大小型层析柱的装填实践介绍(中文)
大小型层析柱的装填实践介绍(中文)
2M Na2SO4 or (NH4)2SO4 in 50mM phosphate buffer
0.5M NaCl in 0.1M NaHCO3 or phosphate buffer 1M NaCl in 100mM phosphate or NaHCO3 buffer 2M NaCl in 20 nM phosphate buffer 0.5M NaCl or 0.2M glycine in 20mM phosphate or Tris buffer 2M KCI or NaCl in 20mM phosphate
TOYOPEARL的静臵时间
TOYOPEARL 粒径
Coarse Medium Fine Superfine C级规格: 100 µm M级规格: 65 µm F级规格: 45 µm S级规格: 35 µm 水中静臵时间 15-30 Min. 30-45 Min. 45-60 Min. 60-90 Min.
内容提要 装填前的准备工作
– 小颗粒的去除 – 缓冲液平衡 – 匀浆准备
装填步骤 / 层析柱类型 层析柱的操作
– 柱子的平衡与柱效评价 – 保存
Peak Biotech
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
TOYOPEARL树脂填料的装填
装填的一般原则
☆TOYOPEARL的装填压力最好在0.5 - 5 bar的范围内 ☆装填流速至少比实际操作流速高50% ☆不要使用会产生剪切力的装臵（如：磁力搅拌器、 齿轮泵）
装填
管路清洗
运行
卸料
优点：易于装填 弱点：填料用量较大, 卸料可能较难, 有剪切力发生, 卸料会导致大量的浆液体积
Resolute
TOSOH BIOSCIENCE GmbH
层析柱装柱流程
层析柱装柱流程层析柱是一种用于分离、纯化化合物的重要工具，它具有操作简单、分离效果好、适用范围广等优点，因此在化学、生物等领域得到了广泛的应用。
在进行层析柱操作时，正确的装柱流程是非常重要的，它直接影响到实验结果的准确性和重现性。
下面将介绍层析柱的装柱流程。
首先，准备好所需的层析柱和填料。
层析柱通常由玻璃或塑料制成，填料的选择根据需要分离的化合物而定，可以是硅胶、纸浆、聚合物凝胶等。
填料的粒径和填充量也需要根据具体实验要求进行调整。
接着，将层析柱放置在支架上，并用适当的溶剂进行预洗。
预洗的目的是去除填料中的杂质和空隙中的气体，为样品的装柱做好准备。
预洗的溶剂通常是与样品相似的极性溶剂，如甲醇、乙醇等。
然后，将填料均匀地装入层析柱中。
填料的均匀性对于分离效果至关重要，因此在装填填料时需要轻轻振动层析柱，使填料能够均匀分布，并避免出现空隙或局部堆积的情况。
接下来，将样品溶液缓慢地加入层析柱中。
在加样的过程中，需要注意控制流速，避免填料被冲洗出来或样品在填料中发生混合。
通常情况下，可以使用移液枪或注射器来进行加样，以确保流速的均匀和稳定。
装柱完成后，可以开始进行层析操作。
根据需要，可以选择使用不同的洗脱溶剂来进行洗脱，以实现对样品的分离和纯化。
在洗脱的过程中，需要注意收集不同洗脱峰的组分，并记录下各个组分的出现时间和洗脱溶剂的类型，以便后续的分析和鉴定。
最后，对层析柱进行清洗和保存。
清洗时，可以用适当的溶剂将填料中残留的样品和杂质洗净，然后用干燥剂将层析柱中的水分去除干净。
清洗完成后，将层析柱放置在干燥通风的地方保存，避免受潮和受到污染。
总之，层析柱的装柱流程是一个关键的操作步骤，它直接影响到后续层析操作的效果和实验结果的准确性。
正确的装柱流程应该包括层析柱的预洗、填料的均匀装填、样品的缓慢加样、洗脱组分的收集和记录、以及层析柱的清洗和保存等步骤。
只有严格按照流程进行操作，才能保证层析柱操作的顺利进行和实验结果的准确可靠。
层析柱装柱流程范文
层析柱装柱流程范文层析柱(CLC)是一种分离和纯化化学物质的常用技术。
它在许多领域，包括制药、生物化学、环境科学和食品科学中广泛应用。
层析柱装柱流程是在层析柱中装填填料的过程，决定着柱的分离性能和吸附能力。
下面是一种常见的层析柱装柱流程:1.准备填料首先需要选择适当的填料。
填料的选择取决于分离目标和样品特性。
常见的填料包括硅胶、脱色树脂、离子交换树脂和凝胶颗粒等。
填料应具有一定的吸附能力，能够与目标物发生相互作用。
2.准备柱子将柱子清洗干净，并根据填料的尺寸调整柱子的高度。
柱子可以是玻璃柱、不锈钢柱或塑料柱，具体选择取决于实验要求。
3.浸泡填料将填料放入容器中，加入合适的溶剂。
浸泡填料有助于去除可能存在的杂质，提高填料表面的活性。
可以根据填料类型和实验要求调整浸泡时间，一般需要几小时到几天。
4.烘干填料将浸泡过的填料放入烘箱中或暴露在室温下进行干燥。
烘干填料有助于去除残留的溶剂，使填料能够更好地保持其结构和吸附性能。
5.装填填料将干燥的填料均匀地倒入柱子中。
填料的层高度应根据实验要求调整，一般为柱子高度的1/3到2/3、填料应当尽量均匀地分布在柱子中，以确保有效的分离效果。
6.压实填料使用压实设备或手动敲击柱子，将填料压缩和固定在柱子中。
压实的目的是增加填料的堆积密度，减少填料颗粒之间的间隙，提高分离效果。
压实的程度应根据填料类型和实验要求进行调整。
7.洗涤柱子将柱子与适当的溶剂进行冲洗，以去除可能存在的杂质和残留的溶剂。
洗涤的选择取决于填料和实验要求。
洗涤过程可以重复几次，直到柱子完全清洁。
8.储存柱子装填完成后，柱子可以进行包装或储存。
柱子应存放在阴凉干燥的地方，以保持填料的性能和活性。
层析柱(色谱柱)填料介质的装载及洗脱操作规程
层析柱（色谱柱）填料介质的装载及洗脱操作规程工业制备层析柱（色谱柱）的填料装载充填和洗脱操作的规范直接影响色谱分离纯化工艺过程的效率，迈思通公司经过多年的实践经验和该行业专家的指导，编写了关于《层析柱（色谱柱）吸附介质的充填及洗脱规程》的方法，供广大用户和科研者参考。
一、柱头安装是否合适及是否严密的检查1、检查下柱头是否按图纸要求安装?（要求按图纸要求安装）2、检查下柱头内，是否安装了防止吸附剂（例如硅胶）漏出的滤布（或滤网）。
3、所用滤布（滤网）的材质要求能耐所用溶剂的腐蚀，而且孔径很小，一般要求使用500目以上孔径大小的滤布（网）。
4、下柱头安好，紧固后，从柱上端（开口）加入所用洗脱剂中极性较小的一种溶剂（例如已烷、石油醚、甲苯等），使溶剂液面比下柱头上部分离出20-30厘米，仔细观察下柱头是否漏溶剂。
如果漏，则必须坚固（或重装），直至不漏为止。
5、检查确实不漏后，放出柱内溶剂，准备装吸附剂（例如硅胶等）。
二、充填吸附剂以充填（或称装填）硅胶为例，作如下说明：1、干法装柱①、取吸附剂（例如硅胶）记下硅胶的量，（等装完柱后，检查剩余硅胶量，就可以知道装入柱中的硅胶量了）。
②、工作人员戴上口罩，准备好木槌，有人从柱上端倒入一定时的硅胶，柱下边有人用木槌敲击柱外壁，振实硅胶；一边加硅胶，一边敲击柱；最好硅胶加到什么高度，就在此高度敲击；且向上下移动敲击。
如此，直至硅胶装满时为止；再上下移动敲击一阵子；至硅胶上平面不再下沉，而且硅胶面很实时为止。
③、如果体系中没有设预柱，层析柱中上端硅胶不把装满，留出空间待“上样”用。
④、如果有预柱的体系，层析柱应装满硅胶。
⑤、干法装柱，粉尘大，且敲击声大，柱外表易变成不光亮，但不耗溶剂。
2、湿法装柱①、同上，准备一定时的硅胶，且记录下硅胶量。
②、准备一只30-50升的耐溶剂腐蚀的塑料桶，例入极性小的且配洗脱剂时需用的溶剂（例如已烷，石油醚、甲苯等），再例入硅胶，搅拌混合。
bpg层析柱 装柱
bpg层析柱装柱BPG层析柱是一种常见的分离技术装置，广泛应用于化学、生物、制药等领域。
本文将介绍BPG层析柱的装柱过程及其相关特点。
一、BPG层析柱的装柱BPG层析柱的装柱过程主要包括填充填料、封口和测试等步骤。
1. 填充填料填充填料是装柱的第一步。
首先，将BPG层析柱的尾部封口，确保填料不会从尾部漏出。
然后，将填料填充到柱体中，填料的选择根据具体的实验目的而定。
常见的填料有凝胶、树脂、硅胶等。
填充填料时需要注意均匀填充，避免形成空隙或过度填充。
2. 封口填充填料后，需要对层析柱进行封口。
封口的目的是固定填料，防止填料在柱体中移动或漏出。
封口材料可以选择合适的密封胶或橡胶垫片，确保封口牢固。
3. 测试装柱完成后，需要对BPG层析柱进行测试。
测试的主要目的是检查装柱过程中是否出现漏液或其他问题。
可以通过加入缓冲液或样品，在一定压力下通过柱体，观察是否有液体泄漏或柱体渗透等现象。
如果发现问题，需要及时进行修复或更换。
二、BPG层析柱的特点BPG层析柱具有以下几个特点：1. 高分离效果BPG层析柱的填料具有较大的比表面积和孔隙结构，能够提供更多的分离位点，有效提高分离效果。
同时，BPG层析柱还可以根据需要选择不同的填料，进一步提高分离效果。
2. 快速操作BPG层析柱的装柱过程相对简单，操作方便快捷。
填充填料和封口都可以在较短的时间内完成，适用于一些对操作时间要求较高的实验。
3. 良好的重复性BPG层析柱具有较好的重复性，可以反复使用。
在使用过程中，只需要更换填料和进行适当的维护保养，就可以保持较好的分离效果和分离效率。
4. 广泛应用BPG层析柱可以应用于各种领域的实验，如生物分离、蛋白质纯化、药物筛选等。
其灵活性和高效性使得BPG层析柱成为实验室中常用的分离技术装置。
总结：BPG层析柱是一种常用的分离技术装置，其装柱过程简单，操作方便快捷。
具有高分离效果、快速操作、良好的重复性和广泛应用等特点。
在实验室中，合理选择和使用BPG层析柱能够提高实验效率，促进科研工作的顺利进行。
中试及工业用手动层析柱装填指南
中试及工业用手动层析柱装填指南1. 中试及工业用手动层析柱中试及工业用手动层析柱的设计，秉承了创新的设计理念，采用专利密封方式以及专利的柱头旋转结构，手动装填层析填料简单，配套工具少，并能够为各种层析填料提供快速的手动装填方法，节约时间，并降低了工作者的工作强度，还能够获得准备而重复性的装柱效果，更快协调不同产品线的转换。
通常手动层析柱从直径100mm到450mm，高度有500mm和1000mm两种。
手动层析柱列表2. 准备工作1.检查层析柱的完整性，容器具已按容器具清洁管理规程清洁待用。
并且在装填前要进行保压密封性及清洁验证。
2.填料在装填前要按填料:匀浆液=1:1.5-2的比例充分匀浆，可以用匀浆棒匀浆，装柱前要脱气处理，可以通过抽真空及超声脱气。
3.将层析柱拆卸，将各部件用注射用水清洗干净。
匀浆棒3. 装柱过程1.装柱参数确定：根据工艺确定（略）。
2.将柱子不锈钢下底盘放在底座支架上，用螺丝固定，底盘出口用软管连接，将软管连接至蠕动泵泵管出口（蠕动泵软管入口在注射用水中），开启蠕动泵，调节流速旋钮至所需位置，检验并确定管线连接无外漏。
3.下底盘放上蓄水环，蓄装水1cm高，排尽气泡，将两层金属网的经纬线以45°角错开，放在底盘中心位置，确认无气泡后将膜盖盖紧。
取下蓄水环。
4.套红色橡胶圈，放底盘，用螺丝对称旋紧。
套垫圈，小心地将玻璃柱体放在垫圈上。
将四根金属杆旋上，玻璃柱顶部套上硅胶圈，不锈钢顶盘穿过金属杆盖在硅胶圈上，使硅胶圈，玻璃柱和顶盘的内边缘刚好对齐。
用螺母将金属杆对称旋紧。
此过程中蠕动泵应不停地泵入水，直至玻璃柱上有2~4cm高的水位时，可停泵，并将底盘软管与蠕动泵泵管连接断开，将底盘软管出口置高过玻璃柱，防止玻璃柱内水流光。
5.将填料沿玻璃柱的内壁缓慢倒入层析柱中，尽量避免产生气泡，填料全部倒完后再加入注射用水使液面与玻璃柱顶端齐平。
如果填料一次性倒不完，可将层析柱出口放低，使水流走一部分再倒填料，此过程中应尽量避免已经沉降好的填料翻起来。
大小型层析柱的装填实践介绍
大小型层析柱的装填实践介绍层析柱是一种常用的分离技术仪器，广泛应用于生化、药学、环境分析等领域。
其原理是利用样品在固定相和移动相间的相互作用下，通过各自不同的迁移速率，从而实现混合物各组分的分离。
一般情况下，层析柱包括大型和小型两种。
下面将讨论这两种层析柱的装填实践介绍。
首先是大型层析柱的装填实践。
大型层析柱一般适用于样品量较大的情况，例如工业生产中的在线层析分离。
其装填实践主要包括以下几个步骤。
第一步是选择合适的填料。
选择填料是大型层析柱装填实践中的关键步骤。
一般情况下，需要根据样品的性质和分离要求来选择合适的填料。
常见的填料有硅胶、Sephadex、糖果胶等。
填料的选择应该考虑到颗粒大小、比表面积、孔隙结构等因素。
第二步是准备填料。
填料在装填前一般需要经过一系列处理，以提高其分离效果。
常见的处理方法包括洗涤、干燥和激活等。
洗涤可以去除填料表面的杂质，干燥可以除去填料中的水分，而激活可以增加填料的活性。
第三步是装填填料。
在装填填料之前，需要将填料与层析柱的内壁润湿。
一般使用的方法是将填料悬浮在适量的移动相中，然后缓慢注入到层析柱中。
装填填料时应注意层析柱的填料层高度和均匀度，以保证分离效果。
第四步是压实填料。
压实填料是装填实践中的重要步骤，可以提高填料层的均一性和稳定性。
压实填料时，可以利用酒精、氮气或专用的装填仪器进行。
压实填料时应注意避免填料的堵塞和破碎。
第五步是检查填料层的质量。
填料层质量的检查可以通过观察填料层的均匀性、密实度和干燥程度来进行。
如果发现填料层存在问题，可以进行调整或更换。
以上是大型层析柱的装填实践介绍，下面我们将介绍小型层析柱的装填实践。
小型层析柱一般适用于实验室规模的研究或分析。
其装填实践与大型层析柱的装填实践相似，但由于样品量较小，操作上相对简单。
其装填实践主要包括以下几个步骤。
第一步是选择合适的填料。
填料的选择原则与大型层析柱相同，根据样品的性质和分离要求来选择合适的填料。
层析柱装柱注意事项
层析柱装柱注意事项《层析柱装柱那些事儿》嘿，朋友们！今天咱来聊聊层析柱装柱这档子事儿。
这可真是个技术活，稍有不慎，那后果可是不堪设想啊！首先，选柱子就像找对象一样，得找个合适的。
尺寸得匹配你的实验需求，不然就像小脚穿大鞋或者大脚挤小鞋，都难受。
这柱子要是选错了，后面的事儿可就不好办喽。
然后，就是填料啦！这填料就像是柱子的灵魂，得好好对待。
千万别毛手毛脚地把它弄得到处都是，不然就像撒了一地的珍珠，心疼着呢。
装填料的时候，要慢慢地、轻轻地，就像给宝贝穿衣服一样，小心翼翼的。
还有啊，装柱的时候可得保持耐心。
这可不是着急就能搞定的事儿，得慢慢把填料压实，不能有气泡。
就好像盖房子打地基一样，得结实，不然房子可就要歪歪扭扭啦！有时候，我就觉得自己像是一个雕塑大师，在精心雕琢我的作品。
说起气泡，那可真是讨厌的家伙！一旦有气泡在里面，就像一个隐藏的炸弹，随时可能爆炸，让你的实验化为泡影。
所以啊，得时刻警惕着，一有气泡冒出来，就得赶紧把它赶跑。
记得有一次，我着急忙慌地装柱，结果填料没压实，实验做得一塌糊涂。
那心情啊，简直比丢了钱包还难受。
从那以后，我就吸取教训了，装柱的时候再也不马虎了。
另外，装柱的过程中也得注意保持环境卫生哦！别搞得乱七八糟的，不然被导师看到了，那可少不了一顿批评。
咱可得把实验台收拾得干干净净的，就像自己的小天地一样。
总之，层析柱装柱虽然看似简单，实则暗藏玄机。
咱们可得用心对待，就像对待自己最喜欢的玩具一样。
只有这样，才能保证实验的顺利进行，得到我们想要的结果。
好啦，今天就跟大家分享这些。
希望我的这些经验和感受能对你们有所帮助，让你们在装柱的道路上少走些弯路。
祝大家实验顺利，都能成为层析柱装柱的高手！哈哈！。
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去除小颗粒
装填缓冲液平衡
匀浆准备
装柱
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小颗粒的去除
装柱前务必进行小颗粒去除的操作!
• 小颗粒的存在会阻塞筛板或烧结板，并最终会导致整个柱子的压降增大
小颗粒的去除采取悬浮静置移注法 重复这一步骤不少于3次
借助显微镜可检 查小颗粒的存在
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– 这一操作可以将填料装得最为紧密，并且可以防止死体积的发生或胶体内沟槽 的出现。
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TOYOPEARL-典型的装填缓冲溶液
SEC HW-40, HW-50, HW-55, HW-65 and HW-75
IEC DEAE-650, QAE-550C, Super-Q-650, CM-650, SP-550C, MegaCap II SP-550EC and SP-650
0.1M Na2SO4, NaNO3, or NaCL in 50mM phosphate or Tris buffer. Organic solvents may be applied to HW-40 as adsorption chromatography like Sephadex LH-20.
内容提要 装填前的准备工作
– 小颗粒的去除 – 缓冲液平衡 – 匀浆准备
装填步骤 / 层析柱类型
层析柱的操作
பைடு நூலகம்– 柱子的平衡与柱效评价 – 保存
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TOYOPEARL树脂填料的装填
装填的一般原则
☆TOYOPEARL的装填压力最好在0.5 - 5 bar的范围内 ☆装填流速至少比实际操作流速高50% ☆不要使用会产生剪切力的装置（如：磁力搅拌器、 齿轮泵）
1 M NaCl in 50 mM phosphate, Tris, or acetate buffer
HIC Ether-650, Phenyl-650, PPG-600m, Butyl-650, SuperButyl550C and Hexyl-650c
2M Na2SO4 or (NH4)2SO4 in 50mM phosphate buffer
2M NaCl in 20 nM phosphate buffer 0.5M NaCl or 0.2M glycine in 20mM phosphate or Tris buffer 2M KCI or NaCl in 20mM phosphate
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匀浆准备
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TOYOPEARL树脂填料 大小型工业制备色谱柱的装填实践
A. Sprauer – 5/06
Götec
GE Healthcare
Pall
Pall-Euroflow / Resolute
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TOYOPEARL树脂填料的装填
显微镜微观显示 – Toyopearl 650 M
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装填缓冲液的平衡
在去除小颗粒时的最后一次步骤中可加入装填缓冲液进行填料的 平衡
最好根据实际生产中所使用的缓冲液选取合适的装填缓冲溶液
一般来讲，分离纯化工艺中将使用到的最高离子强度的流动相是 装填缓冲液的首选
- 这些装置会磨碎树脂填料并产生小颗粒
☆ TOYOPEARL是一种刚性强的树脂填料，装填时务必 区别于一般的软式琼脂糖凝胶
Superformance / Götec
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TOYOPEARL树脂填料的装填
基本步骤
TOYOPEARL出货时为悬 浮液状态（含20%乙醇）
Ether-650, Phenyl-650 Butyl-650, DEAE-650 Super-Q-650, CM-650 SP-650 and all Affinity
QAE-550C and SP-550C
使用约1.1倍柱体积的静置胶 使用约1.2倍柱体积的静置胶 使用约1.25-1.4倍柱体积的静置胶
AFC AF-Tresyl and AF-Epoxy-650M
AF-Formyl-650M, AF-Amino-650M and AF-Carboxy-650M
AF-Heparin HC-560M
AF-Chelate-650M
AF-Blue HC-650M, AF-Red-650M
0.5M NaCl in 0.1M NaHCO3 or phosphate buffer 1M NaCl in 100mM phosphate or NaHCO3 buffer
Settling resin
Slurry preparation in a separate tank
Amicon Moduline-120cm ID
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对于给定的柱子，装柱所需的静置胶体积
Toyopearl HW-40, HW-50, HW-55 HW-65 and HW-75F
❖ 利用量筒测量静置胶体体积或使用水泵抽滤浆液至湿滤饼后 计算装填所需要的填料体积
❖ 通过添加装填缓冲液调节浆液浓度:
- 流动式装填柱 ~ 40 - 70% (v/v)
- 自动装填柱 20 - 60% (v/v)
❖ 最终装填好的柱床体积是要小于装填前胶体静置体积或抽干 的湿滤饼的体积
Slurry preparation in the column
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主要装填方法
o 恒流速装填法 o 恒压装填法 o 辅助的重力沉降装填法
装填方法
装填速度 流速范围 重复性
泵 压力计
不同装填方法的特点
恒流速
快 可增大至较高 很好
恒速 需要
TOYOPEARL的静置时间
TOYOPEARL 粒径
Coarse C级规格: 100 µm
Medium M级规格: 65 µm
Fine
F级规格: 45 µm
Superfine S级规格: 35 µm
水中静置时间
15-30 Min. 30-45 Min. 45-60 Min. 60-90 Min.
Amicon Moduline-120cm ID