还原糖滴定法word版
还原糖的测定方法国标
还原糖得测定方法(1)食物中还原糖得测定方法:岛镒酸钾滴定法与直接滴定法。
•一.高链酸钾滴定法1-0原理鼻样品经除去貳白质后■其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜•加硫酸铁后•氧化亚铜被氧化为铜盐. 以岛猛酸钾溶液滴定氧化作用后生成得亚铁盐，根据岛镒酸钾消耗虽计算氧化亚同含虽，再査表得还原糖量。
儿适用范鬧GB5009. 7 一85•木法适用于所有食品中还原糖得测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖得非还原性糖类物质得测定。
3。
仪器(1 )滴定管(2) 25ml古氏坦竭或G 4垂融划圳-(3 )真空泵⑷水浴锅4•试剂除特殊说明外•实验用水为蒸係水，试剂为分析纯。
4.1 6 mol/L盐酸:址収50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4。
2甲基红指示剂:称取10mg甲基红，用10 0ml乙醇溶解。
4。
3 5 mo 1 /L氢氧化钠溶液:称取20g氢氧化钠加水溶解并稀祥至1 0 Om 1 o 4. 4喊性酒石酸铜甲液:称収34。
639g 硫酸铜(CuSO4・5 H20),加适虽水溶解•加0。
5ml硫酸，再加水稀释至500ml.用精制石棉过滤。
4、5碱性酒石酸铜乙液:称取173g酒石酸钾钠与5 0 g氢氧化钠•加适虽水溶解•并稀释至500讥用精制石棉过滤•贮存干橡胶塞玻璃瓶中。
4。
6精制石棉:取石棉先用3mo 1 /L盐酸浸泡2〜3天•用水洗汛再加2、5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2~3天, 倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时•用水洗净。
再以3 mol/L盐酸浸泡数小时,以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇•使成微细得浆状软县委•用水浸泡并贮存于玻璃瓶中,即可用做填充占氏珀圳用.4.7 0、100 0 mol/L商猛酸钾标准溶液。
4、8 1 mol/L氢氧化钠溶液:称取4g氢氧化钠•加水溶解并稀释至lOOmL4。
9硫酸诜溶液:称取50g硫酸诜，加入200ml水溶解后，慢慢加入1 0 0ml硫酸•冷却后加水稀释至1 J鼻4、10 3mo 1 /L盐酸:虽取30ml盐酸•加水稀释至120m仁弘•操作方法5、I样品处理：鼻5。
实验四还原糖的测定
实验四还原糖的测定(直接滴定法)一、实验目的1.了解费林试剂热滴定测定还原糖的原理。
2.能够准确测定果蔬中还原糖的含量。
二、实验原理还原糖是指含有自由醛基或酮基的单糖和某些二糖。
在碱性溶液中，还原糖将Cu?*、Hg*、Fe*、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化和降解。
费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和亚甲基蓝(氧化还原指示剂) ;乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
将一定量的甲液和乙液等体积混合，生成可溶性的络合物酒石酸钾钠铜;在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，氧化亚铜沉淀再与试剂中的亚铁氰化钾反应生成可溶性无色化合物，便于观察滴定终点。
滴定时以亚甲基蓝为氧化一还原指示剂。
亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据消耗样液量可计算出还原糖含量。
三、试剂1.碱性酒石酸铜甲液:称取15g硫酸铜(CuS0.5H20)及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释到1000mL。
2.碱性酒石酸铜乙液:称取50g酒石酸钾钠及75g氢氧化钠，溶于水中，再加入4g亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至1000mL，贮存于橡皮塞玻璃瓶中。
3.乙酸锌溶液:称取21.9g乙酸锌，加3mL冰醋酸，加水溶解并稀释到100mL.4.10.6%亚铁氰化钾溶液:称10.6g亚铁氰化钾溶于水并稀释至100mL。
5.葡萄糖标准溶液:准确称取1.0000g经过98~100°C干燥至恒重的无水葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸(防止微生物生长)，移入1000mL容量瓶中，用水稀释到1000mL。
6. 1 mol/L NaOH标准溶液。
7.盐酸溶液（1+1）8. 15%Na2CO3溶液: 称15g碳酸钠溶于水并稀释至100mL。
9. 10%Pb(Ac)2溶液:称10g醋酸铅溶于水并稀释至100mL。
滴定法还原糖含量测定
滴定法还原糖含量测定一、实验目的：1、学习和掌握滴定法测定还原糖含量的原理和方法；2、加深对还原糖的特性和测定方法的理解。
二、实验原理：还原糖是具有还原性的单糖和少量的异构体，在碱性条件下能够将还原剂还原为氧化剂，自身被氧化为相应的酸，色变反应用铜离子与氧化的还原糖生成沉淀，滴定沉淀的含量，即可测定还原糖的含量。
三、实验步骤：1、将样品粉碎成细粉末，取 1-2 g由蒸馏水稀释10倍后摇匀并过滤备用。
2、用蒸馏水润洗紫色过滤棉，收集过滤液和洗涤液。
3、取滤液 10.00 mL，加入 1.00mL Fehling's溶液A 和 1.00mL Fehling's溶液B，放在沸水中加热，不停搅拌，约5min后，还原糖会发生反应并生成一种棕色沉淀。
4、用蒸馏水洗涤收集沉淀，连同过滤棉和洗涤液，用蒸馏水冲洗至洗涤液的体积为20.00mL，加入几滴醋酸作为指示剂。
5、转移到滴定管中,用标准 0.1mol/LNaOH滴定至棕色沉淀消失,取得滴定值（V）。
6、根据实验公式计算出还原糖的含量,(含量% =vx1000x正碘量（g）/样品重量（g）*100%）四、实验注意事项：1、取样品后样品应粉碎成细粉末，以充分增加其溶解和反应速率。
2、Fehling's溶液A&B混合后容易发生氧化，必须在使用前彻底振摇，如果出现沉淀就不能使用。
3、滴定前一定要冷却至室温。
4、掌握并准确使用橡胶头滴定管，滴定过程中尽量不要挥霍溶液，避免误差。
五、实验测定数据及处理：还原糖含量公式还原糖含量%=(V*0.1*60.08*1000*100)/m其中，0.1为NaOH标准溶液浓度(M)，60.08为还原糖摩尔质量，1000为体积单位的转换(溶液为毫升，要转化为升)，100为计算单位的转换(要转化为百分数)。
本实验样品用量为2g，测得滴定值为(所用NaOH溶液为0.1mol/L)一二三平均滴定体积 (mL) 26.15 25.90 26.05 26.03平均滴定体积(V)=26.03 mL六、实验结论:本实验利用滴定法对糖含量进行测定，实验结果显示，样品中还原糖含量为0.7865%，满足实验要求。
还原糖含量的测定—直接滴定法
还原糖含量的测定—直接滴定法实验六乳粉中还原糖含量的测定—直接滴定法（GB/T5009.7—2003第⼀法）教学⽬的要求：基本知识点1、掌握直接滴定测定还原糖的原理、基本过程和操作关键。
2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。
重点：1、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术2、直接滴定测定还原糖的原理、基本过程和操作关键。
难点：直接滴定测定还原糖的原理和控制要点课时教学⽅案：复习与提问：1、检查实验准备情况，（1）实验内容；（2）实验仪器与试剂有哪些？（3）直接滴定测定还原糖的步骤。
2、直接滴定测定还原糖的注意事项和控制要点【引⼊新课】乳糖是半乳糖经β-1，4糖苷键与葡萄糖结合的还原性⼆糖，称为4-O-β- d吡喃半乳糖-d-吡喃葡萄糖，还原基在葡萄糖单位上。
乳糖有两种异构体，即α-乳糖和β-乳糖。
乳糖是唯⼀没有在植物中发现的糖，因⾸次在⽜乳中发现，故称为乳糖。
乳糖是哺乳动物乳汁的主要成分，如⼈乳中约含6%～7%，⽜乳中约含5%。
乳糖是婴⼉主要⾷⽤的糖类物质。
初⽣婴⼉仅能消化乳糖、蔗糖、葡萄糖、果糖，对淀粉不易消化，故⽶、⾯淀粉⾷物应在3～4个⽉后才开始添加。
乳糖对婴⼉的重要意义还在于它能够保持肠道中最合适的肠菌种数，并能促进钙的吸收。
随着年龄的增⼤，肠道中将乳糖分解为葡萄糖和半乳糖的乳糖酶活性急剧下降，甚⾄在某些个体中⼏乎降到0，因⽽成年⼈⾷⽤⼤量的乳糖，不易消化，⾷物中乳糖含量⾼于15%时可导致渗透性腹泻。
⼀、⽬的要求1、理解直接滴定法测定还原糖的原理及操作要点；2、熟练称量、过滤、定容、滴定等基本操技术。
⼆、实验原理试样经除去蛋⽩质后，在加热条件下，以次甲基蓝作指⽰剂，滴定标定过的碱性酒⽯酸铜溶液（⽤还原糖标准溶液标定碱性酒⽯酸铜溶液），还原糖将溶液中的⼆价铜还原成氧化亚铜。
以后稍过量的还原糖使次甲蓝指⽰剂褪⾊，表⽰终点到达。
根据试样溶液消耗体积，计算还原糖量。
反应⽅程式如下：CuSO4+2NaOH=Cu(OH)2↓+Na2SO4COONa COONa︱∣CHOH CHO╲∣+Cu(OH)2= ∣Cu +2H2OCHOH CHO╱∣∣COOK COOKCOONa COONa∣CHO ∣CHOHCHO╲∣CHOH ∣2∣Cu +(CHOH)4 +2H2O=2 ∣+ (CHOH)4+Cu2O↓CHO╱∣CHOH ∣∣CH2HO ∣CH2OHCOOK COOK亚甲蓝氧化型+还原糖——→亚甲蓝还原型(蓝⾊) （⽆⾊）三、实验试剂（GB/T5009.7-2003⾷品中还原糖的测定）1、盐酸。
直接滴定法测定食品中还原糖的含量-精品文档资料
直接滴定法测定食品中还原糖的含量、还原性糖综述还原糖是指具有还原性的糖类。
在糖类中，分子中含有游离醛基和酮基的单糖和含有游离醛基的二糖都具有还原性。
还原糖包括葡萄糖、果糖、半乳糖、乳糖、麦芽糖等。
非还原糖有蔗糖、淀粉、纤维素等，但它们都可以通过水解生成相应的还原性单糖。
所以糖类的测定是以还原糖的测定为基础的。
二、直接滴定法测定还原糖的试验方法一）实验原理将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀，这种沉淀很快与酒石酸钾钠反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。
在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀，待二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由蓝色变为无色，即为滴定终点。
根据样液消耗量可计算还原糖含量。
当称样量为5g 时，该法的检出限为0.25g/100g二）实验材料、仪器与试剂实验材料：苹果仪器：分析天平、研钵、电炉、铁架台、锥形瓶、烧杯、玻试剂：1）碱性酒石酸铜甲液：称取15g 硫酸铜（CuSO4?5H2）O及0.05g 次甲基蓝，溶于水中并稀释至l000mL。
2）碱性酒石酸铜乙液：称取50g 酒石酸钾钠及75g 氢氧化钠，溶于水中，再加入4g 亚铁氰化钾，完全溶解后，用水稀释至lOOOmL贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
（3）乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL乙酸，加水溶解并稀释至l00mL。
4）10.6%亚铁氰化钾溶液：称取l0.6g 亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至l00mL。
5）葡萄糖标准溶液：准确称取l.0000g 经过96±2C干燥2h的纯葡萄糖，加水溶解后加入5mL盐酸，并以水稀释至lOOOmL。
此溶液每毫升相当于 1.0mg 葡萄糖。
三）实验步骤1 ）样品处理：称取约 5.00g 试样，置于250mL容量瓶中，加50mL水，混匀，慢慢加入 5 mL乙酸锌溶液及5mL亚铁氰化钾溶液，加水至刻度，混匀，沉淀，静置30mi n,用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，取续滤液备用。
直接滴定法测食品中还原糖实验报告
1.目的掌握直接滴定法测还原糖的原理、操作、条件及注意事项。
2.原理样品经前处理提取还原糖，在加热条件下，直接滴定一定量的碱性酒石酸铜标准溶液，以次甲基蓝作指示剂，根据样液消耗体积，计算样品中还原糖量。
3.试剂3.1碱性酒石酸铜标准溶液（还原糖因数f/mg·10mL-1）3.1.1甲液:称取23.10g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g次甲基蓝，溶于水中并稀释至100mL3.1.2乙液: 称取115.33g酒石酸钾钠及33.30氢氧化钠，溶于水中，用水稀释至1000mL，贮存于橡胶塞玻璃瓶中瓶中3.2乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌，加3mL冰乙酸，加水溶解并稀释至100mL. 加水溶解并稀释至100mL3.3亚铁氰化钾溶液（106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾，加水溶解并稀释至100mL3.4盐酸3.5葡糖糖标准溶液：精密称取7.0000g经过98~100℃干燥至恒量的纯葡萄糖加水溶解，并以水稀释至1000mL.此溶液每毫升相当于7mg葡糖糖4.仪器碱式滴定管、电炉5.样品硬糖（m样=5.8002g）6.操作6.1样品处理称取样品5.8002g置于小烧杯中，加40mL水，40℃微热溶解，冷却后加40mL水，调节PH至中性，加水定容至100mL，过滤后收集滤液即为样品溶液。
6.2标定碱性酒石酸铜溶液吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置150mL三角锥形瓶中，加水10mL，加入玻璃珠2粒，置于电炉上加热至沸（要求控制在2min内沸腾），然而趁热以每秒1滴的速度继续滴加葡萄糖标准溶液，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录消耗葡萄糖的总体积。
同时平行操作三份，取其平均值，计算每10mL（甲液乙液各5mL）碱性酒石酸铜溶液相当于葡萄糖的质量mg，即还原糖因数f。
6.3样品溶液预测吸取5.0mL碱性酒石酸铜甲液及5.0mL乙液，置于150mL三角锥瓶，加水10mL，加入玻璃珠2粒，摇匀，在电炉上2min内加热至沸，趁热以先快后慢的速度，从滴定管中滴加试样溶液，并保持溶液沸腾状态，待溶液颜色变浅时，以每两秒1滴的迅速滴定，直至溶液蓝色刚好褪去为终点，记录样品溶液消耗体积。
(整理)还原糖滴定法
15.2.2.1铜还原——直接滴定法15.2.2.2 姆松——华尔格法(高锰酸钾容量法)15.2.2.3常量法——氰化盐碘量法15.2.2.4夏费—索姆吉法——半微量法15.2.2.1 铜还原——直接滴定法(Lane-Eynon’s method)［1，2］Top15.2.2.1.1 方法原理样品中的水溶性糖可以用80℃温水浸提，但对含淀粉和菊糖高的样品则须用800mL·L-1-850mL·L-1酒精浸提，其中还原糖可使费林(Fehling)试剂还原生成Cu2O沉淀，而本身被氧化和降解成糖酸。
费林试剂是由CuSO4溶液、NaOH和KNaC4H4O6溶液组成。
在碱性溶液中，酒石酸盐可与铜盐形成配离子而不致生成氢氧化铜沉淀。
其反应如下：Cu2++ 2OH- + 2(C4H4O6)2-→［Cu(C4H3O6)2］4-+2H2O在煮沸条件下，用还原糖待测液滴定一定量的费林试剂时，铜的酒石酸配离子被还原糖还原，产生红色Cu2O沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应示意式如下：上述反应是铜还原法测糖的基本原理。
滴定时是以亚甲基蓝为氧化还原指示剂，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝，即达滴定终点。
还原糖与费林试剂反应的完全程度与滴定时条件(如加热强度、温度、时间等)很有关系，故必须严格按照操作规程测定。
指示剂也消耗一定量还原糖，所以每次滴定时须按规定加入相同数量的亚甲基蓝。
本法适宜于含糖量高的样品(15—50mL糖液中含糖50mg)。
15.2.2.1.2 主要仪器高速组织捣碎机；电热恒温水浴锅；玻塞滴定管(附弯形尖管，见图15-图15-1 弯形尖管规格及安装图1.玻塞滴定管2.橡皮圈3.橡皮管4.弯形尖管(管径为5mm)15.2.2.1.3 试剂(1) Soxhlet修正的费林(Fehling)溶液：应用前立刻配制，通过下列费林试剂A和B溶液等体积混合而制得。
①费林试剂A：溶解CuSO4·5H2O 34.639g于水中，移入500mL容量瓶中，用水定容。
【精品文档】还原糖的测定方法
还原糖的测定方法食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。
一、高锰酸钾滴定法1.原理样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。
2.适用范围GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。
3.仪器（1）滴定管（2） 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚（3）真空泵（4）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。
4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。
4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。
4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g 硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。
4.5 碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。
4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。
再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。
然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。
4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。
4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。
4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。
4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。
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15.2.2.1铜还原——直接滴定法15.2.2.2 姆松——华尔格法(高锰酸钾容量法)15.2.2.3常量法——氰化盐碘量法15.2.2.4夏费—索姆吉法——半微量法15.2.2.1 铜还原——直接滴定法(Lane-Eynon’s method)［1，2］Top15.2.2.1.1 方法原理样品中的水溶性糖可以用80℃温水浸提，但对含淀粉和菊糖高的样品则须用800mL·L-1-850mL·L-1酒精浸提，其中还原糖可使费林(Fehling)试剂还原生成Cu2O沉淀，而本身被氧化和降解成糖酸。
费林试剂是由CuSO4溶液、NaOH和KNaC4H4O6溶液组成。
在碱性溶液中，酒石酸盐可与铜盐形成配离子而不致生成氢氧化铜沉淀。
其反应如下：Cu2++ 2OH- + 2(C4H4O6)2-→［Cu(C4H3O6)2］4-+2H2O在煮沸条件下，用还原糖待测液滴定一定量的费林试剂时，铜的酒石酸配离子被还原糖还原，产生红色Cu2O沉淀，还原糖则被氧化和降解，其反应示意式如下：上述反应是铜还原法测糖的基本原理。
滴定时是以亚甲基蓝为氧化还原指示剂，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝，即达滴定终点。
还原糖与费林试剂反应的完全程度与滴定时条件(如加热强度、温度、时间等)很有关系，故必须严格按照操作规程测定。
指示剂也消耗一定量还原糖，所以每次滴定时须按规定加入相同数量的亚甲基蓝。
本法适宜于含糖量高的样品(15—50mL糖液中含糖50mg)。
15.2.2.1.2 主要仪器高速组织捣碎机；电热恒温水浴锅；玻塞滴定管(附弯形尖管，见图15-1)图15-1 弯形尖管规格及安装图1.玻塞滴定管2.橡皮圈3.橡皮管4.弯形尖管(管径为5mm)15.2.2.1.3 试剂(1) Soxhlet修正的费林(Fehling)溶液：应用前立刻配制，通过下列费林试剂A和B溶液等体积混合而制得。
①费林试剂A：溶解CuSO4·5H2O 34.639g于水中，移入500mL容量瓶中，用水定容。
②费林试剂B：溶解酒石酸钾钠(KNaC4H4O6·4H2O)173g和NaOH 50g于少量水中，洗入500mL容量瓶中，用水定容。
(2) 100g·L-1中性醋酸铅溶液：称100g醋酸铅［Pb(CH3COO)2·3H2O］(化学纯)溶于水中，过滤后稀释至1L。
(3) Ba(OH)2饱和溶液：在100mL无CO2水中，加入固体Ba(OH)2·8H2O(化学纯)约6g，用玻棒搅拌，将烧杯盖好过夜，次日滤去未溶物，溶液装在细口瓶中备用。
为了防止与空气中CO2接触，应装设碱石灰管及虹吸管。
(4) Na2SO4饱和溶液：称Na2SO4·10H2O(化学纯)165g，溶于1L水中。
(5) 50g·L-1硫酸锌溶液：称取ZnSO4·7H2O(化学纯)50g，加水溶解，并用水稀释至1L。
(6) 850mL·L-1及800mL·L-1乙醇(C2H5OH)溶液：取950mL·L-1乙醇(分析纯)85mL，加水稀释至95mL，即为850mL·L-1乙醇溶液。
取950mL·L-1乙醇80mL，加水稀释至95mL，即为800mL·L-1乙醇溶液。
(7) 固体草酸钠(Na2C2O4)试剂(分析纯)。
(8) 10g·L-1亚甲基蓝水溶液：称亚甲基蓝 1.00g溶于水中，加水稀释至100mL。
(9) 2mg·mL-1葡萄糖标准溶液：称取干燥的葡萄糖(优级纯)0.2000g用少量水溶解后，洗入100mL容量瓶中用水定容。
15.2.2.1.4 操作步骤(1) 待测液制备①水提取法：清除新鲜水果、蔬菜样品外来污染的杂质，尽可能快地磨细或切碎，混匀，称取样品25.00g—50.00g(含糖约2.5g)，置高速组织捣碎机中，加适量水后捣碎(或置研钵中加少量纯石英砂共同研磨)，然后小心移入250mL 容量瓶中，加水至约150mL；或风干已磨细的样品则可称取0.500—5.00g，洗入250mL容量瓶中，亦加水至约150mL。
然后加入粉状CaCO30.5—1.5g中和样品中的酸度(防止浸提过程中蔗糖水解)，摇动1min，置于80℃水浴中保温浸提0.5h，其间摇动数次以利糖分浸提完全。
冷却，滴加100g·L-1中性醋酸铅溶液至产生白色絮状沉淀，充分摇动混合，静置15min，再滴加几滴中性醋酸铅溶液于上部清液中检查是否沉淀完全。
如果还有沉淀形成，再摇动，静置，直至不产生白色絮状沉淀为止(约2—5mL)，用水稀释定容。
用干滤纸过滤。
加入足量草酸钠固体到滤液中，使铅沉淀完全，再用干滤纸过滤，再用固体草酸钠少许加到滤液中，检查铅是否沉淀完全。
无铅的滤液待用。
②乙醇提取法：称取剪碎、混匀的新鲜植株样品(含大量淀粉或菊糖的样品)25.00g或是干样称0.500—5.00g，放入400mL烧杯中，加入850mL·L-1乙醇150mL浸泡过夜(另测样品水分)。
倒入高速组织捣碎机的杯中捣碎，再倒回原烧杯中，用800mL·L-1乙醇将杯壁上的样品洗净，一同倒入烧杯中，过滤入250mL 容量瓶中，再用800mL·L-1乙醇少量多次洗涤残渣，直至滤液无糖反应为止(注1)。
最后以800mL·L-1乙醇定容。
吸取乙醇浸出液25.00—50.00mL(吸取量视含糖量与方法而定)，放入瓷蒸发皿中，如溶液呈酸性，用固体CaCO中和，在3水，用橡皮头玻棒将干物质洗下，60—80℃水浴上蒸干乙醇，后加入少量无CO2饱和溶液2—10mL，至溶液呈淡黄色(碱性)，此时絮状蛋白边搅边加入Ba(OH)2溶质沉淀物浮在液面。
加入酚酞指示剂1滴，在不断搅动下加入50g·L-1ZnSO4液以沉淀过量的Ba2+，直到溶液呈微红色时为止。
过滤入50mL容量瓶中，用少量水洗涤沉淀后定容，待测。
(2)还原糖测定。
试液呈中性或接近于中性，其滴定步骤如下：① 约测：准确吸取未混的费林试剂A和B各5mL或12.5mL(或吸取混合费林试剂10mL或25mL)，放入250mL三角瓶中，由滴定管加入待测糖液约15mL，置在石棉网上加热煮沸，趁沸继续滴加糖液(注2)，滴加速度约为10—15s之内加入1mL，直至溶液蓝色即将消失，加入10g·L-1亚甲基蓝指示剂3滴，继续滴加糖液，直至蓝色褪尽为止(注3)，记下待测糖液的用量(mL)。
②精密滴定：准确吸取未混的费林试剂A和B各5mL或12.5mL(或吸取混合费林试剂10mL或25mL)，放入250mL三角瓶中，加入待测糖液，其用量比上述滴定量约少0.5—1.0mL，置在石棉网上加热，使之2min内沸腾，维持沸腾2min 后，加入亚甲基蓝指示剂3滴，再逐滴地加入待测糖液，直至蓝色褪尽。
前后总沸时间为3min。
准确记下待测糖液的消耗量(V)，须在15—50mL范围内(含糖量1近50mg)，否则应增减称样量，重新制备待测液。
(3)费林试剂的标定同上15.2.2.1.4(2)①,②操作条件，葡萄糖标准溶液也分“约测”及“准确(测定三次取平均值)。
测定”二步进行。
准确记下消耗标准糖液用量为V15.2.2.1.5 结果计算还原糖，%=标准糖溶液浓度(2mg·mL-1)×V0×V/(m×V1)×100式中： V—滴定10mL费林试剂所消耗标准葡萄糖液的量(mL)；V1—滴定10mL费林试剂所消耗待测糖液的量(mL)；V—待测糖液的总体积(mL)；m—样品质量(mg)；15.2.2.1.6 注释1.检验糖方法：于白色点滴板的孔穴中加1%α-萘酚乙醇溶液2滴和浓H2SO4 10滴，混匀，加入待检的淋洗液1滴，1min后如无红圈出现，证明糖已洗净。
2.还原糖与碱性酒石酸铜试剂反应速度较慢，必须在加热至沸的情况下进行滴定。
为了防止烧伤及便于滴定操作，可于滴定管尖部加接一弯形尖管，弯形尖管规格及安装如图15—1所示。
并戴上隔热手套操作。
3.无色的还原型亚甲基蓝极易被大气中的O2所氧化，恢复原来的蓝色，故整个滴定过程中三角瓶不能离开电炉，使瓶中的溶液始终保持沸腾状态，液面覆盖水蒸汽，不与空气接触。
15.2.2.2 姆松——华尔格法(Munson-Walker 法)［2］(高锰酸钾容量法)Top15.2.2.2.1 方法原理将样品试液与过量的费林氏试剂反应，过滤取得生成物Cu2O后，用直接称量法测知Cu2O的质量；或用容量法测知生成物中铜的质量。
然后从表15-2(哈蒙德，Hammond)表查得与铜量相当的糖量，再计算样品的含糖量。
由于这种方法所得结果准确，重现性好，但花费时间较多。
美国AOAC分析方法1985年版介绍此法测定糖和糖浆中的转化糖。
高锰酸钾容量法，其反应为：Cu2O+Fe2(SO4)3+H2SO4→2CuSO4+2FeSO4+H2O10FeSO4+2KMnO4+8H2SO4→5Fe2(SO4)3+2MnSO4+K2SO4+8H2O由反应式可知，10摩尔铜相当于2摩尔的高锰酸钾，则每mL1/5 mol·L-1KMnO4溶液相当Cu量。
x为158∶63.57×5=158/5∶x， x=63.6mg。
所以，已知高锰酸钾滴定量，就可计算成铜的质量，由表15-2计算样品的含糖量。
15.2.2.2.2 试剂(1)高锰酸钾标准溶液(约为0.03152mol·L-1)，称取KMnO44.98g溶于水中，煮沸过滤，放冷，稀释至1L，此液1mL相当于10mgCu。
(2)硫酸高铁溶液：溶解硫酸高铁(无水)Fe2(SO4)355g或硫酸铁铵FeNH4(SO4)2·12H2O 135g于水中，稀释1000mL。
(3)Soxhle修正的费林溶液：(同15.2.2.3.1)(4)邻菲啉亚铁指示剂：溶解邻菲啉水合物0.7425g于0.25mol L-1FeSO4溶液(FeSO4·7H2O 6.95g·L-1)25mL中。
15.2.2.2.3 操作步骤试液应呈中性或弱碱性，应除去还原性干扰成分，并脱去铅。
吸取费林溶液A，B各25mL，置于400mL玻璃烧杯中，加入样品试液50mL，若样品试液容积较少，则可加水将溶液总容积调整到100mL。
将烧杯置于电炉石棉网上加热，盖上表面玻璃，使在4min内沸腾，并继续保持混腾2min(此操作必须严格遵守)。
立即趁热利用抽滤法通过事先已做好石棉垫的古氏坩埚或玻璃滤器(3、4号)过滤，用60℃热水沏底洗涤Cu2O沉淀和烧杯，直至不呈碱性为止。