1生物学实验常用技术
史上最全的30个生物实验技术及原理!(一)2024
史上最全的30个生物实验技术及原理!（一）引言概述：生物实验技术的快速发展在许多领域中发挥着重要作用。
本文将介绍史上最全的30个生物实验技术及其原理，希望能够为读者提供一些有关生物实验的有用信息和启发。
本篇文档将详细阐述其中的五个大点，并在文末进行总结。
正文：1. PCR技术（聚合酶链式反应）及其原理a. 反应原理：DNA的扩增b. 所需材料和试剂c. 反应步骤d. PCR在基因检测和疾病诊断中的应用e. PCR扩增的局限性和优化方法2. Western Blot技术及其原理a. 反应原理：蛋白质的检测和定量b. 所需材料和试剂c. 实验步骤d. Western Blot在蛋白质研究中的应用e. Western Blot的优缺点及其改进方法3. 细胞培养技术及其原理a. 细胞培养的目的和意义b. 常用的细胞培养基和培养环境要求c. 细胞培养的方法和步骤d. 细胞培养在药物筛选和细胞研究中的应用e. 细胞培养的注意事项和常见问题解决方法4. ELISA技术（酶联免疫吸附测定法）及其原理a. 反应原理：特定抗原或抗体的检测b. 所需材料和试剂c. 实验步骤d. ELISA在免疫学和生物医学研究中的应用e. ELISA的优点和缺点，以及改进方法5. 荧光显微镜技术及其原理a. 反应原理：荧光信号的检测和成像b. 所需设备和试剂c. 实验步骤d. 荧光显微镜在细胞和组织成像中的应用e. 荧光显微镜的局限性和技术进展总结：本文介绍了史上最全的30个生物实验技术及其原理。
从PCR 技术、Western Blot技术、细胞培养技术、ELISA技术到荧光显微镜技术，每个大点均分别阐述了技术的原理、所需材料和试剂、实验步骤、应用领域以及优缺点。
这些实验技术在生物医学研究、药物开发和生物工程等领域中起着重要作用。
读者可以根据自己的研究需求和兴趣，选择适合自己的技术进行实验和研究。
在使用这些技术时，应注意实验操作的细节和安全性，以提高实验的准确性和可靠性。
高中生物选修一生物技术实践知识点总结材料
高中生物选修一生物技术实践知识点总结材料生物技术实践是高中生物选修一课程中的重要内容，其涉及的知识点较多。
下面是关于生物技术实践相关知识点的总结材料。
一、细胞培养技术1.细胞培养基本理论：细胞培养的定义、种类和应用2.细胞培养技术的步骤：细胞的分离、传代、化学培养基的制备等3.细胞培养的影响因素：温度、培养基成分、培养器具等4.细胞培养的应用：生物药物的生产、组织工程、基因工程等二、基因工程技术1.基因工程的基本概念：基因重组、基因表达等2.基因工程中的重要技术：限制性酶切、DNA连接、DNA复制等3.基因工程的应用：转基因技术、蛋白质表达与纯化、分子诊断等4.基因工程的伦理问题：风险评估、生物安全等三、单细胞技术1.单细胞技术的基本原理：单细胞分离、扩增等2.单细胞技术的应用：单细胞测序、单细胞克隆等3.单细胞技术在医学研究中的应用：癌症研究、免疫细胞研究等4.单细胞技术的发展前景：个体化医学、药物开发等四、酶工程技术1.酶工程的基本概念：酶的定义、性质等2.酶工程技术的步骤：酶的筛选、改造、固定化等3.酶工程技术的应用：生化制剂的生产、环境保护等4.酶工程技术的发展趋势：多功能酶的研究、酶催化反应的优化等五、生物传感器技术1.生物传感器的基本原理：生物元件的识别、信号转导等2.生物传感器的种类：酶电极、抗体电极等3.生物传感器的应用：生物分析、临床诊断等4.生物传感器技术的发展：微纳制造技术的应用、多样化生物传感元件的研究等六、生物安全技术1.生物安全的概念：生物实验的风险评估、安全管理等2.生物安全技术的措施：生物实验室建设、生物废弃物处理等3.生物安全的法律法规：《生物安全法》等相关法律法规4.生物安全技术的发展：新兴疾病、转基因生物等生物安全问题的研究与应对以上是高中生物选修一生物技术实践的知识点总结材料。
这些知识点涵盖了细胞培养技术、基因工程技术、单细胞技术、酶工程技术、生物传感器技术和生物安全技术等方面，希望对你的学习有所帮助。
00 生物化学实验--常用生物化学实验技术及原理-比色分析技术
比色分析技术分光光度法是利用单色器（主要是棱镜）获得单色光来测定物质对光吸收能力的方法。
物质对不同波长的光波具有选择吸收的特性，分光光度法就是基于物质的这种特性而建立起来的分析方法，它是光谱分析技术中最基本和最常用的方法，因其具有灵敏、准确、快速、简便、选择性好等特点而被广泛应用。
一、比色分析的基本原理比色分析技术是利用物质对光的吸收作用来对物质进行定性或定量分析的技术。
分光光度法是光谱分析技术中最常用的一种，应用最多的是紫外 - 可见光分光光度法。
（一）吸光度与透光度当一束光线通过均匀、透明的溶液时可出现三种情况：一部分光被散射，一部分光被吸收，另有一部分光透过溶液。
设入射光强度为I 0 ，透射光强度为I ，I 和I 0 的比值称为透光度（ transmittance ，T ），即T ＝，其数值小于 1 。
T 与 100 的乘积称为百分透光度，以 %T 表示。
透光度的负对数称为吸光度 (absorbance ， A) 。
其表达式为：A ＝－LgT ＝－Lg ＝Lg（二） Lambert-Beer 定律Lambert-Beer 定律指出当一束单色的辐射能通过介质或溶液后，有一部分被吸收，其辐射能的吸收与溶液中吸收物质的浓度和溶液厚度的乘积成正比。
Lambert-Beer 定律适用于可见光、紫外光、红外光和均匀非散射的液体。
Lambert-Beer 定律是描述溶液吸光度同溶液浓度和溶液液层厚度之间关系的基本定律，该定律是分光分析的理论基础。
其表达式为：A ＝KLC式中，A ——吸光度；K ——吸光系数；L ——溶液厚度，称为光径；C ——溶液浓度。
根据 Lambert-Beer 定律，当液层厚度单位为 cm ，浓度单位为 mol/L 时，吸光系数K 称为摩尔吸光系数（ε）。
ε的意义是：当液层厚度为 l cm ，物质浓度为 l mol/L 时，在特定波长下的吸光度值。
ε是物质的特征性常数。
在一定条件（入射光波长、温度等）下，特定物质的ε不变，这是分光光度法对物质进行定性的基础。
生物化学检验常用技术
5.标准溶液设置的浓度范围足够大。
2．比较法
己知浓度的标准品和标本作同样处理，使用相同的空白，同时测定 标准管和标本的吸光度，根据测定的吸光度及标准品浓度，可直接计 算出标本的浓度，计算公式为：
CR=(AR ×Cs)/As
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二、发射光谱分析法
处于激发态的待测元素，原子回到基态 时以辐射的形式释放出能量，由此而产生的 光谱称为发射光谱，对元素进行定性与定量 分析的方法。
2、试剂空白：用不加样品，而显色剂和其他试剂都相同的溶液作参比溶液。 选择原则：当显色剂本身有颜色或其它试剂有颜色，被测试样中又无其他有色离子时，选用试剂参比。
3、样品空白：用不加显色剂的样品溶液作参比溶液。 选择原则：当试样溶液有颜色，而试剂、显色剂均无颜色时，选用样品空白。
4、平行操作空白：按样品分析完全相同的操作步骤，用不含待测元素的样品进行平行操作， 以消除操作过程中引入干扰杂质所带来的误差。
可用电极测定的气体
CO2 + H2O === HCO3- + H+ NH3 + H2O === NH4+ + OHSO2 + H2O === HSO3- + H+ 2NO2 + H2O === NO3- + NO2- + H+ H2S + H2O === HS- + H3O+ HCN + H2O === H3O+ + CNHF + H2O === H3O+ + F-
第二节 电化学分析技术
一、电位分析法― ISE
电位分析法 利用电极电位与浓度的关系测定物质含量的电化学分析方法。
离子选择电极 ISE
分子生物学实验技术分类
分子生物学实验技术分类分子生物学实验技术是现代生物学研究中不可或缺的一部分，它涉及到对生物体内分子结构、功能和相互作用的研究。
这些实验技术在基础科学研究、医学诊断和药物研发等领域发挥着重要作用。
在分子生物学实验技术中，根据其应用和原理可以进行分类，主要包括以下几类：1. 基因克隆技术，基因克隆技术是分子生物学研究中常用的技术之一，它包括DNA片段的定向克隆、质粒构建、DNA序列分析等。
通过基因克隆技术，研究人员可以将感兴趣的基因或DNA片段放入适当的载体中，进行进一步的研究和应用。
2. 蛋白质分离和纯化技术，蛋白质是生物体内重要的功能分子，其结构和功能的研究对于理解生物学过程至关重要。
蛋白质分离和纯化技术包括凝胶电泳、亲和层析、离子交换层析等方法，可以将混合的蛋白质样品分离并得到纯净的蛋白质。
3. 核酸分离和检测技术，核酸是生物体内的遗传物质，包括DNA和RNA。
核酸分离和检测技术包括DNA/RNA提取、聚合酶链式反应（PCR）、原位杂交等方法，可以用于检测和分析生物体内的核酸序列。
4. 基因组学和转录组学技术，基因组学和转录组学技术是对生物体内所有基因组和转录组的研究，包括全基因组测序、RNA测序、ChIP-seq等方法，可以帮助研究人员全面了解生物体内基因的组成和表达模式。
5. 蛋白质-核酸相互作用技术，蛋白质和核酸之间的相互作用对于细胞内的生物学过程至关重要。
蛋白质-核酸相互作用技术包括免疫共沉淀、荧光共聚焦、电泳迁移变性等方法，可以帮助研究人员研究蛋白质和核酸之间的相互作用。
以上是分子生物学实验技术的一些分类，这些技术的不断发展和创新为生物学研究提供了强大的工具，也推动了生物医学领域的进步。
在未来，随着技术的不断进步，分子生物学实验技术将继续发挥重要作用，为人类健康和生命科学研究带来更多的突破和进展。
常见的生物化学实验方法
常见的生物化学实验方法生物化学实验是研究生物分子结构、功能和相互作用的重要手段，广泛应用于生物医学研究、药物开发和环境保护等领域。
本文将介绍一些常见的生物化学实验方法。
一、色谱技术色谱技术是一种分离和分析物质的方法，根据分子的化学性质和大小差异，将混合物分离成各个组分。
常见的色谱技术包括气相色谱（GC）、液相色谱（LC）和薄层色谱（TLC）等。
在生物化学实验中，色谱技术常用于对生物样品中的分子进行纯化和分析。
例如，气相色谱可用于分析氨基酸和脂肪酸等小分子化合物，液相色谱则可以用于分离蛋白质、核酸和多糖等生物大分子。
二、电泳技术电泳技术是利用电场作用下物质的电荷和大小差异，将混合物分离成各个组分的方法。
常见的电泳技术包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）、聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和凝胶过滤电泳等。
在生物化学实验中，电泳技术常用于分离和检测蛋白质和核酸等生物大分子。
例如，聚丙烯酰胺凝胶电泳可用于分离和测定蛋白质分子量，SDS-PAGE则可以用于检测蛋白质的纯度。
三、质谱技术质谱技术是利用质量分析仪器对物质的质量和结构进行分析的方法。
常见的质谱技术包括质谱仪、飞行时间质谱（TOF-MS）和液相色谱质谱联用（LC-MS）等。
在生物化学实验中，质谱技术常用于鉴定和定量生物分子。
例如，利用质谱仪可以对蛋白质进行鉴定，通过测定样品中蛋白质的质量和碎片离子的质量谱图，确定蛋白质的氨基酸序列。
四、核酸杂交技术核酸杂交技术是利用互补的DNA或RNA序列进行结合，从而检测目标序列的方法。
常见的核酸杂交技术包括Southern blot、Northernblot和in situ hybridization等。
在生物化学实验中，核酸杂交技术常用于检测和定量特定DNA或RNA序列的存在。
例如，Southern blot可用于检测DNA片段在基因组中的分布和拷贝数，Northern blot则可用于检测特定mRNA的表达水平。
常用分子生物学实验技术--整理
常⽤分⼦⽣物学实验技术--整理常⽤的分⼦⽣物学实验技术：离⼼技术： 是分离纯化蛋⽩质、酶、核酸（DNA、RNA）、细胞的最常⽤⽅法之⼀。
电泳（electrophoresis）：带电粒⼦在电场中向着与其所带电荷相反⽅向电极移动的现象。
可⽤于分离不同分⼦量的⽣物⼤分⼦。
1.蛋⽩质的电泳： ⽤途：蛋⽩质的定量。
2.核酸的电泳： ⽤途：⽤于核酸的分离、鉴定、纯化、回收。
⽐如：我只需要长度300bp左右的分⼦。
那么，电泳后，在切胶过程中，只切300bp处的分⼦即可。
蛋⽩质研究相关的技术： 1. 含量测定： 2. 结构的测定： （1）⼀级结构的测定：搞清楚蛋⽩质肽链的氨基酸排列顺序。
⽅法：Edman降解法、质谱法（MS, 将蛋⽩⽔解，多肽链分成⼩段。
检测肽段） （2）空间结构测定：蛋⽩空间结构分析⽐⼀级结构分析复杂得多。
⽅法：X射线衍射晶体分析法、核磁共振法等。
3. 功能的测定： （1）酵母双杂交（YTH）： 假设：欲检测蛋⽩X与蛋⽩Y是否相互作⽤。
检测⽅法： 将蛋⽩X与报告基因转录因⼦的BD融合； 将蛋⽩Y与AD融合； 确认蛋⽩X与蛋⽩Y形成的复合体能否激活报告基因的表达。
如果能激活报告基因的表达，说明：X与Y形成了复合体，则BD和AD靠近，激活了下游报告基因的表达；反之，报告基因不表达。
原理： 真核⽣物的转录因⼦（尤其是酵母转录因⼦GAL4），包括两个彼此分离、但功能必需的结构域：⼀个是与DNA结合的结构域-BD；⼀个是转录激活域-AD。
BD识别转录因⼦效应基因的上游序列并与之结合；AD通过与转录复合体的其他成分作⽤，启动下游的基因转录。
即使BD与AD分开，但如果在空间上较为接近时也能激活转录。
——利⽤转录因⼦的BD、AD这⼀特性，通过检测转录因⼦是否启动了其效应基因的表达，可研究蛋⽩质X与Y是否相互作⽤。
（2）蛋⽩质芯⽚技术：⼀种⾼通量、微型化、⾃动化的蛋⽩质分析技术。
⼀次试验中可同时检测⼏百甚⾄⼏千种⽬标蛋⽩或多肽。
生物化学实验技术
生物化学实验技术生物化学实验技术是一门研究生物分子结构和功能的学科，主要运用化学方法和技术手段来研究生物大分子的组成、结构、功能和转化过程。
本文将介绍几种常用的生物化学实验技术和其应用。
1. 蛋白质电泳蛋白质电泳是一种常用的生物化学实验技术，用于分离和定量分析蛋白质混合物。
常见的蛋白质电泳方法包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和二维凝胶电泳。
SDS-PAGE通过蛋白质与阴离子表面活性剂SDS结合，并在电场中沿凝胶分离，根据蛋白质的分子量进行定量分析。
二维凝胶电泳则结合了分子量和等电点的信息，实现更高分辨率的分离。
2. DNA测序技术DNA测序技术是生物化学实验中的重要手段，用于确定DNA序列。
目前常用的DNA测序技术包括链终止法（Sanger测序）和高通量测序（Next Generation Sequencing）。
链终止法通过使用缺少3'-OH基团的硫酸二酯链终止剂和核酸聚酶合成短链DNA，并借助电泳分离完成测序。
高通量测序则通过将DNA分子串联成DNA文库，并应用测序仪进行高通量测序，从而大大提高测序效率和准确性。
3. 酶联免疫吸附实验（ELISA）ELISA是一种常见的生物化学免疫学实验技术，用于检测目标蛋白质的存在和浓度。
ELISA基于酶与底物的反应产生可检测信号的原理，可以通过颜色变化或发光信号来定量分析蛋白质。
ELISA技术广泛应用于生物医学研究、临床诊断和药物筛选等领域。
4. 质谱分析技术质谱分析技术是一种能够确定化合物分子量和结构的重要手段。
生物化学实验中常用的质谱分析技术包括质谱仪、气相色谱-质谱联用技术（GC-MS）、液相色谱-质谱联用技术（LC-MS）等。
质谱分析技术在药物研发、代谢组学和蛋白质组学等领域有着广泛的应用。
5. 核磁共振技术核磁共振（NMR）技术是一种用于研究物质结构和动力学的强大工具。
生物化学实验中常用的核磁共振技术包括核磁共振波谱（NMR spectroscopy）和核磁共振成像（NMR imaging）。
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生物学实验常用技术一、分子方面
1、基因工程
1)PCR
(Polymerase Chain Reaction)
(二楼PCR仪器全部会用)
2)RT-PCR;Q-PCR
3)琼脂糖凝胶电泳;胶回收
4)酶切/链接
5)转化
6)固体/液体LB培养基配制
(高压蒸汽灭菌锅使用方法) 7)质粒大/小抽原理及步骤
(手提、溶液I、II、III作用)
8)基因组DNA抽提
9)RNA提取; 2、蛋白质工程
1)蛋白收集
(蛋白裂解液+PMSF;
1×Loading 裂解(推荐))
2)SDS-PAGE(电泳胶的配制)
2)考马斯亮蓝染色,银染
3)Western blot
4)蛋白定量常用的方法及原理,
以及熟练操作Bradford法蛋
白定量
(TRIZOL法原理、注意事项及步骤)
二、细胞方面
1)细胞培养、传代
2)细胞冻存与复苏
冻存液配制: (1)DMSO:血清=1:9(推荐)
(2)DMSO:培养基:血清=1:3:6 均可
DMSO为细胞专用型;现用现配,效果最好;冻存时细胞在-80℃中不要超过一周,最好在24-48h内放入液氮罐中保存。
3)细胞培养基配制(过滤除菌)、胰酶配制(过滤除菌),PBS配制(灭菌);(不同培养基的区别;谷氨酰胺(提供氮源),2周补充一次)
4)转染
5)MTT原理及操作(检测细胞存活率或死亡率)
6)碱性磷酸酶实验(ALP,检测细胞分化)
(5、6 需学会SPSS软件及graphpad prism5软件使用)
7)Hoechst染色
8)结晶紫染色(不推荐)
9)苏木精/伊红染色
(9可以替代8,以后实验推荐使用9,图片漂亮)
10)荧光显微镜的使用
11)激光共聚焦显微镜样品制备(细胞固定,染色,洗脱)
(7、8、9、10、11需学会Photoshop常用工具处理数据)
12)流式细胞仪样品制备(包括:转染效率与细胞凋亡染色标记)以及仪器操作(需学会FlowJo软件分析流式结果)
三、动物实验
1)小鼠的定制:
常见的小鼠:
ICR小鼠(正常),9元/只
BalB/C小鼠(正常),30元/只
SD大鼠(正常),30元/只
裸鼠(免疫缺陷小鼠),80元/只
NOD SCID小鼠(免疫三缺陷),250元/只
其中前四种就是常用的,最后一种以后可能会用到。
浙江中医药大学:小鼠品系齐全,可提供以上小鼠静脉注射,提供体内原位成瘤手术;杭州师范大学:NOD SCID品系小鼠没有,不提供裸鼠静脉注射,不提供体内原位成瘤手术。
2)小鼠成瘤(熟练皮下成瘤操作);
3)肿瘤测量(游标卡尺测量;IVIS测量(推荐,前体要构建Luc细胞系))
4)慢病毒转染构建稳转Luc癌细胞系
5)小鼠的腹腔注射、瘤内注射以及ICR小鼠的尾静脉注射
6)小鼠尾部与眼球取血
7)小动物活体成像仪的原理及使用方法
8)小鼠解剖及组织固定
电镜样品:2、5%戊二醛固定;
免疫组化:10%的福尔马林或4%的多聚甲醛固定
9)组织电镜样品的制备及TEM的使用
(每个样品400,额外每张TEM照片5元)
10)免疫组织切片样品的制备
(蜡块制备25元;HE染色15元/片;TUNEL:200元/片;免疫组化:45元/片(抗体自备))
11)免疫组织切片的观察(荧光显微镜与正置光学显微镜使用切换)。