SMAD4泛素化调控介导TGF-β通路信号转导的研究进展
TGF-β1及Smad4在结直肠腺瘤癌变过程中的表达及意义
Ｐ Ｒ检测所得结果采用两样本 ｔ Ｃ 检验 ， 对免疫组化 检测所得结果采用 检验。采用 Ｓｅｒ ａ ｐａ ｎ等级相 ｍ
关分析 法分 析 Ｔ ＦＢ 和 Ｓ ｄ Ｇ —。 ｍａ４表 达 的相 关 性 。Ｐ ≤Ｏ ０ 为差异有 显著性 。 ．５
２ 结果
抗人 Ｔ ＦＢ 多克隆抗体、 Ｇ — 鼠抗人 Ｓ ａ４单克隆抗 ｍｄ
应 用 ＳＳ ７ ０软 件 ， Ｒ — ＰＳ １． 对 Ｔ
剂 ：ＴＰ Ｒ引物 （ Ｒ —Ｃ 上海生工生物工程技术服务有限 公司） 。逆 转 录 试 剂 盒 （ 国 Ｐｏ ｅａ公 司 ） 总 美 ｒｍ ｇ ，
Ｒ Ａ提取 试剂 盒 （ ｒｏ 试剂 ，ｎｉｏｅ 司 ） Ｎ Ｔｉ ｌ ｚ Ｉｖｒｇｎ公 ｔ 。兔
体、— ＳＰ试剂盒及 Ｄ Ｂ显色剂 （ Ａ 北京中杉金桥生物
技术有限公司） 。
１２ Ｔ ＦＢ 和 Ｓ ａ４ｍ Ｎ ． Ｇ －１ ｍ ｄ Ｒ Ａ表 达 检测 采用 Ｒ ． Ｔ
Ｐ Ｒ法 。所 有 引 物 根 据 文 献 获 得 ， Ｃ 目的基 因 Ｔ Ｆ Ｇ．
Ｔ ＦＢ 、ｍａ４ｍ Ｎ Ｇ ． 。Ｓ ｄ Ｒ Ａ在 大肠 腺 瘤 癌 变 过 程 中 的表达 见表 １Ｔ ＦＢ ｍａ４蛋 白表 达 阳性 率见 表 ，Ｇ — Ｓ ｄ ２ ｐａ ａ 级 相 关 分 析 示 结 直 肠 癌 中 Ｔ Ｆ１ 。Ｓｅｒ ｎ等 ｍ Ｇ 一。 ３
糖凝胶 （ 含溴化 乙锭 ０ ５ｔ ／ １ 电泳检 查 ， Ｉ 胶 ． ｇ ｍ ） ， ＧＳ凝
Ｓ ａ 家族是一类 Ｔ ＦＢ信号的细胞质 内介导者， ｍｄ Ｇ— 其中 Ｓ ａ４是 Ｔ Ｆ１信号转导通路 中起瓶颈作用 ｍｄ Ｇ－ ３
的 因子 。２０ ０８年 ８一ｌ ， 们 采用 Ｒ —Ｃ ２月 我 ＴＰ Ｒ和 免 疫组化 法检测 了结 直腺瘤 、 结直肠 腺癌 、 正常结直 肠
一个新的与泛素化有关的蛋白家族_TRIM家族_田利源
综述文章编号：１００９－０００２（２００７）０２－０２７０－０４一个新的与泛素化有关的蛋白家族———ＴＲＩＭ家族田利源，陈红星，邓继先军事医学科学院生物工程研究所，北京１０００７１［摘要］ＴＲＩＭ家族是一个结构保守、进化快速的蛋白家族，它参与了细胞凋亡、周期调控、细胞对病毒的应答等重要的生命过程。
结构上的保守预示着ＴＲＩＭ家族可能是以一种共同的机制参与各种生命过程的。
最近的一些研究显示ＴＲＩＭ家族可能是一类新的ＲＩＮＧ指泛素连接酶。
［关键词］ＴＲＩＭ家族；锌指结构；泛素连接酶［中图分类号］Ｑ５１［文献标识码］ＡＴＲＩＭＰｒｏｔｅｉｎｓ：ａＦａｍｉｌｙＩｎｖｏｌｖｅｄｉｎＵｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎＴＩＡＮＬｉ－ｙｕａｎ，ＣＨＥＮＨｏｎｇ－ｘｉｎｇ，ＤＥＮＧＪｉ－ｘｉａｎＢｅｉｊｉｎｇＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００７１，Ｃｈｉｎａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＴｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆＴＲＩＭｐｒｏｔｅｉｎｓｉｓｒｉｇｉｄｃｏｎｓｅｒｖｅｄａｎｄｔｈｅｆａｍｉｌｙｅｖｏｌｖｅｒａｐｉｄｌｙ．ＴＲＩＭｐｒｏｔｅｉｎａｒｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎａｐｌｅｔｈｏｒａｏｆｃｅｌｌｕｌａｒｐｒｏｃｅｓｓｅｓｓｕｃｈａｓａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ｃｅｌｌｃｙｃｌｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎａｎｄｖｉｒａｌｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｔｈｅｈｉｇｈｙｃｏｎｓｅｒｖｅｄｍｏｄｕ－ｌａｒｓｔｒｕｃｔｕｒｅｏｆｔｈｅｓｅｐｒｏｔｅｉｎｓｓｕｇｇｅｓｔｓｔｈａｔａｃｏｍｍｏｎｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｍａｙｕｎｄｅｒｌｉｅｔｈｅｉｒａｓｓｏｒｔｅｄｃｅｌｌｕｌａｒｒｏｌｅｓ．ＴｈｅｒｅｃｅｎｔｄａｔａｉｎｄｉｃａｔｉｎｇｔｈａｔｓｏｍｅＴＲＩＭｐｒｏｔｅｉｎｓａｒｅｉｍｐｌｉｃａｔｅｄｉｎｕｂｉｑｕｉｔｉｎａｔｉｏｎ，ａｓａｎｏｖｅｌｃｌａｓｓｏｆＲＩＮＧｆｉｎｇｅｒｕｂｉｑｕｉｔｉｎＥ３ｌｉｇａｓｅｓ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ＴＲＩＭ[ＲＩＮＧｆｉｎｇｅｒ[ｕｂｉｑｕｉｔｉｎＥ３ｌｉｇａｓｅｓＴＲＩＭ家族是一个近年来越来越受到重视的蛋白家族，这与该家族在结构上的保守性、在功能上的重要性，以及家族基因在进化上的特点是分不开的。
TGF―β1及Smad4在卵巢上皮恶性肿瘤患者血清中的表达及其意义-4页文档资料
TGF―β1及Smad4在卵巢上皮恶性肿瘤患者血清中的表达及其意义本实验通过检测卵巢上皮恶性肿瘤和正常对照组血清TGF-β1和Smad4 水平，为卵巢癌的发病机制、诊断、监测、治疗和预后提供一定的实验依据。
1.3 实验方法严格按照ELISA试剂盒说明书进行操作，主要实验步骤如下：1.取出血清样品（经离心处理后），室温平衡达30分钟，取出ELISA 试剂盒，放置30分钟，实验过程在室温（20℃-25℃）内进行。
2.取出酶标板，将标准品依照次序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中。
3.空白微孔中加入50ul的样品，使标本中的抗原与固相抗体相结合，形成固相抗原-抗体复合物，空白对照中加入50ul的蒸馏水。
4.在各孔中加入100ul的酶标记溶液，固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体相结合（不含空白对照孔）。
5.将酶标板用封口胶密封后，37℃孵育反应1小时。
6.充分清洗酶标板3-5次，保持各孔有充足的水压。
7.酶标板洗涤后用吸水纸彻底拍干。
8.各孔加入显色剂A、B液各50ul。
9. TGF-β1在20℃-25℃避光反应15分钟，Smad4在20℃-25℃下避光反应10分钟。
10.各孔加入50ul终止液，终止反应。
11. TGF-β1在30分钟内，Smad4在10分钟内均在波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值。
12.用分光光度值自动分析软件得到各样品的浓度值。
1.4统计学方法采用SPSS17.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差表示，两组间比较采用t检验，以P<0.05时差异有显著性。
结果（表1：卵巢上皮恶性肿瘤及对照组的血清TGF-β1水平比较）分组例数浓度（?x ±s）健康对照组 2 0302.62±25.69卵巢上皮恶性肿瘤组 3 4504.85±81.42卵巢上皮恶性肿瘤组水平显著高于正常对照组，差别有统计学意义（P<0.01），结果见图表1（表2：卵巢上皮恶性肿瘤及对照组的血清Smad4水平比较）分组例数浓度（?x ±s）健康对照组 2 0 5.63±3.19 卵巢上皮恶性肿瘤组 3 4 12.30±6.35 血清Smad4水平高于正常对照组，差别具有统计学意义（P<0.05），结果见图表2 讨论卵巢癌为妇科三大恶性肿瘤之一，病死率占居首位，而卵巢上皮恶性肿瘤占卵巢恶性肿瘤85%-90%[1，2]，因此只有在分子生物学水平上研究卵巢癌的癌变机制及恶性生物行为，提高早期诊断率尤为重要。
tgf-β信号传导通路及其生物学功能
tgf-β信号传导通路及其生物学功能
TGFB（Transforming growth factor-beta）信号传导通路是一
种调节细胞增殖、分化、凋亡和细胞外基质的生长因子信号传导通路。
TGFB家族包括TGFB1、TGFB2、TGFB3、BMPs（骨形态发生蛋白）等多
种生长因子，它们可用于在发生炎症、受到外部刺激、治疗过程中起
到两种完全相反的作用：促进细胞的增殖和转化，或促进细胞的凋亡。
TGFB信号传导通过将信号从TGFB受体I和受体II上转导至内皮体中的Smad蛋白来实现。
受体I和受体II与TGFB1结合，从而形成
复合物。
复合物使受体II激酶催化受体I激酶的磷酸化，最终激活Smad蛋白。
活化的Smad蛋白进入细胞核并调节基因表达，从而参与细胞增殖、分化、凋亡等过程。
在生物学中，TGFB信号传导通路可参与一系列生物学过程。
例如，在胚胎发育中，它可调控神经元的分化和细胞迁移。
在免疫系统中，
它可调节T细胞的功能和表达、B细胞的分化和细胞因子的产生。
在皮肤组织再生中，它亦可以促进创面愈合。
总之，TGFB信号传导通路在细胞生理中扮演着至关重要的角色，并有望成为治疗和预防各种疾病的重要靶点。
TGF-βSmad 信号通路
TGF-β/Smad 信号通路图TGF-β（转化生长因子-β）信号通路在调控干细胞活性和器官形成中发挥着重要的作用，当TGF-β信号通路各成员活性未激活时，体内会自发性发生多种癌症，这表明TGF-β定向调节干细胞对癌症形成也具有不可或缺的功能。
TGF-β超家族包含接近30个生长和分化因子，其中有TGF-βs，活化素(activin)，inhibins和骨形态发生蛋白(BMPs) 。
下游的跨膜TGF-β受体是多个SMAD蛋白，这些蛋白是TGF-β超家族信号传递的重要调控分子，并在不同层面上受多种多样精确的调控。
TGF-β与TGF-βII型受体（TGF-βRII）结合后，再激活募集TGF-β I型受体（TGF-β RI）组合后形成二聚体形式的受体复合物。
TGF-β RII磷酸化TGF-β RI的甘氨酸-丝氨酸富集区域（GS序列）并活化TGF-β RI的丝氨酸/苏氨酸活性。
活化的TGF-β RI反过来又磷酸化受体相关smad蛋白。
脊椎动物中目前发现的smad蛋白至少有9种，分别是：(a)受体调节的Smads （R-Smads）：Smad 1, Smad 2, Smad 3, Smad 5, and Smad 8;(b)共调节Smads: Smad 4 and Smad 10;(c)抑制性Smads(I-Smads): Smad 6 and Smad 7。
Smad 2,和Smad 3参与TGF-β和活化素信号通路，而Smad 1、Smad 5和Smad 8调节BMP信号通路。
R-Smads和Smad 4 主要位于细胞质中，它们的活性主要受衔接蛋白调节，如Smad锚定受体激活蛋白（SARA）和ELF。
Smad 2和Smad 3直接被TGF-β RI磷酸化, 使得构象发生改变从而从受体复合物中释放出来。
Smad 4蛋白的MH2结构域识别R-Smads C端的磷酸丝氨酸从而形成异质二聚体复合物（R-Smad/C-Smad）。
Smad4在喉癌中的表达及其与淋巴管生成之间的关系的开题报告
Smad4在喉癌中的表达及其与淋巴管生成之间的关
系的开题报告
引言：
喉癌是一种恶性肿瘤，其发病率逐年增加，近年来已成为普遍的问题。
虽然手术、放疗和化疗等方法已被广泛使用来治疗喉癌，但尚无特效药物可用于治疗晚期喉癌。
因此，寻找新的治疗方法对于喉癌的治疗非常重要。
Smad4是调节TGF-β信号转导的关键分子。
有研究表明，在癌症细胞中Smad4表达下降。
然而，目前尚不清楚Smad4在喉癌中的表达及其与淋巴管生成之间的关系。
目的：
本研究的目的是探讨Smad4在喉癌中的表达及其与淋巴管生成之间的关系。
方法：
本研究将基于病例对Smad4在喉癌中的表达进行分析。
另外，我们将通过分析Smad4表达与淋巴管生成之间的相关性来评估Smad4的作用。
结果：
我们预计Smad4表达在喉癌中下调，并且Smad4表达水平与淋巴管生成数量之间存在显著的负相关。
讨论：
Smad4在多种肿瘤中已被证实具有调节作用。
目前尚不清楚Smad4在喉癌中的确切作用。
我们的研究结果可能有助于理解Smad4在喉癌中的作用，从而为寻找喉癌治疗的新方法提供指导。
结论：
Smad4在喉癌中的表达下调，并且与淋巴管生成之间存在显著的负相关。
这些结果有助于理解Smad4在喉癌中的作用，并为发展喉癌治疗提供新的思路。
TGF-beta_smad信号通路的传导
抑制型SMAD蛋白（I-smad）
包括smad6、smad7； 功能：阻止受体对R-smad的磷酸化，从而阻 断信号传导； 原因：I-smad与R-smad结构相似，更有效的 结合Ⅰ型受体，从而阻止R-smad与Ⅰ型受体 结合。 在TGF-β信号通路中，主要是smad7起作用。
TGF-β/smad信号通路在糖尿病肾病 中的作用
TGF-β/smad信号通路的传导
信号通路在传导中的3个主要步骤
1、TGF-β与细胞表面受体结合，形成异源三聚体
2、异源三聚体通过激活R-smad蛋白，将信号传导至胞浆内
3、R-smad与Co-smad结合后，转移至细胞核，与靶基因结 合，调节蛋白合成
TGF-β的分子结构和生物特性
TGF-β-------(transforming growth factor beta,转化生长因子-beta)是一种 多向性、多效性的细胞因子，以自分泌或旁分泌的方式通过细胞表面的受 体信号转导途径调节细胞的增殖、分化、凋亡，对细胞外基质的合成、创 伤的修复、免疫功能等有重要的调节作用。 成熟的TGF-β是通过二硫键连接而成的分子量为25×10³ 的同质二聚体。
转化生长因子超家族
TGF-β
活化素
骨形成蛋白
TGF-β有三种同分异构体
TGF-β1 -----在肾脏的表达最多，分布于肾小 球、肾小管，活性最强。 TGF-β2 -----只表达与肾小球旁器。
TGF-β3 -----分布于TGF-β1相似，但数量较 少。
TGF-β的储存及激活
新合成的TGF-β以非共价键与潜活性相关蛋 白（LAP）形成没有活性的休眠复合体，储 存在血小板的α颗粒中。 在强酸、强碱、高温、纤溶酶、组织蛋白酶 作用下，TGF-β脱去LAP而活化,与靶细胞膜 上的受体结合，从而发挥生物效应。
Smad4蛋白的研究进展
Smad4蛋白的研究进展
孙琰;叶棋浓
【期刊名称】《生物技术通讯》
【年(卷),期】2005(16)3
【摘要】Smad4是一种抑癌基因,其主要功能是参与转化生长因子β(TGF-β)超家族的细胞内信号转导,在TGF-β超家族的信号转导途径中处于中枢地位,近年来国内外对其研究非常活跃.本文介绍了Smad4蛋白的结构、功能及其与肿瘤等疾病的关系.
【总页数】4页(P299-302)
【作者】孙琰;叶棋浓
【作者单位】军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850;军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850
【正文语种】中文
【中图分类】Q754
【相关文献】
1.Smad4蛋白与肿瘤发生发展关系的研究进展 [J], 杨松(综述);邱明星(审校)
2.胰腺癌组织中Smad4、上皮型钙黏蛋白及β-连环蛋白的表达及临床意义 [J], 肖蔚;焦霞;赵燕;周彤敏;窦荣荣;于鸿
3.Smad4反义寡核苷酸对高糖培养的人肾小球系膜细胞分泌纤连蛋白、层黏连蛋白的影响 [J], 吴丹丹;王秋月
4.植物雌激素对大鼠成骨细胞TGF-β信号转导蛋白Smad4表达的影响 [J], 辛欣;
詹文红;王建华
5.SEL1L蛋白、Smad4蛋白在食管癌中的表达及其意义 [J], 詹鹤琴;张洪福;曹立宇
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《泌尿外科杂志（电子版)》2016年第8卷第2期SMAD4泛素化调控介导 TGF- p通路信号转导的研究进展卢国良综述夏庆华审校(山东大学附属省立医院泌尿微创中心，山东济南250014)T G F-p超家族蛋白成员作为一种多效细胞 信号分子普遍存在于各种基本生物进程当中，包 括诱导胚胎胚芽层生长、维持成人组织体内稳态 等[1]。
与其多效性相对应的，T G F- p信号通路缺 陷与癌症发生、组织纤维化、生长缺陷密切相关[2]。
T G F-p配体与胞膜上的跨膜激酶受体复 合体结合，导致R- S M A D的丝氨酸C端残基磷酸 化，磷酸化后的R- S M A D s与S M A D4结合转运至 胞核，与转录因子特异性启动子相结合调节基因 表达。
因此，S M A D4作为T G F - p通路上的关键 蛋白，对介导该通路的信号传导具有重要作用[3’4]。
越来越多的研究表明，多种调节机制确保S M A D4蛋白的活动受到严格控制，进而调节细胞 对T G F-p信号通路的反应。
其中某些机制涉及 对信号通路级联反应的磷酸化修饰，比如对 S M A D4蛋白的磷酸化修饰。
S M A D4的磷酸化调 节曾被认为是调控T G F- p信号通路的主要方式 之一，磷酸化的S M A D4是T G F- p信号通路激活 的标志。
最近，泛素化对S M A D4和受体相关型 S M A D S(R- S M A D)功能调节这一重要的作用被广 泛关注[5]。
S M A D4泛素化导致的蛋白酶体降解被 认为是一种调节T G F- p信号通路转导的机制[6];在研究T G F- p信号通路依赖的去泛素酶时发现S M A D4蛋白同时存在单泛素化修饰过程，这提示 S A M D4蛋白持续的单泛素化与去泛素化循环是 T G F- p信号通路转导过程所特有細象[7’8]。
已有体外研究证实在前列腺癌细胞中，单泛素化 S M A D4蛋白水平升高，这提示S M A D4蛋白的泛素 化修饰过程与肿瘤的发生发展存在密切联系[，0]。
因此，笔者将总结S M A D4蛋白泛素化修饰及单泛 素化与去泛素化循环的最新研究进展及其对肿瘤 细胞的影响。
泛素化进入人们的视野始于对哺乳动物H E C T结构域泛素酶smurf1、smurf2的研究，这两 种酶被认为是T G F - p信号通路上负性调控因子[11’12]。
随后，该通路中其他具有生物活性的E3 泛素连接酶被陆续发现。
这其中又包括H E C T结 构域泛素酶—Nedd4L、Wwpl/Tiull和 Aip4/ Itch，RIN G结构域泛素酶---Arkadia、Highwire 和Ectodermin/T i f1 - 7/Trim33。
泛素化作为一'种调节 机制广泛参与到各种细胞生物进程当中，如细胞 周期反应、D N A损伤修复、信号通路转导等[13]。
泛素化是泛素多肽通过三种酶的顺序催化作用，以共价连接方式结合于目的蛋白的过程_泛素 激活酶E1激活泛素多肽，泛素结合酶E2将激活 的泛素多肽转运至目的蛋白，泛素连接酶E3通过 促进泛素结合酶E2同目的蛋白的结合从而提高.综述.泛素多肽的转运效率。
同其他翻译后修饰相比，泛素化是一种可逆 的过程[14]。
泛素多肽可作为单体共价连接于单个 赖氨酸(单泛素化），或者多个泛素多肽共价连接 于多个赖氨酸残基上（多泛素化），亦或多个泛素 多肽串联连接于同一个赖氨酸残基上（聚泛素 化）。
此外，根据泛素多肽内部赖氨酸7种不同的 位置（K48、K63、K29)，多聚泛素链还承担着不同 的功能，从而使泛素化可以广泛参与到各种调节 监管机制当中。
例如:K48位点连接的聚泛素化可 触发蛋白酶体的降解，N F- k B通路中K63位点连 接的聚泛素化可作为蛋白间相互作用的支架，或 参与到表皮生长因子信号通路介导的囊泡分泌过 程当中。
泛素化过程是可逆的，细胞可以通过超 过100种的各类去泛素酶逆转被泛素化修饰的目 的蛋白，从而使系统“复位”或从一种泛素化形式 “切换”到另一种形式[15]。
泛素-溶酶体降解途径是普遍存在于细胞内 降解蛋白的方式之一，在这种机制下，目标蛋白首 先与泛素多肽共价结合，然后转运至溶酶体内被 降解。
S M A D4作为T G F-p信号通路中的关键分 子，也存在泛素化降解的调节过程[16]。
Anita M o r e i等人勺研究证实在S M A D4蛋自分子中存 在M H1和M H2两个结构域。
正常S M A D4分子的 泛素化调节发生在M H2结构域，此结构域内以单 泛素化调节为主，调节过程将在下文内详述。
当S M A D4蛋白发生致癌突变时，错义突变的S M A D4 蛋白的泛素化调节发生在M H1结构域，在此种情 况下，S M A D4蛋白将被聚泛素化进而经溶酶体降 解[17]。
对于参与突变S M A D4蛋白泛素-溶酶体途径降解的麟以及泛素化修饰的地点，Lei Y a n g等 人和Mei W a n等人的研究分别给出了合理的解 释。
在这两个研究中，SCFp -TrCP1是E3泛素连 接酶复合体中 Skp1 - Cullin- F- box protein(S C F)的一种，也是催化S M A D4泛素修饰的主要酶类。
Lei Y a n g的研究证明在急性粒细胞白血病中，S iRN A沉默SCFp -TrCP1的达会引起错义突变的S M A D4蛋白水平上升，而Mei W a n的研究表明 在S C F p-TrCP1缺失的胰腺癌细胞当中，错义突 变的S M A D4蛋白水平以及总S M A D4蛋白水平均 高于S C F p-TrCP1正常胰腺癌细胞，免疫组化显 示在胰腺导管腺癌细胞中S M A D4蛋白也处于一 个较低的水平，而这正是由于与SCFp -TrCP1结 合后泛素化修饰造成的[18]。
该研究认为突变S M A D4的泛素化降解过程并不是-个偶然发现，通过对胰腺癌细胞内大量突变S M A D4蛋白的系 统检测显示大部分突变蛋白都存在蛋白稳定性下 降，结构降解的现象，并且与SCFp -TrCP1相互作 用增强。
此前有报道指出Skp2作为S C F复合体 中另一种E3连接酶也可与多种蛋白底物结合并 对其进行泛素化修饰，但Anita M o r e S的研究显示 在人肾上腺293T细胞中转染突变S M A D4质粒，利用免疫共沉淀实验检测显示突变的S M A D4分 子与SCFSKp2之间并无明显相互作用，因此认为 SCFSKp2并无E3连接酶活性也不能催化S M A D4 蛋白的泛素化降解过程[19]。
但Min Liang等人的 研究结果与此相反，在他的研究中认为突变的S M A D4蛋白正是由于与SCFSKp2的快速结合，从 而导致S M A D4突变蛋白的持续降解[20]。
作为T G F - p信号通路的重要转导蛋白，S M A D4需要与磷酸化的R- S M A D s形成异源二聚 复合物转运至核内行使功能。
与S M A D4突变分 子的调控机制相比，S M A D2分子也存在类似于S M A D4分子调控机制，S M A D2分子M H1结构域 的突变会导致其迅速被泛素化降解[21]。
JingXu 等人的研究证实了这一观点。
然而，令人意外的 是S M A D2分子M H1结构域突变并不会影响通路 上游分子对其磷酸化修饰，也不会阻止其与S M A D4分子的结合，相反，S M A D2突变分子的降《泌尿外科杂志（电子版)》2016年第8卷第2期解发生于核内，从而降低了 293T细胞对于T G F- p 信号通路刺激的敏感性。
这提示S M A D4分子 M H1结构域突变是否也具有类似的调控作用[22]。
最近，Hadrien D e m a g n y的一项研究对此提供了一 个合理的解释，W n T通路中的G S K3对S M A D4蛋 白的顺序性磷酸化可引起SCFp-T r C P l催化的聚 泛素化修饰过程，S M A D4的顺序磷酸化位点介于 M H1与M H2结构域之间，而SCFp-T r C P l可以识 别磷酸化的S M A D4并与之结合。
但该研究并未 明确指出被磷酸化的S M A D4蛋白是否突变。
进 一步研究发现，W n T通舰过G S K3诱导的磷酸化 S M A D4蛋白与T G F-p信号通路实现交互。
这也 提示笔者对S M A D4分子的调控存在多种通路多 种机制共同作用，S M A D4分子的泛素化修饰可能 是由于某种“扳机”分子的激活引起的[23]。
近十年来，随着对诸如D N A修复、组蛋白调 控、膜受体信号转导、肿瘤抑制分子调控等诸多领 域的大量观察研究，单泛素化作为一种通用的调 节蛋白功能的机制，而非蛋白破坏的提示信号受 到越来越多的关注[24’25]。
同磷酸化相比，单泛素 化可调节蛋白活性和亚细胞定位、构成或覆盖蛋 白-蛋白相互作用表面、可被用作非依赖目的蛋 白水平的时间或空间上的调控机制并可以被去泛 素酶快速逆转。
研究表明Tifl- 7是保护动物外 胚层发育所必需的，此外胚层位于动物胚胎区，介 于Nodal和T G F - p信号通路诱导产生的内胚层 与中胚层之间。
在外胚层内，Ecto/Tifl- y限制 B M P信号通路作用，使外胚层细胞均衡地分化为 表皮细胞和神经谱系。
相应的，Ecto/Tifl- 7同时制约着人獅胞对T G F- p和B M P信号通路的 反应[26]。
作为T G F-p通路的转导因子，S M A D4可与 Ecto/Tifl- 7结合，并被其泛素化。
非洲爪蟾的 Ecto/Tifl- y敲出实验证明，对促进S M A D4的核 外转运以及维持结肠癌S M A D4等位基因Rl00T 的不稳定性来说，Ecto/Tifl-y是必需的。
与此 观察结果相一致的是Ecto/Tifl-y的R I N G区域 突变也会导致其对S M A D4的抑制特性消失，因此 Ecto/Tifl-y作为S M A D4的泛素连接酶可起到 拮抗S M A D4的作用[7’28]。
S M A D4的泛素化过程 作为调节T G F- p信号通路关键一步的作用随后 被去泛素化酶F A M/UsP9x所证实，F A M/UsP9x是 维持S M A D4活性所必需的酶[9]。
在Sirio Dupont 等人的研究中，F A M/U sp9x通过逆转单泛素化的 S M A D4激活T G F- p信号通路，以此对抗Ecto/Tifl-y对该通路的抑制作用。
在包括非洲 爪蟾胚胎细胞在内的几种细胞中，S M A D4可被部 分单泛素化，并受内源性Ecto/Tifl-y和F A M/ Usp9x水平的影响。