【CN109593861A】不同位点白血病MEF2DBCL9融合基因寡核苷酸的检测方法及检测试剂盒【
mds中的白血病融合基因分型
mds中的白血病融合基因分型
白血病是一种造血系统恶性疾病，其中涉及到许多不同的融合基因。
以下是一些常见的白血病融合基因分型：
1. 急性淋巴细胞白血病（acute lymphoblastic leukemia, ALL）： - BCR-ABL1：在Ph染色体阳性的ALL中常见，主要涉及
t(9;22)(q34;q11)染色体易位。
- MLL融合基因：涉及11q23异常，包括MLL-AF4、MLL-AF9、MLL-ENL等融合基因。
2. 急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）：
- AML1-ETO：涉及t(8;21)(q22;q22)染色体易位。
- PML-RARA：在急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia, APL）中常见，涉及t(15;17)(q22;q12)
染色体易位。
- CBF融合基因：包括inv(16)(p13q22)/t(16;16)(p13;q22)染色
体易位的CBFβ-MYH11和t(8;21)(q22;q22)染色体易位的
AML1-ETO。
3. 慢性髓细胞白血病（chronic myeloid leukemia, CML）：
- BCR-ABL1：CML的特征性融合基因，涉及
t(9;22)(q34;q11)染色体易位。
这些融合基因分型对于白血病的诊断、治疗和预后评估都具有重要意义，并且为靶向治疗提供了一些潜在的治疗靶点。
但需要注意的是，不同的融合基因类型在不同的白血病亚型中可能有重叠，且某些亚型可能存在多种不同的融合基因。
因此，准
确的分型需要基于综合的病理学、细胞学和分子遗传学特征进行综合诊断。
白血病融合基因检测的意义
白血病融合基因检测的意义白血病（leukemia）属于造血系统的恶性肿瘤，是一组高度异质性的恶性血液病，其特点为白血病细胞呈现异常增生伴分化成熟障碍。
临床出现不同程度的贫血、出血、发热及肝脾、淋巴结肿大，可危及生命。
白血病融合基因（fusion gene），是白血病的分子生物学特异性标志。
近年来，由于分子生物学技术的发展，对白血病细胞分子遗传学改变的了解也不断深入。
迄今报道白血病涉及至少数十种融合基因。
已经认识到大部分的白血病中存在着染色体结构畸变，包括缺失、重复、倒位、易位等，导致原癌基因及抑癌基因结构变异，原癌基因激活或抑癌基因失活，产生新的融合基因，编码融合蛋白。
有些基因是调控细胞增殖、分化和凋亡的转录因子，当基因发生变异，直接影响了下游信号传递途径，导致细胞增殖能力增强、凋亡障碍，分化障碍等，产生白血病表型。
一些典型的白血病融合基因是某种白血病的特异性分子诊断标志，如BCR-ABL融合基因，可出现在95%以上的慢性粒细胞白血病（CML）。
患者预后效果的好坏，与融合基因的类型有一定关系，如急性早幼粒细胞白血病（APL）特有的PML-RARa融合基因，对APL患者用全反式维甲酸（ATRA）诱导缓解治疗，其预后非常好，复发率低。
而有些基因，如MLL相关融合基因，预后差，死亡率高。
1.融合基因检测对白血病诊断的意义通过临床实践发现单纯细胞形态学分型，检测者的主观成分较大，相互间的符合率及正确率有一定限制，随着细胞和分子生物学技术的迅速发展及对白血病发病机制研究的不断深入，认识到白血病发病过程中的基因和表型变化对各类白血病的诊断与治疗具有重要意义，因此提出了白血病MICM分型。
近两年白血病分子特征的研究取得了明显进展，尤其是对染色体易位形成融合基因，有一些已作为诊断不同类型白血病的分子生物学特异性标志和确定诊断的唯一依据，如急性早幼粒细胞白血病APL：PML/RARA，t(15;17)(q21;q22)；急性髓细胞白血病AML-M4Eo：CBFB/MYH11,inv(16)(p13;q22)；慢性粒细胞白血病CML或部分急性淋巴细胞白血病ALL：BCR/ABL，t (9;22)(q34;q11)；AML-M2：AML1/ETO，t(8;21)(q22;q22)；ALL-L3：MYC/IgH，t(8;14)(q24;q32)；AML-M4/M5：11q23MLL异常等。
aml融合基因型
aml融合基因型全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：AML（急性髓系白血病）是一种常见的白血病类型，特点是骨髓中存在异常增生和发育异常的原始血细胞，导致血液中白细胞过多，有时还伴随着贫血和血小板减少等症状。
在AML的研究中，发现了一种称为AML融合基因型的特殊遗传变异，对于AML的发病机制和治疗方式有着重要的指导作用。
AML融合基因型是一种由两个或更多基因发生融合的遗传变异，导致异常的基因表达和调控，从而影响白血病细胞的增殖和分化。
这些融合基因通常涉及到与造血细胞发育相关的关键基因，如AML1-ETO、CBFβ-MYH11、PML-RARα等。
这些融合基因的形成可以是染色体易位、染色体局部缺失、染色体倒位等多种机制导致的。
AML1-ETO融合基因是AML中最常见的一种，由AML1基因的Runt结构域（RUNX1）和ETO基因融合而成。
AML1-ETO主要发生在具有正常AML1基因突变的AML患者中，占据AML患者中的一大部分比例。
AML1-ETO融合基因在AML的发病机制中起到了关键作用，通过抑制正常AML1基因的功能，影响造血细胞的增殖和分化，导致AML细胞的异常增生。
针对AML1-ETO融合基因的治疗策略成为了AML治疗研究的重要方向。
CBFβ-MYH11融合基因是另一种常见的AML融合基因型，由CBFβ和MYH11基因的融合而成。
CBFβ-MYH11融合基因主要发生在与核酸检测结局有关的AML患者中，其与AML的预后和治疗反应密切相关。
CBFβ-MYH11融合基因的形成不仅影响了造血细胞的发育，还导致AML患者的细胞凋亡受限，增加AML的耐药性。
PML-RARα融合基因是APL（急性早幼粒细胞白血病）中最典型的一种融合基因型，由PML和RARα基因融合而成。
PML-RARα融合基因的形成导致了早幼粒细胞的异常增生和成熟障碍，是APL病理生理学特点的重要因素之一。
通过针对PML-RARα融合基因的治疗，如全反式维甘鞭阿、阿三醇治疗，可以显著改善APL患者的预后和生存率。
bcr-abl融合基因反义寡核苷酸对K562细胞生长的影响
bcr-abl融合基因反义寡核苷酸对K562细胞生长的影响石奇珍;吕联煌;胡建达;杨月玲;陈英玉【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2000(016)004【摘要】目的: 研究bcr-abl融合基因硫代磷酸反义寡核苷酸(Aspo)对K562细胞生长特性的影响,探讨其在慢性粒细胞白血病(CML)基因治疗中的意义.方法:倒置显微镜下细胞活体观察;Aspo与细胞共同培养24 h、48 h、72 h、96 h及120 h,用0.4%台盼蓝染色计各处理组死活细胞数,甲基纤维素半固体培养法观察其克隆形成率的变化,流式细胞仪测定各处理组细胞P210蛋白表达变化.结果:Aspo处理后细胞仍呈克隆状生长,当Aspo浓度达5μmol/L时,即可产生增殖抑制作用,呈一定的量效关系,其最大抑制效应时间为作用120 h,当Aspo达10μmol/L时,在一定细胞浓度范围内(1×104 /mL～5×105/mL),均有显著抑制作用,当Aspo浓度达5μmol/L以上时,K562细胞P210蛋白表达明显下降甚至不表达.b2a2型Aspo对表达b3a2型mRNA的K562细胞也表现出交叉抑制作用.结论:bcr-abl融合基因反义寡核苷酸对K562细胞具有特异性增殖抑制作用,在慢性粒细胞白血病基因治疗中值得深入研究.【总页数】5页(P342-346)【作者】石奇珍;吕联煌;胡建达;杨月玲;陈英玉【作者单位】福建医科大学附属协和医院,福建省血液病研究所,福建,福州,350001;福建医科大学附属协和医院,福建省血液病研究所,福建,福州,350001;福建医科大学附属协和医院,福建省血液病研究所,福建,福州,350001;福建医科大学附属协和医院,福建省血液病研究所,福建,福州,350001;福建医科大学附属协和医院,福建省血液病研究所,福建,福州,350001【正文语种】中文【中图分类】Q253【相关文献】1.Skp2反义寡核苷酸对K562细胞生长和增殖的影响 [J], 王小中;冯文莉;刘兴;曹唯希;黄宗干2.c-Ets1对K562细胞BCR-ABL融合基因表达的影响 [J], 孟凡凯;孙汉英;李春蕊;刘文励;周剑峰3.Genistein 对K562细胞生长及CyclinD1基因和bcr-abl融合基因表达的影响[J], 王玮;孙秉中;于文彬;冯琦4.c—Myb基因反义寡核苷酸对K562细胞增殖和生长的影响 [J], 李弘;张洹5.联合应用bcr-abl融合基因反义寡核苷酸与c-myb基因反义寡核苷酸对K562细胞作用的研究 [J], 石奇珍;吕联煌因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
【CN110093421A】白血病MEF2D基因断裂探针检测试剂盒【专利】
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910384749.3(22)申请日 2019.05.09(71)申请人 首都医科大学附属北京儿童医院地址 100045 北京市西城区南礼士路56号北京儿童医院(72)发明人 高超 岳志霞 刘曙光 田硕 郑胡镛 张瑞东 陈绍宇 (74)专利代理机构 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245代理人 张立娜(51)Int.Cl.C12Q 1/6886(2018.01)C12Q 1/6841(2018.01)C12N 15/11(2006.01)(54)发明名称白血病MEF2D基因断裂探针检测试剂盒(57)摘要本发明公开了白血病MEF2D基因断裂探针检测试剂盒。
本发明提供了一种用于检测染色体MEF2D基因断裂的荧光原位杂交多克隆分离探针，由定位于染色体MEF2D基因着丝粒侧的两个BAC克隆片段(RP11-964F7和RP11-139I14)和定位于染色体MEF2D基因端粒侧的两个BAC克隆片段(RP11-214H6和RP11-1047J23)组成。
本发明利用FISH技术检测MEF2D基因断裂相关的白血病，对患者进行个体化治疗，本发明探针可以全面检测涉及到MEF2D基因的全部易位，发现新的易位，应用的准确率高、特异性高、成功率高，荧光信号强，操作简便，能辅助优化MEF2D基因断裂相关的白血病的治疗和预后评估。
权利要求书1页 说明书8页 附图2页CN 110093421 A 2019.08.06C N 110093421A1.一种用于检测染色体MEF2D基因断裂的荧光原位杂交多克隆分离探针，由定位于染色体MEF2D基因着丝粒侧的两个BAC克隆片段和定位于染色体MEF2D基因端粒侧的两个BAC 克隆片段组成；所述定位于染色体MEF2D基因着丝粒侧的两个BAC克隆片段为BAC克隆片段RP11-964F7和BAC克隆片段RP11-139I14；所述定位于染色体MEF2D基因端粒侧的两个BAC克隆片段为BAC克隆片段RP11-214H6和BAC克隆片段RP11-1047J23。
不同位点白血病MEF2D-BCL9融合基因寡核苷酸的检测方法及检测试剂盒[
专利名称：不同位点白血病MEF2D-BCL9融合基因寡核苷酸的检测方法及检测试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：李玉华,胡宇行,常宁,贺艳杰
申请号：CN201910118948.X
申请日：20190218
公开号：CN109593861A
公开日：
20190409
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明是一种用于检测不同位点白血病MEF2D‑BCL9融合基因检测方法及试剂盒，包括检测体系PCR反应液、引物对、探针、阳性对照品和阴性对照品。
利用实时荧光PCR中的Taqman探针技术检测患者体内MEF2D‑BCL9融合基因的表达情况以及对高危人群进行较为准确的筛查和鉴定，具有特异性好，灵敏度高，方法简便高效的特点。
申请人：南方医科大学
地址：510515 广东省广州市白云区沙太南路1023号-1063号
国籍：CN
代理机构：北京市诚辉律师事务所
代理人：范盈
更多信息请下载全文后查看。
白血病融合基因分型
白血病融合基因分型白血病融合基因分型作为一种慢性血液系统疾病，白血病是造成包括体内免疫机制破坏、产生许多不同类型细胞将带来严重副作用甚至是致命危害的疾病。
根据白血病患者的临床表现、真菌学和术语，白血病分为克罗恩病 (CML)、急性髓系白血病 (AML)、慢性髓系白血病 (CLL)、急性淋巴细胞白血病 (ALL) 和慢性淋巴细胞白血病 (CLL) 等多种子类。
近年来，人们对白血病的研究有了相当大的进步。
融合基因分型就是其中重要的一种技术，它利用疾病相关基因单位（gene unit）中发生重新排列，交叉或互换、有序组合在一起而形成一种特定的融合（fusion）基因类型來诊断白血病。
比如，已知在慢性髓细胞白血病患者体内发现的是“philadelphia 遗传标记”（Ph），那么就说明这种白血病是由融合基因“philin-Abl”所导致的。
融合基因分型的关键在于如何准确的检测到融合基因的存在。
目前相关的技术和设备有“杂交-逆转录－聚合酶链反应”（hybridization-reverse transcription-polymerase chain reaction, hRET-PCR）、芯片证明（chipProove）、FISH 和 SAGE 等，由于其灵敏度高、质量可靠，运用这些技术能够更加准确的检测，为准确诊断和治疗白血病患者提供有效的协助。
与传统的细胞学定量和分子病理检查方法相比，融合基因分型技术相对简单，有效，宲量快速，且不需要大量细胞，可大大提高实验质量，准确准确的识别疾病患者的融合基因类型，根据融合基因分型结果，及时采取合适的治疗方式，提高病人治疗的成功率。
综上所述，融合基因分型已经在白血病的诊断和治疗中发挥了重要的作用：准确测定病人的融合基因，给出准确的诊断以及合适的治疗措施，帮助病人更快更有效地恢复健康。
白血病相关融合基因，您知道多少？
白血病相关融合基因，您知道多少？作者：王兴光单位：沧州市人民医院随着精准医疗、精准诊断的提出与发展，白血病的诊断和治疗效果评估，不再单一依赖于形态学，其他的手段如分子生物学、流式细胞学等被广泛应用。
融合基因检测，作为精准医疗的组成部分，在白血病的诊疗中发挥重要作用。
融合基因概念融合基因是由两个或多个基因的编码区相连，置于同一套调控序列的控制下而构成的嵌合基因。
融合基因的形成机制：染色体重排、异常转录。
由形成机制可以看出，融合基因能够驱动肿瘤的发展和向恶性转化。
融合基因检测标本收集与处理：抗凝骨髓标本，抗凝剂可以采用EDTA、草酸钠、枸橼酸钠，严禁使用肝素抗凝标本（肝素是Taq酶的强抑制剂）。
由融合基因的形成过程可以看出，要提取RNA，再逆转录为cDNA进行上机检测。
由于空气中RNA酶无处不在，所以进行RNA提取操作要用到DEPC水和Trizol试剂。
检测原理：主要采用FQ-RT-PCR方法，采用融合基因特异性引物、荧光探针及Taq酶等组成的反应体系。
利用荧光标记定性/定量检测人骨髓标本中的白血病相关融合基因RNA或其逆转录产物（cDNA）。
融合基因与临床在白血病诊断中意义：新版WHO伴有重现性遗传学异常的三种急性白血病，即使形态学上原始细胞分类未达到20%，也可以诊断的三种情况为：❶ inv16(p13q22)或t(16; 16) ( p13;q22)使得位于16p13的MYH11基因与位于16q22的CBFβ基因发生重组，形成CBFβ-MYH11融合基因；❷ PML-RARα融合基因由t(15; 17) ( q22; q21) 染色体易位形成，见于绝大多数AML-M3患者；❸ AML1-ETO融合基因是由于t（8；21）（q22；q22.1）易位形成，是一种预后好的指标。
急性早幼粒细胞白血病（APL）相关融合基因解读：PML-RARA是APL发病的分子细胞遗传学基础，是最常见的融合基因。
近年，随着分子生物学的发展，尤其是二代测序技术的广泛应用，发现了更多的APL相关融合基因，这也提示我们在形态学和流式细胞学高度怀疑APL,而PML-RARA等典型融合基因阴性时，可以先按APL诱导方案治疗，如果有效果，可以应用二代测序等手段进一步追溯。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910118948.X
(22)申请日 2019.02.18
(71)申请人 南方医科大学
地址 510515 广东省广州市白云区沙太南
路1023号-1063号
(72)发明人 李玉华 胡宇行 常宁 贺艳杰
(74)专利代理机构 北京市诚辉律师事务所
11430
代理人 范盈
(51)Int.Cl.
C12Q 1/6886(2018.01)
C12N 15/11(2006.01)
(54)发明名称
不同位点白血病MEF2D-BCL9融合基因寡核
苷酸的检测方法及检测试剂盒
(57)摘要
本发明是一种用于检测不同位点白血病
MEF2D -BCL9融合基因检测方法及试剂盒，包括检
测体系PCR反应液、引物对、探针、阳性对照品和
阴性对照品。
利用实时荧光PCR中的Taqman探针
技术检测患者体内MEF2D -BCL9融合基因的表达
情况以及对高危人群进行较为准确的筛查和鉴
定，具有特异性好，灵敏度高，方法简便高效的特
点。
权利要求书2页 说明书7页序列表3页 附图2页CN 109593861 A 2019.04.09
C N 109593861
A
权 利 要 求 书1/2页CN 109593861 A
1.一种用于不同位点MEF2D-BCL9融合基因的检验试剂盒，所述检验试剂盒中包括检测用引物、探针，其特征在于：
检测目的基因用上下游引物分别为：202-968-F、202-968-R、221-968-F、221-968-R、202-1055-F、202-1055-R、221-1055-F、221-1055-R，探针为202-968-Probe、221-968-Probe、202-1055-Probe、221-1055-Probe，检测内参基因ABL1用引物为ABL1-F、ABL1-R，探针为ABL1-Probe；其中，
序列信息
202-968-F：GCAGCCAGCACTACAGAGGA SEQ ID No.1
202-968-R：CTCTGGAGGCATGGTATAAGGTGT SEQ ID No.2
202-968-Probe：FAM-CCCCACCTCCTACAGCCAGCC-BHQ1 SEQ ID No.3
221-968-F：GTGACCTGAACAGTGCTAACGGA SEQ ID No.4
221-968-R：CTGGAGGCATGGTATAAGGTGT SEQ ID No.5
221-968-Probe：FAM-CCTGCCCCAGCCCTGTTGGTG-BHQ1 SEQ ID No.6
202-1055-F:CAGCCAGCACTACAGAGGAACA SEQ ID No.7
202-1055-R:CTGAGGGTTGGCATCGGAAC SEQ ID No.8
202-1055-Probe：FAM-CTGCCCCAGCGGCCAGCTA-BHQ1 SEQ ID No.9
221-1055-F:GTGACCTGAACAGTGCTAACGGA SEQ ID No.10
221-1055-R：ACCTGAAATTCGAGGATTCTGTGT SEQ ID No.11
221-1055-Probe：FAM-CTGCCCCAGCCCTGTTGGAA-BHQ1 SEQ ID No.12
ABL1-F:GTGAGTGACATAGCCTCATGTTC SEQ ID No.13
ABL1-R:GCAGGCGTGCTCGTGAAAT SEQ ID No.14
ABL1-Probe:Quasar670-TCAGGGAGGGTTAGGAAAACCAC-BHQ-plus SEQ ID No.15。
2.根据权利要求1所述的检验试剂盒，所述检验试剂盒中还包括阴性对照和阳性对照，所述阳性对照品为含有MEF2D-BCL9 Variant 1，MEF2D-BCL9 Variant 2，MEF2D-BCL9 Variant 3，MEF2D-BCL9 Variant 4；所述阴性对照品为去离子水。
3.一种用于不同位点MEF2D-BCL9融合基因的引物和探针组合物，所述的引物和探针组合物包括：202-968-F、202-968-R、221-968-F、221-968-R、202-1055-F、202-1055-R、221-1055-F、221-1055-R，探针为202-968-Probe、221-968-Probe、202-1055-Probe、221-1055-Probe，检测内参基因ABL1用引物为ABL1-F、ABL1-R，探针为ABL1-Probe；其中，序列信息
202-968-F：GCAGCCAGCACTACAGAGGA SEQ ID No.1
202-968-R：CTCTGGAGGCATGGTATAAGGTGT SEQ ID No.2
202-968-Probe：FAM-CCCCACCTCCTACAGCCAGCC-BHQ1 SEQ ID No.3
221-968-F：GTGACCTGAACAGTGCTAACGGA SEQ ID No.4
221-968-R：CTGGAGGCATGGTATAAGGTGT SEQ ID No.5
221-968-Probe：FAM-CCTGCCCCAGCCCTGTTGGTG-BHQ1 SEQ ID No.6
202-1055-F:CAGCCAGCACTACAGAGGAACA SEQ ID No.7
202-1055-R:CTGAGGGTTGGCATCGGAAC SEQ ID No.8
202-1055-Probe：FAM-CTGCCCCAGCGGCCAGCTA-BHQ1 SEQ ID No.9
2。