CA153定量测定-检验科免疫室作业指导书
【指导】免疫组作业指导书三21上
文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 【关键字】指导免疫室作业指导书定量免疫部分(上)第B版编制：张思思肖造林审核：肖造林批准：陈建国生效日期：2016年12月01日长沙九龙医院检验科目录表西门子全自动电化学发光定量免疫室内质控程序1 目的检测控制免疫室西门子全自动电化学发光仪测定工作的精密度，并检测其准确度的改变，提高常规检测工作的批间批内检测结果的一致性。
2 适用范围肿瘤标志物：AFP、CEA、CA125、CA153、CA199、TPSA、sfPSA、CA724、CA211、βHCG。
甲状腺功能指标：TT3、TT4、FT3、FT4、TSH。
性腺激素：FSH、LH、E2、PRL、Prog、Test等3 职责质量负责人负责质量控制方案制定，临床免疫实验室组长负责具体实施，质量监督员监控。
4 室内质控管理程序室内质量控制是由实验室技术人员采用一系列统计学的方法，连续评价本实验室测定工作的可靠程度，判断检验报告是否可发出的整个过程，室内质量控制是实验室质量控制保证体系中的基本要求之一。
4.1 开展室内质量控制的准备工作。
4.1.1 培训工作人员在开展质控前，每个实验室工作人员都应对质控的重要性、基础知识、一般方法有比较充分的了解，并在质控的实际过程中不断进行培训和提高，在实际中实验室应培养一些质控工作的技术骨干。
4.1.2 建立标准操作规程实施质控需要有一套完整的标准操作规程文件做保障，如仪器的使用、维护操作规程、试剂、质控品、校准品等操作规程等。
4.1.3 仪器的检定与校准仪器的检准：对西门子全自动电化学发光仪的校准按要求每12个月进行一次，校准由西门子公司批派专门技术人员完成，并出具仪器校正报告。
曲线的校准：当定标间隔到期、定标是无效、使用新的批号试剂、质控失效或仪器更换重要的部件或光路系统经过大型保养维修时，进行曲线的校准。
使用仪器配套的标准品，能溯源到参考方法或参考物质。
糖链抗原CA 15-3标准操作程序SOP文件
♦概述：属于糖蛋白类抗原，MW约400000D。
1984年Hilkens等人从人乳脂肪球膜上糖蛋白MAM-6制成小鼠单克隆抗体（II5-DB）；1984年，Kufu等从肝转移乳癌细胞膜制成单克隆抗体（DF-3）,由这些抗体识别出CA15-3o主要用于乳腺癌的监测和筛选，以及用于评价患者预后情况的指标。
♦临床应用：乳腺癌1）乳腺癌患者30-50%增高，有转移灶者增高可达80%；2）发现癌转移的敏感性比癌胚抗原和组织多肽抗原高，且早于临床发现转移；3）CA15-3是监测病人术后复发情况，特别是癌症转移患者的术后监测的重要指标, 血清CA15-3水平增高，提示乳腺癌的局部或全身复发，且增高早于核素检查和临床检查；4）用于对治疗的随查评估及早期发现转移灶，CA15-3的增高比临床诊断出转移灶要早几个月时间；5）可与CA125联合检查，用于卵巢癌复发的早期诊断；•检测结果由机器自动从标准曲线上查出。
此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。
试齐小M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6. 5mlo含防腐剂。
R1：生物素化的抗CA153单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。
含防腐剂。
R2： Ru（bpy）32+标记的抗CA抗3单克隆抗体（黑盖）,1≡, 10ml o含防腐剂。
储存和稳定性：存放在2-8度，切莫倒置。
未开封，可稳定至标明的保质期。
开封后，2-8度，12周；放在Elecsys2010, 8周；（室温20 — 25度；开盖时间累计不超过20小时）。
标本采集和准备：血清：按标准常规方法采集。
血浆：EDTA-K3或柠檬酸钠抗凝。
（不要使用肝素抗凝血浆或草酸盐/氟化物抗凝血浆。
确保标本不被肝素污染。
）标本在2 —8度可稳定24小时，-20度可稳定12个月。
只可冻融一次。
含沉淀的标本使用前需离心。
标本和质控品禁用叠氮钠防腐。
标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。
免疫作业指导书
1、为规范免疫室的工作管理，提高服务质量、服务效率，更好的满足客户的需要。
使检验工作严谨、高效、科学、有序，工作人员必须严格遵守本制度。
2、工作人员应遵守医院、科室和各专业组的各项规章制度。
组内实行组长负责制,组长、质量监督员、仪器负责人按各自岗位职责分工完成工作、分工不分家。
3、遵守医院和科室的考勤制度，严格遵守上下班时间。
4、上班期间，工作人员的言行举止应遵守《医院服务礼仪言行规范》要求。
5、上班期间不准进食、干私活，例如：娱乐、聊天、打瞌睡、高声喧哗、高谈阔论、阅读与专业无关的报纸、杂志等，应保持工作场所的严肃性。
6、应严格遵守操作规程，准确及时地发出检验报告。
7、经常检查试剂的数量、质量，试剂用后应及时放回冰箱保存。
8、每天按规定进行室内质控，并做好失控分析。
9、检查结果在填发报告之前要进行一次审查。
如发现与诊断不符，结果异常偏高或偏低，或质控血清值出现异常等，应仔细检查操作。
10、操作时严格遵守《安全管理制度》的相关要求，注意生物安全，防止标本污染、传染及其它事故的发生。
11、所有标本及接触标本的物品均视为传染性物质，应按《医疗废物管理规定》进行处理。
12、遵守HIV实验室的各项制度。
12．1登记制度：对阳性样品应按规定登记在专用登记本上。
并保留原始比色记录。
12．2 通知制度：出现阳性样品时，及时通知：a)所有实验室将病人的标本作相关处理，做好个人防护。
b)主诊医生(口头报告)。
c)报告科主任。
d)通知感染科(送标本)。
12．3保密制度: 该知的人要知，不须知的人不告知，病人由市疾控中心通知。
编写：审核：批准：批准日期：年月日1、总则为使免疫室的工作能保质保量的顺利完成，在遵守《检验科内务管理制度》的前提下，有必要对免疫室的各岗位进行分工，以明确各岗位的工作职责和工作范围。
要求做到分工不分家，发挥团结协作的精神，共同完成日常工作。
2、范围：免疫室3、岗位职责各岗位的职责包括：标本分流、编号、预处理、检测、结果审核、报告；室内质量控制；检测后标本的整理；每班工作结束后工作场地的整理；仪器的维护保养；仪器的使用维护记录、交接班记录。
CA153定量测定-检验科免疫室作业指导书
CA153定量测定-检验科免疫室作业指导书CA153定量测定1.原理抗原或抗体包被的微粒子，是由多孔高分子粒子制成，具有很好的亲水性，悬浮性极佳，微粒子可与玻璃纤维不可逆结合，从而提高了反应的特异性。
标本与微粒子以一定比例混合，标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应，以反应终了后，反应液的一部分被移到玻璃纤维上，洗去未反应的被检物质与其它的不要成份，加入基质液，基质液被碱性磷酸所分解生成Methylumbelliferone。
当该物受荧光照射后就产生荧光，测定荧光强度的分化率，从而决定被测物质的浓度。
2.标本采集：2.1标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2标本种类：血清或血浆。
2.3标本要求：采集血清样本，取被检者静脉血，用无菌取血针抽取病人静脉血3ml，收集干燥试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用.采集血浆样本，用无菌取血针取被检者静脉血3ml，收集于含有EDTA作抗凝剂的试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用。
3.标本储存：待测样本室温不超过8小时，4-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，避免反复冻融。
4.标本运输：室温运输。
5.标本拒收标准：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。
6.试剂：6.1试剂名称：CA153诊断试剂盒。
6.2试剂生产厂家：美国雅培制药有限公司6.3包装规格：100T est/kit6.4试剂盒组成：CA153诊断试剂。
6.5试剂储存条件及有效期：试剂盒贮存2-8℃条件，有效期12个月。
7.仪器设备：7.1仪器名称：AXSYM免疫自动分析仪7.2仪器厂家：美国雅培公司7.3仪器型号：AXSYMTm型7.4仪器校准：本仪器校准由厂家工程师负责校准。
8.操作步骤：8.1样本处理：取待测样本血清或血浆置于样本杯中(不能有纤维蛋白，不能有气泡)。
8.2仪器准备：检查纤维杯，反应杯数量满足实验需要，废物桶和废液桶是否连接好，仪器的光路是否正常，环境温度是否符合要求，打印机的连接。
免疫学检验室内质量控制操作程序-检验科免疫室作业指导书
免疫学检验室内质量控制操作程序1.目的：保证ELISA检测结果准确可靠,充分发挥其方法学的优点。
2.该SOP变动程序：本标准操作程序的变动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。
3.方法3.1分析前质控3.1.1人员培训实验是人操作的，因此检验人员需经过培训，熟练掌握本专业如下几方面的技术知识：检验项目的基本原理（ELISA原理）；临床意义；熟悉检测技巧，了解易出差错的环节及难点；熟悉检测试剂性能（包括试剂盒组成，包被片段及其组成）；熟悉检测仪器的原理及性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识。
某些特殊项目检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班，考试合格后持证上岗。
3.1.2.室内质控血清的制备：质控血清每年列出计划报质控组采购，一般采用CutOff值附近的阳性值；⑵质控血清-20℃冻存备用；⑶使用前室温复融。
3.1.3试剂盒选择卫生部规定乙肝试剂，丙肝试剂，艾滋病试剂，梅毒试剂及血型试剂必须使用经卫生部生物制品检定所检定合格，并贴有防伪标签的产品。
试剂盒评价：根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告，了解其质量水平，按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；通过询问试剂包被物的组成，如原料来源（基因工程或合成多肽），片段的组合（按比例混合或化学合成），片段的长短等判断试剂的优劣；参考室间质评报告中对试剂的评价结果，了解不同试剂的质控成绩。
根据权威部门发布的试剂评价结果，了解市场上试剂的质量优劣。
3.1.4仪器质控为使仪器保持最佳工作状态应建立维护和校正仪器的标准操作程序（SOP），所要控制的仪器包括移液器（加样枪），水浴箱（温箱），洗板机和酶标仪。
⑴移液器：ELISA加样量小（5-100ｕl），其准确性直接影响实验结果，利用称重法检查：吸取刻度指示量的水，万分之一天平称重后计算吸量是否准确，一般应在±10%以内；水浴箱：经常检查水浴箱温度计所示的温度和水中（或温箱内）实测温度是否一致，允许有±1℃的误差；洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul，人工扣板时，垫纸不湿，定期检查管孔是否堵塞；酶标仪：经常维护其光学部分，防止滤光片霉变，定期检测校正，使其保持良好的工作性能。
免疫室作业指导书
免疫室作业指导书编写者杨梦逑审核者批准者2015年10月01日目录1 目的对免疫室内部的检验程序进行质量控制，以保证检验结果的准确性。
2 适用范围临床免疫实验室3 职责检验科主任负责组织人员制定质量控制程序，免疫室组长负责组织人员具体实施。
4 室内质量控制管理程序室内质量控制是由实验室工作人员采用一系列统计学的方法，连续评价本实验室测定工作的可靠程度，判断检验结果是否可发出的整个过程。
室内质量控制是实验室质量控制保证体系中的基本要求之一。
4.1 开展室内质量控制前的准备工作4.1.1 人员实验室专业技术人员须具有相应的专业学历，并取得相应的专业技术职务任职资格。
资质、经历和能力必须能够满足相应岗位的要求。
检验人员要加强专业继续教育，适应专业发展需求。
4.1.2 项目及方法的选择和评价检验项目及方法的选择，应能满足临床工作需要，须符合在卫生行政部门核准登记的医学检验诊疗科目，并应按照卫生部规定的检验项目及方法开展工作。
目前要求选择的方法要符合卫生部《全国临床检验操作规程（第二版）》和/或经国家批准注册的厂家检验方法及程序。
进一步建立检验方法的选择和评审等程序，规范相关工作。
4.1.3 仪器设备仪器要按照仪器操作规程定期检查并经常维护和保养，使仪器设备处于最佳状态下运转。
对测定临床样本的各类仪器要按一定的要求进行校对，校准是要选择合适的标准品，如有可能，校准品应能溯源到参考方法或参考物质。
4.1.4 质控品的选择质控品是保证质控工作的重要物质基础。
根据物理性状可有冻干质控品，液体质控品，混合血清等；根据有无测定值可分为有定值质控品和非定值质控品。
实验室可根据情况选以上任何一种质控品作为室内质控品。
作为较理想的质控品至少应具备以下一些特征：①人血清基质，分布均匀；②无传染性；③添加剂和调制物数量少；④瓶间变异小；⑤冻干品其复溶后稳定，2—8℃时≧24小时，-20℃不少于20天，某些不稳定成分在复溶后前4小时的变异小于2%；⑥到实验室后应有1年以上的原载效期。
糖类抗原15-3(CA 15-3)作业指导书
ElecsysE170分析仪：
·一个月（同一批号试剂）
·7天（放置仪器上的同一试剂盒）
各种分析仪均适用的情况：根据要求进行定标：如质控结果超出范围时。
5.操作步骤（以E 170为例）
批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。
进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。
1.分析原理
采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。
·第1步：20µl仪器自动使用通用稀释液预稀释1：10的标本、生物素化的抗CA 15-3特异性的单克隆抗体和钌（Ru）标记的抗
CA 15-3特异性的单克隆抗体混匀，形成夹心复合物。
·第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
·第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，通过2点定标曲线以及试剂条码提供的母定标曲线计算出结果。
2.标本要求
血清：按标准常规方法采集。
血浆：肝素钠、锂、铵和EDTA-K3抗凝。使用柠檬酸钠结果会比使用以上抗凝剂低24％。标本在2－8度可稳定5天，-20oC可
质控品：
Elecsys肿瘤标志物质控品1和2（PreciControlTumor Marker）货号11776452
糖类抗原153项目性能验证方案
糖类抗原153(CA153) 检测方法学性能验证评价报告验证内容：正确度、重复精密度、中间精密度、线性范围、临床可报告范围及参考区间的确认验证人员：一检测系统信息项目：CA153仪器名称: 雅培免疫分析仪仪器型号: I2000试剂及厂商：雅培公司检测方法：化学发光微粒子免疫检测法二厂商提供的相关参数三验证过程1 正确度1.1 目的：评价仪器测试结果与接受参考值之间的一致程度。
通过实验室检测数据的偏倚从而评价和验证实验室检测结果的准确性。
1.2 评价方法：参加卫生部临检中心的室间质评，本组参加室间质评的项目一律用回报结果作为评价标准，最近一次参加卫生部室间质评卫生部质控值。
1.3 结果判断方式：<1/2 CLIA’88正确度验证试验数据记录表2 精密度2.1 重复精密度2.1.1 目的：考察仪器检测方法的随机误差2.1.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20个结果，判断这20个独立结果间的一致程度2.1.3 方法：选择新鲜混合血清标本（病人高值、低值）各20份，测量前先定标，再做质控，质控结果在控制范围内，连续重复测定20次，计算SD，CV，得到重复性精密度。
2.1.4 标本来源：高、低值标本均为混合血清。
2.1.5 结果判断方式：<1/4C LIA’ 88 6.25%重复性精密度验证试验数据记录表2.2 中间精密度：2.2.1 目的：考察目前实验室检测方法中间精密度。
2.2.2 原理：在检测系统处于优良的条件下，连续测定20天，取得20个结果，判断这20个独立结果间的一致程度。
2.2.3 方法：取一个月的室内质控值（高值、低值）计算CV、SD，得到批间精密度。
2.2.4 结果判断方式：<1/3 CLIA’ 88 8.33%中间精密度验证试验数据记录表3 线性范围（Linearity range, AMR）3.1 目的：在确定某项目检测上限的同时检测其上下限是否呈线性关系，从而保证该浓度范围检测结果的准确性。
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CA153定量测定
1.原理
抗原或抗体包被的微粒子，是由多孔高分子粒子制成，具有很好的亲水性，悬浮性极佳，微粒子可与玻璃纤维不可逆结合，从而提高了反应的特异性。
标本与微粒子以一定比例混合，标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应，以反应终了后，反应液的一部分被移到玻璃纤维上，洗去未反应的被检物质与其它的不要成份，加入基质液，基质液被碱性磷酸所分解生成Methylumbelliferone。
当该物受荧光照射后就产生荧光，测定荧光强度的分化率，从而决定被测物质的浓度。
2.标本采集：
2.1标本采集前病人准备：受检者应空腹。
2.2标本种类：血清或血浆。
2.3标本要求：采集血清样本，取被检者静脉血，用无菌取血针抽取病人静脉血3ml，收集干燥试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用.采集血浆样本，用无菌取血针取被检者静脉血3ml，收集于含有EDTA作抗凝剂的试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用。
3.标本储存：待测样本室温不超过8小时，4-8℃不超过72小时，-20℃可长期保存，避免反复冻融。
4.标本运输：室温运输。
5.标本拒收标准：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。
6.试剂：
6.1试剂名称：CA153诊断试剂盒。
6.2试剂生产厂家：美国雅培制药有限公司
6.3包装规格：100Test/kit
6.4试剂盒组成：CA153诊断试剂。
6.5试剂储存条件及有效期：试剂盒贮存2-8℃条件，有效期12个月。
7.仪器设备：
7.1仪器名称：AXSYM免疫自动分析仪
7.2仪器厂家：美国雅培公司
7.3仪器型号：AXSYMTm型
7.4仪器校准：本仪器校准由厂家工程师负责校准。
8.操作步骤：
8.1样本处理：取待测样本血清或血浆置于样本杯中(不能有纤维蛋白，不能有气泡)。
8.2仪器准备：检查纤维杯，反应杯数量满足实验需要，废物桶和废液桶是否连接好，仪器的光路是否正常，环境温度是否符合要求，打印机的连接。
8.3试剂准备与检查：从冰箱取1号液放入仪器，检查所有试剂和缓冲液量是否足够，是否在有效期内。
8.4定标
8.4.1定标步骤：输入主标正曲线(工厂定标)，从MAINMENU选择STOREDRESULTS，选择CALIBRATIONREVIEW，选择F4-NEWLOT，选择
F4-SCAN用条码阅读器扫主标正曲线或用键盘手工输入条码数据，选择F6-SAVE储存主标正曲线数据。
8.4.2定标申请：从MAINMENU中选择ORDERLIST，选择F4-CAL，选择项目CA153，输入样品架位置，输入标准品的批号和有效期，选择F6-ADD确认，选择F1-EXIT追回。
8.4.3定标运行：检查试剂盒和消耗品，检查库存，按RUN运行。
8.5质控：
质控品分高、中、低三种。
8.5.1质控定义：从MAINMENU中选择CONFIGURATION，选择CONTROL，选择CA153项目，输入质控名(每个质控名带一个质控水平，高、中、低)，选择F2-ADDCONTROL，选择F6-CONTROLDETAILS，选择数据区域(2SD范围)，输入质控信息，按ENTER键，选择F6-SAVE 保存质控信息。
8.5.2质控申请：从MAINMENU选择ORDERLIST，选择F5-CONTRL，选择项目CA153，输入样品架位置，选择分析的质控品水平，高、中、低，选择F6-ADD确认，按F1追加MAINMENU。
8.5.3质控运行：检查试剂，消耗和库存，按RUN键运行。
8.5.4质控浏览
8.5.4.1质控结果浏览：从MAINMENU选择STOREDRESULTS，选择VIEWSTOREDQCRESULTS，选择浏览CA153质控结果，选择F6-DETAILS。
8.5.4.2质控图浏览：从MAINMENU选择LEVERY-JENNINGSQC，选择项目CA153，选择质控水平，选择F5-GRAPH浏览。
8.5.5质控要求：所有质控水平必须控制在2SD范围内。
9.标本检测常规操作：
9.1申请病人样品测试
9.1.1单个病人样品申请：从MAINMENU选择ORDERLIST，选择F6-PATIENT，输入样品架位置编号和样品编号，可选择输入病人编号、病人姓名、病人说明等资料。
选择CA153项目，可选择是否急诊项目，选择F6-ADD确认。
9.1.2样品批处理申请：从MAINMENUT选择ORDERLIST，选择F6-PATIENT，选择F2-BATCH，输入起始样品等的位置，输入起始样品编号，输入测试的样品数，选择项目CA153，选择F6-ADD确认。
9.2检测结果查看：
从MAINMENU选择STOREDRESULTS，选择PATIENTREPORT，选择要查看的编号，选择F6-DETAILS。
9.3检测结果打印和保存：
清单打印和详情单打印，结果硬盘保存，软盘保存，传输到PC电脑保存.
10.结果计算：利用点对点数据产生方法来产生标准曲线利用率A 的方法来产生主标准曲线，并根据标准曲线计算最终样品浓度。
11.参考范围：＜28U/ml
12.临床意义：
12.1乳腺癌患者CA153明显升高，CA153水平与临床分期及淋巴结转移成正相关，治疗有效时CA153水平显著下降，复发时又复上升。
12.2血清CA153升高还可见于肺癌，卵巢癌患者，亦可见于良性乳腺疾病和良性卵巢疾病。
13.操作性能：FlexibleProtocolTMProcessing技术为免疫检测程序的最优化步骤，此技术被运用于样本处理，试剂处理，吸样处理和分析处理等整个检测过程中，检测程序各步骤被处理或完全独立的分析基元，不同的分析技术，步骤和过程可在同一台仪器上同时进行，使整个分析表现(如灵敏度，特异性，精密度，准确性等)达到最佳状态，同时使分析过程成为真正的随机连读分析步序，达到最快出结果的速度。
14.超出范围结果处理：检测样本中CA153值在250U/ml范围内可直接报告，如结果大于250U/ml，可做相应的稀释后重测。
15.方法局限性：检测样本不能溶血，脂血或黄疸血，不同批量试剂不能混用，必须使用原厂试剂。
16.当检验系统(仪器)不能工作时，所采取的补救措施：当检验系统(仪器)不能工作时，可联系厂家代理商，进行紧急维修，如一时不能修好，如别实验室有同类仪器可到别的仪器上测试，如别的实验室无同类仪器，可改用其它方法进行检测(如酶联免疫法)。
17.参考文献：
朗江明等临床免疫诊断学，3003.3
18.其他：
18.1试剂只用于体外检测试剂。
18.2仪器必须严格按保养和维护进行。
18.3保持消耗品的清洁,消耗品必须在原包装条件下保存。
18.4样品中如有颗粒物质必须离心驱除,注意溶血,脂血或黄疸血的可能干扰,如是冷冻样品,融解后必须彻底混匀,避免样品反复冻融。
18.5只有人源样品可用于检测。
18.6所有废品应进行相应的处理后装在专用塑料袋中,丢弃在指定地点。