杂色曲霉转化孕酮的研究

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检测中药材污染杂色曲霉菌素产生菌的PCR引物、方法及试剂盒[发明专利]

专利名称：检测中药材污染杂色曲霉菌素产生菌的PCR引物、方法及试剂盒
专利类型：发明专利
发明人：徐晖,罗朝权,詹若挺,陈蔚文,王文丽,鲁晓芳,郑润生
申请号：CN201811594728.6
申请日：20181225
公开号：CN109576354A
公开日：
20190405
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种检测中药材污染杂色曲霉毒素产毒真菌的PCR引物、方法及试剂盒。

基于PCR检测方法，包括能在反应管中进行PCR反应的引物对。

本发明建立了一种不经过分离纯化，直接检测中药材污染杂色曲霉毒素产毒真菌的PCR体系，各引物特异性强，方法的检出限为10～
10CFU/g，检测灵敏度高。

申请人：广州中医药大学(广州中医药研究院)
地址：510006 广东省广州市番禺区广州大学城外环东路232号
国籍：CN
代理机构：广州新诺专利商标事务所有限公司
代理人：张玲春
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来源于胃液杂色曲霉的代谢产物分离纯化与致突变性

来源于胃液杂色曲霉的代谢产物分离纯化与致突变性上野芳夫;王殿升【期刊名称】《癌变．畸变．突变》【年(卷),期】1993(005)001【摘要】我们通过培养来源于慢性胃炎患者胃液的染色曲霉,分离制备了包括杂色曲霉素(ST)、averufin(AV)和新产物5′-hydroxy-averantin(5′-HA)等代谢产物。

并检测它们及其有关衍生物的致突变性。

Ames试验表明:在0.1～100μg/皿剂量时,ST、O—甲基—ST、O—乙酰基—ST,不论有无S_θ存在,都显示阳性结果,而AV和5′-HA只是在S_θ存在时出现阳性;加S_θ时5′-HA和AV对TA_(θ8)和TA_(100)菌株的致突变性强度分别是AFB_1的0.02％和0.03％、0.04％,而ST则是13.75％和38.35％。

在S_θ存在时ST、5′-HA、AV对CHL细胞染色体畸变阳性剂量分别是0.05、10.0、50.0μg/ml,不加S_θ,只有ST在5μg/ml时就出现阳性。

染色体畸变类型,ST和AV以cte为主。

而5′-HA以ctb为主。

据此认为新产物5′-HA和AV的致突变性,远远弱于ST和AFB_1。

【总页数】7页(P13-19)【作者】上野芳夫;王殿升【作者单位】不详;不详【正文语种】中文【中图分类】R735.202【相关文献】1.红树林来源内生真菌杂色曲霉Aspergillus versicolor MA-229次级代谢产物研究 [J], 罗寒;李晓栋;李晓明;刘洋;孟令红;王斌贵2.小麦中杂色曲霉毒素的硅镁吸附柱层析分离纯化及HPLC的定量分析 [J], 袁建;杜娟3.来源于印度洋深海区的烟曲霉次生代谢产物的研究 [J], 李冬艳; 王晶; 陈科良; 朱虎成; 陈春梅; 张锦文4.海洋来源杂色曲霉次级代谢产物及其抗植物病原细菌活性 [J], 付兵;王美;刘建阳;林伟;张成省;赵栋霖5.杂色曲霉产毒培养物的诱变性研究 [J], 廖兴广;张秀丽;王爱月因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

微生物转化法合成3-氧代齐墩果酸及其条件优化

１实验
１１材料．
大量研究对其进行结构修饰Ｌ４。相对于化学法进行３］．
结构改造，生物法具有条件温和、色环保、微绿区域选择性和立体选择性高等独特优点。
王晋宇等［利用赭曲霉ＮＧ１０５２３羟基化齐墩果酸
１１３培养基．．
学修饰可以提高其水溶性并增强其药效。齐墩果酸经氧化后得到的３氧代齐墩果酸（－ｘ — 一３ｏｏＯＡ）抗肿瘤的活性明显提高，人口腔鳞癌细胞（）有较高的选对ＫＢ具择性，对正常细胞毒性较小［且１由于齐墩果酸的母。核与甾体化合物的母核相似，因此作者选取了自行保
采用黑根霉使孕酮一步转化成Ｃ。一基孕酮；羟ａ陈小明等［利用微生物转化法生产１羟基一甾一一一一８７雄４烯３
酮。有报道＿对齐墩果酸的３羟基和２－基进行化９］一８羧
雷斯青霉（ｎｃｌｉｍｒｉｒｃｉＡＴＣ１４０、ＰｅｉｉｕａｓｉｉｌｔｋＣ０９）赭曲霉（ｐｒｉｕｈａｅｓ４５和黑根霉（ｉｏＡｓｅｇｌｓｃｒｃｕ０）ｌｏＲｈｚ — ｐｓｉｒｃｎＣ４０７均为自行保藏。ｕｇｉｓＴＣＣ１４）ｎａ
１１１试剂与仪器．．
甲醇（国Ｍｅｃ德ｒｋ公司）乙腈为色谱纯，余试、其

可见光分光光度法测定米曲霉发酵液中总黄酮

1422009No .9Serial No .210Chi n a Bre w i n gAna l y sis and Exa m i n ation收稿日期:2009-04-30作者简介:金红星(1968-),男,讲师,研究方向为微生物学。

可见光分光光度法测定米曲霉发酵液中总黄酮金红星,胡炎华,成文玉(河北工业大学化工学院,天津300130)摘要:米曲霉可发酵生产黄酮类物质,为确定发酵液中总黄酮含量,采用可见光分光光度法(A510)进行测定,并优化了测定条件。

确定乙醇浓度为95%(体积分数),亚硝酸钠浓度为4%(质量分数),硝酸铝浓度为10%(质量分数)以及氢氧化钠浓度为4%(质量分数)时最适用于米曲霉发酵液中总黄酮含量的测定。

最后分别用芦丁和槲皮素物质的量为标准确定总黄酮含量。

关键词:可见光分光光度法;米曲霉;发酵液;总黄酮中图分类号:O 657.32 文献标识码:A 文章编号:0254 5071(2009)09 0142 03D eter m ination of t otal flavonoi d s i n Asperg illus oryzae fer m entation by visible spectrophot om etryJIN H ongxi ng ,HU Yanhua ,CHENG W enyu(S chool of Che m ical Engineeri ng an d T echnology,H ebei Universit y of Technology,Tianjin ,300130,Chi na)Ab stract :T he concen tration of flavono i ds i n A spergill us oryzae f er m en t a tion was deter m i ned by v isi ble s pectrophoto m etry (A510).The optm i a l deter m i nati on cond itions were obtained as fo ll ow s :ethano l concentrati on 95%,sodi u m n itrite concentrati on ,4%,a l u m i nu m n itra te concentrati on 10%and sodi u m hydrox i de concentrati on 4%.The tota l fl avono i ds content we re assayed usi ng ruti n and querceti n as standard .K ey word s :v i si b l e spectropho t om etry ;A spergill us oryzae ;fer m entati on ;tota l fl avono i ds黄酮类化合物(F lavono i d)也叫生物类黄酮或维生素P ,常与维生素C 伴存,广泛存在于植物(如蔬菜、水果、花和谷物)中。

总状毛霉生物转化孕酮的研究

总状毛霉生物转化孕酮的研究周斌;胡秋芬;杨海英;杨新周;牛德云;沈广剑;来天超;杜刚【摘要】为筛选羟基化多样性的菌株,对总状毛霉(Mucor racemosus)生物转化孕酮进行研究.转化产物经HPLC分析,共分离到6个转化产物,通过NMR、MS及FTIR等手段对孕酮转化产物进行结构鉴定.其结构为11α-羟基孕酮(1);15α-羟基孕酮(2);11α,15β-二羟基孕酮(3);6β,11α-二羟基孕酮(4);7β,15β-二羟基孕酮(5);1-脱氢11α-羟基孕酮(6).研究结果表明,总状毛霉转化孕酮的衍生物具有丰富的多样性.【期刊名称】《湖北农业科学》【年(卷),期】2014(053)003【总页数】4页(P666-669)【关键词】生物转化;总状毛霉(Mucor racemosus);孕酮;结构鉴定【作者】周斌;胡秋芬;杨海英;杨新周;牛德云;沈广剑;来天超;杜刚【作者单位】云南民族大学化学与生物技术学院,昆明650500;云南民族大学化学与生物技术学院,昆明650500;云南民族大学化学与生物技术学院,昆明650500;云南民族大学化学与生物技术学院,昆明650500;云南民族大学化学与生物技术学院,昆明650500;云南民族大学化学与生物技术学院,昆明650500;云南民族大学化学与生物技术学院,昆明650500;云南民族大学化学与生物技术学院,昆明650500【正文语种】中文【中图分类】O621.31952年Murray等［1］利用黑根霉转化孕酮得到11α－羟基孕酮，并在甾体工业中大规模应用，由此微生物转化技术在甾体药物生产中的重要性被广泛认识。

而甾体化合物的羟基化是微生物转化技术应用的主要方面。

羟基化反应是甾体化合物生物转化反应中最重要的反应，由于甾体母核上4个环上有多个次甲基，用化学法进行羟基化很难区分，不能反应的区域选择性及对映体选择性，微生物能够专一地在甾体母核或侧链上引入一个或多个羟基，羟基化改变了甾体的极性，进而影响其毒性、细胞分泌及药物分布，从而产生不同的药效，并可应用于甾体药物工业生产［2］。

转化黄体酮菌株的筛选及转化产物研究

转化黄体酮菌株的筛选及转化产物研究∗罗莎莎;李卫天;蒋丹;苏志伟;黄守瑞;冷潇【期刊名称】《成都医学院学报》【年(卷),期】2016(11)2【摘要】Objective The new progesterone derivatives obtained with the microbial transformation method are vital for the research and development of new drugs.Methods TLC and Sulfuric acid methods were adopted to screen the strains which are capable of transforming progesterone with the help of microbial transformation.The silica gel column chromatography was used to purify the products in the fermented liquid,and mass spectrum, infrared spectrum and nuclear magnetic resonance spectrum were employed to identify the structure of the purified products.Results A strain which could transform progesterone completely was screened and identified as Fusarium of Molecular biology identification.Two important intermediates of hormone drugs in the purified transformation products were aquired and identified as Androst-1,4-dien-3,1 7-dione and testolactone.Conclusion The screened strain is of potential value in producing the two important intermediates of hormone drugs including Androst-1,4-dien-3,1 7-dione and testolactone in a lager scale.%目的：用微生物转化的方法获得新型的黄体酮类衍生物,对于相关新药的研发至关重要。

林生毛霉对孕甾烯醇酮的生物转化研究

林生毛霉对孕甾烯醇酮的生物转化研究宇川川;贾桂燕;李丽阳;阮洪生;赵竹青;崔玉;葛文中【期刊名称】《黑龙江八一农垦大学学报》【年(卷),期】2015(000)001【摘要】利用林生毛霉对孕甾烯醇酮进行生物转化，得到了三个转化产物。

经波谱学方法（IR、MS和2D NMR）分别鉴定为3β，7α-二羟基孕甾-5-烯-20-酮（2）、3β，7α，11α-三羟基孕甾-5-烯-20-酮（3）和3β，7α，9α-三羟基孕甾-5-烯-20-酮（4）。

通过2D NMR技术对产物13C NMR数据进行了全归属，详细地解析了化合物4的结构。

【总页数】5页(P73-77)【作者】宇川川;贾桂燕;李丽阳;阮洪生;赵竹青;崔玉;葛文中【作者单位】黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆 163319;黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆 163319;黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆 163319;黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆 163319;黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆 163319;齐齐哈尔市梅里斯区第二中学;黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，大庆 163319【正文语种】中文【中图分类】R914.4【相关文献】1.5,6α-环氧-16-孕甾烯酮的生物转化研究 [J], 葛文中;任丽鸽;刘宏民2.日内瓦毛霉对妊娠烯醇酮的生物转化研究 [J], 孙工兵3.相转移催化合成5,7-孕甾二烯-3,20-二酮-二乙二醇缩酮 [J], 杜杰;王迪;崔励4.孕甾烯醇酮吡咯化合物的合成及对三种植物病菌抑制率的研究 [J], 刘焕梅;李立军;孙晓然;韩美慧;刘焕昱5.总状毛霉对17α-羟基孕甾-4-烯-3,20-二肟的生物转化 [J], 谢春清;佟国军;葛文中因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

4种三萜类化合物的微生物转化探讨

ｔｌｏＰＬＡ，Ｋａｆｎａｆｉｅｇ，Ｈｅａ７０３，ｉａ）ｎｎ４５０Ｃｈｎ
Ａｂｔａｔｓｒｃ：Ｏｂｅｔｅｊｃｉ：Ｔｏｂｏｒｎｆｒｌｎｓｅｏ，ｉｏｏｉｌｌａｏｉａｉｎｌｃｒｈｔｎｃａｉｖｉｔａｓｏｍａｏｔｒｌｎｔｄｏ，ｏｅｎｌｃｄａｄｇｙｙｒｅｉｉｃｄ．Ｍｅｈｄ：１ｃｔｏｓ８
ＺＨＡＯｎ— ｉ，ＣＨＥＮｉｓｎ，ＸＵｉｈｏｇＷＡＮＧｎ，ＤＯＮＧｎｇｙｕＦｅｑｎＹｎ— ｈｅｇＣａ— ｎ，ＦａｇＨｏ — ，ＺＨＡＮＧＺｈｎｚｅｅ —ｈｎ
ｎ７５４，Ｃｈｉ２．ＮＯ．１ｎｔａｌＨｏｐｉｎａ５５Ｃｅｒｓ — （ＰｈｒｃｕｉａｎｔｔｔｆｎｎＵｎｖｒｉｙ，ＫａｆｎＨｅａｎ４００１．ａｍａｅｔｃｌＩｓｉｕｅｏＨｅａｉｅｓｔｉｅｇ，
桦褐孔茵醇，．７、．２７ＡＳ３３４、．６、．４０可转化齐墩果酸，曲霉３７５及ＡＳ３９０ＡＳ３９０ＡＳ３１０、．４３ＡＳ３２４ＡＳ３２５黑．９．７、ＡＳ３１０、．４３ＡＳ３２８、．６、．４０可转化甘草次酸，筛菌种均不能转化羊毛甾醇。．２７ＡＳ３３４、．８２ＡＳ３２４ＡＳ３２５所关键词：毛甾醇；褐孔茵醇；羊桦齐墩果酸；草次酸；生物转化甘微

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云南民族大学学报：自然科学版，２０１５，２４（２）：１２６—１２８
ｄｏｉ：１２．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ１６７２— ８５１３．２０１５．０２．０１１
ＣＮ５３ — １１９２／ＮＩＳＳＮ１６７２—８５１３
积比）：甲醇／水＝６０／４０；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：２４５ｎｍ；柱温：４０℃ ；进样量：５Ｌ．取０．０５ｇ粗提物，加入ｌｍＬ甲醇溶解，用０．４５ｍ过滤膜过滤，进行ＨＰＬＣ分析．
裂解孕酮Ｃ一１７位的侧链，生成１９个碳的转化产物，并对裂解产物进行结构修饰．关键词：生物转化；杂色曲霉；孕酮；结构鉴定中图分类号：０６２９．２文献标志码：Ａ文章编号：１６７２— ８５１３（２０１５）０２— ０１２６— ０３筛选优良菌株、发掘新的生物催化剂是发展甾体药物工业的重要课题．１９５２年美国普强公司的Ｍｕｒｒａｙ和Ｐｅｔｅｒｓｏｎ利用黑根霉转化孕酮１１位羟基化，并实现了工业化生产，这一工作使可的松的合成步骤减少到
养７ｄ．发酵液用乙酸乙酯萃取，菌丝体用甲醇浸泡超声提取，真空浓缩合并得到粗提物浸膏．
１．４ＨＰＬＣ分析
色谱柱：ＡｇｉｌｅｎｔＺＯＲＡＸＳＢ— Ｃ１８柱／４．６Ｘ１５０ｍｍ，５ｍ；检测器：二级管陈列检测器（ＤＡＤ）；流动相（体
孕酮是一种孕激素，是合成皮质激素的重要中间体，也是最早进行微生物转化研究的甾体化合物，雄烯二酮（ＡＤ）和雄二烯二酮（ＡＤＤ）为最具市场价值的甾体药物中间体，市场容量达每年１０亿美元＿５］．本研究以实验室保藏杂色曲霉菌株对孕酮进行生物转化初步研究，为该菌株在甾体药物研发中的应用提供依据．
摘要：利用杂色曲霉对孕酮进行生物转化，通过ＨＰＬＣ对转化产物进行检测，硅胶柱层析分离纯
化转化产物，得到３个转化产物．运用ＮＭＲ、ＭＳ、ＩＲ等波谱数据对转化产物进行结构鉴定，确定
转化产物结构为：雄烯二酮（ＡＤ）；睾酮；雄二烯二酮（ＡＤＤ）．研究结果表明，杂色曲霉菌株能够
ｈｔｔｐ：／／ｘｂ．ｙｎｎｉ．ｅｄｕ．ｃｎ
杂色曲霉转化孕酮的研究
杨海英，李忠孝，沈广剑，张振宇，李淑娟，杜刚
（云南民族大学民族药资源化学国家民族事务委员会一教育部重点实验室，云南昆明６５０５００）
十一步，大大降低了生产成本，到１９６７年可的松的生产成本已降到１美ｇＬ１－３ｊ．这是第一个成功的生物转
化工业化项目，证明了微生物技术可以应用于大规模的甾体药物生产．自此以后，微生物转化甾体化合物的研究被广泛开展，微生物转化甾体类药物成为生物转化在大规模工业应用中最成功的范例之一，在甾体药物生产中具有高选择性、高转化率、条件温和及低化学污染等优点．
收稿日期：２０１４—科学研究基金重点项目（２０１３Ｚ０３８）；云南民族大学化学与生物技术学院ＳＲＴ项目（２０１３ＨＸＳＲＴ０５）作者简介：杨海英（１９７５一），女，硕士，副教授，硕士生导师．主要研究方向：天然产物及生物催化．
１仪器试剂
１．１材料
孕酮购自江苏省盐城信谊医药化工有限公司，经ＮＭＲ及ＨＰＬＣ检测纯度＞９８％．
１．２微生物菌株
杂色曲霉分离自滇重楼根状茎，为本实验室保藏菌株，实验室编号ＹＮＣＡ００９８．１．３转化过程及粗提物制备发酵培养基含３ｇ／ＬＮａＮＯ３，１ＬＫ２ＰＯ４，０．５ｇ／ＬＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ，０．５ｇ／ＬＫＣ１，０．０１ｇ／ＬＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ，３０Ｌ蔗糖，ｐＨ６．５，孕酮１．０ｇ／Ｌ，孕酮加少量乙酸乙酯溶解，再加４Ｌ吐温８０混匀，加水形成乳浊液加入１Ｌ培养基，进行放大培养发酵．２５０ｍＬ锥形瓶装入１００ｍＬ发酵液，共发酵８Ｌ置于２８ｏＣ，２２０ｒ／ｍｉｎ振荡培