血红素氧合酶-1介导海参蛋白肽对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用
南极磷虾油对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用
南极磷虾油对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用郑振霄;朱凯;戴志远【期刊名称】《中国食品学报》【年(卷),期】2023(23)1【摘要】为研究南极磷虾油的抗炎作用,以脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞为炎症模型,通过细胞形态、细胞吞噬能力、髓过氧化物酶(MPO)活力、促炎细胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)等指标,评价南极磷虾油的抗炎能力,并通过炎症因子及炎症关键酶(iNOS和COX-2)基因的表达,研究其抗炎机理。
结果表明,南极磷虾油可以显著缓解LPS引起的细胞分化,抑制细胞吞噬能力和MPO活力的增强,以及炎症因子分泌量的升高(尤其是TNF-α)。
实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的检测结果表明,南极磷虾油可以显著平息LPS引发的炎症关键酶和炎症因子基因的活化。
结论:南极磷虾油具备抗炎活性,该活性与其对i NOS和COX-2的调控作用相关。
【总页数】9页(P23-31)【作者】郑振霄;朱凯;戴志远【作者单位】浙江工商大学海洋食品研究院;浙江工商大学浙江省水产品加工技术研究联合重点实验室;浙江工商大学海洋食品精深加工关键技术省部共建协同创新中心【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.铁观音茶提取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制2.红松松仁多糖对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用3.抗炎合剂通过TLR4/MyD88/NF-κB通路抑制脂多糖诱导的过表达高迁移率蛋白-1转染小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞炎症反应的机制研究4.琼胶寡糖对脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用5.基于Caspase-1细胞焦亡信号通路探讨栀子苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症的抑制作用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血红素氧化酶-1在器官及细胞移植中的作用
白生成并经后 者通过螯合作 用清 除细胞 内多余 的游 离铁 而
抑 制 氧 自由基 产 生 。
用， 且这一作 用完全是通过 中间物 Ｈ Ｏ一１ 表达介导的， Ｈ Ｏ一 １
Ｂ Ｅ Ｉ Ｎ等 报道 ， 低浓度 的 Ｃ Ｏ能在 体 外和体 内选择 性地 下 调脂 多糖诱导 的前 炎症 细胞 因子 Ｔ Ｎ Ｆ一０ 【 和 Ｉ Ｌ一１等 的表 达， 而增加 Ｉ Ｌ一１ ０的表达。Ｉ Ｌ一 １ ０和 Ｈ Ｏ一１之 间存在 的正
反馈环 效应 ， 为Ｈ Ｏ 一１在 移 植 排 斥 中 的 抗 炎症 作 用提 供 了
ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｅ ｄ ｉ ｎ ｅ ｎ ｄ ｏ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ａ ｌ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ａ ｎ ｄ ｉ ｓ ｒ ｅ ｇ ｕ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｂ ｙ ｌ ｙ ｓ ｏ ｓ ｏ ｍａ ｌ ／ａ ｕ ｔ ｏ ｌ ｙ －
［ ２ ４ ］Ｃ Ｌ Ｅ Ａ Ｒ Ｙ Ｍ Ａ， ＶＡ Ｎ Ｏ Ｇ， Ｂ Ｒ ＡＭ Ａ Ｐ Ａ， ｅ ｔ ａ １ ．Ｆ Ｇ Ｆ ， Ｔ Ｇ Ｆ Ｄ ａ ｎ ｄ
Ｔ ｈ ｅ ｒ Ｔ ａ ｒ ｇ ｅ ｔ ｓ ， ２ ０ ０ ９ ，１ ３ （ ４ ） ： ４ ８ ５— ４ ９ ６ ．
［ Ｅ ｐ ｕ ｂ ａ ｈ ｅ ａ ｄ ｏ ｆ ｐ ｉ ｒ ｎ ｔ ］
［ ２ ５ ］Ｘ Ａ Ｖ Ｉ Ｅ Ｒ Ｓ ，Ｇ Ｉ Ｌ Ｂ Ｅ Ｒ Ｔ Ｖ，Ｒ Ａ Ｓ Ｔ Ａ Ｌ Ｄ Ｉ Ｍ Ｐ ，ｅ ｔ ａ １ ．Ｂ Ａ ＭＢ Ｉ ｉ ｓ ｅ ｘ —
理论基础 。
中， 胆绿素／ 胆 红素均是 具有广谱 抗氧化 功 能的 内源性代谢
产物 ， 能清 除 体 内各 种 形 式 的 自 由基 ； Ｆ ｅ “ 则通过诱 导铁蛋
１ ． ４ ． ２ 调 节免疫 作用 Ｃ ＨＡ Ｂ Ａ Ｎ Ｎ Ｅ Ｓ等 研 究表 明 ， 骨髓 间充质 干细胞具有抑制 Ｔ细胞的增 殖而抑制 免疫反应 的作
根皮素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的体外抗炎作用机制
根皮素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞的体外抗炎作用机制李潭孙一涵李国峰（长春中医药大学，长春130117）中图分类号R285.5文献标志码A文章编号1000-484X（2021）07-0812-07［摘要］目的：研究根皮素对脂多糖（LPS）诱导的RAW264.7巨噬细胞体外抗炎的作用机制，以全方位认识根皮素的抗炎作用机制并为临床开发新药提供理论依据。
方法：CCK-8法检测根皮素对巨噬细胞增殖的影响，ELISA、实时荧光定量PCR、Western blot、荧光抗体技术（ICC-IF）分别检测TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS和COX-2及Akt/NF-κB、MAPK信号通路、NF-κB P65核移位。
结果：CCK-8法显示根皮素药物浓度在1μg/ml~100μg/ml时其细胞增殖差异无统计学意义（P>0.05）；与正常组相比，模型组TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS和COX-2及Akt/NF-κB、ERK1/2和P38信号通路高表达（P<0.05、P<0.01、P<0.001）；与模型组相比，不同剂量组含根皮素药物干预后，TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS、COX-2及Akt/NF-κB、ERK1/2和P38表达下调（P< 0.05、P<0.01、P<0.001）。
结论：根皮素能明显抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞的炎症因子释放及TNF-α、IL-6、IL-1β、iNOS 和COX-2的mRNA及Akt/NF-κB、ERK1/2和P38蛋白表达从而抑制炎症反应。
［关键词］根皮素；RAW264.7；Akt/NF-κB；MAPK；脂多糖Anti inflammatory mechanism of phloretin on RAW264.7cells induced by lipopolysaccharide in vitroLI Tan，SUN Yi-Han，LI Guo-Feng.Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun130117，China［Abstract］Objective：To study the anti-inflammatory mechanism of phloretin on RAW264.7macrophages induced by lipopoly‐saccharide（LPS），to fully understand the anti-inflammatory mechanism of phloretin and provide theoretical basis for clinical develop‐ment of new drugs.Methods：CCK-8method was used to detect effect on macrophage proliferation.ELISA，real-time fluorescence quantitative PCR，Western blot and ICC-IF were used to detect TNF-α，IL-6，IL-1β，iNOS and COX-2，Akt/NF-κB，MAPK signal‐ing pathway and NF-κB P65nuclear translocation.Results：CCK-8method showed that there was no significant difference in cell pro‐liferation of phloretin at the concentration of1μg/ml~100μg/ml（P>0.05）.Compared with normal group，TNF-α，IL-6，IL-1β，iN‐OS and COX-2，Akt/NF-κB，ERK1/2and P38signaling pathways were overexpression in model group（P<0.05，P<0.01，P<0.001）；compared with model group，drug intervention with different doses of phloretin reduced expressions of TNF-α，IL-6，IL-1β，iNOS and COX-2，Akt/NF-κB，ERK1/2and P38（P<0.05，P<0.01，P<0.001）.Conclusion：Phloretin could significantly inhibit the release of inflammatory factors，TNF-α，IL-6，IL-1β，iNOS and COX-2mRNA，Akt/NF-κB，ERK1/2and P38protein expression in RAW264.7 macrophages induced by LPS.［Key words］Phloretin；RAW264.7；Akt/NF-κB；MAPK；LPS炎症是机体在受到各种炎症因子的刺激和损伤后产生的一种防御反应，能使这些炎症因子失活和清除，并为组织修复创造环境。
CCK-8对LPS诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞内质网应激的影响中期报告
CCK-8对LPS诱导小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞内质网应激的影响中期报告
研究背景：
脂多糖（LPS）是一种常见的细菌毒素，可以诱导单核巨噬细胞（MonoMac，RAW264.7）产生炎症反应，这种炎症反应可能与内质网应激有关。
内质网应激是一种细胞应激反应，可以被各种诱导物如病毒感染、药物和脂质过多激活。
内质网应激可能对炎症反应和细胞凋亡产生
影响。
CCK-8作为一种多肽激素，可以调节胰岛素和胆囊收缩，但其对内
质网应激和炎症反应的影响尚未报道。
因此，本研究旨在研究CCK-8对LPS诱导的内质网应激和炎症反应的影响。
研究方法：
将RAW264.7细胞分为以下6组：对照组、LPS组、CCK-8 1 ng/ml + LPS组、CCK-8 10 ng/ml + LPS组、CCK-8 100 ng/ml + LPS组和
CCK-8 1000 ng/ml + LPS组。
将LPS加入到培养基中，细胞培养24小时。
然后，将细胞收集，通过Western blot法检测CHOP、GRP78和p-JNK
蛋白的表达，并通过Elisa法检测IL-6、IL-1β和TNF-α的水平。
预期结果：
我们预计CCK-8对LPS诱导的内质网应激和炎症反应具有剂量依赖
性的调节作用。
具体来说，CCK-8可能能够减少LPS诱导的内质网应激
和炎症反应，这种作用可能是通过减少JNK磷酸化和CHOP和GRP78的表达来实现的。
此外，我们预计CCK-8也可能通过抑制IL-6、IL-1β和TNF-α的产生来减弱LPS诱导的炎症反应。
结论：
本研究有望为CCK-8在炎症性疾病治疗中的应用提供理论基础。
脂多糖对Raw264.7巨噬细胞线粒体功能的作用效应
脂多糖对Raw264.7巨噬细胞线粒体功能的作用效应邓威;陈倩;郭金;张璐懿;龚作炯【期刊名称】《疑难病杂志》【年(卷),期】2022(21)2【摘要】目的探讨脂多糖(LPS)对Raw264.7巨噬细胞线粒体内参与重要代谢途径过程中关键物质的影响。
方法2020年9月—2021年2月于武汉大学第一临床学院中心实验室进行实验。
体外培养小鼠Raw264.7巨噬细胞,随机分为4组,空白对照组巨噬细胞不做其他处理;脂多糖模拟机体在炎性反应过程中产生的刺激物质,分为低剂量LPS组(1μg/ml)、中剂量LPS组(5μg/ml)和高剂量LPS组(10μg/ml)。
检测并比较4组细胞内线粒体呼吸链复合体Ⅰ~Ⅲ活性、异柠檬酸脱氢酶(IDH1)的活性与含量以及乳酸含量。
结果与空白对照组比较,低、中、高剂量LPS组Raw264.7细胞内线粒体呼吸链复合体Ⅰ~Ⅲ活性均依次降低(F=139.363、95.123、86.795,P均<0.01),异柠檬酸脱氢酶蛋白活性、含量、相对荧光值依次降低(F=240.796、624.261、278.540,P均<0.01);乳酸含量依次升高(F=55.987,P<0.01)。
结论脂多糖可抑制Raw264.7细胞内线粒体呼吸链复合体Ⅰ~Ⅲ活性、异柠檬酸脱氢酶活性及蛋白表达含量,增加Raw264.7细胞内乳酸含量,且LPS浓度越高,细胞内线粒体关键酶活性越低,乳酸含量越高。
【总页数】5页(P188-191)【关键词】脂多糖;Raw264.7巨噬细胞功能;线粒体;异柠檬酸脱氢酶;乳酸【作者】邓威;陈倩;郭金;张璐懿;龚作炯【作者单位】武汉大学人民医院感染科【正文语种】中文【中图分类】R559【相关文献】1.AcSDKP体外抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞促炎功能研究2.甘丙肽体外抑制脂多糖诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞促炎功能研究3.脾多肽对幽门螺旋杆菌脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞TNF-α、IL-1β、IL-6及IL-17的作用4.翼茎羊耳菊提取物对脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7的抗炎作用5.绿豆寡肽对脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7的抗炎作用因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
氧化苦参碱对脂多糖诱导的RAW264_7细胞一氧化氮及其诱导型合酶表达的影响
RAW 264.7 细胞 iNOS mRNA 的表达。 结果：OMT 显著减少 LPS 诱导的 RAW 264.7 细胞 NO 的释放(P<0.05，P<0.01)；同
时减少 LPS 诱导的 RAW 264.7 细胞 iNOS mRNA 的表达(P<0.05，P<0.01)。 结论：OMT 可能通过抑制 LPS 诱导的巨噬
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南通大学学报（医学版） Journal of Nantong University (Medical Sciences) 2011 ∶ 31 （3 ）
氧化苦参碱对脂多糖诱导的 RAW 264.7 细胞一氧化氮 及其诱导型合酶表达的影响 *
胡亚娥 **， 茅家慧， 刘 霞， 施海燕，朱 燕， 周爱玲 ***
LPS 组(1 μg/mL)、OMT 组(100 μmol/L)、LPS+OMT 小剂量组(20 μmol/L)、LPS+OMT 中剂量组(50 μmol/L)、LPS+OMT大剂
量组(100 μmol/L)。 采用 Griess 试剂法测定细胞培养液中 NO 释放量。 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法测定
氧化苦 参 碱(Oxymatrine，OMT)是 豆 科 植 物 苦 参 Sophora flavescens Ait 的 干 燥 根 中 提 取 的 一 种 生 物 碱，具有四环的喹嗪啶类化学结构(图 1)。 近年来文 献[1-3]报道 OMT 具有抗 炎、抗心律 失常、抗肿瘤 等多 方面的药理作用，在神经系统中 OMT 对脑缺血缺氧 损伤具有保护作用[4]。 研究[5]表明，OMT 能剂量依赖 性地对抗二甲苯所致小鼠耳肿胀及右旋糖苷所致的 大鼠足跖肿胀，具有抗炎作用。 然而 OMT 在抗炎过
化合物TML对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎性反应的保护作用
实验研究CHINESE COMMUNITY DOCTORS 革兰阴性细菌细胞壁中的一种成分：脂多糖，对宿主是有害的。
细胞死亡、溶解、人工破坏、脂多糖才会被释放出，所以叫做内毒素。
类脂质A 为其毒性成分。
抗炎细胞因子白细胞介素能被一些抗生素像头孢菌素所抑制，从而进一步加重炎性反应。
所以，TML 的作用将在研究脂多糖所致的炎症过程中所追寻的最有效的抗内毒素药物让其成为临床医学和基础医学领域的重要任务。
然而缺血性心脏病是近几十年来在发达国家和发展中国家导致死亡的首要原因之一。
目前研究证实炎症反应是缺血性心脏病(急性冠状动脉综合征、缺血再灌损伤及慢性心衰等)的首要发病因素之一，并且炎性反应在缺血性心脏病发生、发展过程及愈后中始终伴有重要角色。
炎性反应(包括炎性细胞浸润)在心肌缺血再灌注免疫损伤中起主要作用，缺血再灌注免疫损伤导致微血管内皮细胞和补体的激活、血管通透性增加，激活的内皮细胞表达大量的趋化因子，如单核细胞趋化蛋白-1。
抑制缺血再灌损伤过程中补体激活或抑制炎症细胞因子作用有效减轻心肌I/R 损伤，并改善心肌缺血再灌损伤后修复。
免疫相关炎性反应伴随缺血再灌损伤的发病始终，因此干预炎性反应将有效预防缺血再灌损伤的发生、发展。
资料与方法实验材料：①细胞：小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞，为本实验室原有。
②主要药物和试剂：化合物TML：实验室原有，脂多糖(LPS)，Sigma 公司；磷酸盐缓冲液(PBS)：自行配制，TRIZOL，Takara 公司；DMEM 培养液，小牛血清(FBS)：GIBCO-BRL 公司；氯仿，异丙醇，75%乙醇：国药集团化学试剂有限公司。
③主要仪器：Infinite M200酶标仪：TECAN 公司；SW-CJ-2FD 型双人单，双面净化工作台：上海康路仪器设备有限公司；800型离心机：上海粤秀器械厂；XDS-1B 型显微镜：北京宏昌信科技有限公司；磁力搅拌器，涡轮混匀器：海门市其林贝尔仪器制造有限公司；Real-time PCR 仪：Bio-rad公司。
虾青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及机制
华南农业大学学报 Journal of South China Agricultural University 2020, 41(5): 9-16DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.202002019宋阳, 朱凌羽, 李若楠, 等. 虾青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及机制[J]. 华南农业大学学报, 2020, 41(5): 9-16.SONG Yang, ZHU Lingyu, LI Ruonan, et al. Effect of astaxanthin on inflammatory response of RAW264.7 cells induced by lipopolysaccharide and its mechanism[J]. Journal of South China Agricultural University, 2020, 41(5): 9-16.虾青素对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及机制宋 阳，朱凌羽，李若楠，郑 鑫(吉林农业大学 动物科学技术学院，吉林 长春 130118)摘要: 【目的】研究虾青素(AST)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响及作用机制，为将虾青素应用于炎症治疗奠定理论基础。
【方法】采用不同浓度梯度的脂多糖及虾青素对RAW264.7细胞进行不同时间段的处理，通过MTT法确定最佳处理浓度和时间，对细胞进行最佳处理后，用ELISA法、荧光定量PCR技术和Western blot法分别检测细胞炎症因子的分泌量、mRNA相对表达量和蛋白相对表达量。
【结果】100 μmol/L虾青素和2 μg/mL脂多糖处理3 h的RAW264.7细胞活力处于峰值。
与对照组相比，脂多糖组RAW264.7细胞中TNF-α、IL-6和Caspase-1的分泌量分别降低了12.83%、9.66%和20.80%(P<0.05)，脂多糖对于TLR4/MyD88/NF-кB通路相关蛋白表达有促进作用，其中，TLR4和NF-кB p65蛋白相对表达量分别提高了195.40%和226.95% (P<0.05)；与LPS组相比，AST+LPS组中虾青素对炎性因子的分泌及mRNA表达有抑制作用，TLR4、MyD88和NF-кB p65蛋白相对表达量降低了54.99%、45.70%和28.20%(P<0.05)。
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血红素氧合酶-1介导海参蛋白肽对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用宋佳佳1，白函瑜1，成雪1，纪小敏1，姜乃义2，刘学玲2，毛学英1（1.中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083）（2.烟台源力德海洋生物有限公司，山东烟台 265600）摘要：为研究海参蛋白肽对脂多糖（LPS ）诱导小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用及作用机制，本研究利用LPS 刺激RAW264.7巨噬细胞建立炎症模型，采用Griess 法测定细胞一氧化氮（NO ）含量，实时荧光定量PCR 测定细胞内诱导型一氧化氮合酶（iNOS ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）以及血红素氧合酶-1（HO-1）mRNA 表达。
结果表明，海参蛋白肽以浓度依赖效应显著抑制LPS 诱导RAW264.7巨噬细胞NO 生成以及TNF-α、IL-1β、IL-6和iNOS mRNA 表达（p <0.05），显著提高细胞内HO-1 mRNA 表达（p <0.05）。
HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ（ZnPP-Ⅸ）部分逆转海参蛋白肽对LPS 诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的抑制作用。
具有抗炎活性的海参蛋白肽富含甘氨酸、谷氨酸和天冬氨酸，分子量180~1000 u 的组分为72.12%。
这些结果说明海参蛋白肽通过上调细胞HO-1 mRNA 表达发挥抑制LPS 诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的作用。
关键词：海参；多肽；巨噬细胞；一氧化氮；基因表达文章篇号：1673-9078(2016)4-1-7 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.4.001Heme Oxygenase-1 Mediated Inhibitory Effects of Peptides Derived fromSea Cucumber on Lipopolysaccharides-induced Inflammation inRA W264.7 MacrophagesSONG Jia-jia 1, BAI Han-yu 1, CHENG Xue 1, JI Xiao-min 1, JIANG Nai-yi 2, LIU Xue-ling 2, MAO Xue-ying 1(1. College of Food Science and Nutritional Engineering, China Agricultural University, Beijing 100083, China)(2. Yantai Yuanlide Ocean Bio-tech Co. Ltd., Yantai 265600, China)Abstract: The inhibitory effects and mechanisms of peptides from sea cucumber on lipopolysaccharides (LPS)-induced inflammation responses in RAW264.7 murine macrophages were investigated in this study. The inflammation model in RAW264.7 macrophages was established by LPS treatment. The content of nitric oxide generated by inflammatory macrophages was determined using the Griess assay, and the heme oxygenase-1 (HO-1) mRNA expression as well as the mRNA expression of inducible nitric oxide synthase, tumor necrosis factor-α, interleukin-1β (IL-1β), and IL-6 was measured by real-time quantitative polymerase chain reaction. The results showed that the peptides from sea cucumber significantly inhibited LPS-induced NO production by RAW264.7 macrophages in a dose-dependent manner (p < 0.05), inhibited the mRNA expression of tumor necrosis factor-α, IL-1β, IL-6, , and significantly induced HO-1 expression in RAW264.7 macrophages (p < 0.05). These inhibitory effects were partially reversed by co-treatment with zinc (II)-protoporphyrin IX, a specific inhibitor of HO-1. The sea cucumber peptides with anti-inflammatory activity were rich in glycine, glutamic acid, and aspartic acid, and the peptide fraction with a molecular weight ranging from 180 to 1000 u accounted for 72.12%. These results suggest that peptides derived from sea cucumber inhibit inflammation responses in LPS-stimulated RAW264.7 macrophages by up-regulating HO-1 mRNA expression.Key words: sea cucumber; peptides; macrophages; nitric oxide; gene expression收稿日期：2015-06-03基金项目：国家自然科学基金资助项目（31371753）；公益性行业（农业）科研专项资助项目（201303085）作者简介：宋佳佳（1986-），男，博士研究生，从事活性肽的制备及生物学活性研究通讯作者：毛学英（1970-），女，博士，教授炎症是由激活的巨噬细胞释放的一系列炎症介质和细胞因子调节的复杂生理过程。
巨噬细胞的激活是机体起始清除病原菌感染、修复受损组织等防御反应的重要组成部分，而一氧化氮（NO ）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）以及白介素-1β（IL-1β）等炎症介质的释放能够提高这种防御能力[1,2]。
尽管炎1症的主要功能有利于宿主防御过程，但异常、持久的炎症反应会导致多种慢性疾病的发生。
研究发现，慢性炎症与心血管疾病、阿尔茨海默症、II型糖尿病以及癌症等慢性疾病密切相关[3]。
然而，抗炎药物的长期使用常会伴有诸如胃肠道溃疡、肾病变以及肝脏毒性等副反应[2]。
因此，积极寻求高效、安全的天然活性功能因子对慢性炎症反应进行营养干预具有重要意义。
近年来，利用蛋白酶解技术水解食源蛋白质制备各种生物活性肽受到了广泛关注，其中源于海洋生物的具有抗炎活性的多肽已有报道。
例如，源于虾的多肽通过抑制脂多糖（LPS）刺激的RAW264.7巨噬细胞核转录因子NF-κB的激活，进而降低TNF-α生成发挥抗炎作用[4]。
海参作为海洋中重要的食物和药物资源，体壁含有丰富的胶原蛋白（占体壁总蛋白70%以上）。
海参蛋白肽（水解物）具有抗疲劳、免疫调节、降血压以及抗氧化生物学活性[5~6]，然而，关于其抗炎活性的研究未见报道。
研究表明，多肽的抗氧化活性与其疏水性氨基酸含量直接相关，由风味蛋白酶制得的具有抗氧化活性的海参蛋白肽富含疏水性氨基酸，其中以甘氨酸含量最高[7~8]。
而富含甘氨酸的多肽能够激活RAW264.7巨噬细胞表面甘氨酸受体抑制LPS刺激的RAW264.7巨噬细胞炎症反应[9]。
因此，本研究推测海参蛋白肽可能具有抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的作用。
为促进海参资源的开发与利用以及证明海参蛋白肽的抗炎活性，本研究以风味蛋白酶水解海参蛋白制备海参蛋白肽，评价其抑制LPS刺激RAW264.7巨噬细胞炎症反应的作用。
以LPS刺激RAW264.7巨噬细胞建立炎症细胞模型，研究海参蛋白肽对LPS刺激RAW264.7巨噬细胞NO生成、炎症介质基因表达的影响，探讨血红素氧合酶-1（HO-1）基因表达与海参蛋白肽体外抗炎作用之间的关系，为海参蛋白肽营养干预慢性炎症相关疾病以及功能食品开发提供理论基础。
1 材料与方法1.1 材料与试剂海参冻干粉，由烟台源力德海洋生物有限公司（中国山东）提供；DMEM高糖培养基，购自美国Hyclone公司；青链霉素双抗溶液、非必需氨基酸溶液和0.25%胰蛋白酶（含EDTA）均购自美国Gibco 公司；风味蛋白酶（500 LAPU/g）、锌原卟啉-Ⅸ（ZnPP-Ⅸ）、四甲基偶氮唑盐（MTT）、二甲基亚砜（DMSO）、脂多糖（LPS，Escherichia coli O11:B4）和Griess试剂均购自美国Sigma公司；Trizol试剂和KR104型逆转录试剂盒，购自天根生化科技（北京）有限公司；DRR420A型荧光定量PCR试剂盒，购自宝生物工程（大连）有限公司；RAW264.7巨噬细胞，购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。
1.2 仪器与设备DK-8B型电热恒温水浴锅，上海精宏试验设备有限公司；LGJ-12型真空冷冻干燥机，北京松源华兴科技发展有限公司；iMark酶标仪，美国伯乐公司；BS-100A型自动部份收集器，上海青浦沪西仪器厂；UV-2600型紫外-可见分光光度计，尤尼柯（上海）仪器有限公司；LightCycler96型荧光定量PCR仪，美国罗氏公司；Agilent 1200型高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；L-8900型氨基酸分析仪，日本日立公司。
1.3 方法1.3.1 海参蛋白肽的制备按质量浓度50 mg/mL将海参冻干粉溶解于50 ℃水中，于pH 7.0条件下溶解0.5 h。