来自柱子的颗粒污染（样品、洗脱液和系统）。
倒转柱子，以反向的流动来冲洗柱子。
如果这样不能解决问题，更换进口过滤器或者筛板。
2．微生物在洗脱液中生长。
倒转柱子，尝试以反向的流动来将污染物冲洗出柱子。
更换进口过滤器或者筛板。
3．有蛋白质脂肪，油脂污染或者极性化合物等污染。
再生柱子（见第12节）。
12.再生
1．再生反相色谱柱
a．首先倒转柱子。
b．以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照水
—甲醇—异丙醇—二氯甲烷—异丙醇—甲醇—水进行。
c．柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。
注意：在使用另外的淋洗方法的时候，一定要先用水开始冲洗以去除缓冲液，保证其后的洗脱液可以混溶。
2．再生硅胶柱
a．首先倒转柱子。
b．以大约最佳流速的40%的流速冲洗柱子大约45-60分钟，使用的溶剂的顺序要按照异辛烷（或己烷）—乙酸乙酯—干燥的异辛烷（或己烷）进行。
c．柱子转回正常方向，使用分析所用洗脱液平衡。
3.再生极性键合柱
取决于使用的条件，可以使用反相的条件，也可以使用硅胶柱的条件。
注意：再生会导致柱效降低，另外绝对不要使用酮类或醛类冲洗氨基柱，因为可能与固定相发生反应。
四氢呋喃作为替代可以使用。