黑素瘤缺乏因子2诱导的固有免疫在慢性乙型肝炎发病机制中的作用

潘家超， 等． 黑素瘤缺乏因子 2 诱导的固有免疫在慢性乙型肝炎发病机制中的作用
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慢性乙型病毒性肝炎 （ 简称慢乙肝 ） 在我国高 发， 其发生肝硬化、 肝衰竭和原发性肝癌等潜在的不 良结局成为一个主要的临床问题
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9000 ） 及浓缩型 DAB 试剂盒 （ ZLI9017 ） 试剂（ PV均购自北京中杉金桥生物技术有限公司 。 1． 3 B 型超声引导下行肝组织穿刺， 所 有的肝穿标本都首先浸泡在 4% 的甲醛溶液中， 取 实验方法 经过脱水， 透明， 浸蜡， 包埋， 最后制 一块肝脏组织， 。 ， 成切片 烘干切片 将切片放入二甲苯内脱蜡， 然后 95% 、 85% 、 75% ） 逐步洗去二甲 梯度乙醇 （ 100% 、 苯， 将切片放入含有煮沸的柠檬酸修复液的修复盒 中抗原修复。为了消除内源性过氧化物酶造成的非 特异性背景染色， 应用免疫组化 pap 笔圈定肝穿组 织， 并 在 圆 圈 内 滴 加 3% 双 氧 水。 将 第 一 抗 体 AIM2 、 Caspase1、 IL1 β、 IL18 分别滴加在圆圈内肝 PBS 缓冲液冲 将标本放于 4 ħ 冰箱过夜， 组织上， 放置在 洗。然后 加 入 二 抗 PV9000 （ 通 用 抗 体 ） ， 37 ħ 的保温箱中 10 min。然后用 PBS 缓冲液冲洗， DAB 染色。蒸馏水冲洗终止染色， 然后用盐酸乙醇 分化， 氨水返蓝， 中性树胶封片。胞质中棕褐色的染 根据染色强度和阳性细胞 色表明了蛋白表达阳性， 百分比进行评分。 ① 根据染色强度： 无褐色染色为 0 分， 浅棕色为 1 分， 棕色为 2 分， 深棕色为 3 分； ② 6% 根据阳性细胞百分比： 阳性细胞≤5% 为 0 分， 30% 为 1 分， 31% 60% 为 2 分， ＞ 60% 为 3 分。 最 0 后将染色强度分数与阳性细胞百分比分数相乘 ，
第 52 卷 Vol． 52
第4 期 No． 4
山 东 大 学 学 报 （ 医 学 版） JOUＲNAL OF SHANDONG UNIVEＲSITY （ HEALTH SCIENCES ）
DOI： 10． 6040 / j． issn． 16717554． 0． 2013． 663
2014 年 4 月 Apr． 2014
文章编号： 1671 － 7554 （ 2014 ） 04 － 0074 － 06
黑素瘤缺乏因子 2 诱导的固有免疫在 慢性乙型肝炎发病机制中的作用
1， 2 1， 2 3 2 2 2 潘家超 ， 张乐 ，徐琳琳 ， 单晓宇 ， 杜文军 ， 陈士俊
（ 1． 山东大学医学院，山东 济南 250012 ； 2． 济南市传染病医院介入治疗中心 ，山东 济南 250021 ； 3． 济南市传染病医院科教科 ，山东 济南 250021 ） 摘要： 目的 初步探讨黑素瘤缺乏因子 2 （ AIM2 ） 诱导的固有免疫在慢性乙型肝炎 （ CHB ） 发病机制中的作用。 23 例脂肪肝患者为对照组 ， 方法 47 例慢性乙型肝炎患者为实验组 ， 采用免疫组织化学法分别测定两组患者肝组 2 Caspase1、 IL1 β 及 IL18 的表达， 组间比较采用 χ 检验， 相关性分析采用 Spearman 相关分析。 结果 织中 AIM2 、 2 AIM2 （ 89． 3% ） P ＜ 0． 01 ） ， 实验组患者肝组织中 的表达阳性率 明显高于对照组 （ 43． 5% ） （ χ = 15 ． 655 ， 实验组 AIM2 的表达强度与 Caspase1 呈正相关（ r s = 0 ． 738 ， P ＜ 0 ． 01 ） ， IL1 β 和 IL18 的表达强度与 AIM2 的表达强度呈 0 ． 642 ，P ＜ 0 ． 01 ） 。 ALT 和 AST 的水平与 AIM2 表达强度呈正相关 （ r s = 0 ． 325 ， 0 ． 362 ， P＜ 正相关（ r s = 0 ． 527 ， DNA ≥ 1 ˑ 10 5 copies / mL ） AIM2 的表 达 强 度 高 于 低 病 毒 载 量 组 （ HBVDNA ＜ 1 ˑ 0 ． 01 ） 。 高病毒载量组 （ HBV5 2 10 copies / mL ） （ χ = 27 ． 572 ， P ＜ 0． 01 ） 。结论 AIM2 可以结合 HBVDNA ， 1 途径激活固有免疫， 通过 Caspase引 1 β、 IL18 的释放， 起炎性因子 IL导致慢性乙型肝炎炎症的发生 。 2 ； 慢性乙型肝炎； 半胱天冬酶1 ； 白介素 1 β； 白介素 18 关键词： 黑素瘤缺乏因子中图分类号： Ｒ574 文献标志码： A
1105 ； 网络出版时间： 20140325 10ʒ 38 收稿日期： 2013网络出版地址： http： / / w w w ． cnki． net / kcms / doi /10． 6040 / j． issn． 16717554． 0． 2013． 663． html 基金项目： 山东省科技厅资助项目 （ 2011GSF12111 ） mail： csj7516@ sina． com 通讯作者： 陈士俊。E-
Ｒole of innate immunity induced by AIM2 in the pathogenesis of chronic hepatitis B
2 2 PAN Jiachao 1， ，ZHANG Le1， ，XU Linlin3 ，SHAN Xiaoyu2 ，DU Wenjun2 ，CHEN Shijun2
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1
1． 1
资料与方法
研究对象
选择 2010 年至 2012 年在济南市 传染病医院就诊的 70 例慢性肝炎患者。其中 47 例 为慢乙肝患者， 作为实验组； 23 例为脂肪肝患者， 作 为对照组。慢乙肝的诊断符合亚太慢性乙型肝炎治 疗共识
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中的诊断标准， 脂肪肝的诊断符合中华医
Hale Waihona Puke 1 3 分为轻度阳性， 4 6 分为中度阳性， 分为阴性， 7 分以上为强阳性。依据肝炎病毒预防和治疗措施 对肝纤维化的分期 （ S ） 和炎症程度 （ G ） 进行评分。 肝纤维化的分期为 S0 S4 期 （ S0 无纤维化； S1 汇 限窦周及小叶内纤维化； S2 汇管 管区纤维化扩大， 区周围纤维化， 纤维间隔形成， 小叶结构保留； S3 纤 维间 隔 伴 小 叶 结 构 紊 乱， 无 肝 硬 化； S4 早 期 肝 硬 化） 。肝脏炎症程度分为 G0 G4 期 （ G0 无炎症， G1 汇管区炎症， G2 轻度灶性坏死， G3 中度灶性坏 G4 重度灶性坏死） 。 死， 1． 4 统计学处理 采用 SPSS 17． 0 软件进行处理。 2 ʃ s 表示， 计量资料以 x 珋 组间比较采用 χ 检验， 相关 P ＜ 0． 05 为差异有 性分析采用 Spearman 相关分析， 统计学意义。
。 迄今为止， 慢
乙肝炎症损伤的发病机制仍不清楚 。大多数的观点 认为细胞免疫清除乙肝病毒的过程中导致了肝脏的 慢性损伤， 而固有免疫在慢乙肝炎症损伤中的作用 还少有研究。 DeYoung 等［2］最早发现 AIM2 是 IFI20X_IFI16 蛋白家族中的一员。 AIM2 可与胞质内双链 DNA 1， 分子结合， 形成炎性体， 激活 Caspase继而引起成 ［3 ］ 1 β、 IL18 的产生 ， 诱导机体非特异性固 熟的 IL在机体抵御细菌、 病毒感染中发挥重要 有免疫反应， ［45 ］ 。HBV 是一种双链 DNA 病毒， 作用 在肝细胞核 中经过复制最后进入胞质中完成包装 。 本实验 探讨 HBV 可以通过与 AIM2 结合， 激发固有免疫导 致肝脏炎症损伤， 从固有免疫角度分析慢乙肝的发 病机制。
（ 1． School of M edicine，Shandong University ，Jinan 250012 ，Shandong ，China； 2． Interventional Therapy Center for Liver Tumor，Jinan Infectious Disease Hospital，Jinan 250021 ，Shandong ，China； 3． Department of Science and Education，Jinan Infectious Disease Hospital，Jinan 250021 ，Shandong ，China） Abstract： Objective To explore the role of innate immunity induced by absent in melanoma 2 （ AIM2 ） in the pathogenesis of chronic hepatitis B （ CHB ） ． Methods A total of 70 cases w ere enrolled in this study ， including 47 CHB cases as the experimental group and 23 cases of fatty liver as the controls group． The immunohistochemical method w as adopted to detect the expressions of AIM2 ，Caspase1 ，IL1 β and IL18 in liver tissues． The differences betw een the tw o groups w ere compared w ith chisquare test，and the correlation w as analyzed using spearman test． Ｒesults The positive rate of AIM2 expression in the experimental group （ 89． 3% ） w as significantly higher than that in the control group （ 43． 5% ） （ χ2 = 15 ． 655 ，P ＜ 0． 01 ） ． In the experimental group，Caspase1 w as positively correlated w ith AIM2 （ r s = 0 ． 738 ，P ＜ 0． 01 ） ； IL1 β and IL18 w ere positively correlated w ith AIM2 （ r s = 0 ． 527 ，0 ． 642 ，P ＜ 0． 01 ） ． ALT and AST w ere positively correlated w ith AIM2 （ r s = 0 ． 325 ， 0 ． 362 ，P ＜ 0． 01 ） ． The AIM2 expression in the high HBV tiDNA ≥ 1 ˑ 10 5 copies / mL ） w as significantly higher than that in the low HBV titers group （ HBVters group （ HBV5 DNA ＜ 1 ˑ 10 copies / ml） （ χ2 = 27 ． 572 ，P ＜ 0． 01 ） ． Conclusion In the innate immune response to HBV infection， AIM2 can recognize HBVDNA ，activate Caspase1 pathw ays subsequently ，release IL1 β and IL18 inflammatory factors，thus leading to liver inflammatory damages in chronic hepatitis B． Key words： Absent in melanoma 2 ； Chronic hepatitis B ； Caspase1 ； Interleukin1 β； Interleukin18